Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Когерентная антистоковская рамановская спектроскопия (CARS) для визуализации миелинизации в срезах мозга

2.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64013

⸱

22 июля 2022 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Integrative Biology, Oklahoma State University, 2Department of Physiology and Biophysics, University of Colorado Anschutz, 3Advanced Light Microscopy Core, University of Colorado Anschutz

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Визуализация миелинизации является важной целью для многих исследователей, изучающих нервную систему. CARS - это метод, совместимый с иммунофлуоресценцией, который может нативно отображать липиды в ткани, такой как мозг, освещая специализированные структуры, такие как миелин.

Аннотация

Когерентная антистоковская рамановская спектроскопия (CARS) — это метод, классически используемый химиками и физиками для получения когерентного сигнала сигнатурных колебаний молекул. Тем не менее, эти вибрационные сигнатуры также характерны для молекул в анатомической ткани, такой как мозг, что делает его все более полезным и применимым для приложений нейробиологии. Например, CARS может измерять липиды, специфически возбуждая химические связи внутри этих молекул, что позволяет количественно оценивать различные аспекты ткани, такие как миелин, участвующий в нейротрансмиссии. Кроме того, по сравнению с другими методами, обычно используемыми для количественной оценки миелина, CARS также могут быть настроены на совместимость с иммунофлуоресцентными методами, что позволяет совместно маркировать с другими маркерами, такими как натриевые каналы или другие компоненты синаптической передачи. Изменения миелинизации являются по своей сути важным механизмом при демиелинизирующих заболеваниях, таких как рассеянный склероз или другие неврологические состояния, такие как синдром хрупкой Х или расстройства аутистического спектра. В заключение, CARS может быть использован инновационными способами, чтобы ответить на насущные вопросы в неврологии и предоставить доказательства основных механизмов, связанных со многими различными неврологическими состояниями.

Введение

Потенциалы действия являются основной единицей информации в мозге, а распространение потенциала действия через аксоны образует один столп обработки информации 1,2,3. Нейроны обычно получают афферентные входы от нескольких других нейронов и интегрируют эти входы в заданное узкое временноеокно 4,5. Поэтому механизмам распространения потенциала действия в аксонах было уделено значительное внимание со стороны исследователей.

При распространении через аксон потенциал действия многократно регенерируется вдоль аксона для обеспечения надежного распространения6. В большинстве нейронов челюстных позвоночных (гнатостомов) аксоны окружены оболочкой миелина, который представляет собой богатое липидами вещество, продуцируемое близлежащими олигодендроцитами или шванновскими клетками, которые являются типами глиальных клеток (рассмотрено в 7,8). Эта миелиновая оболочка электрически изолирует аксон, уменьшая его емкость и позволяя распространять потенциал действия эффективно, быстро и с более низким потреблением энергии. Миелин не покрывает аксон равномерно, но он обшивает аксон сегментами, которые имеют короткие промежутки между ними, называемые узлами Ранвье (рассмотрено в 9,10). На скорость распространения потенциала действия влияет как толщина миелинизации, контролирующая уровень электрической изоляции аксона, так и расстояние между узлами Ранвье, управляющими частотой, с которой регенерируются потенциалыдействия вдоль аксона.

Существует большое количество литературы, предполагающей, что толщина миелинизации влияет на скорость распространения потенциала действия в аксонах 12,13,14. Кроме того, изменения в миелинизации аксонов могут привести к ряду дефицитов ЦНС 15,16,17,18,19,20,21. Поэтому неудивительно, что многие исследовательские усилия сосредоточены на измерении и характеристике миелинизации аксонов. Измерения толщины миелина чаще всего проводились с помощью электронной микроскопии, метода, который требует значительного количества подготовки тканей и сложен в использовании в сочетании с иммуногистохимией. Тем не менее, существует также более быстрый и простой метод измерения миелинизации аксонов, который основан на когерентной рамановской спектроскопии Против Стокса (CARS). Лазер CARS может быть настроен на различные частоты, и при настройке на частоты, которые подходят для возбуждения липидов, миелин может быть визуализирован без необходимости каких-либо дополнительных меток22. Липидная визуализация может быть объединена со стандартной иммуногистохимией таким образом, что липиды могут быть изображены вместе с несколькими флуоресцентными каналами23. Визуализация миелинизации с помощью CARS значительно быстрее, чем электронная микроскопия, и имеет разрешение, которое, хотя и ниже ЭМ, достаточно для обнаружения даже небольших различий в миелинизации в одном и том же типе аксонов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты соответствовали всем применимым законам, руководящим принципам Национальных институтов здравоохранения и были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Университета Колорадо Аншутц.

