Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Модель тройной культуры первичных клеток гематоэнцефалического барьера человека для изучения ишемического инсульта in vitro

4.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64469

⸱

6 октября 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Miller School of Medicine, University of Miami, 2Institute of Physiotherapy and Health Sciences, The Jerzy Kukuczka Academy of Physical Education

В этой статье

Краткое содержание

Здесь описан метод создания модели тройной клеточной культуры гематоэнцефалического барьера на основе первичных микрососудистых эндотелиальных клеток головного мозга человека, астроцитов и перицитов. Эта многоклеточная модель подходит для исследований дисфункции нервно-сосудистых единиц во время ишемического инсульта in vitro или для скрининга кандидатов на лекарства.

Аннотация

Ишемический инсульт является основной причиной смерти и инвалидности во всем мире с ограниченными терапевтическими возможностями. Невропатология ишемического инсульта характеризуется прерыванием кровоснабжения головного мозга, приводящим к гибели клеток и когнитивной дисфункции. Во время и после ишемического инсульта дисфункция гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) способствует прогрессированию травмы и способствует плохому восстановлению пациента. Современные модели ГЭБ в основном включают эндотелиальные монокультуры и двойные кокультуры с астроцитами или перицитами.

Таким моделям не хватает способности полностью имитировать динамическую микросреду мозга, которая необходима для межклеточной коммуникации. Кроме того, обычно используемые модели ГЭБ часто содержат увековеченные эндотелиальные клетки человека или клеточные культуры животного происхождения (грызуны, свиньи или крупного рогатого скота), которые создают трансляционные ограничения. В этой статье описывается новая модель ГЭБ, содержащая только первичные клетки человека (микрососудистые эндотелиальные клетки мозга, астроциты и перициты сосудов головного мозга), позволяющая исследовать ишемическую черепно-мозговую травму in vitro.

Влияние кислородно-глюкозной депривации (OGD) на целостность барьера оценивали с помощью измерений пассивной проницаемости, трансэндотелиального электрического сопротивления (TEER) и прямой визуализации гипоксических клеток. Представленный протокол предлагает явное преимущество в проникновении межклеточной среды ГЭБ in vivo, служа более реалистичной моделью BBB in vitro для разработки новых терапевтических стратегий в условиях ишемической черепно-мозговой травмы.

Введение

Инсульт является одной из ведущих причин смерти и длительной инвалидности во всем мире1. Частота инсульта быстро увеличивается с возрастом, удваиваясь каждые 10 лет после 55лет 2 года. Ишемический инсульт возникает в результате нарушения мозгового кровотока вследствие тромботических и эмболических событий, которое охватывает более 80% всех случаев инсульта3. Даже в настоящее время существует относительно мало вариантов лечения, доступных для минимизации гибели тканей после ишемического инсульта. Существующие методы лечения чувствительны ко времени и, следовательно, не всегда приводят к хорошим клиническим результатам. Поэтому срочно необходимы исследования сложных клеточных механизмов ишемического инсульта, влияющих на постинсультное восстановление.

ГЭБ является динамическим интерфейсом для обмена молекулами между кровью и паренхимой мозга. Структурно ГЭБ состоит из микрососудистых эндотелиальных клеток мозга, соединенных между собой соединительными комплексами, окруженными базальной мембраной, перицитами и астроцитарным концом4. Перициты и астроциты играют существенную роль в поддержании целостности ГЭБ за счет секреции различных факторов, необходимых для образования сильных, плотных соединений 5,6. Распад ГЭБ является одной из отличительных черт ишемического инсульта. Острая воспалительная реакция и окислительный стресс, связанные с ишемией головного мозга, приводят к нарушению белковых комплексов плотного соединения и дисрегулируемых перекрестных помех между астроцитами, перицитами и эндотелиальными клетками, что приводит к увеличению параклеточной проницаемости растворенного вещества через ГЭБ7. Дисфункция ГЭБ дополнительно способствует образованию отека мозга и увеличивает риск геморрагической трансформации8. Учитывая все вышесказанное, существует большой интерес к пониманию молекулярных и клеточных изменений, которые происходят на уровне ГЭБ во время и после ишемического инсульта.

