Методическая статья

Метод изучения токсичности и агрегации α-синуклеина с использованием гуманизированной дрожжевой модели

DOI:

10.3791/64418

⸱

25 ноября 2022 г.

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, Ajou University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Физиологическая модель in vivo α-синуклеина необходима для изучения и понимания патогенеза болезни Паркинсона. Описан метод мониторинга цитотоксичности и агрегатного образования α-синуклеина с использованием гуманизированной дрожжевой модели.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Паркинсона является вторым наиболее распространенным нейродегенеративным расстройством и характеризуется прогрессирующей гибелью клеток, вызванной образованием клеток Леви, содержащих неправильно свернутые и агрегированные α-синуклеин. α-синуклеин является обильным пресинаптическим белком, который регулирует торговлю синаптическими пузырьками, но накопление его белковых включений приводит к нейротоксичности. Недавние исследования показали, что различные генетические факторы, включая бактериальные шапероны, могут уменьшить образование α-синуклеиновых агрегатов in vitro. Тем не менее, также важно контролировать антиагрегационный эффект в клетке, чтобы применять его в качестве потенциального лечения для пациентов. Было бы идеально использовать нейронные клетки, но с этими клетками трудно обращаться и требуется много времени, чтобы продемонстрировать фенотип антиагрегации. Поэтому для дальнейшей оценки антиагрегационной активности in vivo требуется быстрый и эффективный инструмент in vivo . Описанный здесь метод использовался для мониторинга и анализа антиагрегационного фенотипа в гуманизированных дрожжах Saccharomyces cerevisiae, которые экспрессировали человеческий α-синуклеин. Этот протокол демонстрирует инструменты in vivo , которые могут быть использованы для мониторинга клеточной токсичности, вызванной α-синуклеином, а также образования агрегатов α-синуклеина в клетках.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Паркинсона (БП) является серьезной проблемой для стареющих обществ во всем мире. Агрегация α-синуклеина тесно связана с БП, а белковые агрегаты α-синуклеина широко используются в качестве молекулярного биомаркера для диагностики заболевания1. α-синуклеин представляет собой небольшой кислый белок (140 аминокислот в длину) с тремя доменами, а именно N-концевым липидсвязывающим α-спирали, амилоид-связывающим центральным доменом (NAC) и С-концевым кислотным хвостом2. Неправильное сворачивание α-синуклеина может происходить спонтанно и в конечном итоге приводит к образованию амилоидных агрегатов, называемых тельцами Леви3. α-синуклеин может способствовать патогенезу БП несколькими способами. В целом, считается, что его аномальные, растворимые олигомерные формы, называемые протофибриллами, являются токсичными видами, которые вызывают гибель нейрональных клеток, воздействуя на различные клеточные мишени, включая синаптическую функцию3.

Биологические модели, используемые для изучения нейродегенеративных заболеваний, должны иметь отношение к людям в отношении их генома и клеточной биологии. Лучшими моделями будут клеточные линии нейронов человека. Однако эти клеточные линии связаны с несколькими техническими проблемами, такими как трудности в поддержании культур, низкая эффективность трансфекции и высокие затраты4. По этим причинам требуется простой и надежный инструмент для ускорения прогресса в этой области исследований. Важно отметить, что инструмент должен быть простым в использовании для анализа собранных данных. С этой точки зрения широко используются различные модельные организмы, включая Drosophila, Caenorhabditis elegans, Danio rerio, дрожжи и грызунов5. Среди них дрожжи являются лучшим модельным организмом, потому что генетические манипуляции просты, и они дешевле, чем другие модельные организмы. Самое главное, дрожжи имеют большое сходство с человеческими клетками, такие как 60% гомология последовательности для человеческих ортологов и 25% близкая гомология с генами, связанными с человеческими заболеваниями6, и они также разделяют фундаментальную эукариотическую клеточную биологию. Дрожжи содержат много белков с аналогичными последовательностями и аналогичными функциями в клетках человека7. Действительно, дрожжи, экспрессирующие человеческие гены, широко использовались в качестве модельной системы для выяснения клеточных процессов8. Этот штамм дрожжей называется гуманизированными дрожжами и является полезным инструментом для изучения функции генов человека9. Гуманизированные дрожжи имеют преимущества для изучения генетических взаимодействий, потому что генетические манипуляции хорошо известны в дрожжах.

