Методическая статья

Просвечивающая электронная микроскопия: инструмент хирургической патологии при нейробластоме

DOI:

10.3791/63994

⸱

6 июля 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Anatomic Pathology Division of EORLA, Children's Hospital of Eastern Ontario, University of Ottawa, 2Department of Laboratory Medicine and Pathology, University of Alberta, 3Department of Pediatrics, University of Alberta, Stollery Children's Hospital, 4Department of Orthopedics, Tianyou Hospital, Wuhan University of Science and Technology, 5Institute of Pathology, Medical University of Innsbruck

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Небольшие круглые синеклеточные опухоли у детей представляют собой интригующую и сложную коллекцию новообразований. Поэтому просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) и профессиональные знания об опухолях у детей могут быть чрезвычайно ценными в хирургической патологии. Здесь мы представляем протокол проведения ПЭМ для диагностики нейробластомы, одной из наиболее распространенных солидных опухолей в детском возрасте.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Малые круглые синеклеточные опухоли у детей (PSRBCT) представляют собой интригующую и сложную коллекцию новообразований. Световая микроскопия небольших круглых опухолей голубых клеток выявляет маленькие круглые клетки. Они содержат в целом гиперхроматическое ядро и относительно скудную базофильную цитоплазму. Детские небольшие круглые синеклеточные опухоли включают в себя несколько образований. Обычно они включают опухоль Вильмса, нейробластому, рабдомиосаркому, саркому Юинга, ретинобластому, лимфому и мелкоклеточную остеосаркому, среди прочих. Даже с помощью иммуногистохимии дифференциальный диагноз этих новообразований может быть спорным при световой микроскопии. Слабое окрашивание или неоднозначный фон могут отпугнуть патологоанатомов от принятия правильного диагностического решения. Кроме того, молекулярная биология может предоставить огромное количество данных, которые трудно различить, а некоторые транслокации могут быть замечены более чем в одной категории. Таким образом, просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) может быть чрезвычайно ценной. Здесь мы делаем акцент на современном протоколе обработки данных ПЭМ нейробластомы. Опухолевые клетки с клубками цитоплазматических отростков, содержащими нейросекреторные гранулы, могут диагностировать нейробластому.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа патологоанатома может быть довольно сложной как в клинической диагностике, так и в исследовательской сфере. Эволюция световой микроскопии в18-м и19-м веках была замечательной. Мощность электронного микроскопа опирается в первую очередь на длину волны электронов, которая короче светового 1,2,3. До появления поликлональных и моноклональных антител и их применения в иммуногистохимии ПЭМ играл важную роль в диагностике небольших круглых синеклеточных опухолей.

Начиная с 90-х годов прошлого века, иммуногистохимический подход заменил морфологический инструмент в диагностике4. В настоящее время существуют тысячи новых поликлональных и моноклональных антител, направленных на антигены небольшой круглой синеклеточной опухоли группы 4,6,7,8. В последнее десятилетие очень плодотворного20-го века и в первом десятилетии начала21-го века молекулярная биология, включая флуоресцентную гибридизацию in situ, от геномных зондов до секвенирования следующего поколения, по-видимому, вытеснила значительную прикладную роль иммуногистохимии в нескольких лабораториях. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в Соединенных Штатах Америки, Канадское агентство по контролю за продуктами питания (CFIA) в Канаде, Агентство по охране окружающей среды (EPA) или аналогичные правительственные органы в других странах не всегда одобряют протоколы молекулярной биологии9. Кажется, что существует много информации, которую довольно сложно вставить в отчет о патологии, которая может быть использована в терапевтических целях, и выбор хорошо финансируемой и функционирующей лабораторной информационнойсистемы имеет решающее значение. В то же время иммуногистохимия выявила многочисленные подводные камни: эпителиальные опухоли демонстрируют мезенхимальные маркеры и наоборот11. Эпителиально-мезенхимальный переход спутал некоторые границы в группах патологии12,13. В последние несколько лет стало очевидным, что электронная микроскопия процветает в нескольких лабораторияхпо всему миру. В частности, время обработки образцов тканей сократилось с недель до всего лишь 3 дней и даже меньше при использовании нескольких протоколов, приближающихся к окрашиванию моноклональными или поликлональными антителами 4,10.

