Method Article

Применение интеллектуальной высокопроизводительной системы тестирования чувствительности к противомикробным препаратам/скрининга фагов и индекса устойчивости к противомикробным препаратам Lar

DOI:

10.3791/64785

⸱

July 21st, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding, Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, P.R. China, Key Laboratory of Livestock and Poultry Multi-omics of MARA, 2Department of Genetic and Genomes Biology, University of Leicester, 3College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы познакомим вас с принципом, структурой и инструкцией интеллектуальной высокопроизводительной системы тестирования чувствительности к противомикробным препаратам/скрининга фагов. Его применение проиллюстрировано на примере сальмонеллы , выделенной от домашней птицы в провинции Шаньдун, Китай. Рассчитан индекс Лара и всесторонне рассмотрено его значение в оценке антимикробной резистентности.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для повышения эффективности тестирования на чувствительность к противомикробным препаратам (AST) и высокопроизводительного скрининга фагов на резистентные бактерии, а также для снижения затрат на обнаружение, была разработана интеллектуальная высокопроизводительная система AST/фагового скрининга, включающая 96-точечный матричный инокулятор, преобразователь получения изображений и соответствующее программное обеспечение, в соответствии с критериями AST и точками разрыва резистентности (R), сформулированными Институтом клинических и лабораторных стандартов (CLSI). АСТ и статистические данные о распределении минимальной ингибирующей концентрации (МПК) (от R/8 до 8R) 1500 штаммов сальмонеллы , выделенных от домашней птицы в Шаньдуне, Китай, по сравнению с 10 антимикробными агентами были проведены с помощью интеллектуальной высокопроизводительной системы скрининга АСТ/фагов. Индекс Лара, означающий «меньше антибиотика, меньше резистентности и остаточный до тех пор, пока антибиотика мало», был получен путем вычисления средневзвешенного значения каждого МПК и деления на R. Такой подход повышает точность по сравнению с использованием показателя распространенности резистентности для характеристики степени устойчивости к противомикробным препаратам (УПП) штаммов с высокой устойчивостью. Для штаммов сальмонелл с высоким УПП литические фаги были эффективно отобраны из библиотеки фагов с помощью этой системы, а также рассчитан и проанализирован спектр лизиса. Результаты показали, что интеллектуальная высокопроизводительная система скрининга АСТ/фагов является работоспособной, точной, высокоэффективной, недорогой и простой в обслуживании. В сочетании с Шаньдунской ветеринарной системой мониторинга устойчивости к противомикробным препаратам эта система была пригодна для научных исследований и клинического выявления УПП.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поскольку противомикробные препараты широко используются для профилактики бактериальных инфекционных заболеваний, устойчивость к противомикробным препаратам (УПП) стала глобальной проблемой общественногоздравоохранения1. Борьба с УПП в настоящее время является основной миссией мониторинга УПП эпидемиологических патогенов и синергической терапии чувствительных антимикробных препаратов и литических бактериофагов2.

Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам in vitro (АСТ) является основой для мониторинга терапии и определения уровня УПП. Это важная часть фармакологии противомикробных препаратов и важнейшая основа для клинических препаратов. Институт клинических и лабораторных стандартов (CLSI) Соединенных Штатов Америки и Европейский комитет по тестированию на чувствительность к противомикробным препаратам (EUCAST) сформулировали и пересмотрели международные критерии АСТ, а также постоянно модифицировали и дополняли методы АСТ и контрольные точки для определения МПК одной определенной комбинации «организм-антимикробный агент» как чувствительного (S), резистентного (R) или промежуточного (I)3. 4. См.

В период с 1980-х по 1990-е годы были быстро разработаны и применены в клинической практике автоматические приборы для разведения микробульона, в том числе Alfred 60AST, VITEK System, PHOENIXTM и Cobasbact 5,6,7. Однако эти приборы были дорогими, требовали дорогостоящих расходных материалов, а их диапазоны обнаружения были рассчитаны на клиническое лечение пациентов 5,6,7. По этим причинам они не подходят для ветеринарного клинического обследования и выявления больших количеств высокорезистентных штаммов. В данном исследовании была разработана интеллектуальная высокопроизводительная система скрининга АСТ/фагов, включающая 96-точечный матричный инокулятор (рис. 1), преобразователь получения изображений (рис. 2) и соответствующее программное обеспечение8, для проведения АСТ для партии штаммов бактерий против нескольких антимикробных агентов одновременно методом агарового разведения. Кроме того, система также использовалась для обнаружения и анализа паттернов лизиса фагов против устойчивых к противомикробным препаратам бактерий9, а литические фаги были эффективно отобраны из библиотеки фагов. Эта система оказалась эффективной, доступной и простой в эксплуатации.