В этом исследовании мы использовали дрожжи Saccharomyces cerevisiae в качестве модельного организма для изучения патогенеза БП, в частности, для изучения образования агрегатов α-синуклеина и цитотоксичности10. Для экспрессии α-синуклеина в почковых дрожжах штамм W303a использовался для трансформации с плазмидами, кодирующими дикий тип и семейные PD-ассоциированные варианты α-синуклеина. Поскольку штамм W303a имеет ауксотрофную мутацию на URA3, он применим для отбора клеток, содержащих плазмиды с URA3. Экспрессия α-синуклеина, закодированного в плазмиде, регулируется промотором GAL1 . Таким образом, уровень экспрессии α-синуклеина можно контролировать. Кроме того, слияние зеленого флуоресцентного белка (GFP) в С-концевой области α-синуклеина позволяет контролировать образование α-синуклеиновых очагов. Чтобы понять характеристики семейных PD-ассоциированных вариантов α-синуклеина, мы также экспрессировали эти варианты в дрожжах и изучили их клеточные эффекты. Эта система является простым инструментом для скрининга соединений или генов, проявляющих защитные роли против цитотоксичности α-синуклеина.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка носителей и решений

  1. Подготовка СМИ
    1. Для приготовления среды YPD растворите 50 г порошка YPD в dH2O, чтобы получить конечный объем 1 л. Автоклав для стерилизации. Хранить при комнатной температуре (RT).
    2. Чтобы сделать агар YPD средой, растворите 50 г порошка YPD и 20 г агара в 1 л dH2O. Автоклав для стерилизации. После остывания вылейте на чашку Петри. Хранить при температуре 4 °C.
    3. Для получения СК с рафинозной (SRd)-Ura средой растворяют 6,7 г азотистого основания дрожжей с сульфатом аммония и без аминокислот в 795 мл dH2O. Автоклав для стерилизации. Добавьте 100 мл 20% рафинозы, 5 мл 20% глюкозы и 100 мл 10x -Ura перед использованием.
    4. Для получения агаровой среды SD-Ura растворяют 6,7 г азотистой основы дрожжей с сульфатом аммония и без аминокислот и 20 г агара в 800 мл dH2O. Автоклав в колбе объемом свыше 2 л. Добавьте 100 мл 20% глюкозы и 100 мл 10x-ura выпадения. Хорошо перемешать и вылить на посуду Петри. Хранить при температуре 4 °C.
    5. Для получения СК с галактозой (СГ)-Ура агаровой средой растворяют 6,7 г основания дрожжевого азота с сульфатом аммония и без аминокислот и 20 г агара в 800 мл dH2O. Автоклав в колбе объемом свыше 2 л. Добавляют 100 мл 20% галактозы и 100 мл выпадения 10х-Ура. Хорошо перемешать и вылить на чашку Петри. Хранить при температуре 4 °C.
  2. Стоковые решения для использования с SD-носителями
    1. Чтобы получить 20% источник углерода (глюкоза, галактоза и рафиноза), растворите 100 г глюкозы, галактозы или рафинозы в dH2O, чтобы получить конечный объем 500 мл. Автоклав и магазин на RT.
    2. Чтобы сделать 10-кратные дрожжевые синтетические добавки без урацила (10x-Ura drop-out), растворите 19,2 г «дрожжевых синтетических добавок без урацила» в dH2O, чтобы сделать окончательный объем 1 л. Автоклав и хранить в RT.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для приготовления среды, содержащей агар, добавьте магнитный перемешивание в колбу, чтобы хорошо перемешать все растворы перед выливанием на чашку Петри.