Кроме того, применение электронной камеры, соединенной с электронным микроскопом, помогло патологоанатомам получить быстрое изображение, которое является универсальным в различных операционных системах. Наконец, некоторые антитела, даже после забора антигена, трудно выявить в некоторых областях некроза или изменений, связанных с аутофагией/ишемией. В то же время электронная микроскопия в надежных руках все еще может дать отличные результаты и подсказки для правильной классификации неизвестных патологическихопухолей.

Педиатрическая группа малых круглых синеклеточных опухолей включает в себя несколько опухолей, в основном нейробластому, опухоль Вильмса или нефробластому, рабдомиосаркому и саркому Юинга. Данные молекулярной биологии относительно педиатрической группы небольших круглых опухолей голубых клеток могут быть ошеломляющими из-за применяемых методов. Маленькие круглые голубые клетки могут не сильно отличаться при обычном окрашивании (окрашивание гематоксилином и эозином), а некоторые опухоли могут иметь аберрантные иммунофенотипические признаки. С момента открытия ПЭМ в молекулярной биологии были достигнуты огромные успехи. В группе небольших круглых синеклеточных опухолей некоторые новообразования могут встречаться чаще, чем другие, но их необходимо учитывать. Несмотря на то, что папиллярная почечно-клеточная карцинома по существу не является небольшой круглой синеклеточной опухолью, а в основном имеет сосочки, она может иметь некоторые круглые клеточные участки, которые, возможно, необходимо отличать от других хорошо известных небольших круглых синеклеточных опухолей (например, опухоли Вильмса) с использованием несколькихвспомогательных методов. В конечном счете, метанефрические стромальные опухоли также могут нуждаться в дифференциальной диагностике17. Рабдоидная опухоль является особенно злокачественной опухолью у детей, относящейся к почечному и внепочечному подтипу18.

Нейробластома является одним из наиболее распространенных солидных злокачественных новообразований в младенчестве и детстве. Клетки нейробластомы – это злокачественные клетки этой солидной опухоли, которые коварно возникают из производных первичного нервного гребня. Его диагностика и дифференциальная диагностика могут быть затруднены. Его естественная биология претерпела замечательный прогресс за последние пару десятилетий. Семейство транскрипционных факторов forkhead характеризуется отчетливым доменом «forkhead» (FOXO3/FKHRL1). Эти факторы транскрипции функционируют как триггер апоптоза (запрограммированной гибели клеток) за счет экспрессии генов, необходимых для клеточной гибели. FOXO3/FKHRL1 активируется 5-аза-2-дезоксицитидином и индуцирует молчаливую каспазу-8, и этот комплекс играет решающую роль в развитии нейробластомы. Ядерный FOXO3 предсказывает неблагоприятные клинические исходы и способствует ангиогенезу опухоли при нейробластоме 7,19. Несмотря на достижения в области молекулярной патологии, классификация Шимада остается стандартом практики для любого патологоанатома и детского онколога. Это имеет решающее значение для дифференциации между благоприятной и неблагоприятной гистологией 20,21,22,23.

Обоснование разработки простого протокола для электронной микроскопии опухолей с подозрением на нейробластому связано с целесообразностью и обоснованностью ультраструктурного исследования образца ткани. Он редко изменяется из-за проблем, обычно возникающих при использовании иммуногистохимии. Обоснование и протокол были положены в основу нескольких учебников и научных статей по детской патологии и электронной микроскопии 4,24,25. Этот протокол охватывает опыт трех десятилетий работы автора и будет сосредоточен на нескольких PSRBCT, уделяя особое внимание личному опыту и обзору литературы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, выполненные в исследованиях с участием людей, соответствовали этическим нормам институционального и/или национального исследовательского комитета, а также Хельсинкской декларации 1964 года и более поздним поправкам к ней или сопоставимым этическим стандартам. Исследование методом электронной микроскопии является частью обычной процедуры микроскопического исследования образцов, полученных в диагностических целях, и не требует одобрения Комитета по биоэтике. Данное исследование является ретроспективным и соблюдает полную анонимность образцов.