figure-introduction-1
Рисунок 1: Структурная схема 96-точечного матричного инокулятора. 1: Штифтовая пластина для прививки; 2: Оператор мобильной связи; 3: Исходный блок; 4: Инкубационная пластина; 5: База; 6: Рукоятка управления; 7: Ограничительный штифт. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.

figure-introduction-2
Рисунок 2: Структурная схема конвертера для получения изображений. 1: Оболочка; 2: Экран дисплея; 3: Помещение для получения изображений; 4: Основание платы детектирования; 5: Доска обнаружения на складе и за его пределами; 6: Пульт управления; 7: Устройство преобразования изображения; 8: Источник света; 9: Сканер изображений. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Штаммы сальмонеллы, использованные в этом исследовании, были получены от домашней птицы в провинции Шаньдун, Китай, после получения одобрения от Комитета по биобезопасности Института животноводства и ветеринарной медицины Шаньдунской академии сельскохозяйственных наук, Китай.

1. Применение интеллектуальной высокопроизводительной системы АСТ8

  1. Подготовка посевного материала
    1. Инкубируют микроорганизм контроля качества Escherichia coli и 93 штамма сальмонеллы для тестирования на АСТ на планшетах из агара Мюллера-Хинтона (MHA) в течение 16-18 ч при 37 °C3.
    2. Приготовьте посевной материал каждого штамма в соответствии со стандартом мутности 0,5 по Мак-Фарланду на основе метода, указанного в стандарте CLSI3, а затем разбавьте в 10 раз.
    3. Поместите 200 мкл стерильного физиологического раствора в горизонтальную 1-ю лунку (А1) 96-луночной планшета в качестве отрицательного контроля, две суспензии микроорганизма контроля качества в горизонтальные 2-ю и3-ю лунки (А2 и А3) в качестве положительного контроля и контроля качества, соответственно. Добавьте 200 мкл разбавленной суспензии посевного материала каждого испытуемого пятна в соответствующие 93 лунки в 96-луночном семенном блоке.
  2. Приготовление антимикробной агаровой пластины
    1. Установите диапазоны концентраций различных антибактериальных средств, тестируемых в соответствии с диапазоном расчета индекса Лара (от 0,125R до 8R). Концентрация колеблется от диапазона контроля качества или 0,0625R (в зависимости от нижнего диапазона) до 8R.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если индекс Лара не рассчитан, диапазон концентраций антибиотиков может быть установлен в соответствии с потребностями АСТ.
    2. Выполняйте схему удвоения log2 для раствора антибиотика, начиная с подходящей концентрации запаса на основе метода разбавления агара, указанного в стандартеCLSI 3.
    3. Стерилизовать стеклянные флаконы объемом 50 мл, содержащие 18 мл агаровой среды Мюллера-Хинтона. Добавьте 2 мл соответствующих разведений противомикробного раствора к 18 мл расплавленной среды, охлажденной до 45-50 °C, тщательно перемешайте и разлейте по тарелкам в шкафу биобезопасности.
    4. Дайте агару застыть при комнатной температуре (RT), оставьте зазор под крышкой инкубированных планшетов и продуйте, чтобы высушить поверхность агара перед инокуляцией.
    5. Маркируйте типы противомикробных агентов и их концентрации на обратной стороне инкубированных планшетов. Расположите несколько инкубационных планшетов каждого противомикробного препарата в стопку в порядке удвоения log2.
    6. Подготовьте две безлекарственные агаровые пластины в качестве контрольных для каждого противомикробного средства.
  3. Этапы инокуляции для 96-точечного матричного инокулятора
    1. Установите булавочную пластину для автоклавного инокуляции на опору 96-точечного матричного инокулятора в шкафу биобезопасности.
    2. Подготовленный семенной блок с испытуемыми штаммами и агаровую инкубационную пластину помещают на подвижный носитель с одинаковым углом позиционирования для двух планшетов.
    3. Сдвиньте передвижной держатель так, чтобы семенной блок находился прямо под пластиной инокуляционного штифта.
    4. Нажмите на рукоятку управления, переместите пластину инокуляционного штифта вниз и направьте штифты 96 на инокуляцию в 96 лунок семенного блока.
    5. Отпустите рукоятку управления с управлением, затем сбросьте пластину штифта прививки под действием пружины.
    6. Нажмите на ручку управления 2-3 раза, чтобы хорошо перемешать каждый посевной материал и окунуть. Надавите и переместите несущую пластину так, чтобы инкубационная пластина находилась прямо под пластиной для прививки.