2. Трансформация дрожжей

ПРИМЕЧАНИЕ: Плазмида pRS426 использовалась для клонирования гена α-синуклеина и содержала ген URA3 в качестве выбираемого маркера. Существуют семейные PD-ассоциированные варианты α-синуклеина, которые имеют тяжелые фенотипы заболевания (например, цитотоксичность). Эти варианты также использовались здесь для мониторинга их цитотоксичности и образования агрегированных очагов. Используйте одну и ту же колонию дрожжевых трансформантов для всех экспериментов, чтобы получить последовательные результаты.

  1. Для трансформации плазмид экспрессии дрожжей используют пустой вектор (pRS426) в качестве контрольных и α-синуклеин-содержащих плазмид. Ссылаясь на стандартный способ11 ацетата лития (LiAc), получают шесть компетентных клеток и 0,5 мкг каждой плазмиды и выполняют трансформацию.
  2. Чтобы выбрать дрожжевые трансформанты, содержащие плазмиды, используйте синтетическую определенную среду (SD-среду) без урацила (SD-Ura) и инкубируйте пластины при 30 °C в течение 2-3 дней.
  3. Нанесите три одиночные колонии на агаровую пластину SD-Ura для отбора клеток, содержащих плазмиды, для дальнейших экспериментов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы получить точные и надежные результаты, мы изучили по крайней мере три биологических репликата на штамм.

3. Споттинг-анализ

ПРИМЕЧАНИЕ: Известно, что экспрессия GFP-меченого α-синуклеина в плазмидах с высоким числом копий связана с цитотоксичностью в дрожжах10.

  1. Инокулируют три пластырных дрожжевых трансформанта на штамм в 3 мл SRd-Ura для селективного роста дрожжей, содержащих плазмиды с 2% рафинозы для ингибирования индукции α-синуклеина под промотором GAL1 и 0,1% глюкозы. Инкубируют клеточную культуру при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно повторить все эксперименты с разными колониями. Получение одинаковых результатов из более чем трех независимых колоний означает, что результат является надежным.
  2. На следующий день инокулируют культивируемые на ночь клетки в 3 мл свежего SRd-Ura до OD600 0,2 и инкубируют в течение 6 ч при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин.
  3. Когда OD600 достигнет 0,6-0,8, разбавьте клетки в 96-луночных пластинах для анализа пятнистости следующим образом.
    1. Измерьте OD600 всех образцов и разбавьте образцы до OD600 0,5 со стерильным dH2O (смешанный объем составляет 100 мкл) в полосе 1 96-луночной пластины для выравнивания количества клеток в каждой культуре.
    2. Выполняют пятикратное последовательное разведение дрожжевых клеток путем добавления 160 мкл стерильного dH2Oк следующим пяти полосам. Обеспечьте общий объем 40 мкл при последовательном разбавлении ячеек в каждой полосе.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Низкие коэффициенты разбавления могут привести к большим различиям между образцами. Для обеспечения равномерного перемешивания при выполнении последовательных разбавлений требуется достаточная пипетка. Наконечник пипетки должен быть заменен в каждой точке разбавления. В противном случае клетки, прикрепленные к поверхности наконечника, могут быть перенесены в следующую лунку и повлиять на номер ячейки.
  4. Используйте многоканальную пипетку для переноса 10 мкл из каждой скважины, чтобы обнаружить образцы на агаровых пластинах SD-Ura для контроля и агаровых пластинах SG-Ura для мониторинга токсичности.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Пластины следует сушить до тех пор, пока пятнистые образцы не будут полностью поглощены пластинами.
  5. Инкубируйте пятнистые пластины вверх ногами при 30 °C в течение 4 дней.
  6. Делайте снимки пластин каждые 24 часа до 4-го дня, а затем анализируйте данные, сравнивая различия в росте между штаммами, замеченными глазом. Подсчитайте отдельные колонии в наиболее разбавленной пробе, рассчитайте количество жизнеспособных клеток в исходной культуре для каждого штамма или сравните размер отдельных колоний.

