Методическая статья

Модель ожога крысы для изучения термического ожога кожи на всю толщину и инфекции

6.8K просмотров

DOI:

10.3791/64345

23 августа 2022 г.

В этой статье

Краткое содержание

Модель, имитирующая клинический сценарий ожоговой травмы и инфекции, необходима для дальнейших исследований ожогов. Настоящий протокол демонстрирует простую и воспроизводимую модель ожоговой инфекции крыс, сравнимую с таковой у людей. Это облегчает изучение ожогов и инфекций после ожога для разработки новых местных методов лечения антибиотиками.

Аннотация

Методики индукции ожогов непоследовательно описаны в моделях на крысах. Однородная модель ожоговой раны, представляющая клинический сценарий, необходима для проведения воспроизводимых ожоговых исследований. Настоящий протокол описывает простой и воспроизводимый способ получения ожогов на всю толщину с общей площадью поверхности тела (TBSA) ~20% у крыс. Здесь медный стержень размером 22,89 см2 (диаметр 5,4 см), нагретый до 97 ° C на водяной бане, был нанесен на поверхность кожи крысы, чтобы вызвать ожоговую травму. Медный стержень с высокой теплопроводностью был способен рассеивать тепло глубже в тканях кожи, создавая ожог на всю толщину. Гистологический анализ показывает ослабленный эпидермис с коагуляционным повреждением на всю толщину дермы и подкожной клетчатки. Кроме того, эта модель репрезентативна для клинических ситуаций, наблюдаемых у госпитализированных пациентов с ожогами после ожоговой травмы, такой как иммунная дисрегуляция и бактериальные инфекции. Модель может повторять системную бактериальную инфекцию как грамположительными, так и грамотрицательными бактериями. В заключение, в этой статье представлена простая в освоении и надежная модель ожога крыс, которая имитирует клинические ситуации, включая иммунную дисрегуляцию и бактериальные инфекции, что имеет большое значение для разработки новых местных антибиотиков для лечения ожоговых ран и инфекций.

Введение

Ожоговые травмы являются одними из самых разрушительных форм травм, при этом смертность достигает 12% даже в специализированных ожоговых центрах 1,2,3. Согласно недавно опубликованным отчетам, ~ 486 000 пациентов с ожогами ежегодно нуждаются в медицинской помощи в Соединенных Штатах, при этом почти 3 500 смертей 1,2,3,4,5,6. Ожоговая травма представляет собой серьезную проблему дл....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Северной Каролины и проводились в соответствии с установленными им руководящими принципами. Для экспериментов использовали самцов и самок крыс Sprague Dawley (250-300 г) в возрасте 7-9 недель. Все животные были размещены в 12-часовом цикле свет-темнота со свободным доступом к пище и воде ad libitum. Всегда работайте со своим ветеринарным врачом над планом обезболивания до начала исследования.

1. Подготовка крыс к ожоговой травме

  1. Подготовьте животных к ожогу за 24 часа до ожога.
  2. О....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Представленный здесь протокол обладает высокой воспроизводимостью и привел к ожоговой травме третьей степени на всю толщину у крыс. Ожоговая рана выглядит восково-белой после индукции ожога (рис. 2B). Цвет ожоговой травмы изменился с белого на коричневый в течение 72 часов после ожога (рис. 2B-E).

Гистологический анализ подтвердил ожог полной толщины (глубина >2,61 мм через 24 ч после ожога;

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Для изучения патофизиологии ожоговой травмыбыло представлено несколько моделей ожогов 8,12,16,17. В настоящем исследовании мы использовали модель крысы для разработки простого и воспроизводимого протокола, чтобы вызвать ожог на всю толщину с последующей бактериальной инфекцией, чтобы имитировать инфицированную ожоговую травму у пациентов. Выбор крысы в качестве модели животного для имитации усл.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликтов интересов, которые необходимо раскрывать.