    7. Нажмите на рукоятку управления, переместите пластину инокуляционного штифта вниз и остановитесь на 1-2 с, чтобы инокуляционные штифты полностью соприкоснулись с поверхностью инкубируемой планшета.
    8. Отпустите рукоятку управления. На этом одна прививка завершена. Замените другую инкубационную чашку и продолжайте цикл до тех пор, пока не закончится одна группа антимикробных агаровых планшетов.
    9. Замените другую инокуляционную контактную пластину и семенной блок и инокуляцию другой группы тестируемых штаммов. Цикл до тех пор, пока все прививки не будут завершены.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Сначала засейте контрольную агаровую пластину (без антимикробного агента), затем планшет в порядке концентрации препарата от низкой до высокой и вторую контрольную агаровую пластину последней, чтобы убедиться в отсутствии загрязнения или переноса антимикробного агента. Объем инокуляции зависит от объема естественного осаждения каждого штифта, составляющего примерно 2 мкл.
  4. Инкубация антимикробных агаровых планшетов
    1. Инкубируют модифицированные антимикробные агаровые пластины при РТ до тех пор, пока влага в пятнах посева не впитается в агар.
    2. Переверните планшеты и инкубируйте их в течение 16-20 ч при 37 °C для испытуемых штаммов, чтобы убедиться, что неингибированные бактерии образуют колонии.
  5. Получение изображений и статистика данных
    1. Дважды щелкните по 96-точечной матричной системе получения изображений AST , чтобы открыть программу.
    2. Нажмите « Тестовая информация » на панели задач. Нажмите « Создать », чтобы создать новое тестовое задание, и заполните информацию в соответствии с подсказками, включая код, название, источник, бактерии, количество штаммов, антибиотиков и градиент.
    3. Нажмите на пункт Data Collection > Photograph > Test , чтобы выбрать новую созданную задачу. Нажмите « Антибиотики », чтобы выбрать название антибиотика, и нажмите « Градиент », чтобы выбрать начальную концентрацию этого антибиотика.
    4. Нажмите « Подключиться», чтобы подключиться к конвертеру для получения изображений.
    5. Поместите соответствующие инкубированные планшеты на основание планшета обнаружения так, чтобы недостающий угол был справа спереди для ориентации, и вставьте их в конвертер для получения изображений.
    6. Нажмите на Коллекцию , чтобы получить изображения. Градиент антибиотика автоматически перейдет к следующему градиенту. Поместите следующую тарелку по очереди и продолжайте нажимать на «Сбор » до тех пор, пока не будут собраны пластины для этого антибиотика.
    7. Нажмите « Антибиотики» и выберите следующий набор инкубационных планшетов. Нажмите на Градиент, чтобы выбрать начальный градиент и перейти к следующему раунду сбора изображений.
    8. После завершения всех коллекций нажмите « Отправить». Программа автоматически распознает количество белых пикселей, отформатированных в каждой точке посева на изображениях, определит, есть ли образование колоний, и преобразует изображения в значения MIC.
    9. Нажмите « Запрос», чтобы получить все результаты МПК штаммов против тестируемых антибиотиков.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Интеллектуальная высокопроизводительная система AST подходит для определения MICs больших партий бактериальных штаммов. Процесс тестирования, включая подготовку, посев, инкубацию и считывание результатов, занимает 3 дня. Типы антибиотиков и диапазоны обнаружения МПК могут быть установлены в соответствии с соответствующими потребностями, а основные расходные материалы могут быть использованы повторно.
  6. Расчет индекса Лара
    1. Точно определите индекс Лара по формуле: , где: figure-protocol-1
      MICi: минимальная ингибирующая концентрация.
      Диапазон распределений МПК от MIC-3 до MIC3 представляет собой последовательные двойные концентрации, центрированные на R: 0,125R, 0,25R, 0,5R, R, 2R, 4R и 8R.
      figure-protocol-2 равен 2i, а диапазон i равен -3 до 3.
      R: точки разрыва резистентности бактерий к антимикробным препаратам, стандартизированные CLSI.
      f: частотное распределение микрофона.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Общий индекс Лара представляет собой среднее арифметическое всех индексов Лара. После вычисления индекса Lar округлите итоговое значение до двух значащих цифр после запятой.

