Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение и культивирование макрофагов, полученных из костного мозга у мышей

8.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64566

⸱

23 июня 2023 г.

 ,  ,  , 
1Department of General Pathology, Institute of Biological Sciences, Federal University of Minas Gerais, 2Department of Cell Biology and Molecular Genetics, University of Maryland

В этой статье

Краткое содержание

В настоящем протоколе описывается выделение и культивирование макрофагов, полученных из костного мозга у мышей.

Аннотация

Макрофаги выполняют важные эффекторные функции в гомеостазе и воспалении. Эти клетки присутствуют в каждой ткани организма и обладают важной способностью изменять свой профиль в соответствии со стимулами, присутствующими в микроокружении. Цитокины могут оказывать глубокое влияние на физиологию макрофагов, особенно ИФН-γ и интерлейкин 4, генерируя типы М1 и М2 соответственно. Из-за универсальности этих клеток производство популяции макрофагов, полученных из костного мозга, может быть основным шагом во многих экспериментальных моделях клеточной биологии. Цель этого протокола — помочь исследователям в выделении и культивировании макрофагов, полученных из предшественников костного мозга. Предшественники костного мозга от мышей C57BL/6, свободных от патогенов, превращаются в макрофаги при воздействии макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF), который в этом протоколе получают из надосадочной жидкости линии фибробластов мышей L-929. После инкубации зрелые макрофаги доступны для использования с7-го по10-й день. Одно животное может быть источником примерно 2 х10 7 макрофагов. Таким образом, он является идеальным протоколом для получения больших количеств первичных макрофагов с использованием основных методов культивирования клеток.

Введение

Моноциты и макрофаги являются мононуклеарными фагоцитами, которые могут быть получены от предшественников в костном мозге. Недавние исследования показали, что макрофаги также происходят из эритро-миелоидных предшественников, полученных из желточного мешка1. Независимо от их происхождения, эти лейкоциты выполняют важные эффекторные функции в гомеостазе и воспалении 2,3. Моноциты — это клетки периферической крови, которые в дальнейшем могут дифференцироваться в макрофаги в ткани 2,4, тогда как макрофаги представляют собой гетерогенные клетки, которые демонстрируют фенотипы и функции, регулируемые местным воздействием факторов роста и цитокинов5. Поскольку макрофаги демонстрируют такое функциональное разнообразие, они были изучены на многих моделях заболеваний. Таким образом, культура макрофагов in vitro стала важным инструментом для понимания их физиологии и роли в различных заболеваниях. Костный мозг является важным источником клеток-предшественников, в том числе предшественников макрофагов, которые можно выделять и размножать, экспоненциально увеличивая количество получаемых макрофагов. Кроме того, макрофаги, полученные из костного мозга, особенно важны для того, чтобы избежать эффектов, генерируемых тканевым микроокружением, поскольку макрофаги изменяют свой фенотип в ответ на различные раздражители в тканях 6,7. Предшественники костного мозга превращаются в макрофаги при воздействии макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF)8. Макрофаги, полученные из костного мозга, невозможно отличить от макрофагов, полученных из моноцитов, по биохимическим маркерам в тканях. Эти клетки представляют собой высокооднородную популяцию первичных клеток, которые во многих других отношениях сопоставимы с перитонеальными макрофагами 6,9.

Из-за своего гетерогенного набора клеточных функций макрофаги уже давно тщательно изучены исследователями. Эти клетки могут быть использованы в различных экспериментальных моделях, в том числе при инфекционных и воспалительных заболеваниях, так как они участвуют в этих процессах10,11. Они также могут быть полезны для исследования поляризации макрофагов в ответ на различные микроэкологические стимулы12,13. Таким образом, здесь представлен простой и надежный протокол с целью получения большого количества первичных макрофагов из костного мозга мыши.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Этот протокол был выполнен в соответствии с Национальным советом по контролю за экспериментами на животных (Concea) и с одобрения Комитета по этике и использованию животных (CEUA). Мыши C57BL/6 были приобретены в Biotério Central Федерального университета Минас-Жерайс (UFMG), Белу-Оризонти, Бразилия. Средства индивидуальной защиты (СИЗ), такие как лабораторные халаты, перчатки и средства защиты глаз, должны использоваться на всех этапах, описанных в данном протоколе.

