Этот протокол описывает новый метод доставки пероральных комбинированных антиретровирусных препаратов, которые успешно подавляют репликацию РНК ВИЧ-1 у гуманизированных мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Пероральное комбинированное антиретровирусное лечение у ВИЧ-1 инфицированных гуманизированных мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Пандемия вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1) продолжает распространяться во всем мире, и в настоящее время нет вакцины против ВИЧ. Хотя комбинированная антиретровирусная терапия (кАРТ) была успешной в подавлении репликации вируса, она не может полностью уничтожить резервуар у ВИЧ-инфицированных людей. Безопасная и эффективная стратегия лечения ВИЧ-инфекции потребует многосторонних методов, и поэтому достижения животных моделей инфекции ВИЧ-1 имеют решающее значение для развития исследований в области лечения ВИЧ. Гуманизированные мыши резюмируют ключевые особенности инфекции ВИЧ-1. Гуманизированная модель мыши может быть инфицирована ВИЧ-1, а репликация вируса может контролироваться с помощью схем cART. Кроме того, прерывание cART приводит к быстрому вирусному отскоку у гуманизированных мышей. Тем не менее, введение кАРТ животному может быть неэффективным, трудным или токсичным, и многие клинически значимые схемы кАРТ не могут быть оптимально использованы. Наряду с потенциальной небезопасностью для исследователей, введение кАРТ обычно используемой интенсивной ежедневной процедурой инъекций вызывает стресс из-за физического сдерживания животного. Новый пероральный метод cART для лечения ВИЧ-1-инфицированных гуманизированных мышей, описанный в этой статье, привел к подавлению вирусемии ниже уровня обнаружения, увеличению скорости восстановления CD4 + и улучшению общего состояния здоровья у ВИЧ-1 инфицированных гуманизированных мышей.
Введение
Ожидаемая продолжительность жизни лиц, инфицированных хроническим вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), значительно улучшилась при комбинированном антиретровирусном лечении (кАРТ)1,2. cART успешно снижает репликацию ВИЧ-1 и увеличивает количество CD4+ Т-клеток до нормального состояния у большинства ВИЧ-1 хронически инфицированных участников3, что приводит к улучшению общего состояния здоровья и резкому снижению прогрессирования заболевания4. Однако латентный резервуар ВИЧ-1 устанавливается даже тогда, когда АРТ инициируется во время острой инфекции
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Анонимная ткань человеческого плода была приобретена коммерчески. Исследования на животных проводились в соответствии с протоколами, одобренными Калифорнийским университетом в Лос-Анджелесе и Комитетом по исследованиям животных (ARC) (UCLA) в соответствии со всеми федеральными, государственными и местными руководящими принципами. В частности, все эксперименты проводились в соответствии с рекомендациями и руководящими принципами по содержанию и уходу за лабораторными животными Национальных институтов здравоохранения (NIH) и Международной ассоциации по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными (AALAC) в соответствии с Протоколом UCLA ARC No 2010-038-02B. Вс....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Предполагая, что средняя мышь с весом 25 г потребляет 4 г пищи в день, суточная доза препарата при пероральном приеме соответствует 2,88 мг / кг TFV, 83 мг / кг FTC и 768 мг / кг RAL. Чтобы проверить, является ли оптимизированный режим питания токсичным и влияет ли на общее состояние здоровья по сравнению с ежедневной инъекцией кАРТ, вес мышей контролировали еженедельно до и во время кАРТ с помощью пероральной или подкожной инъекции. Не было существенных различий в весе до введения cART в каждой группе (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь разработан метод перорального введения кАРТ для ВИЧ-1 инфицированных гуманизированных мышей путем объединения трех антиретровирусных препаратов в пище с высоким содержанием питательных веществ. По сравнению с введением ежедневными инъекциями, пероральные роды проще в использовании, ограничивают частоту введения, уменьшают обращение с животными, минимизируют стресс и повышают безопасность55. До этого момента только в нескольких исследованиях на гуманизированных мышах 24,37,41 использовались п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
SK является основателем CDR3 Inc. Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить докторов Ромаса Гелезиунаса и Джеффа Марри, а также сотрудников Gilead за предоставление антиретровирусных препаратов, используемых в этом исследовании. Эта работа финансировалась NCI 1R01CA239261-01 (для кухни), грантами NIH P30AI28697 (ядро вирусологии UCLA CFAR, ядро генной и клеточной терапии и гуманизированное ядро мыши), U19AI149504 (PI: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (для Zhen), NIAID R2120200174 (PI: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Эта работа также была поддержана Институтом СПИДа UCLA, Благотворительным фондом Джеймса Б. Пендлтона и Фондом семьи Маккарти.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Чашка Петри 60 мм | Thermo Scientific Nunc | 150288 | Для аликвотирования пищевых АРТ |
| APC античеловеческого антитела к CD8 | Biolegend | 344722 | Для проточной цитометрии |
| BD LSRFortessa | BD biosciences | Для сбора проточных данных | |
| CD34 микрошариков | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | Для генерации мышей NSG-BLT |
| Центрифужные пробирки | Falcon | 14-432-22 | Для растворения АРТ |
| DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | Для приготовления пищи АРТ |
| Элвитегравир | Гилеад | Подаренный из Гилеад | |
| Эмтрицитабин | Гилеад | Подаренный от Гилеад | |
| FITC античеловеческий CD3 Антитела | Biolegend | 317306 | Для проточной цитометрии |
| Программное обеспечение Flowjo | Для анализа данных проточной цитометрии | ||
| прямой праймер HIV-1: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′; | IDT | Tailored For | Viral Load RT-PCR |
| HIV-1 Probe: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3′; | IDT | Tailored Для | вирусной нагрузки ОТ-ПЦР |
| ВИЧ-1 обратный праймер: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′; | IDT Tailored | For Viral Load RT-PCR | |
| Ткань человеческого плода | Advanced Bioscience Resources, Inc | ||
| Mice, штамм NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ | Лаборатория Джексона | 5557 | Для конструирования гуманизированных мышей |
| Pacific Blue anti-human CD45 | Biolegend | 304022 | Для проточной цитометрии |
| PerCP anti-human CD4 Antibody | Biolegend | 300528 | Для проточной цитометрии |
| QIAamp Viral RNA Kits | Qiagen | 52904 | Для измерения вирусной нагрузки |
| Ралтегравир | Merck | Подаренный от Merck | |
| Стерильные клеточные скребки | Thermo Scientific | 179693 | Для аликвотирования АРТ пищевой |
| TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit | Прикладные биосистемы | 4392653 | Для определения вирусной нагрузки плазмы |
| Тенофовир дизопроксил фумарат | Гилеад | Подаренный от Гилеад | |
| Триметоприм-сульфаметоксазол | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | Для поддержания стерильности пищевых продуктов ART. Каждая чайная ложка объемом 5 мл содержит 200 мг сульфаметоксазола, USP 40 мг триметоприма, USP NMT 0,5% спирта |
Ссылки
- Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
- May, M. T., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
