Прогнозирование сетевой фармакологии и экспериментальная проверка механизма действия Trichosanthes-Fritillaria thunbergii против аденокарциномы легкого

Рак легких относится к злокачественным опухолям, происходящим из слизистой оболочки бронхов легких, включая плоскоклеточный рак, аденокарциному, крупноклеточный рак и мелкоклеточный рак¹. Аденокарцинома легкого (LUAD) является наиболее распространенным типом рака легких, на который приходится около 40% от общего числа случаев рака легких². Большинство пациентов диагностируются на поздней стадии или имеют отдаленные метастазы и, таким образом, теряют возможность хирургического вмешательства³. В современном клиническом лечении одновременная химиолучевая терапия является наиболее распространенной стратегией лечения ЛУАД, но ее применение ограничено из-за серьезных побочных реакций⁴.

Традиционная китайская медицина (ТКМ) может эффективно облегчить клинические симптомы пациентов с LUAD и уменьшить побочные реакции, вызванные лучевой терапией и химиотерапией, и, таким образом, стала горячей точкой исследований ^5,6,7. В традиционной китайской медицине рак легких относится к категории «скопление легких» и «легочный камень». Дефицит Ци и взаимодействие мокроты, застоя и яда имеют важное значение в патогенезе рака легких. Таким образом, тонизирование Ци и устранение мокроты и застоя крови являются основными методами клинического лечения^{рака легких 8} согласно теории ТКМ⁹. Trichosanthes kirilowii Maxim (Gualou) и Fritillaria thunbergii Miq (Zhebeimu) представляют собой распространенную пару лекарств при лечении рака легких, и эта комбинация обладает эффектами очищения тепла и уменьшения мокроты^10,11,12. Однако механизм его действия до сих пор неясен, и необходимо провести дальнейшие исследования.

Сетевая фармакология — это комплексный метод, основанный на теории системной биологии и разнонаправленной фармакологии, целью которого является выявление сложных сетевых взаимосвязей между несколькими лекарствами и заболеваниями¹³. Традиционные китайские рецепты обладают характеристиками многокомпонентности и многонаправленности, что означает, что они очень подходят для изучения сетевой фармакологии^14,15. В последнее время сетевая фармакология стала мощным подходом к изучению формул ТКМ и стала горячей точкой исследований^16,17.

Однако, насколько нам известно, все исследования по сетевой фармакологии представлены в виде текста. Представление этой технологии с помощью видео значительно снизит порог обучения и облегчит продвижение этой технологии, что является одним из преимуществ этой статьи. В этом исследовании мы взяли Trichosanthes-Fritillaria thunbergii против аденокарциномы легкого в качестве примера для прогнозирования сетевой фармакологии и экспериментальной проверки.

Все процедуры сетевой фармакологии проводились в соответствии с Руководством по методам оценки сетевой фармакологии¹⁸. Все экспериментальные процедуры были выполнены в соответствии с правилами управления лабораторией Пекинского университета китайской медицины.