1. Животные

  1. Используйте C57BL/6J (stock #000664) мышей (Mus musculus), полученных из Лаборатории Джексона, или монгольских песчанок (Meriones unguiculatus), первоначально полученных из чарльз-Ривер.

2. Подготовка тканей

  1. Для транскардиальной перфузии передозировка грызунов представляет интерес с пентобарбиталом (120 мг/кг массы тела) и транскардиально перфузировав их фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS; 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 1,76 мМ KH2PO4, 10 мМ Na2HPO4) с последующим 4% параформальдегидом (PFA)24.
    1. В частности, откройте брюшную полость и грудную клетку с помощью ножниц и удерживайте грудную клетку на месте с помощью гемостатических щипцов Келли, чтобы обнажить сердце.
    2. Вставьте иглу 23 GA, подключенную к перфузионному насосу, в левый желудочек и быстро вырежьте правое предсердие с помощью мелких ножниц.
    3. Вводите PBS через перфузионный насос и иглу в сердце в течение 10 минут, чтобы очистить мозг и тело от крови.
    4. Переключите перфузионный насос на 4% PFA в течение 10 минут и проверьте жесткость конечностей и хвоста, чтобы подтвердить успешную перфузию.
  2. После перфузии обезглавить животных и удалить их мозг из черепа. Держите мозг на ночь в 4% PFA перед переводом на PBS. Встраивают стволы мозга в 4% агарозы (в PBS) и разрезают коронально с помощью вибратома толщиной 200 мкм.

3. Окрашивание

  1. Окрашивание свободно плавающих секций для Nissl, для визуализации клеточных тел (1:100), в средах антител (AB среда: 0,1 М фосфатного буфера (ПБ: 50 мМ KH2PO4, 150 мМ Na2HPO4), 150 мМ NaCl, 3 мМ Тритон-X, 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA)) в течение 30 мин при комнатной температуре на стандартном лабораторном шейкере25.
    1. Защитите секции от света с помощью алюминиевой фольги и/или крышки. Длины волн 550 нм или ниже совместимы с изображениями CARS (рисунок 1).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Хотя мы не ожидаем, что Triton-X или другие реагенты оказывают влияние на визуализацию липидов CARS, дополнительные средства контроля со специфическими средами антител могут быть оправданы.
  2. ТОЧКА ПАУЗЫ: Храните свободно плавающие секции (защищенные от света) в PBS до получения изображения. После секционирования визуализируйте участки мозга в течение 2 недель.

figure-protocol-1
Рисунок 1: Визуализация CARS может быть объединена с иммунофлуоресцентной визуализацией. Графики показывают, что визуализация CARS происходит при 660/640 нм красного спектра сигнала26. Эта длина волны достаточно удалена от зеленого, синего или ультрафиолетового диапазона, что позволяет сочетать сигнал CARS с иммунофлуоресценцией в этих диапазонах. В частности, график также показывает возбуждение и излучение для Nissl, помеченного синим флуорофором, который был объединен с CARS во время сбора репрезентативных результатов для этой публикации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

4. Визуализация

ПРИМЕЧАНИЕ: Лазерная установка CARS содержит волоконный лазер, который обеспечивает тактовую частоту 80 МГц, и лазер OPO (Оптический параметрический осциллятор) с настраиваемым диапазоном 770-990 нм с лучом Стокса, фиксированным на 1031 нм, которые необходимы для сбора сигнала CARS. Для обоих лучей имеется одна диафрагма.