1. Протокол ПЭМ для забора FFPE (фиксированных формалином и парафином) и образцов тканей, фиксированных глутаральдегидом

  1. Извлеките последние препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, и тканевый блок FFPE.
  2. С помощью перманентного маркера выберите интересующую область на предметном стекле и сопоставьте ее с областью на тканевом блоке.
  3. Вырежьте выбранный участок новым лезвием бритвы из блока и аккуратно нарежьте его на кубики по 5 мм на фильтровальной бумаге.
  4. Поместите фильтровальную бумагу с извлеченной салфеткой в чашку Петри с этикеткой. Поместите чашку Петри в духовку при температуре 60-70 °C на 15 минут, т.е. пока парафин не расплавится (парафин состоит из смеси твердых углеводородов с прямой цепью в температуре плавления 48-66 °C (от 120 до 150 °F)) и не впитается фильтровальной бумагой.
  5. Переложите извлеченную ткань без парафина в сцинтилляционный флакон, наполненный 4 мл 100% толуола (метилбензола) v/v [100% толуол означает 100 мл толуола]. Убедитесь, что образцы непрерывно вращаются в процессе депарафинизации (скорость вращения: 24 оборота/мин).
  6. Пройдите через две замены толуола, по 1 часу каждая, и одну замену 4 мл 100% толуола по 30 минут каждая, используя вращающееся устройство под углом.
  7. Проведите через одну замену 4 мл 100% абсолютного этанола (C2H5OH) в течение 1 ч, а затем две замены 4 мл 100% абсолютного этанола в течение 30 мин каждая. Затем еще одна смена 30 мин в 4 мл 70% этанола.
  8. Проведите через одну замену 4 мл 0,1 М буфера какодилата натрия в течение 30 минут. Перенесите образцы в 4 мл 2,5% глутаральдегида и держите при 4 °C до обработки.
  9. Используйте следующие шаги в автоматизированном тканевом процессоре для стандартизации обработки: 0,1 М буфер какодилата натрия в течение 5 мин, 2% тетраоксид осмия в течение 1 ч и 50 мин, dH2O в течение 5 мин, 50% этанол в течение 15 мин, 70% этанол в течение 30 мин, 100% этанол в течение 15 мин (три раза), 100% этанол в течение 30 мин (три раза), 100% этанол в течение 45 минут, ацетон в течение 50 минут, смола в течение 1 часа (два раза) и свежая смола в течение ночи. Объем всех растворов составляет 15 мл.
  10. Залейте свежей смолой прямо из тканевого процессора.
    1. Поместите полиэтиленовые капсулы в держатель с пронумерованными полосками бумаги. Капните в капсулы свежую смолу, переложите образец в соответствующие блоки и оставьте блоки на ночь в духовке при температуре 60 °C (140 °F).
  11. Полутонкие (500 нм) срезы окрасить 1% толуидинового синего на конфорку, минимальный нагрев в течение 30 с, прополоскать при dH2O, а затем установить покровную крышку.
  12. Здесь микротом Ultracut (UCM) используется для резки полутонких секций.
    1. Возьмите закладной блок из смолы и установите его в держатель блока UCM. Затем установите держатель блока на столик UCM и затяните его.
    2. Разрежьте излишки смолы вокруг образца с помощью лезвия бритвы с однолезвием с помощью окуляра. Вырежьте лицевую сторону блока в форме трапеции.
    3. Снимите держатель блока со сцены и установите его в кронштейн UCM, плотно затянув. Далее установите держатель лезвия на столик UCM. Наконец, затяните стеклянный нож на держателе лезвия.
    4. Используя окуляры и свет, обеспечиваемый UCM, медленно, как можно ближе подведите край стеклянного ножа к поверхности смоляного блока, который нужно разрезать. Затяните держатель лезвия на месте на сцене.
    5. Установите толщину резки UCM на 500 нм и обрежьте смоляной блок до 75% по всей поверхности.
    6. Поменяйте стеклянный нож на новый. Добавьте стерильную воду в резервуар для стеклянного ножа.
    7. Нанесите на предметное стекло микроскопа маркировку с номером случая и капните на предметное стекло четыре отдельные капли стерильной воды.