1. Сетевое фармакологическое предсказание

1. Подбор активных компонентов
   1. Откройте базу данных HERB (http://herb.ac.cn)¹⁹ и используйте «Gualou» (китайское название Trichosanthes kirilowii Maxim) и «Zhebeimu» (китайское название Bulbus Fritillariae thunbergii) в качестве ключевых слов для получения компонентов двух препаратов. Загрузите список и канонические структуры SMILES родственных компонентов двух препаратов.
   2. Определите, является ли полученный компонент активным.
      1. Включите в качестве активных компонентов те, которые имеют пероральные значения биодоступности (OB) и лекарственные (DL) значения в базе данных группы HERB (т.е. компоненты с OB ≥ 30% и DL ≥ 0,18)^20,21.
      2. Если компонент не имеет значений OB и DL, введите компонент в швейцарскую базу данных ADME (http://www.swissadme.ch/index.php)²², чтобы получить сведения о каждом компоненте. Включите компоненты с «высоким» поглощением ГИ и по крайней мере двумя значениями DL «Да» в качестве активных компонентов.
2. Целевое прогнозирование активных компонентов
   1. Откройте базу данных HERB (http://herb.ac.cn). Поиск и копирование канонических структур активных компонентов SMILES.
   2. Откройте базу данных SEA (Similarity ensemble approach, http://sea.bkslab.org)²³. Вставьте канонические структуры SMILES активных компонентов в поле поиска и нажмите « Попробовать SEA », чтобы получить целевой ключ, целевое имя, P-значение и MaxTC каждого активного компонента.
   3. Скопируйте данные в электронную таблицу и используйте функцию фильтрации файла электронной таблицы, чтобы отфильтровать целевые объекты активных компонентов по целевому ключу (Human, P < 0.05 и MaxTC > 0.5).
   4. Скопируйте все мишени в электронную таблицу и удалите дубликаты, чтобы получить мишени для лекарств.
3. Прогнозирование мишеней для болезней
   1. Откройте базу данных GeneCards (https://www.genecards.org)²⁴ и онлайн-базу данных Mendelian Inheritance in Man (OMIM, https://www.omim.org)²⁵ и используйте аденокарциному легкого в качестве ключевого слова для получения мишеней аденокарциномы легкого.
   2. Загрузите электронные таблицы с целевыми показателями заболевания. Удалите повторяющиеся цели, чтобы получить цели LUAD.
4. Создание целевой сети по лекарственным компонентам и болезням
   1. Скопируйте мишени, связанные с LUAD, и мишени для лекарств в один и тот же столбец в новой электронной таблице. Используйте функцию «Данные - Идентификация дубликатов» на панели инструментов для получения целевых объектов, связанных с LUAD, и целевых объектов, связанных с активными компонентами Trichosanthes-Fritillaria thunbergii .
   2. Откройте Cytoscape 3.8.0. Нажмите « Файл » в строке меню, а затем выберите «Импортировать > сеть из файла », чтобы импортировать файл электронной таблицы. Оптимизируйте размер и цвет узлов сети с помощью панели стилей в левой панели управления.
   3. Используйте функцию «Анализ сети» для анализа топологии сети. Нажмите « Инструменты » в строке меню, а затем выберите «Анализировать сеть». На панели « Таблица » нажмите « Степень » в строке заголовка, чтобы упорядочить компоненты по градусам в порядке убывания. Возьмите десять основных компонентов и целей в качестве основных активных компонентов и основных целей.
5. Построение сети ИПП и скрининг основных белков
   1. Откройте базу данных STRING (https://cn.string-db.org/)²⁶. Вставьте текстовый список потенциальных мишеней Trichosanthes-Fritillaria thunbergii против LUAD в диалоговое окно «Список имен ». Выберите Homo sapiens в разделе « Организмы» и нажмите кнопки « ПОИСК» > «ПРОДОЛЖИТЬ ».
   2. Когда результаты будут доступны, нажмите « Настройки» и отметьте « Высокая достоверность» (0,700) в разделе «Основные настройки» > «Минимальная требуемая оценка взаимодействия». Поставьте галочку напротив пункта « Скрыть отключенные узлы в сети» в разделе «Дополнительные настройки», а затем нажмите кнопку «ОБНОВИТЬ ».
   3. Нажмите « Экспорт » в строке заголовка и загрузите короткий табличный текст отношения PPI в формате TSV.
   4. Откройте Cytoscape 3.8.0. Нажмите « Файл» > «Импортировать > сеть из файла », чтобы импортировать файл формата TSV для визуального анализа.
   5. Используйте функцию Network Analyzer для проведения топологического анализа. Оптимизируйте размер и цвет узлов сети с помощью панели стилей в левой панели управления.
6. Анализ обогащения KEGG
   1. Откройте платформу Metascape (https://metascape.org/)²⁷ . Вставьте текстовый список потенциальных терапевтических целей в диалоговое окно, а затем нажмите кнопку «Отправить ». Отметьте H. sapiens в обоих параметрах « Ввод как виды » и « Анализ как виды», а затем нажмите кнопку «Пользовательский анализ ». Выберите «Обогащение», отметьте только путь KEGG, а затем нажмите « Анализ обогащения». После того, как индикатор выполнения достигнет 100%, нажмите оранжевую кнопку на странице отчета об анализе , чтобы увидеть результаты обогащения.
   2. Нажмите « Все в одном ZIP-файле », чтобы загрузить результат обогащения, а затем откройте файл _ FINAL_GO.csv в папке Enrichment_GO , чтобы получить результат.
   3. Откройте программное обеспечение R (https://cran.r-project.org/). Введите install.package ("ggplot2") и library (ggplot2) в R для установки пакета ggplot2 R. Нажмите Enter , чтобы запустить программу визуализации KEGG.

2. Экспериментальная проверка

1. Приготовление препарата
   ПРИМЕЧАНИЕ: Fritillaria thunbergii Miq и Trichosanthes kirilowii Maxim были приобретены в больнице Дунчжимэнь, связанной с Пекинским университетом китайской медицины.
   1. Смешайте 50 г Fritillaria thunbergii Miq и 50 г Trichosanthes kirilowii Maxim. Замочите смесь в 1 л дистиллированной воды на 20 мин, а затем отварите смесь при 100 °C при нормальном давлении в течение 1 ч.
   2. Отвар отфильтровать для получения фильтрата двойным слоем стерильной медицинской марли, а затем использовать фильтровальную бумагу 80 мкм для дальнейшей фильтрации экстракта. Повторите вышеописанную операцию три раза.
   3. Смешайте фильтрат вместе, чтобы получить примерно 1,2 л отвара. Поместите раствор в колбу роторного испарителя. Установите скорость вращения 50 об/мин при температуре 37 °C. Смешайте и конденсируйте отвары в экстракт во роторном испарителе в течение 6 часов, чтобы получить вязкую жидкость.
   4. Включите вакуумный механизм сублимационной сушки, чтобы предварительно охладить температуру до −40 °C. Перелейте полученный экстракт в лоток для материала и поместите его в холодную ловушку для замораживания.
   5. Когда температура холодной ловушки достигнет -50 °C и материал будет заморожен в течение 2 часов, перенесите замороженные материалы на сушильную стойку, помещенную в холодную ловушку. Включите вакуумный насос, чтобы начать процесс лиофилизации. Выньте лиофилизированный порошок и храните его в холодильнике при температуре -20 ° C для последующего использования.
2. Культивирование клеток
   1. Сконфигурируйте полную среду DMEM с 89% основной средой DMEM, 10% эмбриональной бычьей сывороткой и 1% пенициллином-стрептомицином.
   2. После извлечения клеток А549 из жидкого азота инкубируйте клетки на водяной бане с температурой 37 °C и перемешивайте до тех пор, пока среда во флаконе не растает.
   3. Добавьте четырехкратный объем полной среды DMEM в расплавленные ячейки. Центрифугируйте клетки (4 °C, 679 x g, 5 мин) и выбросьте надосадочную жидкость.
   4. Ресуспендируют осажденные клетки 6 мл полной среды DMEM, помещают их в колбу для культивирования T25 и инкубируют колбу в клеточном инкубаторе при 37 ° C, 5% CO₂.
3. Определение жизнеспособности клеток
   1. Переваривают логарифмические клетки A549 фазы роста с 1 мл 0,25% трипсина в течение 1 мин при 37 ° C. Добавьте 1 мл полной среды DMEM, чтобы нейтрализовать трипсин, и осторожно продуйте его, чтобы способствовать слищению клеток. Центрифугируют смесь для получения клеточной гранулы (4 °C, 192 x g, 5 мин). Ресуспендируют полученные клетки с помощью полной среды DMEM.
   2. Добавьте клеточную суспензию в гемоцитометр и подсчитайте с помощью автоматического счетчика клеток. Разбавьте его до 5 x 10⁴ клеток/мл, используя полную среду DMEM.
   3. Растворите 1 г водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii в 10 мл раствора PBS и профильтруйте-стерилизуйте его через фильтр 0,22 мкм. Разбавьте смесь до 90 мг/мл, 80 мг/мл, 70 мг/мл, 60 мг/мл, 50 мг/мл, 40 мг/мл, 30 мг/мл, 20 мг/мл и 10 мг/мл с использованием PBS.
   4. Наложите разбавленные ячейки на 96-луночные планшеты по 100 мкл на лунку. После адгезии клеток добавьте 1 мкл водных экстрактов Trichosanthes-Fritillaria thunbergii различных концентраций, чтобы отрегулировать концентрацию каждой лунки до 900 мкг/мл, 800 мкг/мл, 700 мкг/мл, 600 мкг/мл, 500 мкг/мл, 400 мкг/мл, 300 мкг/мл, 200 мкг/мл и 100 мкг/мл.
   5. Исходную среду отбрасывают через 24 ч культивирования и добавляют 100 мкл основной среды DMEM для дальнейшей инкубации в течение 2 ч при 37 °C, 5% CO₂.
   6. После вышеуказанной обработки добавляют 20 мкл раствора МТС (таблица материалов) и инкубируют клетки еще 1 ч при 37 ° C, 5% CO₂.
   7. Переложите инкубированную смесь на другую тарелку. Измерьте коэффициент поглощения (OD) на длине волны 490 нм с помощью считывателя микропланшетов. Рассчитайте жизнеспособность клеток по следующей формуле:
      Жизнеспособность (%) = 100 × (OD обработанного образца − OD среды)/(OD контрольного образца − OD среды).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Минимальная концентрация, близкая к IC50, определяется как высокая доза. Концентрация, при которой начинает ингибироваться клеточная пролиферация, определяется как концентрация низкой дозы, а промежуточное значение определяется как концентрация средней дозы для последующих экспериментальных исследований. В этом исследовании 400 мкг / мл, 600 мкг / мл и 800 мкг / мл использовались в качестве низкой, средней и высокой доз.
4. Медикаментозное вмешательство и сбор образцов
   ПРИМЕЧАНИЕ: Рост клеток был построен в зависимости от времени, чтобы определить логарифмическую фазу.
   1. Разбавьте логарифмические клетки фазы роста A549 до 5 x 10,5 клеток/мл. Добавьте 2 мл клеточной суспензии в 6-луночную пластину и выращивайте в течение 12 часов.
   2. Повторите шаг 2.3.3 для получения 80 мг / мл, 60 мг / мл и 40 мг / мл PBS разведения водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii. Добавьте 20 мкл раствора PBS, 20 мкл 40 мг/мл водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii, 20 мкл 60 мг/мл водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii и 20 мкл 80 мг/мл водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii 80 мг/мл в пустую контрольную группу, группу с низкой концентрацией, группу со средней концентрацией и группу с высокой концентрацией, соответственно. Откажитесь от надосадочной жидкости через 24 часа после вмешательства и трижды очистите клетки с помощью PBS.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрации пустой контрольной группы, группы с низкой концентрацией, группы со средней концентрацией и группы с высокой концентрацией водного экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii составляли 0 мкг / мл, 400 мкг / мл, 600 мкг / мл и 800 мкг / мл соответственно.
   3. Добавьте 250 мкл буфера RIPA (содержащего 1% PMSF и 1% ингибитора фосфатазы) в каждую лунку и лизируйте клетки в течение 30 мин. Соберите лизат для центрифугирования (4 °C, 6,714 x g, 10 мин) и получите надосадочную жидкость.
5. Вестерн-блоттинг
   1. Определите концентрацию белка в образцах методом BCA в соответствии с инструкциями производителя. Используйте буфер RIPA для регулировки концентрации каждого образца в соответствии с требованиями.
   2. Смешайте 40 мкл образца белка с 10 мкл 5-кратного загрузочного буфера и кипятите в течение 5 мин при 100 °C. Центрифугу (4 °С, 6,714 х г, 10 мин) смесь для получения надосадочной жидкости для последующих экспериментов.
   3. Изолируют белки с помощью гель-электрофореза с использованием вертикального электрофореза 120 В.
   4. Приготовьте электрический «сэндвич» (губка – фильтровальная бумага – гель – мембрана ПВДФ – фильтровальная бумага – губка). Замочите передаточный аппарат на ледяной бане и перенесите белок на мембраны PVDF при 70 В в течение 60 мин.
   5. Используйте 100 мл раствора TBST (0,05% [v/v] Tween-20, 10 мМ Tris, 150 мМ NaCl, pH 7,5) и 5 г сухого обезжиренного молока для формирования 5% молока. Предварительно разбавьте антитела AKT и p-AKT разбавителем антител в соотношении 1:1000.
   6. Заблокируйте мембрану PVDF в 5% сухом обезжиренном молоке на 1 ч при встряхивании. После блокировки выбросьте блокирующее молоко и добавьте разбавленное первичное антитело для ночной инкубации при 4 ° C.
   7. После удаления первичного антитела используйте раствор TBST для промывания мембраны PVDF пять раз по 5 минут каждый.
   8. Предварительно разбавьте вторичное антитело разбавителем антител в соотношении 1:5000. Добавьте вторичное антитело и инкубируйте при комнатной температуре (RT) в течение 1,5 часа. После удаления вторичного антитела используйте раствор TBST для промывки мембраны PVDF пять раз в течение 5 минут каждый.
   9. Обнаружение белка с помощью системы обнаружения хемилюминесценции.