4. Измерение роста дрожжей с помощью микропластичного считывателя

  1. Инокулируют три пластырных дрожжевых трансформанта на штамм в 3 мл SRd-Ura и инкубируют при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин в течение ночи.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы понять каждый колониальный фенотип гуманизированного штамма дрожжей, экспрессирующего α-синуклеин, используйте одни и те же трансформанты для всех экспериментов.
  2. На следующий день привите культивируемые на ночь клетки в общей сложности 200 мкл свежих SD-Ura и SG-Ura в 96-луночных пластинах. Отрегулируйте конечный объем, включая ячейки, до 200 мкл, а начальную ячейку OD600 до 0,05.
    1. Отрегулируйте настройки программы в микротитровой пластине следующим образом: установите целевую температуру на 30°С, установите длительность встряхивания (линейной) на 890 с, установите амплитуду встряхивания (линейной) на 5 мм, установите интервальное время на 00:15:00, а измерение как поглощение на 600 нм.
    2. Инкубируйте пластину в течение 2-3 дней, чтобы все штаммы достигли стационарной фазы в считывателе микропластин.
  3. Проанализируйте данные, построив кривую роста (например, с помощью Workbook). Получите точки данных путем усреднения значений поглощения от трех биологических реплик и укажите полосы ошибок. Используйте значение поглощения только из среды в качестве элемента управления и вычтите его из значений из культивируемых ячеек (необязательно).

5. Флуоресцентная микроскопия

  1. Инокулируют пластырные дрожжевые трансформанты в 3 мл SRd-Ura и культивируют их в течение ночи при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для определения корреляции фенотипа с цитотоксичностью и образованием очагов используют для эксперимента те же колонии.
  2. На следующий день реиртулируйте ночные культивируемые клетки в 3 мл свежего SRd-Ura до OD600 0,003. Инкубируют культуру до тех пор, пока OD600 не достигнет 0,2 при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин (~18 ч).
  3. Когда достигается OD600 0,2, добавляют 300 мкл 20% галактозы, а затем инкубируют еще 6 ч при 30 °C при перемешивании при 200 об/мин.
  4. Соберите клетки путем центрифугирования при 800 х г в течение 5 мин и выбросьте супернатант.
  5. Осторожно повторно суспендировать гранулу ячейки в 30 мкл дистиллированной воды.
  6. Загрузите 5 мкл повторно суспендированных ячеек на скользящее стекло. Приготовьте агарозную гелевую прокладку12 и нанесите ее на нагруженные ячейки, чтобы она равномерно распределялась.
  7. Выполняйте микроскопическую визуализацию со 100-кратным объективом, используя как ярко-полевые, так и GFP-флуоресцентные фильтры.
    1. Во-первых, используйте brightfield для фокусировки ячейки со 100-кратным объективом с помощью погружного масла. Используйте опцию захвата экрана для создания изображений с помощью программы.
    2. Переключитесь на GFP-флуоресцентный фильтр. Отрегулируйте время экспозиции изображения от 50 до 300 мс для получения четкого изображения путем балансировки отношения сигнал/шум. Захват экрана изображения с помощью программы.
    3. Визуализируйте много ячеек из нескольких точек, а не только из одной.
  8. Анализируйте изображения, подсчитывая процент клеток, содержащих очаги агрегатов α-синуклеина с помощью аналитического программного обеспечения. Наблюдать различия между сигналом растворимого белка GFP и сигналом GFP, образованным фокусами, а также диффузию GFP с вариантной формой A30P α-синуклеина.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образование очагов будет наблюдаться с дикими типами E46K и A53T α-синуклеина.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Известно, что высокая экспрессия α-синуклеина связана с гибелью нейрональных клеток и БП в модельных системах БП. В данном исследовании описаны три метода мониторинга цитотоксичности α-синуклеина и образования очагов агрегированного α-синуклеина в дрожжах. Здесь α-синуклеин был чрезмерно экспрессирован в дрожжах, и были исследованы фенотипы α-синуклеина дикого типа и трех вариантов α-синуклеина, известных как семейные мутанты БП (рисунок 1 и Таблица материалов).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Учитывая сложность различных клеточных систем у человека, выгодно использовать дрожжи в качестве модели для изучения нейродегенеративных заболеваний человека. Хотя почти невозможно исследовать сложные клеточные взаимодействия человеческого мозга с использованием дрожжей, с точки зрения одноклеточных клеток дрожжевые клетки имеют высокий уровень сходства с клетками человека с точки зрения гомологии геномной последовательности и фундаментальных эукариотических клеточных процессов 8,13