    8. Еще при настройке 500 нм вырезаем четыре секции из блока. С помощью тонких щипцов переведите по 1 секции за раз в одну из капель воды на предметное стекло. Каждая капля на слайде будет содержать одну секцию. Сушите предметное стекло на горячей плите при самом низком нагреве до полного высыхания (30 с).
  13. Окрашиваем методом Толуидина синего. Промойте в воде и накройте крышкой. Рассмотрите срезы толуидинового синего под световым микроскопом. Если видны нужные тканевые структуры, разрежьте ультратонкие срезы. Если желаемые тканевые структуры не видны, вырежьте более глубокие срезы и окрашивайте их, используя те же шаги, пока желаемые структуры не обнажаются и не будут показаны на синем предметном стекле толуидина.
  14. Когда из толуидинового синего среза будет определена нужная область для электронной микроскопии, вырежьте ультратонкие срезы на медных сетках. Ультратонкие ломтики нарезать с помощью ультрамикротома (образцы, предназначенные для просмотра в ПЭМ, должны быть нарезаны очень тонкими ломтиками (80 нм)).
    1. Возьмите закладной блок из смолы и установите его в держатель блока UCM. Затем установите держатель блока на столик UCM и затяните его.
    2. С помощью окуляра разрежьте смолу вокруг нужной области для электронной микроскопии с помощью лезвия бритвы с однолезвийным покрытием. Разрежьте лицевую сторону блока в форме трапеции, размером не более 1 мм квадрата. Если желаемую область для электронной микроскопии трудно увидеть из-за яркого света, используйте каплю хлороформа, чтобы выделить структуры в блоке смолы.
    3. Снимите держатель блока со сцены и установите его в кронштейн UCM, плотно затянув. Далее установите держатель лезвия на столик UCM. Наконец, затяните алмазный нож на держателе лезвия.
    4. Используя окуляры и свет, обеспечиваемый UCM, медленно, как можно ближе сдвиньте край алмазного ножа к поверхности смоляного блока, который нужно резать. Затяните держатель лезвия на месте на сцене.
    5. Отрегулируйте различные углы наклона алмазного ножа с помощью винтов UCM. Следите за тем, чтобы край алмазного ножа был максимально точно выровнен с поверхностью разрезаемого блока. Наполните резервуар алмазного ножа стерильной водой.
    6. Установите UCM на толщину 80 нм и скорость 1 мм/с. Здесь для ультратонкой резки используется автоматизированная функция. Установите окно резки на UCM (верх и низ грани блока).
    7. Нажмите кнопку «Пуск » на UCM, чтобы начать секционирование. Секции будут плавать на стерильном резервуаре алмазного ножа.
    8. Когда будет срезано достаточное количество секций, используйте пары хлороформа, чтобы выпрямить срезы. Обмакните ватный тампон в хлороформ и проведите им над срезами, не касаясь их.
  15. Опустите медную сетку в 100% спирт, а затем в стерильную воду с помощью тонких щипцов. Очистите каждую решетку перед использованием. Выделите секции на нескольких сетках.
  16. Оставьте сетки с секциями на маркированной фильтровальной бумаге. Поместите эту фильтровальную бумагу в чашку Петри и поставьте в духовку при температуре 60 °C на 30 минут, чтобы секции высохли на решетках.
  17. Затем выполните контрастное окрашивание.
    1. Окрасить решетки в уранилацетат или любой экологически чистый заменитель на 1 мин. Затем промойте их в стерильной воде для инъекций (40 погружений в четыре разные емкости с водой для каждого полоскания после уранилацетата и цитрата свинца). Шаг цитрата свинца также составляет 1 мин.
  18. Вставьте решетку в ПЭМ, позволив высоковольтному электронному пучку излучаться катодом и создаваться магнитными линзами. Луч, частично прошедший через тонкий (электронно-полупрозрачный) образец, формирует на экране ПЭМ-информацию (см. ниже).