1. Получение надосадочной жидкости линии фибробластов L-929 в качестве источника М-КСФ

  1. Разморозьте клетки линии фибробластов L-929 (American Type Culture Collection Certified Cell Line-ATCC CCL1) и немедленно начните процесс культивирования для сохранения жизнеспособности.
  2. В ламинарном проточном шкафу биобезопасности с помощью пипетки объемом 1000 мкл перенесите клетки линии фибробластов L-929 из флакона в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл.
  3. С помощью серологической пипетки добавьте 50 мл стерильного фосфатно-солевого буфера (PBS), не содержащего кальция и магния.
  4. Центрифуга при 300 x g, 4 °C в течение 10 минут. Выбросьте надосадочную жидкость.
  5. Ресуспендируйте гранулу в 20 мл модифицированной Eagle medium-F12 от Dulbecco, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS) и 1 мл пенициллина/стрептомицина (P/S) (DMEM/F12-10) с помощью серологической пипетки.
  6. Перенесите ресуспендированные клетки в колбу для клеточных культур T75.
  7. Инкубировать в инкубаторе с температурой 37 °C, 5%CO2 до полного слияния.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При работе с колбой будьте осторожны, чтобы не намочить крышку раствором, так как это может стать источником загрязнения. Для получения удобного количества надосадочной жидкости необходимо реплицировать клетки после того, как они покроют всю поверхность колбы с клеточной культурой. Клетки L-929 ингибируются при контакте. Подогрейте раствор трипсина/этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), DMEM/F12-10 и стерильный PBS до 37 °C, чтобы начать экспансию клеточной культуры, как описано в следующих этапах.
  8. Как только будет достигнуто полное слияние, выбросьте надосадочную жидкость из колбы для клеточных культур внутри шкафа биобезопасности с ламинарным потоком.
  9. Промойте колбу с клеточными культурами 20 мл стерильного PBS с помощью серологической пипетки и выбросьте раствор.
  10. Добавьте 10 мл трипсина/ЭДТА (0,05% раствора) в колбу для клеточных культур, содержащую адгезивные клетки.
  11. Перенесите колбу с клеточной культурой из ламинарного потока в инкубатор с температурой 37°C и 5%CO2 и инкубируйте в течение 3 минут.
  12. Встряхните колбу с клеточными культурами, чтобы отделить клетки от поверхности колбы для культур, и используйте микроскоп, чтобы убедиться, что все клетки были диссоциированы.
  13. Инактивируйте трипсин/ЭДТА (0,05% раствор) 10 мл среды DMEM/F12-10.
  14. Перенесите раствор с помощью серологической пипетки в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл.
  15. Центрифугировать при 300 x g при 4 °C в течение 10 минут. Выбросьте надосадочную жидкость.
  16. Суспендируйте гранулу в 10 мл среды DMEM/F12-10.
  17. Добавьте 1 мл клеточной суспензии в колбу для клеточных культур T175 (культура 1:10).
  18. Повторите процедуру, чтобы получить десять колб для клеточных культур T175.
  19. Добавьте по 50 мл DMEM/F12-10 в каждую колбу для клеточных культур.
  20. Инкубировать в инкубаторе с температурой 37 °C, 5%CO2 до полного слияния.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эти шаги гарантируют 500 мл надосадочной жидкости L-929 клеток. На 5-й день, после того как клетки покроют поверхность колбы клеточной культуры Т175, надосадочная жидкость будет обогащена M-CSF и должна быть собрана14.
  21. Извлеките колбу с клеточными культурами из инкубатора на 5-е сутки после контактного ингибирования.
  22. Переложите среду в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл.
  23. Центрифуга при 3 200 x g, при 4 °C в течение 10 мин.
  24. Соберите надосадочную жидкость, обогащенную M-CSF, и переложите раствор в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл. Хранить в морозильной камере при температуре -20 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Центрифугирование чрезвычайно важно для удаления клеток и мусора из надосадочной жидкости.
  25. Надосадочная жидкость L-929 является удобным и недорогим источником макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF) и обычно содержит от 5 до 10 нг/мл M-CSF8. Эти надосадочные жидкости также содержат следовые количества других цитокинов и факторов роста, но они не оказывают глубокого влияния на физиологию макрофагов15. Тем не менее, очищенный M-CSF может быть приобретен и использован в качестве альтернативы надосадочной жидкости L-929 в концентрациях от 1 до 2 нг/мл8.