  1. Прежде чем подавать образцы в микроскоп, включите и разогрейте лазер CARS не менее чем на 1 ч, выровняйте лазер CARS, а Koehler — конденсаторную оптику и диафрагму микроскопа для прямой визуализации CARS.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг имеет решающее значение для правильного функционирования микроскопии CARS.
    1. Для пространственного выравнивания двух лазерных лучей (накачки и стоуксов) получите доступ к двум внутренним PSD (чувствительным к положению детекторам) через графический интерфейс лазера CARS.
    2. Достигните временного выравнивания с помощью функции задержки в графическом интерфейсе лазера CARS, которая может помочь перекрыть импульсы двух лазеров (накачки и стоуки), которые имеют разные дисперсии из-за их разных длин волн. Таким образом, как временное, так и пространственное перекрытие пучков насоса и стоуксов осуществляется с помощью пользовательского ввода через графический интерфейс.
    3. Отрегулируйте внешний перископ (последние два зеркала установки), чтобы центрировать пространственно перекрывающиеся два лазера на сканирующих головных зеркалах микроскопа.
    4. Для наилучшего обнаружения бездесканирования CARS убедитесь, что конденсатор имеет Келер-эд (это означает, что конденсатор центрирован и сфокусирован на диафрагме для достижения равномерного освещения)
  2. Для иммунофлуоресцентной конфокальной визуализации и визуализации CARS установите лазер CARS, как с прямыми, так и с эпи CARS недесканированными детекторами (NND), включив конфокальный микроскоп, оснащенный видимыми лазерами для флуоресцентной визуализации (рисунок 2).
  3. Поместите секции в культуральную чашку с крышкой (для инвертированной микроскопии), PBS, чтобы избежать высыхания ткани, и стеклянной массой, чтобы держать ткань рядом с крышкой.
  4. Делайте z-стеки или одиночные изображения с 60X, 1,2 NA инфракрасным скорректированным водным объективом, который служит для сбора сигнала CARS в направлении эпи и через конденсатор 0,55 NA в прямом направлении для визуализации областей мозга, таких как медиальное ядро трапециевидного тела (MNTB).
    1. Делайте снимки CARS с мощностью насоса/зонда мощностью около 600 мВт и Stokes мощностью 300 мВт с помощью графического интерфейса лазера CARS. Эти значения мощности лазера измеряются системой внутри системы. Мощность обоих лазеров в месте расположения образца составляет менее 25 мВт и безопасна для образца ткани.
    2. Перекрытие насоса и пучков Стокса пространственно и временно. Настройте OPO на 797.2 нм. Это дает длину волны CARS 650 нм. Из-за более высокого энергетического уровня результирующее возвращение в основное состояние является анти-Стоксом (синий смещен) к возбуждению.
    3. Захват сигнала CARS в эпи или прямых недесканированных детекторах с помощью полосовых фильтров (640-680 нм) с последующим последовательным обнаружением метки иммунофлуоресценции (в данном случае флуоресцентно маркированной Nissl).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Маркер нейрональной сомы Nissl не попадает в полосовой фильтр CARS 640-680 нм, что позволяет сочетать флуоресценцию и визуализацию CARS на изображениях, представленных ниже.
    4. CARS и флуоресценция не разделяют PMT. Используйте эти настройки для оптимального липидного сигнала, чтобы выборочно изобразить миелинизацию в области мозга.
      ВНИМАНИЕ: Защитите пользователя от лазерного луча
  5. Сохраните изображения в виде файлов .oib, которые могут быть импортированы в программу анализа изображений для дальнейшей количественной оценки (рисунок 3).