Хотя многие модели BBB in vitro были разработаны в течение последних десятилетий и использовались в различных исследованиях, ни одна из них не может полностью воспроизвести условия in vivo 9. В то время как некоторые модели основаны на монослоях эндотелиальных клеток, культивируемых на хорошо вставленных проницаемых опорах отдельно или в сочетании с перицитами или астроцитами, только более поздние исследования представили модели тройной клеточной культуры. Почти все существующие модели тройной культуры ГЭБ включают первичные эндотелиальные клетки мозга вместе с астроцитами и перицитами, выделенными из видов животных, или клетками, полученными из плюрипотентных стволовых клеток человека 10,11,12,13.

Признавая необходимость лучшего повторения человеческого ГЭБ in vitro, мы создали модель тройной клеточной культуры in vitro BBB, состоящую из микрососудистых эндотелиальных клеток головного мозга человека (HBMEC), первичных астроцитов человека (HA) и первичных сосудистых перицитов головного мозга человека (HBVP). Эта модель BBB с тройной культурой устанавливается на 6-луночную пластину, полиэфирные мембранные вставки с размером пор 0,4 мкм. Эти колодезные вставки обеспечивают оптимальную среду для прикрепления клеток и обеспечивают легкий доступ как к апикальным (кровь), так и к базолатеральным (мозг) отсекам для отбора проб среды или применения соединений. Особенности этой предложенной модели тройной клеточной культуры BBB оцениваются путем измерения TEER и параклеточного потока после OGD, имитирующего ишемический инсульт in vitro, с дефицитом кислорода (<1%O2) и питательных веществ (с использованием безглюсодержащей среды), достигаемой с использованием увлажненной, герметичной камеры. Кроме того, индуцированные ишемоподобные состояния в этой модели точно проверяются путем прямой визуализации гипоксических клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: См. Таблицу материалов для получения подробной информации , относящейся ко всем ячейкам, материалам, оборудованию и решениям, используемым в этом протоколе.

1. Настройка модели тройной клеточной культуры BBB

  1. Посев перицитов
    1. Культивируют HBVP в колбах для культивирования T75 с активированной поверхностью для адгезии клеток в инкубаторе 5% CO2 при 37 °C до слияния. Как только слияние достигнуто, аспирируйте старую перицитную среду и промывайте клетки 5 мл теплого фосфатно-буферного физиологического раствора Dulbecco (DPBS). Аспирировать DPBS и отделить клетки от колбы, используя комбинацию из 4 мл теплого раствора трипсина-ЭДТА и 1 мл DPBS.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте использования отрывков позже P7.
    2. Инкубируйте колбу в течение 5 мин при 37 °C в инкубатореCO2 . Посмотрите под микроскопом, чтобы убедиться, что клетки отделены от колбы. Добавьте 5 мл теплой перицитной среды (содержащей 2% фетальной бычьей сыворотки [FBS]) в колбу и переложите отсоединенные клетки в центрифужную трубку объемом 50 мл.
    3. Центрифугируют клеточную суспензию в течение 3 мин при 200 × г, позволяя клеткам образовывать гранулу в нижней части трубки. Аспирируйте среду из трубки, гарантируя, что клеточная гранула останется неповрежденной.
    4. Повторное суспендирование клеточной гранулы в перицитной среде; рассчитать количество среды в зависимости от слияния ячеек и количества необходимых скважин. Возьмите 10 мкл повторно суспендированных клеток, поместите их в слайд подсчета клеток и подсчитайте количество клеток.
    5. Определить плотность клеток и засеять 300 000 клеток/вставить в 1 мл перицитной среды на аблюминальную сторону колодезных вставок (формат 6 скважин).
      ПРИМЕЧАНИЕ: При посеве HBVP на нижней стороне вкладышей очень важно сначала перевернуть хорошо вставленные пластины вверх дном. Пока пластина укладывается ровно на поверхность, снимите нижнюю секцию, чтобы обнажить аблюминальную сторону колодезных вставок. После добавления перицитной клеточной суспензии на аблюминальную сторону накройте хорошо вставленные пластиной, чтобы предотвратить испарение. Держите все пластины перевернутыми вверх дном в инкубаторе с 5% CO2 при 37 °C в течение ночи.
  2. Посев астроцитов
    1. Культивируйте ГК в колбах T75 в инкубаторе с 5%CO2 при 37 °C до тех пор, пока не будет достигнуто слияние. Следуйте приведенным выше шагам 1.1.1-1.1.4, используя астроцитарную среду (также содержащую 2% FBS) вместо перицитной среды.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте использования отрывков позже P9.
    2. Определите плотность клеток и посадите 300 000 клеток/лунку на дно ткани культуры 6-луночных пластин. Накройте пластину, чтобы предотвратить испарение, и храните все пластины в инкубаторе с 5% CO2 при 37 °C в течение ночи.
  3. Посев эндотелиальных клеток
    1. Культивируют HBMEC в блюдах для культивирования тканей в инкубаторе с 5%CO2 при 37 °C до слияния. Выполните описанные выше шаги 1.1.1-1.1.4, используя полную классическую среду (содержащую 10% FBS) вместо перицитной среды.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте использования отрывков позже P12.
    2. Вынимают тканевую культуру 6-луночными пластинками, содержащими астроциты, и колодезными вставками (6-луночного формата), содержащими перициты, из инкубатора 5% CO2 при 37 °C. Аспирируют астроцитарную среду из культуры тканей 6-луночными пластинками. Добавьте в каждую лунку 1 мл перицитной среды и 1 мл астроцитарной среды.
    3. Аспирируйте перицитную среду из колодцевых вкладышей и поместите их в тканевую культуру 6-луночных пластин, содержащих засеянные астроциты. Посейте HBMEC при плотности 300 000 клеток/лунку в 2 мл полной классической среды на апикальную сторону тех же колодцевых вставок.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эндотелиальные клетки следует высевать на апикальной стороне колодцев-вкладышей на следующий день после посева перицитов на аблюминальной стороне колодцевых вставок и астроцитов на тканевой культуре 6-луночных пластинок. Клетки следует поддерживать в тройной культуре в течение 6 дней, чтобы индуцировать ГЭБ-подобные свойства. Клеточную культуральную среду следует менять в обоих хорошо вставленных отсеках за 24 ч до начала экспериментов.