2. Интеллектуальная высокопроизводительная система фагового скрининга9

  1. Подготовка фагового затравочного блока и двухслойных инкубационных планшетов, содержащих бактерии.
    1. Для получения различных фагов используют метод10 двухслойного агара или метод11 жидкого культивирования. Разбавляют до подходящей параллельной концентрации с титром 1 x 104-5 КОЕ/мл и добавляют 200 мкл фагового посевного материала в 96-луночный посевной блок.
    2. Изготовьте двухслойные пластины с бактериями (10 мл нижней агаровой среды [агар 12 г/л] и 6 мл верхней полуагарной среды [6 г/л] со 100 мкл бактерий [0,5 Макфарланда]) для испытания.
    3. Сделайте двухслойную инкубационную пластину для каждого тестируемого штамма. Оставьте зазор под крышкой двухслойной пластины и выдуйте для просушки поверхность агара в шкафу биобезопасности.
  2. Скрининговый тест
    1. Подготовленный фаговый затравочный блок и двухслойную пластину поместить на мобильный носитель 96-точечного матричного инокулятора и перенести весь фаговый посевной материал на поверхность полуагара. Продолжайте циклы до тех пор, пока не будут завершены все тестируемые штаммы.
    2. Оставьте модифицированные двухслойные пластины на RT до тех пор, пока влага в пятнах посева полностью не впитается в полуагар.
    3. Переверните планшеты и инкубируйте в условиях, подходящих для испытуемых штаммов, в течение 4-6 ч, чтобы обеспечить образование четких литических пятен.
  3. Анализ данных
    1. Получение и сохранение изображения экспериментального результата каждой двухслойной пластины с помощью преобразователя получения изображений (шаги 1.5.4-1.5.6).
    2. Запишите количество и морфологию пятен различной формы в электронную таблицу на основе полученных изображений и рассчитайте соответствующие пропорции различных видов фагов.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Следуя протоколу интеллектуальной высокопроизводительной системы АСТ, ее применение было проиллюстрировано на примере сальмонеллы домашней птицы в провинции Шаньдун, Китай.

Рост штаммов сальмонелл на агаровых пластинах с ампициллином (R 32 мкг/мл) в концентрациях от 2 до 256 мкг/мл, определяемых конвертером для получения изображений, показан на рисунке 3. Горизонтальная1-я скважина А1 была отрицательным контролем и не показала роста ко...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метод разбавления агаром хорошо зарекомендовал себя и широко используется. Принцип работы высокопроизводительной системы АСТ был основан на методе разбавления агара. Одним из важнейших шагов в рамках протокола была точная высокопроизводительная передача 96 инокулей за один раз, которая выполнялась несколько раз подряд. Чтобы завершить этот важный шаг, выводы 96-точечного матричного инокулятора были однородными и очень гладкими. Естественное осаждение каждого штифта представляло собой объем около 2 мкл, который агрегирова...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yuqing Liu et al. подали заявки на китайские патенты на 96-точечный матричный инокулятор и преобразователь для получения изображений и их применение (патент No ZL 201610942866.3 и патент No ZL 201910968255.X).

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа выполнена при поддержке Национального проекта по ключевым исследованиям и разработкам (2019YFA0904003); Современная сельскохозяйственная промышленная система в провинции Шаньдун (SDAIT-011-09); Проект по оптимизации платформы международного сотрудничества (CXGC2023G15); Основные инновационные задачи сельскохозяйственной науки и техники, инновационный проект Академии сельскохозяйственных наук, Шаньдун, Китай (CXGC2023G03).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
96 well  культуральная пластинаBeijing lanjieke Technology Co., Ltd11510
96-точечная матричная система получения изображений ASTИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское
96-точечный матричный инокулятор Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукН/ДЗапатентованный продукт
АгарЦиндао высокотехнологичный промышленный парк Haibo Biotechnology Co., LtdHB8274-1
Амикацин Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA857053
АмоксициллинShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA822839
АмпициллинShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA830931
Аналитические весыSartoriusBSA224S
Автоматизированное программное обеспечение для расчета индекса Лара УППИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское право
Бактерии <эм>штаммы сальмонеллы Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукН/ДБактериальная
резистентность животного происхождения Система управления сертификацией индекса Lar V1.0Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское право
CeftiofurShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC873619
ЦипрофлоксацинShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC824343
клавулановая кислотаShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC824181
Чистый рабочий столСучжоу Очистное оборудование Co., LtdSW-CJ-2D Колистин
сульфатShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC805491
Культурная плитаИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукН/ДЗапатентованный продукт
ДоксициклинShanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd
ЭнрофлоксацинShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdE809130
фильтр 0,22 μ mMilliporeSLGP033RB
FlorfenicolShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdF809685
GentamicinShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdG810322
Стеклянная бутылка 50 млXuzhou Qianxing Glass Technology Co., LtdQX-7
Высокопроизводительная система обнаружения сопротивления V1.0Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское право
Конвертер получения изображенийИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукН/ДЗапатентованный продукт
MeropenemShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdM861173
агарМюллера-ХинтонаВысокотехнологичный промышленный парк Циндао Haibo Biotechnology Co., LtdHB6232
Чашка Петри 60 мм x 15 ммQingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd16021-1
Чашка Петри 90 мм x 15 ммQingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd16001-1
Salmonella phagesИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукН/Д
Шейкеринкубатор Shanghai Minquan Instrument Co., LtdMQD-S2R
ShanghaiXingBai Biotechnology Co., LtdF-TC2015
Библиотечная система базового типа Varms V1.0Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское
Вертикальный пар высокого давления высокого давления стерилизаторШанхайский завод медицинских инструментов ШэньаньLDZX-75L
Система управления тестированием устойчивости ветеринарных патогеновИнститут зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторское
Облачный мониторинг ветеринарной резистентности и платформа контроля фагов V1.0Институт зоотехнии и ветеринарной медицины, Шаньдунская академия сельскохозяйственных наукАвторские права
программное обеспечениена собственное программное обеспечениена программное обеспечениеD832390на собственное программное обеспечение Турбидиметр право на собственное программное обеспечениепрограммное обеспечение на собственное программное обеспечение