figure-protocol-2
Рисунок 2: Диаграмма приборов CARS, показывающая лазеры CARS (красные стрелки) и неосканированное (NDD) эпи и прямое обнаружение, встроенное в конфокальное лазерное сканирование. В форвардном NDD мы приобретаем CARS для связей C-H (темно-красные стрелки) и SHG (второй гармонический генератор) на 515 нм (оранжевая стрелка). В epi NDD мы приобретаем CARS для связей C-H (темно-красные стрелки) и автофлуоресценции 2PE (двухфотонное излучение) (светло-синяя стрелка). Последовательно можно получить флуоресцентные конфокальные изображения (зеленые стрелки для видимого лазера, синие стрелки для конфокального обнаружения). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

figure-protocol-3
Рисунок 3: CARS может освещать миелин (пурпурный) в ткани мозга (ствол мозга), а также визуализировать Nissl (голубой) или флуоресцентные маркеры. На двух панелях показаны репрезентативные результаты из мозга монгольской песчанки (одно изображение M. unguiculatus, рисунок 3A, C, E) и мыши (z-стек max projection M. musculus, рисунок 2B, D, F), что указывает на то, что этот метод может быть использован для разных видов. На рисунке 3A, B показан Nissl в голубом цвете, C, D показан сигнал CARS в пурпурном цвете, E, F объединяют сигналы Nissl и CARS с каждой панелью для песчанки или мыши соответственно. Оба набора изображений показывают участок медиального ядра трапециевидного тела (MNTB) в стволе мозга. Нейроны в MNTB получают входные данные от сильно миелинизированных аксонов, которые заканчиваются в чашечке холда, типа гигантского синапса27. Шкала составляет 20 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Одним из самых больших преимуществ микроскопии CARS перед другими методами является совместимость с флуоресцентной визуализацией23. На рисунке 1 показаны спектры CARS по сравнению с Nissl, помеченными иммунофлуоресцентным маркером, показывающим небольшое /нулевое перекрытие в спектрах. Рисунок 2 иллюстрирует лазер, установленный для CARS в сочетании с конфокальной микроскопией. На рисунке 3 показаны два репре...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Растущая литература подчеркивает роль миелина в функции мозга 13,16,21,28. Кроме того, мы знаем, что толщина миелинизации и картина миелинизации могут изменяться при нескольких неврологических состояниях, таких как рассеянный склероз (рассмотрен в29), старение (рассмотрено в30), аутизм20,31

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Поддерживается NIH R01 DC 17924, R01 DC 18401 (Klug) и NIH 1R15HD105231-01, T32DC012280 и FRAXA (McCullagh). Визуализация CARS была выполнена в основной части Advanced Light Microscopy Центра нейротехнологий в Медицинском кампусе Университета Колорадо Аншутц при частичной поддержке NIH P30 NS048154 и NIH P30 DK116073.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильно>Обезболивающее:
1 мл одноразовый шприц с иглой 27 GA x 0,5"Exel int260040
Fatal +Vortech
Surgery:
Пружинные ножницы - 8 мм Режущие лезвияИнструменты для тонкой науки15024-10
Стандартный пинцетFine Science Tools11027-12
Perfusion:
4% ПараформальдегидFisher ChemicalSF994 (CS)
Тонкие ножницы - SharpFine Science Tools14063-11
Гемостатики КеллиFine Science Tools13019-14
Millipore H2O
Наконечник иглы, 23 GA x 1"BD прецизионный скольжение305193
фосфатный буферный раствор (PBS):
хлорид калияSigmaP9333
Монооснование фосфата калияSigmaP5655
насос с переменным расходом или эквивалент
Хлорид натрияFisher Chemicals271-1
Двухосновной фосфат натрияSigmaS7907
Dissection:
50 мл флакон с 4% PFA
Bochem Chemical Spoon 180 ммBochem230331000
Тонкие ножницы - SharpFine Science Tools14063-11
Пружинные ножницы NoyesИнструменты для тонкой науки15011-12
Пара пинцетов тонкого (Graefe)Инструменты для тонкой науки11050-10
Неглубокий стеклянный или пластиковый поднос, примерно 10" x 10"
Стандартный пинцетИнструменты для тонкой науки11027-12
Хирургические ножницы - тупыеFine Science Инструменты14000-20
Нарезка:
Agar, растениеRPI9002-18-0
VibratomeLeicaVT1000s скважинная
пластина Alkali Sci.TPN1048-NT
<сильно>Окрашивание:
AB Среда:1n 1,000 мл миллипоры H2O
Фосфат буферизованный (PB):
Монооснование фосфата калияSigmaP5655
Фосохат натрияДиосновные SigmaS7907
BSA (Бычий сывороточный альбумин)Sigma life scienceA2153-100g
Sodium ChlorideFisher Chemicals271-1
Triton X-100Sigma - Aldrichx100-500ml
Nissl 435/455InvitrogenN21479
CARS:
APE  пико-изумрудный лазерAngewandte Physik & Электроник 
Полосовой фильтр GmbH (420-520 нм)Полосовой фильтр Chroma TechnologyHQ470/100m-2P
(500-530 нм)Полосовой фильтр Chroma TechnologyHQ515/30m-2P
(640-680 нм)Chroma TechnologyHQ660/40m-2P
Конфокальный микроскопOlympusFV1000
Cut Transfer pipetFisher13-711-7M
дихроичный длинный проход 565 нмТехнология Chroma565dcxr
дихроичный длинный проход 585 нмТехнология Chroma585dcxr
дихроичный проход 750 нмТехнология Chroma TechnologyT750spxrxt
чашка для культуры со стеклянным дномMatTekP35G-0-10-C
стеклянная гиря (10 мм x 10 мм стержень боро)Allen Scientific Стеклянный Inc
многофотонный короткочастотный эмиссионный фильтр 680 нмChroma TechnologyET680sp-2p8
PBS