2. Индукция кислородно-глюкозной депривации

  1. Промывайте ячейки 3x с помощью DPBS. Для трехклеточных культур, подвергшихся воздействию OGD, добавляют безглюковую среду (без L-глутамина и фенола красного) как к апикальному, так и к базолатеральному компартментам. Заменить питательную среду свежей средой в нормоксических контрольных клеточных культурах. Поместите контрольные тройные культуры в инкубаторс 5% CO 2 при 37 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Средние изменения до индукции OGD или сразу после OGD могут создавать механическое напряжение, которое будет дополнительно влиять на монослои эндотелиальных клеток. Таким образом, этапы с замещением среды включены для нормоксического контроля клеточных культур.
  2. Поместите чашку Петри, содержащую 20 мл стерильной воды, в камеру инкубатора гипоксии, чтобы обеспечить адекватное увлажнение культур. Откройте камеру, отпустив кольцевой зажим. Разложите клеточные культуры на полках. Запечатайте камеру, закрепив кольцевой зажим.
  3. Откройте как входное, так и выходное порты камеры. Прикрепите трубку, идущую от верхней части расходомера, к камере. Прикрепите трубку, поступающую из нижней части расходомера, к газгольде, содержащему газовую смесь 95% N2/5% CO2 , через воздушный фильтр.
  4. Откройте клапан управления потоком резервуара, повернув его против часовой стрелки, чтобы обеспечить минимальный поток газа. Медленно откройте клапан регулятора давления, повернув по часовой стрелке.
  5. Промывайте камеру газовой смесью со скоростью потока 20 л/мин в течение 5 мин. Отсоедините камеру от источника газа и плотно закройте оба белых пластиковых зажима.
  6. Выключите клапан управления потоком резервуара, повернув его по часовой стрелке. Закройте клапан регулятора давления, повернув против часовой стрелки.
  7. Поместите камеру гипоксии в обычный инкубатор при 37 °C в течение 4 ч.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для добавления последующего периода реоксигенации промыть клетки 3x DPBS, добавить свежую среду во всех тройных культурах и хранить в течение дополнительных 24 ч в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C. Согласно инструкции производителя, концентрация кислорода, остающаяся в камере, составляет 0% после не менее 4 мин продувки анаэробной газовой смесью при 20 л/мин.

