Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиная гетеротопическая трансплантация шейки матки с использованием сосудистых манжет

2.7K просмотров

DOI:

10.3791/64089

23 июня 2022 г.

В этой статье

Краткое содержание

Мышиные модели трансплантации сердца представляют собой ценные исследовательские инструменты для изучения трансплантационной иммунологии. Настоящий протокол детализирует гетеротопную трансплантацию шейного отдела сердца мыши, которая включает в себя размещение манжет на общей сонной артерии реципиента и стволе легочной артерии донора, чтобы обеспечить ламинарный кровоток.

Аннотация

Мышиные модели трансплантации сердца часто используются для изучения травмы ишемии-реперфузии, врожденных и адаптивных иммунных реакций после трансплантации и влияния иммуномодулирующей терапии на отторжение трансплантата. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у мышей была впервые описана в 1991 году с использованием ушных анастомозов и впоследствии модифицирована, чтобы включить методы манжеты. Это изменение позволило улучшить показатели успеха, и с тех пор было опубликовано несколько докладов, в которых предлагалось дальнейшее техническое усовершенствование. Тем не менее, перевод в более широкое использование остается ограниченным из-за технических трудностей, связанных с анастомозами трансплантата, которые требуют точности для достижения адекватной длины и калибра манжет, чтобы избежать сосудистого анастомотического скручивания или чрезмерного напряжения, что может привести к повреждению трансплантата. Настоящий протокол описывает модифицированный метод выполнения гетеротопной трансплантации шейного сердца у мышей, который включает размещение манжеты на общей сонной артерии реципиента и легочной артерии донора в соответствии с направлением кровотока.

Введение

Abbott et al. опубликовали1 первое описание гетеротопной трансплантации брюшного сердца у крыс в 1964 году. Эти хирургические методы были усовершенствованы и упрощены Оно и др. в 1969 году2. Corry et al. впервые описали метод гетеротопной абдоминальной трансплантации сердца у мышей в 1973 году; подобно ранее сообщенным моделям крыс, это включало приживление в брюшную полость хозяина с реваскуляризацией путем сквозных анастомозов легочной артерии донора и восходящей аорты к нижней полой вене реципиента и брюшной аорте, соответственно3. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у крыс была опис....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры обращения с животными были проведены в соответствии с руководящими принципами NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены Комитетом по изучению животных в Медицинской школе Вашингтонского университета. Сердца мышей C57BL/6 (B6) и BALB/c (весом 20-25 г) пересаживали реципиентам B6 соответствующего пола (в возрасте 6-8 недель). Мыши были получены из коммерческих источников (см. Таблицу материалов). Сингенные трансплантации были выполнены для оценки клеточных реакций, связанных с травмой ишемии-реперфузии, и аллогенные трансплантации были выполнены для исследования иммунных механизмов, участвующих в толерантности и отторже....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Эта модель гетеротопной трансплантации шейки матки мыши была использована для выполнения более 1000 трансплантаций в нашей лаборатории с выживаемостью около 97%. Показатель успеха немного выше, чем в предыдущих отчетах с использованием других методов трансплантации сердца шейки матки у мышей 10,11,20. Это потенциально может быть связано с более крупной манжетой 20 Г, помещенной на легочную артерию донора, чтобы обеспечить достат.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Используя эту технику, гетеротопическая трансплантация шейного отдела сердца мыши может быть выполнена менее чем за 40 минут опытным микрохирургом и примерно за 60 минут микрохирургом начального уровня. В то время как трансплантация шейного сердца была изучена на многочисленных животных моделях, мышиная модель остается золотым стандартом из-за нескольких четко определенных генетических штаммов, возможностей генетического изменения и доступности многочисленных реагентов, включая моноклональные антитела24.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

DK поддерживается грантами Национальных институтов здравоохранения 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, грантом Veterans Administration Merit Review 1I01BX002730 и Фондом для Barnes-Jewish Hospital.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
6-0 плетеные шелковые галстукиHenry Schein Inc7718729
0,75% провидон йозиновый скрабPriority Care IncNDC 57319-327-0
10-0 нейлоновый шовSurgical Specialties CorporationAK-0106
655-нм нецелевой Q-dotsInvitrogenQ21021MP
70% этанолPharmco Products Inc111000140
8-0 плетеные шелковые галстукиHenry Schein Inc1005597
щипцы AdsonFine Science Tools Inc91127-12
BALB/c и C57BL/6 мышей (6-8 недель)Jackson Laboratories
Биполярный коагуляторValleylab IncSurgII-20, E6008/E6008B
Карпрофен (Римадил) для инъекцийTranspharm35844
Карпрофен (Римадил) пероральная жевательная таблеткаTranspharm38995/37919
Изготовленный на заказ микроскоп 2P с программным обеспечением для сбора данных ImageWarpA& B Software
Dumont No. 5 щипцыFine Science Tools Inc11251-20
Пружинные ножницы в стиле Fine Vannas FineScience Tools Inc15000-03
GraphPad Prism 5.0Sun Microsystems Inc.
Иглодержатель HalseyFine Science Tools Inc91201-13
Зажим Halsted-Mosquito с изогнутым наконечникомFine Science Tools Inc91309-12
Гарвардский аппарат искусственной вентиляции легких для мышей модель 687Гарвардский аппаратMA1 55-0001
Раствор гепарина (100 Ед/мл)Abraxis Pharmaceutical Products504031
ImarisBitplane
Кетамин (50 мг/кг)Wyeth206205-01
Микроскоп— Leica Wild M651 × 6– Увеличение 40Leica Microsystems
Moria сверхтонкие пружинные ножницыFine Science Tools Inc15396-00
Изофлурановый испаритель ОгайоParkland ScientificV3000i
QdotsThermoFisher1604036
S& T SuperGrip Щипцы с наклонным наконечникомFine Science Tools Inc00649-11
S& T SuperGrip Щипцы с прямым наконечникомFine Science Tools Inc00632-11
Стерильный нормальный физиологический раствор (0,9% (масс./об.) хлорид натрияHospira IncNDC 0409-4888-20
Стерильные ватные палочки (конические мини-аппликаторы с хлопковым наконечником 3 дюйма)Puritan Medical Company LLC823-WC
Surflow 20 калибр 1/4-дюймовый тефлоновый ангиокатетерTerumo Medical CorporationSR-OX2032CA
Тефлоновый ангиокатетер Surflow 24 калибра 3/4 дюймаTerumo Medical CorporationR-OX2419CA
ThermoCare Small Animal Intensive System (настройки восстановления 3 л/мин O2, 80 °; C, влажность 40%)Thermocare Inc
VetBondSanta Cruz Biotechnology SC361931NC0846393
ксилазин (10 мг/кг)Lloyd Laboratories139-236

Ссылки

  1. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  2. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Card....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги