Эффективная васкуляризация органоидов почек путем интраселомной трансплантации куриным эмбрионам

Marije Koning; Ellen Lievers; Thierry Jaffredo; Cathelijne W. van den Berg; Ton J. Rabelink

doi:10.3791/65090

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Эффективная васкуляризация органоидов почек путем интраселомной трансплантации куриным эмбрионам

2.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65090

⸱

17 февраля 2023 г.

Marije Koning¹^,² , Ellen Lievers¹^,² , Thierry Jaffredo³ , Cathelijne W. van den Berg¹^,²^,⁴ , Ton J. Rabelink¹^,²^,⁴

¹Department of Internal Medicine - Nephrology, Leiden University Medical Center, ²Einthoven Laboratory of Vascular and Regenerative Medicine, Leiden University Medical Center, ³IBPS, CNRS UMR7622, Developmental Biology Laboratory, Sorbonne Université, ⁴The Novo Nordisk Foundation Center for Stem Cell Medicine (reNEW), Leiden University Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем подробный протокол трансплантации органоидов почек в поломическую полость куриных эмбрионов. Этот метод индуцирует васкуляризацию и ускоренное созревание органоидов в течение 8 дней и может быть использован для эффективного изучения этих процессов.

Аннотация

Органоиды почек, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, содержат нефроноподобные структуры, которые в определенной степени напоминают таковые во взрослой почке. К сожалению, их клиническая применимость затруднена отсутствием функциональной сосудистой сети и, следовательно, ограниченным созреванием in vitro. Трансплантация органоидов почек в хеломическую полость куриных эмбрионов индуцирует васкуляризацию перфузированными кровеносными сосудами, в том числе образование клубочковых капилляров, и усиливает их созревание. Этот метод очень эффективен, позволяя проводить трансплантацию и анализ большого количества органоидов. В этой статье описывается подробный протокол интрацеломической трансплантации органоидов почек у куриных эмбрионов с последующей инъекцией флуоресцентно меченного лектина для окрашивания перфузированной сосудистой сети и сбора трансплантированных органоидов для анализа изображений. Этот метод может быть использован для индукции и изучения васкуляризации и созревания органоидов, чтобы найти ключи к усилению этих процессов in vitro и улучшить моделирование заболеваний.

Введение

Было показано, что индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека (hiPSC), полученные из органоидов почек, обладают потенциалом для исследований развития 1,2,3,4, скрининга токсичности ^5,6 и моделирования заболеваний^{5,7,8,9,10,11,12,13}