Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Перевязка левого предсердия у эмбриона птицы как модель измененной гемодинамической нагрузки при раннем развитии сосудов

2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65330

⸱

16 июня 2023 г.

 ,  ,  , 
1Department of Biomedical Sciences and Engineering, Koc University, 2Department of Mechanical Engineering, Koc University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем подробный визуальный протокол выполнения модели перевязки левого предсердия (LAL) у эмбриона птицы. Модель LAL изменяет внутрисердечный поток, который изменяет напряженную нагрузку при сдвиге стенки, имитируя синдром гипоплазии левых отделов сердца. Представлен подход к преодолению трудностей, связанных с этой сложной моделью микрохирургии.

Аннотация

Благодаря своей четырехкамерной конфигурации зрелого желудочка, простоте культивирования, доступу к визуализации и эффективности, птичий эмбрион является предпочтительной моделью позвоночных животных для изучения сердечно-сосудистого развития. В исследованиях, направленных на понимание нормального развития и прогноза врожденных пороков сердца, широко используется эта модель. Микроскопические хирургические методы используются для изменения нормальной механической нагрузки в определенный момент времени эмбриона и отслеживания нисходящего молекулярно-генетического каскада. Наиболее распространенными механическими вмешательствами являются перевязка левой вителлиновой вены, конотранкальное бандажирование и перевязка левого предсердия (LAL), модулирующая внутрисосудистое давление и напряжение сдвига стенки из-за кровотока. LAL, особенно если она выполняется в яйцеклетке, является наиболее сложным вмешательством, с очень малым выходом образцов из-за чрезвычайно тонких последовательных микрохирургических операций. Несмотря на высокий риск, in ovo LAL очень ценен с научной точки зрения, поскольку имитирует патогенез синдрома гипоплазии левых отделов сердца (СГЛО). СГЛОС является клинически значимым сложным врожденным пороком сердца, наблюдаемым у новорожденных. Подробный протокол для in ovo LAL описан в этой статье. Вкратце, оплодотворенные эмбрионы птиц инкубировали при температуре 37,5 °C и постоянной влажности 60%, как правило, до тех пор, пока они не достигали стадий Гамбурга-Гамильтона (HH) со 20 по 21. Скорлупа яиц была вскрыта, а внешняя и внутренняя оболочки удалены. Эмбрион осторожно поворачивали, чтобы обнажить луковицу левого предсердия общего предсердия. Предварительно собранные микроузлы из нейлоновых нитей 10-0 аккуратно располагались и завязывались вокруг почки левого предсердия. Наконец, эмбрион был возвращен в исходное положение, и LAL была завершена. Нормальный желудочек и желудочки с LAL-инструментами продемонстрировали статистически значимые различия в уплотнении тканей. Эффективная генерация моделей LAL будет способствовать исследованиям, посвященным синхронизированным механическим и генетическим манипуляциям во время эмбрионального развития сердечно-сосудистых компонентов. Кроме того, эта модель обеспечит возмущенный клеточный источник для исследований тканевых культур и сосудистой биологии.

Введение

Врожденные пороки сердца (ВПС) – это структурные нарушения, возникающие из-за аномального эмбрионального развития1. Помимо генетических условий, на патогенез влияет измененная механическая нагрузка 2,3. Синдром гипоплазии левых отделов сердца (СГЛОС), врожденный порок сердца, приводит к недоразвитию желудочка/аорты при рождении4 с высоким уровнем смертности 5,6. Несмотря на недавние успехи в клиническом лечении, динамика роста и развития сосудов при СГЛОС до сих пор неясна7. При нормальном эмбриональном развитии эндокард и миокард левого желудочка (ЛЖ) происходят от предшественников сердца по мере прогрессирования раннего эмбрионального формирования трубки сердца. Сообщается о постепенном наличии трабекуляции миокарда, утолщения слоев и пролиферации кардиомиоцитов2. При СГЛОС наблюдается измененное трабекулярное ремоделирование и уплощение левого желудочка, что в дальнейшем способствует гипоплазии миокарда из-за аномальной миграции кардиомиоцитов 2,8,9,10