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ramanan, L., et al. Antimicrobial resistance-the need for global solutions. The Lancet Infectious Diseases. 13 (12), 1057-1098 (2013).
  2. Xiaonan, Z., Qing, Z., Thomas, S. P., Yuqing, L., Martha, R. J. C. inPhocus: Perspectives of the application of bacteriophages in poultry and aquaculture industries based on Varms in China. PHAGE: Therapy, Applications, and Research. 2 (2), 69-74 (2021).
  3. CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests. CLSI document M100. , M100 32nd edition, Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA . (2022).
  4. Yuqing, L., et al. Antimicrobial Sensitivity Testing Standard of EUCAST. , China Standards Press, Beijing. (2017).
  5. Barnini, S., et al. A new rapid method for direct antimicrobial susceptibility testing of bacteria from positive blood cultures. BMC Microbiology. 16 (1), 185-192 (2016).
  6. Höring, S., Massarani, A. S., Löffler, B., Rödel, J. Rapid antimicrobial susceptibility testing in blood culture diagnostics performed by direct inoculation using the VITEK®-2 and BD PhoenixTM platforms. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 38 (3), 471-478 (2019).
  7. Dupuis, G. Evaluation of the Cobasbact automated antimicrobial susceptibility testing system. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 4 (2), 119-122 (1985).
  8. A system of bacterial antimicrobial resistance detection and its operation method. China Patent. , ZL 201610942866.3 (2019).
  9. A high throughput test plate for screening bacteriophage of zoonotic pathogens and its application. China Patent. , ZL 201910968255.X (2022).
  10. Adams, M. H. Bacteriophages. , Interscience Publishers, New York. (1959).
  11. Nair, A., Ghugare, G. S., Khairnar, K. An appraisal of bacteriophage isolation techniques from environment. Microbial Ecology. 83 (3), 519-535 (2022).
  12. Shandong veterinary antibiotic resistance system. , http://www.varms.cn (2023).
  13. Ming, H., et al. Comparison of the results of 96-dot agar dilution method and broth microdilution method. Chinese Journal of Antibiotics. 43 (6), 729-733 (2018).
  14. Laxminarayan, R., Klugman, K. P. Communicating trends in resistance using a drug resistance index. BMJ Open. 1 (2), e000135(2011).
  15. Chen, Y., et al. Assessing antibiotic therapy effectiveness against the major bacterial pathogens in a hospital using an integrated index. Future Microbiology. 12, 853-866 (2017).
  16. Ciccolini, M., Spoorenberg, V., Geerlings, S. E., Prins, J. M., Grundmann, H. Using an index-based approach to assess the population-level appropriateness of empirical antibiotic therapy. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (1), 286-293 (2015).
  17. Yanbo, L., et al. Preliminary application of inoculation system for high-throughput drug susceptibility test. China Poultry. 42 (6), 52-57 (2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Antimicrobial Sensitivity TestingPhage ScreeningHigh Throughput SystemLar IndexAntimicrobial ResistanceMinimum Inhibitory ConcentrationSalmonella Strains96 Dot MatrixImage AcquisitionDouble Layer Agar

Related Articles