3. Измерения TEER

  1. Поместите стерилизованный инструмент TEER в шкаф биобезопасности и подключите электроды к эпителиальному вольтомметру. Стерилизуют электроды в 30 мл 70% раствора изопропилового спирта в течение минимум 30 мин.
  2. Включите прибор TEER и установите для функции значение Ом.
  3. Извлеките электроды из 70% раствора изопропилового спирта и поместите их в 20 мл DPBS минимум на 30 мин до тех пор, пока цифровое считывание на устройстве TEER не считывает 0 Ом.
  4. Вставьте длинный зубец электрода через одно из трех отверстий в вешалке для вставки скважины заготовки, опуская ее до тех пор, пока она не коснется дна колодца. Убедитесь, что короткий зубец покоится над апикальной культурой на нижней части колодезной вставки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Заготовка для вставки скважины состоит из 2 мл полной классической среды в апикальном отсеке и комбинации 1 мл перицитной среды и 1 мл астроцитарной среды в базолатеральном отсеке. Убедитесь, что электроды удерживаются под углом 90° к вставке колодца во время измерения TEER. Использование среднего значения двух или трех показаний, полученных в одной и той же скважине (на открытие), может помочь уменьшить изменчивость.
  5. Подождите, пока значения цифрового считывания на приборе TEER выровняются, прежде чем записывать значение. Поместите электроды обратно в DPBS, чтобы промыть их между измерениями. Продолжайте собирать все измерения TEER для еще двух пустых элементов управления вставкой скважины.
  6. Соберите результаты измерений TEER на пробных пластинах, используя этапы 3.4-3.5, сделанные для контрольных измерений. После того, как все измерения были проведены, поместите электрод обратно в 70% раствор изопропилового спирта на 30 минут. Отсоедините электроды от прибора TEER и дайте им высохнуть на воздухе.
  7. Рассчитайте значения TEER. Используйте уравнение (1) для вычитания среднего омного значения элемента управления пустой скважинной вставкой из значения Ом образца, а затем умножайте это значение сопротивления на площадь мембранной вставки (см2), чтобы получить сообщаемое значение TEER в Ω∙см2.
    figure-protocol-1 (1)

4. Оценка параклеточной проницаемости ГЭБ

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните все шаги с участием FITC-декстрана в шкафу биобезопасности клеточных культур с выключенным светом. Накройте растворы FITC-dextran алюминиевой фольгой, чтобы свести к минимуму фотоотбеливание.

  1. Готовят растворы, содержащие FITC-декстранс 20 и 70 кДа (0,1 мг/мл) с использованием фенольной красной эндотелиальной клеточной питательной среды и дают перемешивать на качающей платформе шейкера в течение 1 ч. Фильтруйте растворы с помощью шприцевого фильтра 0,22 мкм.
  2. Аспирировать среду из базолатерального компартмента и заменить ее 2 мл фенольной среды роста эндотелиальных клеток без красного цвета в модели BBB тройной клеточной культуры. Дважды промыть клетки в апикальном отсеке сбалансированным солевым раствором Хэнкса (HBSS).
  3. Добавьте 1 мл раствора FITC-декстрана в апикальный отсек и накройте пластину алюминиевой фольгой. Поместите пластину в инкубатор с 5% CO2 при 37 °C в течение 1 ч.
  4. Возьмите 100 мкл среды из базолатеральных отсеков и переложите ее в черную 96-луночную пластину. Измерьте флуоресценцию с помощью микропластинного считывателя с длинами волн возбуждения и излучения, установленными на 480 нм и 530 нм соответственно.