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Джеймса Бардуэлла и Тьяго Ф. Аутейро за любезное распространение плазмид, содержащих α-синуклеин. Чанхан Ли получил финансирование от Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемого корейским правительством (MSIT) (грант 2021R1C1C1C1011690), Программы фундаментальных научных исследований через NRF, финансируемой Министерством образования (грант 2021R1A6A1A10044950), и нового исследовательского фонда факультета Университета Аджу.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
96 луночная пластинаSPL30096
AgaroseTAESHIN0158
Bacto AgarBD Difco214010
Breathe-easyдиверсифицированная биотехнологическаяBEM-1Газопроницаемая уплотнительная мембрана для микротитровальных пластин
крышка стеклаMarienfeld24 x 60 мм
40014
Cuvetteratiolab2712120
D-(+)-ГалактозесигмаG0625
D-(+)-глюкозасигмаG8270
D-(+)-Рафинозный пентагидратDaejung6638-4105
Инкубатор (встряхивание)Модель лабтрона: SHI1
Инкубатор (статический)Зрение научноемодель: VS-1203PV-O
LiAcsigmaL6883
Микропланшетный считывательTecan30050303 01Модель: Infinite 200 pro
многоканальный пипетка 20-200 &; LgilsonFA10011
многоканальный дозатор 2-20 &; Л.ГилсонFA10009
микроскопOlympusOlympus IX-53
PEGsigmaP4338средний моль 3,350
PetridishSPL10090
pRS426Кристиансон, Т. В., Сикорски, Р. С., Данте, М., Шеро, Д. Х. & Хитер,. Многофункциональные челночные векторы дрожжей с высоким числом копий. Ген. 110 (1), 119-122 (1992).
pRS426 GAL1 промотор &альфа;-синуклеин A30POuteiro, T. F. & Линдквист, С. Дрожжевые клетки дают представление о биологии альфа-синуклеина и патобиологии. Наука. 302 (5651), 1772-1775 (2003)
pRS426 GAL1 промотор α-синуклеин A53TOuteiro, T. F. & Линдквист, С. Дрожжевые клетки дают представление о биологии альфа-синуклеина и патобиологии. Наука. 302 (5651), 1772-1775 (2003)
pRS426 GAL1 -промотор &альфа;-синуклеин E46KOuteiro, T. F. & Линдквист, С. Дрожжевые клетки дают представление о биологии альфа-синуклеина и патобиологии. Наука. 302 (5651), 1772-1775 (2003)
pRS426 GAL1 -промотор &альфа;-синуклеин WTOuteiro, T. F. & Линдквист, С. Дрожжевые клетки дают представление о биологии альфа-синуклеина и патобиологии. Наука. 302 (5651), 1772-1775 (2003)
РезервуарSPL23050
Спектрофотометрeppendorf6131 05560
W303aПрисутствует от Джеймса Бардуэлла
Дрожжевая азотная основа без аминокислотDifco291940
Дрожжи синтетическая среда для выпадения добавок без урациласигмаY1501
YPDCondalab1547.00