2. Удаление бедренной и большеберцовой костей

  1. Продолжить эвтаназию 8-недельного самца мыши дикого типа C57BL-6 путем вывиха шейки матки после удушья углекислым газом в соответствии с нормативной резолюцией No 18 Национального совета по экспериментам на животных (Concea) и с одобрения Комитета по этике и использованию животных (CEUA).
  2. Смочите мышь в 70% растворе этанола и с помощью стерильных ножниц сделайте разрез на 1 см вдоль живота.
  3. Снимайте кожу до тех пор, пока мышцы задних лап полностью не обнажаются.
  4. Задние ноги уберите на уровне бедер, стараясь не сломать бедренную и большеберцовую кости.
  5. Поместите задние ноги в коническую центрифужную пробирку с 70% раствором этанола.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Всегда используйте мышей, свободных от патогенов. Обязательно собирайте обе ноги, чтобы добиться большего количества клеток. Шаг 2 выполняется в нестерильной среде (настольной). Следовательно, важно аккуратно удалять бедренную и большеберцовую кости, чтобы они оставались неповрежденными, чтобы избежать бактериального загрязнения. Остальные этапы этой процедуры выполняются в ламинарном проточном шкафу биобезопасности. Время воздействия на ноги 70% раствора этанола должно быть ограничено 10 мин. Если время больше, могут быть поражены предшественники костного мозга.

3. Получить предшественников костного мозга из просвета большеберцовой и бедренной костей

  1. Извлеките ноги из 70% раствора этанола и переложите их в стерильный PBS.
  2. С помощью щипцов и дезинфицирующих салфеток удалите все мышцы и фасции. После этого шага косточка должна быть чистой.
  3. Используйте стерильное лезвие хирургического скальпеля, чтобы разрезать костный эпифиз с обоих концов, чтобы обнажить костный мозг.
  4. Наполните шприц объемом 20 мл 10 мл стерильного PBS с добавлением 2% раствора пенициллина/стрептомицина и подключите иглу 26 G.
  5. Удерживайте кость с помощью анатомических рассекционных щипцов одной рукой, а другой вводите иглу в костную полость. Будьте осторожны, чтобы не раздавить кость щипцами.
  6. Промойте внутреннюю часть кости с помощью PBS и соберите костный мозг в стерильную коническую центрифужную пробирку. После этого шага костная полость должна казаться белой.
  7. Центрифугируйте собранные клетки в течение 10 мин при 300 x g при 4 °C.
  8. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 1 мл DMEM/F12-10.
  9. Гомогенизируйте и добавьте еще 9 мл среды DMEM/F12-10, чтобы довести общее количество клеток до 10 мл.

4. Культура макрофагов

  1. Добавьте по 1 мл клеток-предшественников в каждую из круглых пластиковых чашек Петри размером 100 мм x 20 мм (всего 10 чашек), распределив клетки по планшетам с помощью пипетки для получения равномерного распределения. Не используйте посуду, обработанную культурой тканей.
  2. Добавьте 9 мл DMEM/F12-10 с добавлением 20% надосадочной жидкости L-929 в каждую посуду.
  3. Инкубировать в инкубаторе с температурой 37 °C, 5%CO2 .
  4. На3-й день добавьте в каждую посуду по 10 мл среды DMEM/F12-10 с добавлением 20% надосадочной жидкости клеток L-929. Таким образом, чашки для культур теперь имеют в общей сложности 20 мл питательной среды, достаточную для роста клеток до конца их созревания.
    ПРИМЕЧАНИЯ: Не следует использовать чашки, обработанные тканевыми культурами, потому что макрофаги, как естественные адгезивные клетки, отмеченные сильным взаимодействием с поверхностями, не будут легко диссоциироваться с чашкой позже. Как правило, клеточные предшественники от одной мыши (двух бедренных костей) могут быть высажены в 10 культуральных чашах. Клеточные предшественники превратятся в макрофаги, которые можно использовать с 7 по 10 день инкубации. Подтверждение созревания определяется изменениями морфологии макрофагов. Зрелые макрофаги являются адгезивными и демонстрируют неоднородную морфологию, объясняемую эмиссией псевдоподий в разных направлениях. Примеры этих зрелых клеток показаны в репрезентативных результатах.