Среди широко используемых модельных организмов для изучения развития сердца и понимания гемодинамических условий 11 предпочтение отдается эмбриону птицы из-за его четырехкамерного зрелого сердца и простоты культивирования11,12,13,14. С другой стороны, расширенный доступ к визуализации эмбрионов рыбок данио и трансгенных/нокаутных мышей обеспечивает явные преимущества11,12. На эмбрионе птицы были опробованы различные механические вмешательства, которые изменяют внутримурное давление и напряжение сдвига стенки в развивающихся сердечно-сосудистых компонентах. Эти модели включают лигирование левого вителлина, конотрункальное бандажирование15 и лигирование левого предсердия (LAL)11,12,16. Полученный фенотип, обусловленный измененной механической нагрузкой, можно наблюдать примерно через 24-48 ч после хирургического вмешательства в исследованиях, ориентированных на ранний прогноз11,13. Вмешательство LAL является популярным методом сужения функционального объема левого предсердия (LA) путем наложения шовной петли вокруг атриовентрикулярного отверстия. Кроме того, были выполнены микрохирургические вмешательства, нацеленные на перевязку правого предсердия (RAL)17,18. Точно так же некоторые исследователи нацеливаются на придаток левого предсердия (LAA) с помощью микроклипсов, чтобы уменьшить объем LA19,20. В некоторых исследованиях на атриовентрикулярный узел накладывают хирургическую капроновую нить19,21. Одним из используемых вмешательств является LAL, который может имитировать HLHS, но также является самой сложной моделью для выполнения, с очень малым выходом образцов из-за чрезвычайно тонких микрохирургических операций. В нашей лаборатории LAL проводится in ovo между 20-й и 21-й стадиями по шкале Гамбурга-Гамильтона (HH), до того, как общее предсердие будет полностью септировано 6,14,22,23. Вокруг ЛП накладывается хирургический шов, который изменяет внутрисердечный кровоток. В моделях СГЛОС ЛАЛ наблюдается повышенная жесткость стенок желудочков, измененные углы миоволокон и уменьшение размеров полости ЛЖ14,24.

В этой видеостатье представлен подробный протокол и подход к проведению in ovo LAL. Вкратце, оплодотворенные птичьи эмбрионы были инкубированы для микрохирургии, скорлупа яйца была вскрыта, а внешняя и внутренняя оболочки очищены. Затем эмбрион медленно вращали так, чтобы ЛП была доступна. Нейлоновый хирургический шов 10-0 был наложен на зачаток предсердий, и эмбрион был возвращен в его первоначальную ориентацию, завершив процедуру LAL25. LAL и нормальные желудочки сравнивают на уплотнение тканей и объем желудочков с помощью оптической когерентной томографии и базовой гистологии.

Успешно реализованная модель LAL, описанная здесь, будет способствовать фундаментальным исследованиям, посвященным эмбриональному развитию сердечно-сосудистых компонентов. Эта модель также может быть использована вместе с генетическими манипуляциями и передовыми методами визуализации. Кроме того, острая модель LAL является стабильным источником пораженных сосудистых клеток для экспериментов с тканевыми культурами.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Оплодотворенные белые яйца леггорнов получают от проверенных поставщиков и инкубируют в соответствии с утвержденными университетом рекомендациями. Эмбрионы цыплят на стадиях с 18 (3-й день) по 24-й (4-й день) (стадии, представленные в этой статье) не считаются живыми позвоночными животными в соответствии с директивой Европейского союза (ЕС) 2010/63/EU и рекомендациями Комитета по уходу и использованию животных (IACUC) в США. Эмбрионы цыплят считаются «живыми животными» после 19-го дня инкубации в соответствии с законами США, но не для ЕС. Каждое яйцо маркируется датой начала вылупления и планируется к вылуплению не позднее10-го дня инкубации. После того, как из яиц вылупятся птенцы, их извлекают из инкубатора. Протокол выполняется на двух стендовых рабочих станциях (Станция 1 и Станция 2), ориентированных на специализированные этапы генерации моделей.

