Методы и методы культивирования клеток для предотвращения загрязнения грибами и бактериями в исследовательской лаборатории клеточных культур

Краткое содержание

В этом протоколе представлены основные методы и методы культивирования клеток, которые будут использоваться в исследовательской лаборатории клеточных культур, чтобы избежать заражения грибками и бактериями. В категории бактерий особый акцент будет сделан на предотвращении заражения микоплазмами.

Аннотация

Клеточная культура — это тонкий навык, необходимый для выращивания клеток человека, животных и насекомых или других тканей в контролируемой среде. Цель протокола состоит в том, чтобы подчеркнуть правильные методы, используемые в исследовательской лаборатории для предотвращения загрязнения грибками и бактериями. Особое внимание уделяется предотвращению заражения микоплазмой, что является серьезной проблемой в помещении для культивирования клеток из-за его небольшого размера и устойчивости к большинству антибиотиков, используемых для культивирования клеток. Эти же методы обеспечивают непрерывный рост и поддерживают здоровые клетки. Как для новых, так и для опытных пользователей клеточных культур важно последовательно придерживаться этих передовых методов, чтобы снизить риск заражения. Раз в год лаборатории должны проводить обзор передового опыта в области клеточных культур и при необходимости проводить обсуждение или дополнительное обучение. Заблаговременное принятие мер по предотвращению загрязнения в первую очередь сэкономит время и деньги по сравнению с очисткой после загрязнения. Универсальные передовые методы поддерживают здоровье клеточных культур, тем самым уменьшая необходимость постоянного размораживания новых клеток, покупки дорогостоящих сред для клеточных культур и сокращения количества обеззараживания инкубаторов и времени простоя.

Введение

Клеточная культура имеет множество применений в исследовательской лаборатории. С момента возникновения клеточных культур в начале 20-го века клеточные линии помогли продвинуть науку. Клеточные линии имеют ряд преимуществ; Различные клеточные линии могут помочь исследователям изучать клеточную биологию, производить бакуловирус для дальнейших исследований или производить большое количество белка, представляющего интерес, и это лишь некоторые из^них. Некоторые дополнительные виды использования включают изучение роста тканей, помощь в разработке вакцин, токсикологические исследования, изучение роли генов в здоровых организмах и больных моделях, а та....

Протокол

1. Подготовка

1. Общее
   1. Носите чистый лабораторный халат, предназначенный для ношения только в комнате клеточных культур и ни в каких других частях лаборатории.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Лабораторный халат не обязательно должен быть стерильным.
   2. Наденьте новые перчатки, которые не касались других поверхностей. Убедитесь, что перчатки плотно прилегают. Лучше всего подойдут нитриловые, неопудренные перчатки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Перчатки не обязательно должны быть стерильными.
   3. Чтобы подготовиться к работе, опрыскайте перчатки, рукава лабораторного халата и внутреннюю часть шкафа биологической безопасности 70% EtOH. Рабочую поверхность ....

Результаты

Если не следовать надлежащим методам и практикам культивирования клеток, изложенным в этой статье, в исследовательской лаборатории клеточных культур может произойти заражение грибами и бактериями. На рисунке 2 показаны колбы, содержащие загрязнение как в суспензии, так и в адгезивных культурах.

При несоблюдении асептических методов заражение плесенью может произойти через 2-3 дня. Круглые нечеткие шарики, плавающие в среде, заметны в ячейках суспензии, в то время .......

Обсуждение

В то время как загрязнение является одной из основных проблем при выполнении работы с клеточными культурами, методы и методы, изложенные в этой рукописи, помогут снизить риски. Критические шаги включают в себя ношение чистого лабораторного халата, который используется только в комнате для клеточных культур, использование чистых, неопудренных перчаток, которые часто распыляются 70% EtOH и которые меняются при переключении между клеточными линиями, поощрение каждого человека не делиться бутылками со средой, тщательная очис.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 Media	ATCC	30-2006
Стеклянная колба с перегородкой	Pyrex	09-552-40
Стеклянные пипетки	Fisher	13-678-6B
Пипетка Aid	Drummond	13-681-15A
Серологическая пипетка	Corning	07-200-573
T75 колба	Corning	07-202-004
Трипсин	Gibco	25-300-054
* Элементы могут отличаться, поскольку это видео посвящено общим методам

культивирования клеток