Ссылки

  1. Cole, K., Curtis, H. Electric impedance of the squid giant axon during activity. The Journal of General Physiology. 22 (5), 649-670 (1939).
  2. Cole, K. S., Curtis, H. J. Membrane potential of the squid giant axon during current flow. Journal of General Physiology. 24 (4), 551-563 (1941).
  3. Alcami, P., El Hady, A. Axonal computations. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 413(2019).
  4. Neumann, E., Nachmansohn, D. Nerve excitability-Toward an integrating concept. Aharon Katzir Memorial Volume. , 99-166 (1975).
  5. Waxman, S. G. Integrative properties and design principles of axons. International Review of Neurobiology. 18, 1-40 (1975).
  6. Fitzhugh, R. Computation of impulse initiation and saltatory conduction in a myelinated nerve fiber. Biophysical Journal. 2 (1), 11-21 (1962).
  7. Zalc, B. The acquisition of myelin: a success story. Novartis Foundation Symposium. 276, 275-281 (2006).
  8. Salzer, J. L., Zalc, B. Myelination. Current Biology. 26 (20), 971-975 (2016).
  9. Boullerne, A. I. The history of myelin. Experimental Neurology. 283, 431-445 (2016).
  10. Kuhn, S., Gritti, L., Crooks, D., Dombrowski, Y. Oligodendrocytes in development, myelin generation and beyond. Cells. 8 (11), 1424(2019).
  11. Saab, A. S., Nave, K. -A. Myelin dynamics: protecting and shaping neuronal functions. Current Opinion in Neurobiology. 47, 104-112 (2017).
  12. Chomiak, T., Hu, B. What is the optimal value of the g-Ratio for myelinated fibers in the rat CNS? A theoretical approach. PLOS ONE. 4 (11), 7754(2009).
  13. Ford, M. C., et al. Tuning of Ranvier node and internode properties in myelinated axons to adjust action potential timing. Nature Communications. 6, 8073(2015).
  14. Stange-Marten, A., et al. Input timing for spatial processing is precisely tuned via constant synaptic delays and myelination patterns in the auditory brainstem. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), 4851-4858 (2017).
  15. Bu, J., Banki, A., Wu, Q., Nishiyama, A. Increased NG2+ glial cell proliferation and oligodendrocyte generation in the hypomyelinating mutant shiverer. Glia. 48 (1), 51-63 (2004).
  16. Pacey, L. K. K., et al. Delayed myelination in a mouse model of fragile X syndrome. Human Molecular Genetics. 22 (19), 3920-3930 (2013).
  17. Green, A. J., et al. Clemastine fumarate as a remyelinating therapy for multiple sclerosis (ReBUILD): a randomised, controlled, double-blind, crossover trial. Lancet. 390 (10111), London, England. 2481-2489 (2017).
  18. Jeon, S. J., Ryu, J. H., Bahn, G. H. Altered translational control of fragile X mental retardation protein on myelin proteins in neuropsychiatric disorders. Biomolecules & Therapeutics. 25 (3), 231-238 (2017).
  19. Barak, B., et al. Neuronal deletion of Gtf2i, associated with Williams syndrome, causes behavioral and myelin alterations rescuable by a remyelinating drug. Nature Neuroscience. 22 (5), 700-708 (2019).