2. Протокол ПЭМ для сканирования и фотографирования образцов

  1. После того, как срезы на сетках будут окрашены, просвечивайте их с помощью электронного микроскопа. На электронном микроскопе включите напряжение ACC до заранее установленного значения (200-300 кВ), которое зависит от используемого электронного микроскопа.
  2. На компьютере включите программное обеспечение цифровой камеры и введите номер корпуса. Это важно, потому что микрофотографии сохраняются в соответствующем файле дела.
  3. Загрузите сетку в электронный микроскоп, вытяните образец пистолета наполовину и переключите переключатель в положение ВОЗДУХ , чтобы вакуум из камеры пистолета заполнился окружающим (комнатным) воздухом.
  4. Как только он наполнится воздухом, вытащите образец пистолета. Поместите образец пистолета на предназначенный для этого держатель. Затем откройте держатель сетки на кончике пистолета.
  5. Установите сетку на место. Закройте держатель решетки и убедитесь, что решетка надежно закреплена.
  6. Поместите образец пистолета обратно в камеру для образцов на полпути и переключите переключатель в положение EVAC , чтобы создать вакуум в камере для образцов.
  7. Зеленый световой индикатор загорится, когда в камере для образцов будет достигнут вакуум. Затем осторожно вставьте образец пистолета в колонку электронного микроскопа и убедитесь, что он не движется слишком быстро. В противном случае он мог бы повредить объект на кончике образца оружия.
  8. Как только сетка прочно встанет на место в колонке электронного микроскопа, включите нить накала на промежуточную (заранее установленную) настройку насыщения.
  9. Включите камеру с помощью переключателя ВКЛ/ВЫКЛ. На компьютере нажмите « Изображение в реальном времени » в программном обеспечении для обработки изображений.
  10. На электронном микроскопе нажмите кнопку «Малое увеличение » и откройте диафрагму объектива. Это позволяет выбрать желаемую зону грохочения. Затем расположите нужную область сечения в центре экрана компьютера, используя два контроллера по обе стороны от колонны электронного микроскопа.
  11. На электронном микроскопе нажмите кнопку «Зум» и закройте диафрагму объектива, чтобы получить лучший контраст.
  12. Начните просмотр разреза с микрофотографий с увеличением 2500x. Затем отрегулируйте фокусировку с помощью кнопки воблера и кнопки яркости на электронном микроскопе, чтобы обеспечить качество микрофотографии.
  13. Нажмите на кнопку «Итоговое изображение» на компьютере, чтобы сделать микроснимок. Если цвета неровные, выполните коррекцию фона в программном обеспечении камеры. Кроме того, отрегулируйте контраст на конечном изображении с помощью программного обеспечения перед сохранением микрофотографии.
  14. Когда микрофотография сохраняется, дважды проверьте номер корпуса и увеличение, чтобы обеспечить надлежащую идентификацию сделанных микрофотографий.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В некоторых случаях пользователь также может ввести дополнительные подписи, а также ввести инициалы технолога электронной микроскопии.
  15. Выполните процесс микрофотографирования по всей площади исследуемого среза. После достаточного 2500-кратного увеличения микрофотографии сохраняются, чтобы охватить интересующую область, захватить микрофотографии с 4000-кратным и 8000-кратным увеличением и сохранить их на компьютере с соответствующей идентификацией по номеру дела.
  16. Сделайте крупный план раздела для конкретных ультраструктурных деталей, если даны очень конкретные инструкции по скринингу. Затем сохраните измерения конкретных ультраструктурных деталей в компьютере с учетом большего увеличения, если это необходимо.
  17. Когда просеивание образцов будет завершено, последовательно выключите нить накала, камеру, высокое напряжение и программное обеспечение камеры. Далее снимите сетку с колонки электронного микроскопа, пропустив воздух в камеру для образца пистолета.
  18. Поместите сетку в желатиновую капсулу и храните капсулу в коробке с соответствующей маркировкой вместе с блоками смолы в том же футляре. Поместите образец оружия обратно в патронник пистолета и храните его в прохладном и сухом месте, чтобы сохранить используемый материал.
  19. Передавайте цифровые микрофотографии на общие платформы для совместной работы (например, SharePoint) или внутренние серверы, чтобы патологоанатом мог их просмотреть.
  20. Введите рабочие единицы в информационную систему лаборатории (ЛИС).
  21. Если требуются более конкретные микрофотографии, вытащите сетку полей и повторно используйте их для дополнительного скрининга или конкретных вопросов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь представлены отличительные особенности нейробластомы в ПЭМ. Здесь мы проиллюстрируем отличительные особенности нейробластомы в ПЭМ.