1. Подготовка перед микрохирургией

  1. Оплодотворенные яйцеклетки можно получить либо в центре разработки вакцин со специальным классом защиты от патогенов (SPF), либо через проверенную коммерческую ферму поставщика с помощью хрупкого курьера-курьера в контейнерах из сухого полистирола. Перед инкубацией аккуратно очистите яичную скорлупу безворсовыми салфетками, смоченными в 70% этаноле, чтобы удалить загрязнения.
  2. Критерии включения/исключения эмбрионов
    1. Не инкубируйте яйца, которые треснули или повредили во время транспортировки.
    2. Если во время процедуры LAL или после повторной инкубации отмечается кровотечение, не используйте эмбрион.
    3. Не следует использовать эмбрионы, развивающиеся в положении левой стороной вверх, так как гемодинамический кровоток может отличаться от нормальной ориентации.
    4. Эмбрионы Dıscard, развивающиеся с врожденными дефектами как до, так и после операции.
    5. Включите эмбрионы, которые достигают целевой стадии, развиваясь в своем первоначальном месте, имитируя HLHS в качестве модели LAL.
  3. Инкубируют оплодотворенные куриные яйца породы Ливорн (Gallus gallus domesticus L.), тупой конец, до желаемой стадии, обычно при HH20-2115 (37,5 °C, влажность 60%, 3,5 дня) (Рисунок 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно поддерживать в яйцах постоянную температуру и влажность, чтобы увеличить урожайность. В зависимости от модели инкубатора, добавление поддона, наполненного дистиллированной водой, позволит поддерживать стабильную влажность. Авторами разработаны и рекомендованы чертежи дополнительной/вспомогательной системы контроля температуры и влажности, подходящей для большинства инкубаторов. Сведения об электронике, аппаратном обеспечении и коде этого датчика/блока управления собственной разработки представлены в репозиторииданных 26. Непрерывное мягкое встряхивание (вращение) яиц во время инкубации может обеспечить оптимальное положение эмбриона и, таким образом, привести к более высокому проценту «работоспособных» эмбрионов. Встряхивание также может работать с инкубаторами с такой производительностью и еще больше повысить производительность.
  4. Перед началом процедуры подготовьте необходимое количество узлов, завязав свободный верхний узел в шов длиной 1,5 см 10-0. Убедитесь, что узел не туго затянут и достаточно велик, чтобы легко поместиться над предсердиями во время операции (Рисунок 2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Завяжите узлы заранее и храните их в стерильном растворе для цыплят перед использованием. Операция завязывания узлов требует использования двух рук для синхронного управления пинцетом. Поскольку это критический этап в протоколе, для отработки этого шага из шпаклевки можно сделать модель предсердия (рисунок 3). Это позволит улучшить навыки трехмерной микрохирургии, необходимые для выполнения шага 3.2.3 на станции 2 (рис. 4).

2. Работа на станции 1 (рис. 4А)