5. Сбор макрофагов

  1. Откажитесь от надосадочной жидкости из всех блюд культуры.
  2. Вымойте каждую чашку для посева 10 мл теплого (37 °C) стерильного Mg2+ и Ca2+ free PBS.
  3. Слейте раствор с каждой посуды.
  4. Предварительно подогрейте неферментативный раствор для диссоциации клеток до 37 °C и добавьте по 3 мл в каждую посуду. Инкубировать в течение 10 минут в инкубаторе с температурой 37 °C, 5% CO2 . Используйте инвертированный микроскоп, чтобы визуализировать, диссоциируют ли макрофаги от культуральных чашек.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Использование пластиковых пластин, обработанных не тканевыми культурами, должно обеспечить легкую диссоциацию клеток и избежать необходимости соскабливать клетки с пластины.
  5. Мойте посуду с помощью серологической пипетки с раствором для диссоциации неферментативных клеток снова и снова, выполняя круговые движения, чтобы убедиться, что все макрофаги диссоциированы от чашки.
  6. Соберите раствор со всех чашек с культурой вместе в коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл.
  7. Добавьте 10 мл стерильного предварительно подогретого PBS в пустые формы для культуры и действуйте, как в пункте 5.4. Эта процедура является повторением шага 5.4 и призвана гарантировать сбор всех макрофагов.
  8. Центрифуга при 300 x g, 4 °C в течение 10 минут.
  9. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу с 1 мл DMEM/F12-10. Медленно и осторожно гомогенизируйте вверх и вниз с помощью пипетки, чтобы не повредить клетки.
  10. Приготовьте аликвоту из 10 мкл раствора макрофага, разведенного с 10 мкл Трипана Синего для подсчета клеток с помощью гемоцитометра.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На 7-й день каждое блюдо будет производить примерно 2 x 106 макрофагов. Это означает, что одна мышь может производить примерно 2 x 107 первичных макрофагов при сборе в десять планшетов. Поскольку M-CSF только стимулирует созревание макрофагов, процедура гарантирует популяцию клеток, которая по существу является просто макрофагами и свободна от других загрязняющих лейкоцитов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Макрофаги – это крупные и сросшиеся клетки с особыми физиологическими характеристиками. Они демонстрируют разнообразие морфологических проявлений в культуре из-за способности прилипать к стеклу и пластику, а их типичная морфология распространения связана с эмиссией цитоплазматических расширений (рис. 1). Как только предшественники костного мозга подвергаются воздействию M-CSF из надосадочной жидкости клеток L-929 и начинают трансформацию в зрелые макрофаги, они становятся адгезивными к пласт...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Получение популяции макрофагов, полученных из костного мозга, является основным шагом во многих экспериментальных моделях клеточной биологии, особенно когда важно достичь однородной популяции первичных клеток. Как уже упоминалось, клеточные предшественники могут превращаться в макрофаги только в присутствии M-CSF. В качестве основного источника М-КСФ можно использовать надосадочную жидкость L-929. Помимо стоимости, нет никаких проблем сиспользованием рекомбинантного M-CSF 8,17