Нейробластома является одним из наиболее распространенных солидных злокачественных новообразований в младенчестве и детстве. Клетки нейробластомы – это злокачественные клетки этой солидной опухоли, которые коварно возникают из производных первичного нервного гребня. Этот гистогенез объясняет некоторые биохимические и морфологические особенности этой голубой ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом повествовательном обзоре с соответствующим протоколом мы выделили отличительные ультраструктурные особенности нейробластомы. В конце концов, мы предполагаем, что электронная микроскопия далеко не «мертвая» или древняя техника, постулирующая открытие новой роли в сочетании с технологиями омикса одиночных клеток. В этой статье мы хотели бы подчеркнуть недавнюю роль электронной микроскопии в детской патологии 4,27. Ниже подро...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Первый автор получает авторские гонорары от следующих издательств: Springer (https://link.springer.com/book/10.1007/978-3-662-59169-7; ISBN: 978-3-662-59169-7) и Nova (https://novapublishers.com/shop/science-culture-and-politics-despair-and-hopes-in-the-time-of-a-pandemic/; ISBN: 978-1-53619-816-4). Все гонорары идут в педиатрические благотворительные организации.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы высоко оценили опыт и щедрую поддержку доктора Ричарда Вриенда, ранее работавшего сотрудником Службы здравоохранения Альберты в больнице Университета Альберты, и Стивена Джоя (1972-2019), также ранее работавшего сотрудником Службы здравоохранения Альберты в больнице Университета Альберты. Мы посвящаем эту работу памяти г-на Джоя, старшего технолога-эксперта по ультраструктурным исследованиям, который трагически и безвременно ушел из жизни несколько лет назад. Г-н Джой был одним из основных участников большинства исследований в области электронной микроскопии в провинции Альберта, Канада. Наши мысли и молитвы за него и его семью. Мы также в долгу перед г-жой Лесли Бернет за ее помощь и советы. Исследования доктора К. Серджи финансировались за счет щедрости Детской больницы Восточного Онтарио, Оттава, Онтарио, и Фонда детской больницы Столлери, а также поддержки Женской больницы Лоис Хоул через Научно-исследовательский институт женского и детского здоровья (WCHRI, Grant ID #: 2096), Фонд естественных наук провинции Хубэй для Хубэйского технологического университета (грант 100 талантов для программы набора иностранных экспертов, общее финансирование: Цифровая диагностика инфекций и онкологии на основе ПЦР и NGS, 2017-2022 гг.), Австрийский исследовательский фонд (Fonds zur Förderung der wissenschaftlichen Forschung, FWF, Grant ID L313-B13), Канадский фонд женского здоровья («Раннее сердце плода-RES0000928»), Канадский фонд женского здоровья («Раннее сердце плода-»), Общество исследования рака (экспрессия гена фактора фон Виллебранда в раковых клетках), Канадские институты исследований в области здравоохранения (Омега-3 жирные кислоты для лечения заболевания печени, связанного с кишечной недостаточностью: трансляционное научное исследование, 2011-2014, CIHR 232514) и Саудовское культурное бюро, Оттава, Канада. Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ацетон, реактив ACSЭлектронная микроскопия Sciences10014Реагент как установлено Американским химическим обществом (ACS Reagent).
Автоматизированный тканевый процессорElectron Microscopy SciencesL12600LYNX II Автоматизированный тканевый процессор для гистологии и микроскопии.
Программное обеспечение для цифровой камерыGatanL12600Цифровая микрография
Смола СперраЭлектронная микроскопия Sciences14300Встраиваемая смола. Он обеспечивает отличное проникновение для встраивания тканей и быструю инфильтрацию. Блоки обладают отличными качествами обрезки и секции, в то время как тонкие срезы демонстрируют жесткие свойства под электронным пучком.
Этиловый спиртЭлектронная микроскопия наук15058100% этиловый спирт с молекулярным ситом, 50% и 70%.
Глутаральдегид, 25% ЭМ класса водный в сыворотке крови Флаконэлектронной микроскопиинаук 162142,5% глутеральдегида в 0,1 М какодилатном буфере, pH 7,2-7,4 изготовлен из 25% глутеральдегида, первичный фиксатор для образцов тканей ПЭМ.
Тетраоксид осмияЭлектронная микроскопия Sciences19110Второй фиксатор во время обработки тканей TEM используется в качестве OsO4 в дистиллированной воде
Полиэтиленовые капсулыЭлектронная микроскопия Sciences70021Капсулы с плоским дном, размер 00
СцинтилляторЭлектронная микроскопия Sciences82010Четырехугольный детектор
Phillip Лезвиебритвы с одним лезвиемЭлектронная микроскопия науки71952-10Лезвие для чистого Rm., 10/дисп.
Буфер какодилата натрияЭлектронная микроскопия Sciences11655Буфер какодилата натрия, 0,4M, pH 7,2, получен из тригидрата тригидрата
дубильной кислоты натрия, реагент, A.C.S., EM GradeElectron Microscopy Sciences21700как установлено Американским химическим обществом (ACS Reagent).
Просвечивающий электронный микроскоп (1)HitachiHitachi 7100Мы используем его при настройке HV 75
Просвечивающий электронный микроскоп (2)JEOLJEM-1010Мы используем его при настройке HV 38
Реагент дляэлектронной микроскопии22030в соответствии с установлением Американского химического общества (ACS Reagent)
Ультракатовый микротомLeica11865766Ультрамикротом
УранилацетатЭлектронная микроскопия Sciences22400Uranyless, заменитель уранилацетата
, толуола Sciences