  1. Откройте окно с тупого конца яйца и удалите как наружную, так и внутреннюю оболочки15 (фиг. 5A-D).
  2. Откройте яичную скорлупу, осторожно треснув обратным концом пинцета, при этом свободные пальцы крепко поддерживают яйцо, чтобы уменьшить нежелательное распространение трещины.
  3. Так как LAL является длительной процедурой, сохраняйте температуру и влажность эмбриона, так как частота сердечных сокращений зависит от температуры. Таким образом, убедитесь, что начальное окно оболочки создано как можно меньше, ровно настолько, чтобы выполнять операции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Во время работы не используются системы контроля влажности или температуры, но эти системы, если они доступны, улучшат урожайность. Если это возможно, система кондиционирования воздуха в лаборатории отключается, и процедура проводится при максимально возможной комнатной температуре (RT). Также рекомендуется оптимизация частоты сердечных сокращений эмбриона, которую можно контролировать с помощью температуры, во время операции. В некоторых лабораториях частота сердечных сокращений поддерживается на уровне чуть ниже 120 ударов в минуту с помощью контроля температуры во время работы LAL. Таким образом, контроль влажности вокруг операционной зоны еще больше увеличит производительность. Окна яичной скорлупы создаются как можно меньше, достаточно большими, чтобы обеспечить хирургический доступ. Это также относится к толстой внешней оболочке, которая, как правило, меньше яичной скорлупы только в пределах окружности эмбриона. Они обеспечивают поддержание температуры и влажности эмбриона. Открывая окно с тупого конца яйца, мелкие фрагменты скорлупы очищаются таким образом, чтобы эти кусочки не повредили вителлиновую сосудистую целостность и не привели к появлению нежелательных артефактов. Кроме того, в других лабораториях для изготовления окон используются изогнутые микрозубчатые ножницы. Кроме того, две ширины скотча можно использовать для стабилизации яичной скорлупы, чтобы предотвратить растрескивание.
  4. С помощью микроножниц удалите только необходимую вителлиновую мембрану (Дополнительное видео 1).
  5. Нормальное эмбриональное развитие происходит правой стороной вверх. Как только эмбрион освободится от вителлиновой мембраны, поместите пинцет с закрытыми кончиками под дорсальный сегмент эмбриона и осторожно переверните эмбрион, чтобы обнажить левую сторону (т.е. левую сторону вверх) (рис. 6A, B; Дополнительное видео 2).
  6. Убедитесь, что почка левого предсердия теперь открыта, но все еще покрыта сложной мембранной системой, обычно состоящей из двойного слоя перикарда.
  7. Удалите мембраны, в том числе тонкие, непосредственно вокруг почки предсердия. Это еще один важный этап; Выполняйте удаление мембран из грубых оболочек и переходите к тонким мембранам вокруг почки левого предсердия. Приберегите самый тонкий пинцет для удаления тонкой мембраны (Дополнительное видео 3).
  8. Во время процесса удаления плодной оболочки сориентируйте эмбрион в положение левой стороной вверх, чтобы операция по установке узла на шаге 3.2 могла быть выполнена без дальнейшего перемещения. Для этого поднимите эмбрион с помощью мембран на шаге 2.6 и подвесьте его к яичной скорлупе, убедившись, что левая сторона обращена вверх.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые эмбрионы могут располагаться близко к периферии яичной скорлупы, и их может быть трудно оперировать. Тем не менее, эти эмбрионы, скорее всего, будут ориентированы правой стороной вверх и демонстрировать нормальное поведение, и могут быть включены в исследование. В этих случаях, при необходимости, затененное предсердие можно сделать более доступным, осторожно очистив мембрану перикарда тонким пинцетом #4 и удалив скорлупу яйца в обратном направлении (по направлению к отверстию скорлупы). Эти эмбрионы также могут быть подняты с помощью частей внеэмбриональных оболочек и зафиксированы в нужном положении, прикрепив один конец мембраны (конец пинцета) к яичной скорлупе, используя ее естественную липкость. Кроме того, пространство между головой и спинным мозгом эмбриона может быть расширено с помощью пинцета, чтобы открыть закрытое предсердие.

3. Операции на станции 2 (рис. 4Б)