3. Молекулярный докинг

1. Откройте базу данных UniProt (https://www.uniprot.org)²⁸. Введите целевые символы в поле поиска и нажмите кнопку ПОИСК . В подзаголовке « Структура » нажмите « Загрузить », чтобы увидеть 3D-структуры белковых мишеней.
2. Откройте базу данных RCSB PDB (https://www.rcsb.org/pdb/home/sitemap.do)²⁹. Введите название макромолекулы белка в поле поиска. Загрузите структуры белковых макромолекул в формате PDB.
3. Загрузите установочный пакет программного обеспечения UCSF Chimera 1.16 (https://vina.scripps.edu/) и AutoDock Vina (https://vina.scripps.edu/). Установите и откройте программное обеспечение UCSF Chimera 1.16. Нажмите «Файл» > «Открыть », чтобы отобразить рецепторный белок.
4. Нажмите «Инструменты» > «Редактирование структуры» > «Подготовка к доке» и установите флажок «Удалить растворитель», «Добавить водород» и «Добавить заряды» во всплывающем окне, чтобы удалить воду и добавить заряды гидрирования и баланса. Нажмите «Записать файл Mol2», чтобы сохранить рецепторный белок в формате mol2. Проделайте тот же шаг на лиганде.
5. Нажмите «Файл», > «Открыть», чтобы отобразить лиганд формата mol2 в программном обеспечении UCSF Chimera 1.16. В разделе «Инструменты > анализа поверхности/связывания» > AutoDock Vina задайте для полосы рецептора имя белка рецептора, а для полосы «Лиганд» — имя лиганда. Введите значение в поле за «Центр » и « Размер », чтобы отрегулировать вновь разработанное пространство, что позволит полностью охватить лиганд и рецептор.
6. Нажмите OK для виртуального скрининга молекулярного докинга, чтобы получить оптимальное место для связывания лиганда с рецептором. Запишите значение энергии связи в оптимальном положении.

4. Статистический анализ

1. Откройте статистическое программное обеспечение SPSS 26.0. Нажмите « Файл» > «Импортировать данные » для загрузки данных.
2. Представьте экспериментальные данные в виде среднего ± стандартного отклонения.
3. Сравните несколько групп с помощью одностороннего ANOVA.
   ПРИМЕЧАНИЕ: P < 0,05 считался статистически значимым в этой работе.

В общей сложности был идентифицирован 31 активный компонент, связанный с Trichosanthes-Fritillaria thunbergii, в том числе 21 компонент Trichosanthes и 10 компонентов Fritillaria thunbergia, а также 144 соответствующие мишени. В целом, 9 049 и 67 генов, связанных с LUAD, были извлечены из базы данных GeneCards и базы данных OMIM соответственно. После удаления дублированных генов было идентифицировано 9 057 генов, связанных с LUAD. Для получения потенциальных терапевтических мишеней было проведено пересечение генов, связанных с LUAD, и мишеней, связанных с активным компонентом Trichosanthes-Fritillaria thunbergii. На рисунке 1А показана сеть взаимодействия лекарственного компонента-заболевания-мишени Trichosanthes-Fritillaria thunbergii против LUAD. В сети взаимодействия в первую десятку активных компонентов входили кемпферол, гидроксигенкванин, генистеин, диосметин и β-ситостерин, пальмитолеиновая кислота, манденол, гексадекановая кислота, карпроевая кислота и каприновая кислота, которые были идентифицированы как ключевые активные компоненты действия Trichosanthes-Fritillaria thunbergii при лечении LUAD (рис. 1B). Сеть ИПП включала 122 функциональных белка и 210 взаимосвязей, а результаты визуализации показаны на рисунке 2А. В первую десятку основных белков по степени (параметр, используемый для анализа визуализации в программном обеспечении Cytoscape) в порядке убывания вошли ESR1, VEGFA, PPARA, CYP3A4, AR, APP, FGF2, CREB1 и CYP1A1, которые в основном участвуют в неоваскуляризации, пролиферации клеток, апоптозе и транспорте клеточных мембран 30,31,32,33,34,35,36,37,38,39 (рис. 2В). Из 20 лучших путей, ранжированных KEGG, сигнальный путь PI3K/AKT 40, сигнальный путьRap1 41, сигнальный путь фосфолипазы D42 и сигнальный путь MAPK143 тесно связаны с раком легких, среди которых путь PI3K/AKT занял первое место и, таким образом, был использован для последующей верификации (рис. 3).