5. Обнаружение гипоксии в живых клетках

  1. Семена 200 мкл HBMEC, HA и HBVP в центре покрытых поли-d-лизином стеклянных нижних тарелок толщиной 35 мм при плотности 150 000 клеток/тарелка. Перед посевом HBMEC покройте дно посуды фактором крепления. Позвольте клеткам прикрепиться к стеклянной поверхности, оставив их на ночь при 37 °C в инкубаторе CO2 .
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно размещать чашки с первичными клетками человека одновременно с тройной хорошо вставленной моделью ГЭБ в гипоксической камере для OGD.
  2. Как только слияние достигнуто, отбросьте культуральную среду и добавьте 2 мл предварительной безглюсодержащей среды (для OGD) или нормальной среды (для контрольной группы), содержащей 2 мкл 1 мМ Hoechst 33342 (конечная концентрация 0,2 мкМ) и 0,5 мкл исходного раствора 5 мМ указанного реагента зеленой гипоксии Image-iT (конечная концентрация 1 мкМ). После обработки OGD замените среду на оптимизированную для визуализации среду во всех блюдах.
  3. Выполняйте флуоресцентную визуализацию живых клеток с помощью фильтра GFP и инкубатора конфокального микроскопа верхней ступени, как описано ранее14,15.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Чтобы изучить влияние астроцитов и перицитов на барьерную функцию HBMEC, мы построили модель тройной клеточной культуры BBB на вставках клеточной культуры (рисунок 1A) вместе с монокультурой HBMEC и двумя моделями двойной кокультуры в качестве контроля (рисунок 1B). Контроль двойной кокультуры включал бесконтактную кокультуру HBMEC с HA и контактную кокультуру HBMEC с HBVP. После 6 дней совместной культивации все экспериментальные установки подвергали ОГД в тече...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом протоколе описан метод создания надежной тройной эндотелиальной клеточно-перицит-астроцитарной культуры модели ГЭБ для изучения дисфункции ГЭБ в условиях ишемического инсульта in vitro. Учитывая, что перициты являются ближайшими соседями эндотелиальных клеток in vivo, HBVP покрыты на нижней стороне колодезных вставок в этой модели16. Хотя в этой конфигурации отсутствует прямая межклеточная связь между астроцитами и эндотелиальными клетками, такое расположение позволяет осу...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы раскрыли, что конфликта интересов нет.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения (NIH) MH128022, MH122235, MH072567, MH122235, HL126559, DA044579, DA039576, DA040537, DA050528 и DA047157.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
24 мм Transwell с 0,4 &; m Мембранная вставка из полиэстерапорCorning 3450
35 мм Стеклянное дно ТарелкиMatTek Life Sciences (FISHERSCI)P35GC-1.5-14-C
Астроциты MediumScience Cell1801
Фактор прикрепленияклеточные системы (Fisher Scientific)4Z0-201
BD 60 мл ШприцBD309653
BrainPhys Imaging Оптимизированная средаSTEMCELL Technologies5791
Полная классическая среда с сывороткой и CultureBoost4Z0-500Клеточные системы
Corning 50 мл PP Центрифуга пробирки (коническое дно с крышкой CentriStarVWR430829
Corning 75 см² U-образная скошенная шейка без обработки клеточной культуры колба Corning431464U
Corning CellBIND 96-луночный плоский прозрачный дно Черные полистирольные микропластиныCorning3340
Countes Камера подсчета клетокThermo Fisher ScientificC10228
Countess II FL Автоматизированный счетчик клетокThermo Fisher ScientificZGEXSCCOUNTESS2FL
Decon CiDehol 70 Раствор изопропилового спирта Fisher Scientific 04-355-71
Одноразовые чашки ПетриVWR25384-088
Среда DMEM (без глюкозы, без глутамина, без фенола красного)ThermoFisherA14430-01Среда без
глюкозы DPBS (без кальция, без магния)ThermoFisher14190250
EBM Базальная среда для роста эндотелиальных клеток, фенол красный свободный, 500 млLonzaCC-3129
EVOM2 Эпителиальный вольт/омметр (TEER) с электродами STX2World Precison InstrumentsNC9792051Эпителиальный вольтометр 
Флуоресцеин изотиоцианат– декстран (вес 20,000)Millipore SigmaFD20-250MG
Флуоресцеин изотиоцианат– декстран (вес 70 000)Millipore SigmaFD70S-250MG
Fluorview FV3000 Конфокальный микроскопOlympusFV3000
Газовый бак (95% N2, 5% CO2)Газообразный воздухX02NI95C2003071
HBSS (без кальция, без магния, без фенолового красного)Thermofisher14025092
Hoechst 33342, Тригидрохлорид, Тригидрат - 10 мг/мл раствор в водеThermoFisherH3570
Астроциты человекаScience Cell1800
Перициты сосудов головного мозга человекаScience Cell1200
Камера инкубатора гипоксииSTEMCELL Technologies27310
Image-iT Зеленый реагент для гипоксииThermoFisheri14834
Перициты СредаНаукаКлетка 1201
Первичные микрососудистые эндотелиальные клетки головного мозгачеловека ACBRI 376Клеточные системы
Качающаяся платформа-качалка, двойнойVWR10860-658
Однопоточный измерительстволовых клеток Технологии27311
Считыватель микропланшетов SpectraMax iD3Молекулярные устройства75886-128
Фильтр для шприца, 25 мм, 0,22 шт; m, PVDF, SterileNEST Scientific380121
TPP Многолуночные планшеты (6 лунок)MidSciTP92406
TPP Tissue Culture Колбы T-75MidSciTP90075Колбы с активированной поверхностью для клеточной адгезии
Trypsin-EDTA (0,25%), фенол красныйThermoFisher25200056
ультрачистая дистиллированная водаInvitrogen (Life Technologies)10977-015
Инкубатор Uno Stage Top -Oko LabUNO-T-H-CO2-TTL