  1. Под стереомикроскопом расположите предварительно подготовленный узел, начиная с шага 1.4, близко к эмбриону в доступном месте (рис. 6B). Теперь почка предсердия готова к завязыванию (дополнительное видео 4).
  2. Извлеките заранее подготовленный открытый узел и сориентируйте его на зачаток левого предсердия. Чтобы LAL работал, поместите яйцо в трехмерную ориентацию с уникальным наклоном.
    1. Правильно сориентируйте узел, чтобы выполнить процесс затяжки, не повредив эмбрионы.
    2. Оптимально очистите тонкие мембраны на шаге 2.7, чтобы уменьшить эффект бьющегося сердца.
    3. Затяните шов (Рисунок 6C). Для этого шага очень пригодится практика работы со шпаклевкой. Для фиктивных эмбрионов затяните узел ровно настолько, чтобы удержать узел.
  3. Затем с помощью микроножниц обрежьте лишние концы шва как можно ближе к бутону (Дополнительное видео 5).
  4. Будьте очень осторожны, чтобы только что отрезанные концы завязанного шва не были в состоянии проколоть близлежащие сосуды во время вращения или из-за сердцебиения.
  5. С помощью пинцета удалите лишние кусочки шва, отрезанные на шаге 3.3.
  6. Наконец, с помощью закрытого пинцета верните эмбрион в исходное положение, как в шаге 2.5 (Дополнительное видео 6).
  7. После завершения процесса LAL накройте яйцо двойным слоем парапленки и снова инкубируйте. Плотное и стерильное закрытие яиц имеет первостепенное значение для выживания, особенно после 24 часов инкубации. Если вы также хотите получить визуальный доступ, используйте парафин со стеклянными предметными стеклами.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При изучении раннего эмбрионального периода яйца обычно инкубируются в течение 24-48 часов, пока они не достигнут примерно HH25 или HH27. Тем не менее, предела нет, и более поздние стадии могут быть изучены, как это пытались сделать другие исследователи. Для обеспечения высокой скорости работы рекомендуется использовать команду не менее двух человек. Один человек должен быть обучен и отвечать за вскрытие яйцеклетки, первоначальную очистку оболочки, ротацию и очистку оболочки вокруг почки левого предсердия. Другой человек несет ответственность только за первоначальную подготовку узла, его установку и затяжку. Окончательная ротация эмбриона может быть выполнена Человеком 1. Хирургическая операция на одном эмбрионе занимает около 4-5 минут.
  8. До/после хирургических операций очищайте поверхности стола и инструменты этанолом. Обязательно нанесите свежий раствор для звона цыплят (NaCl, KCl, CaCl2 и NaHCO3)16,27 на металлические инструменты, соприкасающиеся с тканями эмбриона.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для наблюдения за структурными и морфологическими изменениями, вызванными вмешательством LAL10, могут быть использованы передовые методы визуализации с временным разрешением. Кроме того, образцы LAL также поддаются молекулярным и биологическим методам19,28. В таблице 1 приведены примеры исследований, в которых использовались результаты модели LAL. В этом контексте вмешательство LAL было выполнено на эмбрионах цыплят, дости...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

При СГЛОС кровоток изменяется из-за структурных дефектов, что приводит к аномальной морфологии с левой стороны 4,6. Данная модель представляет собой практическую экспериментальную систему, позволяющую лучше понять прогрессирование СГЛОС и даже имитировать его патогенез8. Тем не менее, создание полностью клинически эквивалентной модели HLHS на животных является сложной задачей. В дополнение к представленной здесь птичьей модели LAL, в недав...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы выражаем признательность компании Tubitak 2247A за предоставление финансирования. Авторы также выражают благодарность PakTavuk Gıda. A. S., Стамбул, Турция, за обеспечение оплодотворенных яйцеклеток и поддержку сердечно-сосудистых исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
10-0 нейлоновый хирургический шовный материалEthicon
Elastica van Gieson набор для окрашиванияSigma-Aldrich115974Для окрашивания соединительных тканей в гистологических срезах
Этанол абсолютныйInterlab 64-17-5Для этапа стерилизации 70% этанола был получен путем разбавления абсолютного этанола дистиллированной водой.
ИнкубаторKUHL, Флемингтон, Нью-Джерси-СШАAZYSS600-110
KimwipesInterlab080.65.002
МикроножницыWorld Precision Instruments (WPI), Сарасота FL555640SVannas STR 82 мм
Парапленка MSigma-AldrichP7793-1EAУплотнительная ступень для реинкубации яиц
Paraplast BulkLeica Biosystems 39602012Среда для встраивания тканей
СтереомикроскопZeiss Stemi 508  Stemi 508Используется на станции 1
СтереомикроскопZeiss Stemi 2000-CStemi 2000-CИспользуется на станции 2
Пинцет (Dumont 4 INOX #F4)Adumont & Fils, ШвейцарияИспользуется для возврата эмбриона
пинцетом (Super Fine Dumont #5SF) World Precision Instruments (WPI), Сарасота, Флорида501985Используется для удаления оболочек на эмбрионе

