Методическая статья

Анализ активности факторов внеклеточной везикулярной ткани

DOI:

10.3791/65840

⸱

29 декабря 2023 г.

 , 
1Division of Hematology, UNC Blood Research Center, University of North Carolina at Chapel Hill

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы опишем собственный анализ активности фактора внеклеточной везикулярной ткани. Анализы, основанные на активности, и анализы на основе антигенов были использованы для измерения тканевого фактора во внеклеточных везикулах из образцов плазмы крови человека. Анализы, основанные на активности, имеют более высокую чувствительность и специфичность, чем анализы на основе антигенов.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Тканевый фактор (ТФ) является трансмембранным рецептором для факторов (F) VII и FVIIa. Комплекс TF/FVIIa инициирует коагуляционный каскад, активируя как FIX, так и FX. ТФ высвобождается из клеток в кровоток в виде внеклеточных везикул (ВВ). Уровень ТФ-положительных (+) ВВ повышен при различных заболеваниях, включая онкологические, бактериальные и вирусные инфекции, цирроз печени, и связан с тромбозом, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием, тяжестью заболевания и летальностью. Существует два способа измерения ТФ+ ВВ в плазме: анализ на основе антигена и анализ на основе активности. Данные свидетельствуют о том, что анализы, основанные на активности, обладают более высокой чувствительностью и специфичностью, чем анализы на основе антигенов. В этом документе описывается наш собственный анализ активности EVTF, основанный на двухступенчатом анализе генерации FXa. FVIIa, FX и кальций добавляют к образцам, содержащим ТФ+ EV, для генерации FXa в присутствии и отсутствии антител к ТФ, чтобы отличить ТФ-зависимую генерацию FXa от TF-независимой генерации FXa. Для определения уровня FXa используется хромогенный субстрат, расщепленный FXa, в то время как стандартная кривая, сгенерированная с помощью релипированного рекомбинантного TF, используется для определения концентрации TF. Этот собственный анализ активности ЭВТФ обладает более высокой чувствительностью и специфичностью, чем коммерческий анализ активности ТФ.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Свертывание крови начинается со связывания фактора (F) VII/VIIa с тканевым фактором (TF)1. Комплекс TF/FVIIa активирует как FIX, так и FX для активации свертывания крови1. Существует две формы полноразмерного мембранного ТФ: зашифрованный и активный. Кроме того, существует альтернативно сплайсированная форма ТФ (asTF). Сфингомиелин и фосфатидилхолин в наружной створке клеточной мембраны поддерживают ТФ в зашифрованном состоянии 2,3,4. Когда клетки активируются или повреждаются, фосфолипидная скрамблаза переносит фосфатидилсерин и другие отрицательно заряженные фосфолипиды на внешнюю створку1. Активация клеток также приводит к транслокации кислой сфингомиелиназы на внешнюю створку, где она разлагает сфингомиелин до церамида5. Эти два механизма преобразуют зашифрованный TF в активную форму. Также предполагается, что белковая дисульфидизомераза опосредует образование дисульфидных связей между Cys186 и Cys209 в зашифрованном ТФ, что приводит к расшифровке ТФ 6,7,8. asTF также присутствует в кровотоке, но у него отсутствует трансмембранный домен, и поэтому он растворим 9,10. Важно отметить, что asTF имеет очень низкий уровень прокоагулянтной активности по сравнению с полноразмерным активным TF10,11.

Внеклеточные везикулы (ВВ) высвобождаются из покоящихся, активированных и умирающих клеток хозяина, а также из раковых клеток12. ВВ экспрессируют белки из родительских клеток12. Активные ТФ-содержащие ВВ высвобождаются из активированных моноцитов, эндотелиальных клеток и опухолевых клеток в кровоток 13,14,15. Уровни ТФ в плазме могут быть измерены с помощью анализов активности и антигенов. Анализы на основе антигенов включают ИФА и проточную цитометрию16. Существует два различных анализа активности: одноэтапный и двухэтапный анализ активности ТФ. Одноэтапный анализ основан на анализе свертывания крови на основе плазмы. Образец, содержащий ТФ, добавляют в плазму и измеряют время образования сгустка после повторной кальцификации. Двухступенчатый анализ измеряет генерацию образцов FXa путем добавления FVII или FVIIa, FX и кальция. Уровни FXa определяются с помощью субстрата, который расщепляется FXa.