Эксперименты показали, что экстракты Trichosanthes-Fritillaria thunbergii в концентрациях более 400 мкг/мл могут ингибировать пролиферацию клеток, а ингибирующий эффект на клетки A549 в концентрациях до 800 мкг/мл был близок к полуингибирующей концентрации (IC50) (рис. 4). Таким образом, 400 мкг/мл, 600 мкг/мл и 800 мкг/мл использовались в качестве низкой, средней и высокой доз для последующих экспериментов. Вмешательство экстрактов Trichosanthes-Fritillaria thunbergii не вызывало существенных изменений экспрессии белка AKT в каждой группе; однако экспрессия p-AKT (Ser473) была ингибирована и проявляла дозозависимый эффект (рис. 5). Ключевые компоненты Trichosanthes-Fritillaria thunbergii при лечении LUAD были молекулярно состыкованы с ключевыми белками пути PI3K/AKT, и результаты показали, что энергии связывания диосметина и кемпферола с AKT1 были менее -7, что указывает на сильную связывающую активность44 (рис. 6).

Рисунок 1: Диаграмма сети «лекарственный компонент-болезнь-мишень». (A) Синий цвет обозначает болезнь; желтый цвет обозначает наркотик; Красным цветом обозначен компонент; Зеленым цветом обозначена цель. Сокращения: GL = Trichosanthes; ZBM = Fritillaria thunbergia; LUAD = аденокарцинома легкого. (B) Десять основных активных ингредиентов в сети, упорядоченных по степеням в порядке убывания. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 2: Сеть ИПП Trichosanthes-Fritillaria thunbergii при лечении LUAD. (А) Результаты визуализации сети ИЦП. Чем темнее узел, тем более центральным является белок в сети. (B) Десять основных целей в сети в разбивке по степеням. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 3: Обогащение путем KEGG мишеней Trichosanthes-Fritillaria thunbergii против LUAD. (A) 20 лучших путей KEGG ранжированы в соответствии с P-значениями в порядке возрастания. (B) Карта сигнального пути PI3K/AKT. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 4: Влияние различных концентраций экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii на пролиферацию клеток A549 (n = 3). Экстракты Trichosanthes-Fritillaria thunbergii в концентрациях более 400 мкг/мл могут ингибировать пролиферацию клеток. Ингибирующее действие на клетки А549 в концентрациях до 800 мкг/мл было близко к полуингибирующей концентрации (IC50). Аббревиатура: GL-ZBM = Trichosanthes-Fritillaria thunbergii. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 5: Влияние различных концентраций экстракта Trichosanthes-Fritillaria thunbergii на экспрессию белка AKT и уровни фосфорилирования (n = 3). Не было существенных изменений в экспрессии белка AKT в каждой группе, в то время как экспрессия белка p-AKT (Ser473) в группах со средней и высокой дозами была значительно снижена, и разница была статистически значимой по сравнению с контрольной группой (*P < 0,05 по сравнению с контрольной группой). Аббревиатура: GL-ZBM = Trichosanthes-Fritillaria thunbergii. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 6: Молекулярная стыковка родственных компонентов с основными белками. (A) Тепловая карта энергии связывания ключевых компонентов Trichosanthes-Fritillaria thunbergii для лечения LUAD, молекулярно состыкованных с ключевыми белками пути PI3K/AKT. (B) Молекулярная диаграмма стыковки белков диосметина и AKT1. (C) Молекулярная диаграмма стыковки белков кемпферола и AKT1. Розовые линии представляют водородные связи, серые структуры представляют лекарственные композиции, а цветная структура представляет AKT1. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

У авторов нет конфликтов интересов, о которых можно было бы заявить.