Ссылки

  1. Wang, T., et al. Congenital heart disease and risk of cardiovascular disease: A meta-analysis of cohort studies. Journal of the American Heart Association. 8 (10), e012030(2019).
  2. Chaudhry, B., et al. The left ventricular myocardium in hypoplastic left heart syndrome. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (8), 279(2022).
  3. Lashkarinia, S. S., Çoban, G., Ermek, E., Çelik, M., Pekkan, K. Spatiotemporal remodeling of embryonic aortic arch: stress distribution, microstructure, and vascular growth in silico. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 19 (5), 1897-1915 (2020).
  4. Ho, S., Chan, W. X., Yap, C. H. Fluid mechanics of the left atrial ligation chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 20 (4), 1337-1351 (2021).
  5. Gordon, B. M., Rodriguez, S., Lee, M., Chang, R. K. Decreasing number of deaths of infants with hypoplastic left heart syndrome. The Journal of Pediatrics. 153 (3), 354-358 (2008).
  6. Salman, H. E., et al. Effect of left atrial ligation-driven altered inflow hemodynamics on embryonic heart development: clues for prenatal progression of hypoplastic left heart syndrome. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 20 (2), 733-750 (2021).
  7. Fruitman, D. S. Hypoplastic left heart syndrome: Prognosis and management options. Paediatrics & Child Health. 5 (4), 219-225 (2000).
  8. Rahman, A., Chaturvedi, R. R., Sled, J. G. Flow-mediated factors in the pathogenesis of hypoplastic left heart syndrome. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (5), 154(2022).
  9. Henderson, D. J., Anderson, R. H. The development and structure of the ventricles in the human heart. Pediatric Cardiology. 30 (5), 588-596 (2009).
  10. Kowalski, W. J., Pekkan, K., Tinney, J. P., Keller, B. B. Investigating developmental cardiovascular biomechanics and the origins of congenital heart defects. Frontiers in Physiology. 5, 408(2014).
  11. Midgett, M., Rugonyi, S. Congenital heart malformations induced by hemodynamic altering surgical interventions. Frontiers in Physiology. 5, 287(2014).
  12. Kowalski, W. J., et al. Left atrial ligation alters intracardiac flow patterns and the biomechanical landscape in the chick embryo. Developmental Dynamics. 243 (5), 652-662 (2014).
  13. Bruneau, B. G. The developmental genetics of congenital heart disease. Nature. 451 (7181), 943-948 (2008).
  14. Sedmera, D., et al. Cellular changes in experimental left heart hypoplasia. The Anatomical Record. 267 (2), 137-145 (2002).
  15. Celik, M., et al. Microstructure of early embryonic aortic arch and its reversibility following mechanically altered hemodynamic load release. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 318 (5), H1208-H1218 (2020).
  16. Tobita, K., Schroder, E. A., Tinney, J. P., Garrison, J. B., Keller, B. B. Regional passive ventricular stress-strain relations during development of altered loads in chick embryo. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 282 (6), H2386-H2396 (2002).
  17. Alser, M., Shurbaji, S., Yalcin, H. C. Mechanosensitive pathways in heart development: findings from chick embryo studies. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 8 (4), 32(2021).
  18. Alser, M., et al. Blood flow disturbance and morphological alterations following the right atrial ligation in the chick embryo. Frontiers in Physiology. 13, 849603(2022).
  19. Sedmera, D. HLHS: Power of the chick model. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (4), 113(2022).
  20. Rychter, Z., Rychterová, V., Lemez, L. Formation of the heart loop and proliferation structure of its wall as a base for ventricular septation. Herz. 4 (2), 86-90 (1979).