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами от Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG), через Rede de Pesquisa em Doenças Infecciosas Humanas e Animais do Estado de Minas Gerais (RED-00313-16) и Rede Mineira de Engenharia de Tecidos e Terapia Celular - REMETTEC (RED-00570-16), а также от Бразильского национального совета по научному и технологическому развитию (CNPq).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Шприц 20 млDESCARPACKSI100S4GСтерильный шприц
26-г иглыBD497AQDKT7Стерильные иглы
50 мл коническая центрифужная пробиркаSARSTEDT62547254Пластиковые конические пробирки пригодные для центрифугирования
70% раствор этанолаEMFAL490Раствор этанола для стерилизации
Анатомическое рассечение щипцы3B SCIENTIFICW1670Содержать в стерильном стакане, содержащем 70% раствор этанола
C57Bl/6 мыши дикого типаПриобретено в Bioté rio Central в Федеральном университете штата Минас-ЖерайсНе применимоМыши должны быть свободны от специфических патогенов, возраст от 6 до 10 недель. Для восстановления после стресса, связанного с транспортировкой, мышей необходимо разместить не менее чем на неделю раньше
Колба для клеточных культур T175GREINERC7481-50EAT-175 колба, скошенная горлышко, площадь поверхности 75 см2, с фильтрующим колпаком, без ДНКазы, без РНКазы
Колба для клеточных культур T75GREINERC7231-120EAT-75, скошенная горлышко, площадь поверхности 75 см2, с фильтрующим колпачком, без ДНКазы,
Дезинфицирующие или детские салфеткиCLOROXНе применимоПомогает очистить кость
Дистиллированная водаGIBCO15230Стерильная дистиллированная вода
DMEM/F12-10Не применимоНе применимо Не применимоДобавьте 10 мл фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1 мл пенициллина/стрептомицина (P/S) в DMEM/F12 (q.s.p. 100 мл)
DMEM/F12-10 + надосадочная жидкость клеток L-929Не применимоНе применимоДобавить 20% надосадочной жидкости культуры клеток L929 на DMEM/F-12-10
Dulbecco′ s Модифицированный Eagle′ Среда - F12 (DMEM/F12)GIBCO12500096DMEM: F-12 Среда содержит 2,5 мМ L-глутамина, 15 мМ HEPES, 0,5 мМ пирувата натрия и 1200 мг/л бикарбоната натрия. Суспензировать порошок до 1 литра <бр/> дистиллированной воды и добавить 3,7 г гидрокарбоната натрия. Отрегулируйте pH до 7,2 и отфильтруйте с 0,22 &m;M. Хранение при 2 - 8 ° C Морозильная камера
Фетальная бычья сыворотка, сертифицированная, термоинактивированная, США (FFS)GIBCO10082147Обогащение для гемоцитометра DMEM-F12
SIGMA-ALDRICHZ359629Используется для подсчета макрофагов при микроскопии
клеток L-929SIGMA-ALDRICHATCC # CCL-1L-929 представляет собой линию клеток фибробластов мыши, используемых в качестве источника макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF)
Nikon TI затмение NIKON Не применимоNikon TI Eclipse - флуоресцентный и фазово-контрастный микроскоп
Неферментативный раствор для диссоциации клетокCELLSTRIPER (CORNING)25-056-CIРаствор для неэнзиматной диссоциации клеток удаляет макрофаги из пластины, не повреждая их
Необработанные круглые культуральные чашки 100– 20– mm CORNINGCLS430591Не используйте обработанные тканевые культуры чашки Петри или любые планшеты, обработанные культурой
тканей P3199 Пенициллин G Калийная сольUSBIOLOGICAL113-98-4Антибиотики
Раствор пенициллина и стрептомицина (P/S)Используйте 0,26 грамма пенициллина и 0,40 грамма стрептомицина. Смешайте с 40 мл стерильного PBS. Внутри горизонтального шкафа с ламинарным потоком используйте 0,22 & микро; М отфильтровать и хранить аликвоты по 1,0 мл в микрофужных пробирках объемом 1,5 мл в морозильной камере (-20°; C)
Фосфатный буферный физиологический раствор без кальция и магния (PBS)MEDIATECH21-040-CMСтерильный
S7975 Стрептомицина сульфат, 650-850U/мгUSBIOLOGICAL3810-74-0Антибиотики
Серологические пипетки 10 мл или 25 млSARSTEDT861254001Серологические пипетки используются в объемах более 1 мл
Бикарбонат натрияSIGMA-ALDRICH144-55-8Коррекция pH для программного обеспечения DMEM-F12
Nis Elements ViewerNIKONНе применимоNIS-Elements Viewer - это бесплатная автономная программа для просмотра файлов изображений и наборов данных
Стерильный PBS и 2% раствор P/SLABORCRIN590338Добавьте 1 мл P/S в 40 мл стерильного PBS
Прямые ножницы для радужной оболочкиглаза KATENAНе применимоХранить в стерильном стакане, содержащем 70% раствор этанола
Надосадочная жидкость клеток L-929Не применимоL-929 представляет собой линию клеток фибробластов мыши, используемую в качестве источника макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF). Надосадочная жидкость L-929 получена по протоколу
Лезвие хирургического скальпеля No24 Нержавеющая стальSWANN-MORTON311Используется для обнажения эпифиза из костей
Trypan Blue Solution, 0,4%GIBCO15250061Trypan Blue Solution, 0,4%, рутинно используется в качестве окрашивания клеток для оценки жизнеспособности клеток с помощью теста на исключение красителя
Trypsin/EDTA solution 0,05%GIBCO25300-062Используется для диссоциации клеток из бутылочки для культур
Вода для инъекций (WFI) для клеточной культурыGIBCOA12873Стерильная и не содержащая эндотоксинов вода
без РНКазы?