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nitta, R., Imasaki, T., Nitta, E. Recent progress in structural biology: lessons from our research history. Microscopy (Oxford). 67 (4), 187-195 (2018).
  2. Moser, T. H., et al. The role of electron irradiation history in liquid cell transmission electron microscopy. Science Advances. 4 (4), (2018).
  3. Gordon, R. E. Electron microscopy: A brief history and review of current clinical application. Methods in Molecular Biology. 1180, 119-135 (2014).
  4. Sergi, C. M. Pathology of Childhood and Adolescence. An Illustrated Guide. 1st edn. , Springer. Berlin, Heidelberg. (2020).
  5. Sergi, C., Dhiman, A., Gray, J. A. Fine needle aspiration cytology for neck masses in childhood. An illustrative approach. Diagnostics (Basel). 8 (2), 28(2018).
  6. Sergi, C., Kulkarni, K., Stobart, K., Lees, G., Noga, M. Clear cell variant of embryonal rhabdomyosarcoma: report of an unusual retroperitoneal tumor--case report and literature review). European Journal of Pediatric Surgery. 22 (4), 324-328 (2012).
  7. Hagenbuchner, J., et al. Nuclear FOXO3 predicts adverse clinical outcome and promotes tumor angiogenesis in neuroblastoma. Oncotarget. 7 (47), 77591-77606 (2016).
  8. Xu, X., Sergi, C. Pediatric adrenal cortical carcinomas: Histopathological criteria and clinical trials. A systematic review. Contemporary Clinical Trials. 50, 37-44 (2016).
  9. Khan, A., Feulefack, J., Sergi, C. M. Pre-conceptional and prenatal exposure to pesticides and pediatric neuroblastoma. A meta-analysis of nine studies. Environmental Toxicology and Pharmacology. 90, 103790(2022).
  10. Sergi, C. M. Implementing epic beaker laboratory information system for diagnostics in anatomic pathology. Risk Management and Healthcare Policy. 15, 323-330 (2022).
  11. D'Cruze, L., et al. The role of immunohistochemistry in the analysis of the spectrum of small round cell tumours at a tertiary care centre. Journal of Clinical Diagnostic Research. 7 (7), 1377-1382 (2013).
  12. Garcia, E., et al. Epithelial-mesenchymal transition, regulated by beta-catenin and Twist, leads to esophageal wall remodeling in pediatric eosinophilic esophagitis. PLoS One. 17 (3), 0264622(2022).
  13. Al-Bahrani, R., Nagamori, S., Leng, R., Petryk, A., Sergi, C. Differential expression of sonic hedgehog protein in human hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma. Pathol and Oncology Research. 21 (4), 901-908 (2015).
  14. Taweevisit, M., Thorner, P. S. Electron microscopy can still have a role in the diagnosis of selected inborn errors of metabolism. Pediatric and Developmental Pathology. 22 (1), 22-29 (2019).
  15. Ghadially, F. N. Diagnostic Electron Microscopy of Tumours. , Butterworths. (1980).
  16. Geiger, K., et al. FOXO3/FKHRL1 is activated by 5-aza-2-deoxycytidine and induces silenced caspase-8 in neuroblastoma. Molecular Biology of the Cell. 23 (11), 2226-2234 (2012).
  17. Shimada, H. Transmission and scanning electron microscopic studies on the tumors of neuroblastoma group. Acta Pathologica Japonica. 32 (3), 415-426 (1982).