  21. Harh, J. Y., Paul, M. H., Gallen, W. J., Friedberg, D. Z., Kaplan, S. Experimental production of hypoplastic left heart syndrome in the chick embryo. The Americal Journal of Cardiology. 31 (1), 51-56 (1973).
  22. Sedmera, D., Pexieder, T., Rychterova, V., Hu, N., Clark, E. B. Remodeling of chick embryonic ventricular myoarchitecture under experimentally changed loading conditions. The Anatomical Record. 254 (2), 238-252 (1999).
  23. Karakaya, C., et al. Asymmetry in mechanosensitive gene expression during aortic arch morphogenesis. Scientific Reports. 8 (1), 16948(2018).
  24. Trinidad, F., et al. Effect of blood flow on cardiac morphogenesis and formation of congenital heart defects. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (9), 303(2022).
  25. Tobita, K., Keller, B. B. Right and left ventricular wall deformation patterns in normal and left heart hypoplasia chick embryos. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 279 (3), H959-H969 (2000).
  26. Bortecine, S., Merve Nur, C., Faruk, K., Kerem, P. Auxiliary humidifier system design and construction for research grade egg incubators. Zenodo. , (2023).
  27. Schroder, E. A., Tobita, K., Tinney, J. P., Foldes, J. K., Keller, B. B. Microtubule involvement in the adaptation to altered mechanical load in developing chick myocardium. Circulation Research. 91 (4), 353-359 (2002).
  28. Rufaihah, A. J., Chen, C. K., Yap, C. H., Mattar, C. N. Z. Mending a broken heart: In vitro, in vivo and in silico models of congenital heart disease. Disease Models & Mechanisms. 14 (3), (2021).
  29. Siddiqui, H. B., Dogru, S., Lashkarinia, S. S., Pekkan, K. Soft-tissue material properties and mechanogenetics during cardiovascular development. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (2), 64(2022).
  30. Pesevski, Z., et al. Endocardial fibroelastosis is secondary to hemodynamic alterations in the chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome. Developmental Dynamics. 247 (3), 509-520 (2018).
  31. Hu, N., et al. Dependence of aortic arch morphogenesis on intracardiac blood flow in the left atrial ligated chick embryo. Anatomical Record. 292 (5), 652-660 (2009).
  32. Lashkarinia, S. S., et al. Myocardial biomechanics and the consequent differentially expressed genes of the left atrial ligation chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome. Annals of Biomedical Engineering. 51 (5), 1063-1078 (2023).
  33. Krejčí, E., et al. Microarray analysis of normal and abnormal chick ventricular myocardial development. Physiological Research. 61, S137-S144 (2012).
  34. Rahman, A., et al. A mouse model of hypoplastic left heart syndrome demonstrating left heart hypoplasia and retrograde aortic arch flow. Disease Models & Mechanisms. 14 (11), (2021).
  35. Fishman, N. H., Hof, R. B., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. Models of congenital heart disease in fetal lambs. Circulation. 58 (2), 354-364 (1978).
  36. Wong, F. Y., et al. Induction of left ventricular hypoplasia by occluding the foramen ovale in the fetal lamb. Scientific Reports. 10 (1), 880(2020).
  37. Nie, S. Use of frogs as a model to study the etiology of HLHS. Journal of Cardiovascular Development and Disease. 10 (2), 51(2023).
  38. Vilches-Moure, J. G. Embryonic chicken (Gallus gallus domesticus) as a model of cardiac biology and development. Comparative Medicine. 69 (3), 184-203 (2019).
  39. Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
  40. Sukparangsi, W., Thongphakdee, A., Intarapat, S. Avian embryonic culture: A perspective of in ovo to ex ovo and in vitro studies. Frontiers in Physiology. 13, 903491(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Перевязка левого предсердия у эмбриона птицы как модель измененной гемодинамической нагрузки при раннем развитии сосудов
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.