Как в одностадийном, так и в двухступенчатом анализе активности ТФ концентрация ТФ определяется с помощью стандартной кривой, полученной с помощью рекомбинантного ТФ. Двухэтапные анализы обладают более высокой чувствительностью и специфичностью, чем одностадийные. Многие исследования подтвердили, что анализы, основанные на активности, имеют более высокую чувствительность и специфичность, чем анализы на основе антигенов 17,18,19,20,21. Кроме того, наш собственный анализ активности имеет более высокую чувствительность и специфичность, чем анализ коммерческой деятельности22. Здоровые люди имеют очень низкие или неопределяемые уровни активности ЭВТФ в плазме. Напротив, лица с патологическими состояниями, такими как рак, цирроз печени, сепсис и вирусная инфекция, имеют обнаруживаемые уровни активности ЭВТФ, и это связано с тромбозом, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием, тяжестью заболевания и смертностью 23,24,25,26,27,28. В этой статье мы опишем этот собственный двухступенчатый анализ активности EVTF.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследование было одобрено Институциональным наблюдательным советом Университета Северной Каролины в Чапел-Хилл (номер протокола: 14-2108).

1. Забор крови у доноров

  1. Соберите цельную кровь с помощью чистой венепункции в локтевую вену иглой 21 G. Первые 3 мл крови выбросить, так как эта порция крови может содержать ТФ из периваскулярных клеток.
  2. Наберите 2,7 или 1,8 мл (в зависимости от размера пробирок) крови в вакутейнер, содержащий 3,2% цитрата натрия (0,109 моль/л). Не переполняйте или недополняйте трубки. Осторожно переверните пробирки сразу после забора крови, чтобы диспергировать цитрат натрия.
  3. Избегайте перемешивания, если пробирки транспортируются перед обработкой. Плазму готовят в течение 2 ч после забора крови.

2. Подготовка плазмы отрицательного контроля

ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы не должны быть помещены на лед в любое время до окончательного замораживания.

  1. Приготовьте отрицательную контрольную плазму, используя цельную кровь здоровых добровольцев. Сразу после забора крови подготовьте безтромбоцитарную плазму следующим образом.
    1. Переложите образцы крови из пробирок вакутейнера в пробирки объемом 15 мл.
    2. Центрифугируют образцы крови при 2 500 × г в течение 15 мин при комнатной температуре (20-24 °C) без тормоза.
    3. Перенесите надосадочную жидкость (бедную тромбоцитами плазму) в новую пробирку и повторите отжим в тех же условиях.
    4. Перенесите надосадочную жидкость (плазму, обедненную тромбоцитами) в новую пробирку.
    5. Раздробьте образец на ≥100 мкл аликвоты. Оставьте примерно 100 мкл на дне пробирки.
    6. Немедленно замораживают плазму, обедненную тромбоцитами, при температуре −80 °C (рис. 1).

3. Подготовка плазмы положительного контроля

ПРИМЕЧАНИЕ: Реакция на липополисахарид варьируется у разных людей.

  1. Переложите образцы крови из вакутейнеров в пробирки объемом 15 мл.
  2. Приготовьте положительную контрольную плазму с использованием цельной крови здоровых добровольцев, стимулированной липополисахаридом (ЛПС) из Escherichia coli O111:B4 (10 мкг/мл) в течение 5 ч при 37 °C с перемешиванием.
  3. После 5 ч инкубации выполните шаги 2.1.2 - 2.1.6.

4. Выделение внеклеточных везикул из плазмы

ПРИМЕЧАНИЕ: Гранулы EV могут быть не видны. Время размораживания зависит от объема образца, но обычно мы размораживаем плазму объемом 100 мкл в течение 30 минут при температуре 37 °C.

  1. Размораживайте образцы плазмы при 37 °C.
  2. Добавьте 1 мл HBSA без буфера кальция [HBSA-Ca(-)] [137 мМ NaCl, 5,38 мМ KCl, 5,55 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, 0,1% (w/v) бычьего сывороточного альбумина] к каждые 100 мкл образца плазмы в пробирке объемом 1,5 мл.
  3. Центрифужные образцы плазмы при 20 000 × g в течение 15 мин при 4 °C.
  4. Отсасывайте надосадочную жидкость до 20 мкл, не повреждая гранулу EV.
  5. Восстановите гранулу EV, добавив 1 мл буфера HBSA-Ca(-) в каждую пробирку, пипетку вверх и вниз в месте расположения гранулы EV и встряхните каждую пробирку перед повторным центрифугированием при 20 000 × г в течение 15 минут при 4 °C.
  6. Отсасывайте надосадочную жидкость до 20 мкл, не повреждая гранулу EV.
  7. Восстановите гранулу EV в 80 мкл HBSA-Ca(-) и пипетку вверх и вниз в месте расположения гранулы EV (рис. 2).