  20. Phan, B. N., et al. A myelin-related transcriptomic profile is shared by Pitt-Hopkins syndrome models and human autism spectrum disorder. Nature Neuroscience. 23 (3), 375-385 (2020).
  21. Lucas, A., Poleg, S., Klug, A., McCullagh, E. A. Myelination deficits in the auditory brainstem of a mouse model of fragile X syndrome. Frontiers in Neuroscience. 15, 1536(2021).
  22. Wang, H., Fu, Y., Zickmund, P., Shi, R., Cheng, J. -X. Coherent anti-stokes raman scattering imaging of axonal myelin in live spinal ttissues. Biophysical Journal. 89 (1), 581-591 (2005).
  23. Kim, S. -H., et al. Multiplex coherent anti-stokes raman spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids. Circulation Research. 106 (8), 1332-1341 (2010).
  24. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).
  25. Tu, L., et al. Free-floating Immunostaining of Mouse Brains. Journal of Visualized Experiments. (176), e62876(2021).
  26. Fluorescence SpectraViewer. , Available from: https://www.thermofisher.com/order/fluorescence-spectraviewer (2022).
  27. Held, H. Die centrale gehörleitung. Arch Anat Physiol Anat Abt. 17, 201-248 (1893).
  28. Sherman, D. L., Brophy, P. J. Mechanisms of axon ensheathment and myelin growth. Nature Reviews Neuroscience. 6 (9), 683-690 (2005).
  29. Gruchot, J., et al. The molecular basis for remyelination failure in multiple sclerosis. Cells. 8 (8), 825(2019).
  30. Rivera, A. D., et al. Epidermal growth factor pathway in the age-related decline of oligodendrocyte regeneration. Frontiers in Cellular Neuroscience. 16, 838007(2022).
  31. Kútna, V., O'Leary, V. B., Hoschl, C., Ovsepian, S. V. Cerebellar demyelination and neurodegeneration associated with mTORC1 hyperactivity may contribute to the developmental onset of autism-like neurobehavioral phenotype in a rat model. Autism Research: Official Journal of the International Society for Autism Research. 15 (5), 791-805 (2022).
  32. Ozsvár, A., et al. Quantitative analysis of lipid debris accumulation caused by cuprizone induced myelin degradation in different CNS areas. Brain Research Bulletin. 137, 277-284 (2018).
  33. Prineas, J. W., Graham, J. S. Multiple sclerosis: capping of surface immunoglobulin G on macrophages engaged in myelin breakdown. Annals of Neurology. 10 (2), 149-158 (1981).
  34. Bégin, S., et al. Automated method for the segmentation and morphometry of nerve fibers in large-scale CARS images of spinal cord tissue. Biomedical Optics Express. 5 (12), 4145-4161 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Визуализация методом КАРСвизуализация миелинаанализ миелинизацииколичественное определение липидовиммунофлуоресцентная микроскопияконфокальная визуализацияэлектронная микроскопияневрологические расстройства
Когерентная антистоковская рамановская спектроскопия (CARS) для визуализации миелинизации в срезах мозга
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.