  18. Samardzija, G., et al. Aggressive human neuroblastomas show a massive increase in the numbers of autophagic vacuoles and damaged mitochondria. Ultrastructural Pathology. 40 (5), 240-248 (2016).
  19. Suganuma, R., et al. Peripheral neuroblastic tumors with genotype-phenotype discordance: a report from the Children's Oncology Group and the International Neuroblastoma Pathology Committee. Pediatric Blood and Cancer. 60 (3), 363-370 (2013).
  20. Joshi, V. V. Peripheral neuroblastic tumors: pathologic classification based on recommendations of international neuroblastoma pathology committee (Modification of shimada classification). Pediatric and Developmental Pathology. 3 (2), 184-199 (2000).
  21. Schultz, T. D., Sergi, C., Grundy, P., Metcalfe, P. D. Papillary renal cell carcinoma: report of a rare entity in childhood with review of the clinical management. Journal of Pediatric Surgery. 46 (6), 31-34 (2011).
  22. Brisigotti, M., Cozzutto, C., Fabbretti, G., Sergi, C., Callea, F. Metanephric adenoma. Histology and Histopathology. 7 (4), 689-692 (1992).
  23. McKillop, S. J., et al. Adenovirus necrotizing hepatitis complicating atypical teratoid rhabdoid tumor. Pediatric International. 57 (5), 974-977 (2015).
  24. Kim, N. R., Ha, S. Y., Cho, H. Y. Utility of transmission electron microscopy in small round cell tumors. Journal of Pathology and Translational Medicine. 49 (2), 93-101 (2015).
  25. Iida, M., Tsujimoto, S., Nakayama, H., Yagishita, S. Ultrastructural study of neuronal and related tumors in the ventricles. Brain Tumor Pathology. 25 (1), 19-23 (2008).
  26. Erlandson, R. A., Nesland, J. M. Tumors of the endocrine/neuroendocrine system: an overview. Ultrastructural Pathology. 18 (1-2), 149-170 (1994).
  27. Sergi, C. Microscopy Science: Last Approaches on Educational Programs and Applied Research.Microscopy. Torres-Hergueta, E., Méndez-Vilas, A. , Formatex Research Center S.L. 101-112 (2018).
  28. Song, D., et al. FOXO3 promoted mitophagy via nuclear retention induced by manganese chloride in SH-SY5Y cells. Metallomics. 9 (9), 1251-1259 (2017).
  29. Chiu, B., Jantuan, E., Shen, F., Chiu, B., Sergi, C. Autophagy-inflammasome interplay in heart failure: A systematic review on basics, pathways, and therapeutic perspectives. Annals of Clinical and Laboratory Science. 47 (3), 243-252 (2017).
  30. Radogna, F., et al. Cell type-dependent ROS and mitophagy response leads to apoptosis or necroptosis in neuroblastoma. Oncogene. 35 (29), 3839-3853 (2016).
  31. Franchi, A., et al. Immunohistochemical and ultrastructural investigation of neural differentiation in Ewing sarcoma/PNET of bone and soft tissues. Ultrastructural Pathology. 25 (3), 219-225 (2001).
  32. Llombart-Bosch, A., et al. Soft tissue Ewing sarcoma--peripheral primitive neuroectodermal tumor with atypical clear cell pattern shows a new type of EWS-FEV fusion transcript. Diagnostic Molecular Pathology. 9 (3), 137-144 (2000).
  33. Parham, D. M., et al. Neuroectodermal differentiation in Ewing's sarcoma family of tumors does not predict tumor behavior. Human Pathology. 30 (8), 911-918 (1999).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Видео скоро будет доступно

Похожие статьи