5. Вариант: Выделение мелких внеклеточных везикул с помощью ультрацентрифуги

  1. После шага 4.3 соберите надосадочную жидкость и ультрацентрифугу при 100 000 × г в течение 70 мин при 4 °C.
  2. Отсасывайте надосадочную жидкость до 20 мкл, не повреждая гранулу EV.
  3. Восстановите гранулу EV, добавив 1 мл буфера HBSA-Ca(-) в каждую пробирку и встряхните каждую пробирку перед повторным ультрацентрифугированием при 100 000 × г в течение 70 минут при 4 °C.
  4. Отсасывайте надосадочную жидкость до 20 мкл, не повреждая гранулу EV.
  5. Восстановите гранулу EV в 80 мкл HBSA-Ca(-).

6. Измерение активности фактора внеклеточной везикулярной ткани

ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы EV должны быть пипетированы и хорошо перемешаны перед добавлением в лунки. ЭДТА-динатрий ингибирует способность FXa расщеплять хромогенный субстрат. Таким образом, ЭДТА-динатрий не может быть использован в качестве замены ЭДТА-тетранатрия на стадии 6.7.

  1. Добавьте 40 мкл образца EV в две лунки 96-луночного планшета.
  2. Добавьте 11 мкл ингибирующего мышиного античеловеческого TF IgG [(36,4 мкг/мл, конечная концентрация 7,8 мкг/мл)] в одну лунку образца EV и 11 мкл контрольного мышиного IgG [(36,4 мкг/мл, конечная концентрация 7,8 мкг/мл)] в другую лунку.
  3. Инкубируйте 96-луночную планшет в течение 15 минут при комнатной температуре.
  4. В течение инкубационного периода готовят 50 мкл/лунку стандартов ТФ (0, 0,32, 0,63, 1,25, 2,5, 5, 10 и 20 пг/мл) в двух экземплярах, используя релипированный рекомбинантный ТФ.
  5. Приготовьте факторную смесь, смешав 4 мл HBSA с кальцием [HBSA-Ca(+)] [HBSA-Ca(-) + 10 мМ CaCl2, конечная концентрация 10 мМ], 800 мкл 900 нМ FX в HBSA-Ca(+) (конечная концентрация: 146,4 нМ) и 120 мкл 200 нМ FVIIa в HBSA-CA(+) (конечная концентрация: 4,8 нМ).
  6. В каждую лунку добавляют по 50 мкл раствора факторной смеси, накрывают планшет пленкой и инкубируют 2 ч в инкубаторе при 37 °С.
  7. Через 2 ч прекращают образование FXa, добавляя 25 мкл этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) [HBSA-Ca(-) + 25 мМ ЭДТА-тетранатрия, конечная концентрация 5 мМ] и инкубируют в течение 5 мин при комнатной температуре.
  8. Восстановите хромогенный субстрат, расщепленный FXa до 4 мМ (добавьте 8,7 мл дистиллированной воды во флакон 25 мг).
  9. Добавьте 25 мкл раствора хромогенного субстрата в каждую лунку, накройте планшет пленкой, а затем алюминиевой фольгой, чтобы защитить его от света, и инкубируйте в течение 15 минут при 37 °C.
  10. После 15 мин инкубации пузырьки удаляют иглой или центрифугированием при 1 500 × г в течение 1 мин.
  11. Считайте пластину на длине волны 405 нм с помощью считывателя пластин с одним смешением перед считыванием.
  12. Преобразуйте генерацию FXa каждой скважины в активность ТФ, используя стандартную кривую, построенную с использованием релипированного рекомбинантного ТФ.
  13. Рассчитаем TF-зависимую генерацию FXa (активность EVTF) по уравнению (1):
    TF-зависимая генерация FXa (активность EVTF [пг/мл]) = Общая генерация FXa (контрольная скважина IgG) - TF-независимая генерация FXa (анти-TF IgG-скважина) (Рисунок 3) (1)

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

При успешном получении положительного контрольного значения ≥0,5 пг/мл и отрицательного контрольного значения <0,5 пг/мл. Для положительного контроля лучше всего найти ответчик с высоким ЛПС с активностью EVTF >1,0 пг/мл. Репрезентативный результат показывает активность ЭВТФ ВВ, выделенных из плазмы цельной крови 11 здоровых доноров, с активацией ЛПС и без нее (рис. 4). Шесть из одиннадцати доноров (доноры 2, 4, 5, 8, 10, 11) имели средний и высокий уровень ответа на ЛПС, в то время ка...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь представлен протокол нашего собственного анализа активности ЭВТФ. Протокол состоит из трех важнейших этапов. При восстановлении гранулы EV важно проводить пипеткой вверх и вниз в том месте, где находится гранула EV, даже если она не видна. Неполное восстановление гранулы EV приведет к ложноотрицательному результату или занижению значений активности EVTF образцов. Во-вторых, использование HBSA-Ca(+) имеет решающее значение на шаге 6.5 протокола, поскольку генерация FXa не может быть произведена без кальция. В-третьи...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нет никаких конкурирующих интересов, которые нужно раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана R35HL155657 NIH NHLBI (Нью-Мексико) и профессором Джона С. Паркера (Нью-Мексико). Мы хотели бы поблагодарить г-жу Сьерру Арчибальд за ее полезные комментарии