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Khurana, V., Lindquist, S. Modelling neurodegeneration in Saccharomyces cerevisiae: Why cook with baker's yeast. Nature Reviews Neuroscience. 11 (6), 436-449 (2010).
  2. Surguchov, A. Intracellular dynamics of synucleins: "Here, there and everywhere". International Review of Cell and Molecular Biology. 320, 103-169 (2015).
  3. Soto, C., Pritzkow, S. Protein misfolding, aggregation, and conformational strains in neurodegenerative diseases. Nature Neuroscience. 21 (10), 1332-1340 (2018).
  4. Gordon, J., Amini, S. General overview of neuronal cell culture. Methods in Molecular Biology. 2311, 1-8 (2021).
  5. Dawson, T. M., Golde, T. E., Lagier-Tourenne, C. Animal models of neurodegenerative diseases. Nature Neuroscience. 21 (10), 1370-1379 (2018).
  6. Bassett, D. E., Boguski, M. S., Hieter, P. Yeast genes and human disease. Nature. 379 (6566), 589-590 (1996).
  7. Koteliansky, V., Glukhova, M., Bejanian, M., Surguchov, A., Smirnov, V. Isolation and characterization of actin-like protein from yeast Saccharomyces cerevisiae. FEBS Letters. 102 (1), 55-58 (1979).
  8. Botstein, D., Chervitz, S. A., Cherry, M. Yeast as a model organism. Science. 277 (5330), 1259-1260 (1997).
  9. Kachroo, A. H., Vandeloo, M., Greco, B. M., Abdullah, M. Humanized yeast to model human biology, disease and evolution. Disease Models & Mechanisms. 15 (6), (2022).
  10. Outeiro, T. F., Lindquist, S. Yeast cells provide insight into alpha-synuclein biology and pathobiology. Science. 302 (5651), 1772-1775 (2003).
  11. Dunham, M., Gartenberg, M., Brown, G. Methods in Yeast Genetics and Genomics. , Cold Spring Harbour Laboratory Press. Woodbury, New York. (2015).
  12. Skinner, S. O., Sepúlveda, L. A., Xu, H., Golding, I. Measuring mRNA copy number in individual Escherichia coli cells using single-molecule fluorescent in situ hybridization. Nature Protocols. 8 (6), 1100-1113 (2013).
  13. Tenreiro, S., Munder, M. C., Alberti, S., Outeiro, T. F. Harnessing the power of yeast to unravel the molecular basis of neurodegeneration. Journal of Neurochemistry. 127 (4), 438-452 (2013).
  14. Nielsen, J. Yeast systems biology: Model organism and cell factory. Biotechnology Journal. 14 (9), 1800421(2019).
  15. Eleutherio, E., et al. Oxidative stress and aging: learning from yeast lessons. Fungal Biology. 122 (6), 514-525 (2018).
  16. Rencus-Lazar, S., DeRowe, Y., Adsi, H., Gazit, E., Laor, D. Yeast models for the study of amyloid-associated disorders and development of future therapy. Frontiers in Molecular Biosciences. 6, 15(2019).
  17. Franco, R., Rivas-Santisteban, R., Navarro, G., Pinna, A., Reyes-Resina, I. Genes implicated in familial Parkinson's disease provide a dual picture of nigral dopaminergic neurodegeneration with mitochondria taking center stage. International Journal of Molecular Sciences. 22 (9), 4643(2021).
  18. Wan, O. W., Chung, K. K. The role of alpha-synuclein oligomerization and aggregation in cellular and animal models of Parkinson's disease. PLoS One. 7 (6), 38545(2012).
  19. Xu, L., Pu, J. Alpha-synuclein in Parkinson's disease: From pathogenetic dysfunction to potential clinical application. Parkinson's Disease. 2016, 1720621(2016).
  20. Gitler, A. D., et al. The Parkinson's disease protein α-synuclein disrupts cellular Rab homeostasis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (1), 145-150 (2008).
  21. Sampson, T. R., et al. A gut bacterial amyloid promotes α-synuclein aggregation and motor impairment in mice. Elife. 9, 53111(2020).
  22. Evans, M. L., et al. The bacterial curli system possesses a potent and selective inhibitor of amyloid formation. Molecular Cell. 57 (3), 445-455 (2015).
  23. Su, L. J., et al. Compounds from an unbiased chemical screen reverse both ER-to-Golgi trafficking defects and mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease models. Disease Models & Mechanisms. 3 (3-4), 194-208 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Alpha Synuclein AggregationYeast ModelParkinson s DiseaseSynuclein ToxicityHumanized YeastProtein AggregationFluorescence MicroscopyWestern BlottingGenetic ScreeningSynaptic Vesicle Trafficking

Похожие статьи