Ссылки

  1. Gomez Perdiguero, E., et al. Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors. Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).
  2. van Furth, R., Cohn, Z. A. The origin and kinetics of mononuclear phagocytes. The Journal of Experimental Medicine. 128 (3), 415-435 (1968).
  3. Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).
  4. Medzhitov, R. Origin and physiological roles of inflammation. Nature. 454 (7203), 428-435 (2008).
  5. Shapouri-Moghaddam, A., et al. Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease. Journal of Cellular Physiology. 233 (9), 6425-6440 (2018).
  6. Davies, J. Q., Gordon, S. Isolation and culture of murine macrophages. Methods in Molecular Biology. 290, 91-103 (2005).
  7. Jin, X., Kruth, H. S. Culture of macrophage colony-stimulating factor differentiated human monocyte-derived macrophages. Journal of Visualized Experiments. (112), e54244(2016).
  8. Gonçalves, R., Mosser, D. M. The isolation and characterization of murine macrophages. Current Protocols in Immunology. 111 (1), 1-16 (2015).
  9. Varol, C., Mildner, A., Jung, S. Macrophages: development and tissue specialization. Annual Review of Immunology. 33, 643-675 (2015).
  10. Andrés, V., Pello, O. M., Silvestre-Roig, C. Macrophage proliferation and apoptosis in atherosclerosis. Current Opinion in Lipidology. 23 (5), 429-438 (2012).
  11. Pineda-Torra, I., Gage, M., de Juan, A., Pello, O. M. Isolation, culture, and polarization of murine bone marrow-derived and peritoneal macrophages. Methods in Molecular Biology. 1339, 101-109 (2015).
  12. Edwards, J. P., Zhang, X., Frauwirth, K. A., Mosser, D. M. Biochemical and functional characterization of three activated macrophage populations. Journal of Leukocyte Biology. 80 (6), 1298-1307 (2006).
  13. Hamczyk, M. R., Villa-Bellosta, R., Andrés, V. In vitro macrophage phagocytosis assay. Methods in Molecular Biology. 1339, 235-246 (2015).
  14. Hosoe, S., et al. Induction of tumoricidal macrophages from bone marrow cells of normal mice or mice bearing a colony-stimulating-factor-producing tumor. Cancer Immunology, Immunotherapy. 28 (2), 116-122 (1989).
  15. Rice, H. M., et al. rM-CSF efficiently replaces L929 in generating mouse and rat bone marrow-derived macrophages for in vitro functional studies of immunity to intracellular bacteria. Journal of Immunological Methods. 477, 112693(2020).
  16. Boltz-Nitulescu, G., et al. Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant. Journal of Leukocyte Biology. 41 (1), 83-91 (1987).
  17. Weischenfeldt, J., Porse, B. Bone marrow-derived macrophages (BMM): isolation and applications. Cold Spring Harbor Protocols. 2008 (12), (2008).
  18. Austin, P. E., Mcculloch, E. A., Till, J. E. Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture. Journal of Cellular Physiology. 77 (2), 121-134 (1971).
  19. Stanley, E. R. Macrophage colony-stimulating factor (CSF-1). Encyclopedia of Immunology. 116 (1983), 1650-1654 (1998).
  20. Bou Ghosn, E. E., et al. Two physically, functionally, and developmentally distinct peritoneal macrophage subsets. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (6), 2568-2573 (2010).
  21. Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488(2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Макрофаги костного мозгаизоляция макрофаговкультура макрофаговмакрофаги мышипредшественники костного мозгадифференцировка клетокпроточная цитометрияанализ фагоцитозамаркер F480маркер CD11B
Выделение и культивирование макрофагов, полученных из костного мозга у мышей
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.