Ссылки

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart disease and stroke statistics-2016 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 133 (94), 38(2016).
  2. Yousufuddin, M., Young, N. Aging and ischemic stroke. Aging. 11 (9), 2542-2544 (2019).
  3. Donkor, E. S. Stroke in the 21st century: a snapshot of the burden, epidemiology, and quality of life. Stroke Research and Treatment. , 3238165(2018).
  4. Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity. Fluids and Barriers of the CNS. 17 (1), 69(2020).
  5. Brown, L. S., et al. Pericytes and neurovascular function in the healthy and diseased brain. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 282(2019).
  6. Cabezas, R., et al. Astrocytic modulation of blood brain barrier: perspectives on Parkinson's disease. Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 211(2014).
  7. Abdullahi, W., Tripathi, D., Ronaldson, P. T. Blood-brain barrier dysfunction in ischemic stroke: targeting tight junctions and transporters for vascular protection. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 315 (3), 343-356 (2018).
  8. Candelario-Jalil, E., Dijkhuizen, R. M., Magnus, T. Neuroinflammation, stroke, blood-brain barrier dysfunction, and imaging modalities. Stroke. 53 (5), 1473-1486 (2022).
  9. He, Y., Yao, Y., Tsirka, S. E., Cao, Y. Cell-culture models of the blood-brain barrier. Stroke. 45 (8), 2514-2526 (2014).
  10. Thomsen, L. B., Burkhart, A., Moos, T. A triple culture model of the blood-brain barrier using porcine brain endothelial cells, astrocytes and pericytes. PLoS One. 10 (8), 0134765(2015).
  11. Song, Y., Cai, X., Du, D., Dutta, P., Lin, Y. Comparison of blood-brain barrier models for in vitro biological analysis: one cell type vs three cell types. ACS Applied Bio Materials. 2 (3), 1050-1055 (2019).
  12. Xu, L., et al. Silver nanoparticles induce tight junction disruption and astrocyte neurotoxicity in a rat blood-brain barrier primary triple coculture model. International Journal of Nanomedicine. 10, 6105-6118 (2015).
  13. Appelt-Menzel, A. Establishment of a human blood-brain barrier co-culture model mimicking the neurovascular unit using induced pluri- and multipotent stem cells. Stem Cell Reports. 8 (4), 894-906 (2017).
  14. Zhang, Y., et al. Rational construction of a reversible arylazo-based NIR probe for cycling hypoxia imaging in vivo. Nature Communications. 12 (1), 2772(2021).
  15. Palacio-Castañeda, V., Kooijman, L., Venzac, B., Verdurmen, W. P. R., Le Gac, S. Metabolic switching of tumor cells under hypoxic conditions in a tumor-on-a-chip model. Micromachines. 11 (4), 382(2020).
  16. Ramsauer, M., Krause, D., Dermietzel, R. Angiogenesis of the blood-brain barrier in vitro and the function of cerebral pericytes. FASEB Journal. 16 (10), 1274-1276 (2002).
  17. Lyck, R., et al. ALCAM (CD166) is involved in extravasation of monocytes rather than T cells across the blood-brain barrier. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 37 (8), 2894-2909 (2017).
  18. Rizzi, E., et al. A triple culture cell system modeling the human blood-brain barrier. Journal of Visualized Experiments. (177), (2021).
  19. Kumar, S., Shaw, L., Lawrence, C., Lea, R., Alder, J. P50: Developing a physiologically relevant blood brain barrier model for the study of drug disposition in glioma. Neuro-Oncology. 16 (6), (2014).
  20. Stone, N. L., England, T. J., O'Sullivan, S. E. A novel transwell blood brain barrier model using primary human cells. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 230(2019).
  21. Al Ahmad, A., Taboada, C. B., Gassmann, M., Ogunshola, O. O. Astrocytes and pericytes differentially modulate blood-brain barrier characteristics during development and hypoxic insult. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 31 (2), 693-705 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Тройная культура клетоккислородно-глюкозная депривацияцелостность барьератрансэндотелиальное электрическое сопротивлениепервичные клетки человекаизоляция перицитовкультура астроцитовпроницаемость для FITC-декстрана
Модель тройной культуры первичных клеток гематоэнцефалического барьера человека для изучения ишемического инсульта in vitro
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.