Благодарности

Авторы благодарят Отдел сравнительной медицины Университета Северной Каролины за предоставление и уход за животными. Мы благодарим Лорен Ральф и Мию Евангелисту из Pathology Services Core за экспертную техническую помощь в области гистопатологии / цифровой патологии, включая срезы тканей и визуализацию. Это исследование было поддержано исследовательским грантом Министерства обороны (номер награды W81XWH-20-1-0500, GR и TV).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1 мл шприцBD, США309597Используется для введения обезболивающего
1,7 мл МикротрубкаOlympus, США24-282Используется для переноса морфина
10% NBFVWR, США16004-115Используется для фиксации куска кожи для окрашивания
шприца 30 млBD, США302832Используется для введения раствора лактата Рингера
70% этилового спиртаФишера Научная, СШАBP28184
Aperio AT2 Digital Pathology  Сканер слайдов с программным обеспечением ImageScopeAperio, Technologies Inc., Vista, CA, СШАн/дСканирование H & E слайды и анализ
Ацетримидные агаровые пластиныBD, США285420Селективные медиа пластины для роста Pseudomonas aeruginosa
Медные стержнин/дИспользуются для индуцирования ожоговой травмы
Аппликаторы с ватными наконечникамиOMEGA Surgical supply, США4225-IMCИспользуются для нанесения глазной мази
ЭлектробритваOster, СШАGolden A5Используется для удаления волосков на тыльной стороне
Смазка для глазDechra, Великобританиян/дУвлажняющее средство для глаз для обеспечения длительного комфорта и предотвращения сухости глаз
Наполненные пухом накладкиMedline, СШАMSC281225Используется в процедуре ожога Щипцы
F.S.T.11027-12Используется для удержания кусочка кожи
Марлевые губкиOasis, СШАPK412Используются для очистки нанесенного наира крема с тыльной стороны;
Перчатки термостойкиен/д нИспользуются для удержания нагретых медных стержней
Гематологический анализаторIDEXX laboratories, СШАProCyte Dx
Индукционная камераKent Scientific, СШАvetFlo-0730Используются для обезболивания животных
инсулиновым шприцемBD, США329461
ИзофлуранаПиветал, США NDC46066-755-04Используется для обезболивания крыс для индуцирования потери сознания
Изофлуран вапорайзерн/дн/д
Раствор лактатного рингераicumedical, СШАNDC0990-7953-09Используется для реанимации крыс
L-образный разбрасывательFischer Scientific, США14-665-230
Mannitol AgarBD, США211407Селективные медиаторы для Staphylococcus aureus growth
Minicollect tubes (K2EDTA)greiner bio-one, США450480Используется для сбора крови
MorphineMallinckrodt, UKNDC0406-8003-30Эта анальгезия использовалась для того, чтобы вызвать неспособность чувствовать боль при ожоговой травме
Muller Hinton BrothBD, США275730
Muller Hinton II AgarBD, США211438
Nair лосьон для удаления волосNair, СШАн/дИспользуется для удаления остаточных волос на тыльной стороне
Игла 23 GBD, США 305193Используется для введения раствора лактата
Нормальный физиологический растворн/д н/д
СпектрофотометрThermoScientific, СШАGenesys 30
Крысы Sprague-Dawley, самцы и самкиCharles River Labsn/a7-9 недель для индукции ожога
Хирургические ножницыF.S.T.14501-14Используется для разрезания нужного кусочка кожи
Трубки для сбора тканейGlobe Scientific220101236
Гомогенизатортканей Kinematica, Inc, СШАPOLYTRON PT2100Используется для гомогенизации образцов тканей
Водяная баняFischer Scientific, СШАн/дИспользуется для вызова ожоговой травмы
Утяжеленная грелкаComfytemp, СШАн/дИспользуется во время процедуры для сохранения тепла тела крысы
н

Ссылки

  1. Peck, M., Molnar, J., Swart, D. A global plan for burn prevention and care. Bulletin of the World Health Organization. 87, 802-803 (2009).
  2. American Burn Association. Burn incidence and treatment in the United States: 2011 fact sheet. Chicago: Ame....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Pseudomonas aeruginosaStaphylococcus aureus

Похожие статьи