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пробирка объемом 1,5 мл для 20 000 x gлюбой компанииN/AМы используем пробирку от Fisher Scientific (каталожный номер: 05-408-129).
Пробирка 1,5 мл для ультрацентрифугилюбой компанииН/ДМы используем ту, что от Beckman Coulter (Каталожный номер: 357448)
15 мл Тубалюбой компанииН/ДМы используем ту, что от VWR (Каталожный номер: 89039-666)
21 G x .75 дюйма. BD Vacutainer Safety-Lok Набор для сбора крови 12 дюймов. трубка и адаптер ЛюэраBD367281
96-луночной пластинелюбой фирмыN/AМы используем тот, который от Globe Scientific (Каталожный номер: 120338).
BD Vacutainer Цитратные пробиркиBD363083
Бычий сывороточный альбуминSigma AldrichA9418
Хлорид кальцияFisher ScientificC69-500
Центрифуга для пробирки 1,5 мллюбой фирмыN/AМы используем центрифугу 5417R (Eppendorf).
Центрифуга для пробирки 15 мллюбой фирмыN/AМы используем центрифугу 5810R (Eppendorf).
D-(+)-глюкозаSigma AldrichG7021
Этилендиаминтетрауксусная кислота дигидрат тетранатриевой солиSigma AldrichE6511
HepesSigma AldrichH4034
Лаборатория исследования ферментовчеловека FVIIaHFVIIaРаствор следует разбавлять HBSA-Ca(+).
Лаборатория исследованияферментов FX человекаHFX1010Раствор следует разбавлять HBSA-Ca(+).
Ингибирующий мышиный античеловеческий тканевый фактор IgG, клон HTF-1Fisher Scientific550252
Липополисахарид из Escherichia coli O111:B4Sigma AldrichL2630Существует несколько липополисахаридов из разных E. coli. Разные липополисахариды имеют разный потенциал активации моноцитов.
Мышь IgGSigma AldrichI5381
Pefachrome FXa 8595Enzyme Research Laboratory085-27
Планшетный ридерлюбой компанииN/AМы используем SpectraMax i3x от Molecular Devices
Re-lipiated рекомбинантный тканевый фактор, Dade InnovinSiemens 10873566
Sodium chloride Fisher ScientificS271-500
Beckman CoulterOptima TLX
УльтрацентрифугаBeckman CoulterTLA-55
Ультрацентрифуга

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Grover, S. P., Mackman, N. Tissue factor: an essential mediator of hemostasis and trigger of thrombosis. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 38 (4), 709-725 (2018).
  2. Shaw, A. W., Pureza, V. S., Sligar, S. G., Morrissey, J. H. The local phospholipid environment modulates the activation of blood clotting. Journal of Biological Chemistry. 282 (9), 6556-6563 (2007).
  3. Tavoosi, N., et al. Molecular determinants of phospholipid synergy in blood clotting. Journal of Biological Chemistry. 286 (26), 23247-23253 (2011).
  4. Wang, J., Pendurthi, U. R., Rao, L. V. M. Sphingomyelin encrypts tissue factor: ATP-induced activation of A-SMase leads to tissue factor decryption and microvesicle shedding. Blood Advances. 1 (13), 849-862 (2017).
  5. Kornhuber, J., Rhein, C., Muller, C. P., Muhle, C. Secretory sphingomyelinase in health and disease. Biological Chemistry. 396 (6-7), 707-736 (2015).
  6. Versteeg, H. H., Ruf, W. Tissue factor coagulant function is enhanced by protein-disulfide isomerase independent of oxidoreductase activity. Journal of Biological Chemistry. 282 (35), 25416-25424 (2007).
  7. Reinhardt, C., et al. Protein disulfide isomerase acts as an injury response signal that enhances fibrin generation via tissue factor activation. Journal of Clinical Investigation. 118 (3), 1110-1122 (2008).
  8. Langer, F., et al. Rapid activation of monocyte tissue factor by antithymocyte globulin is dependent on complement and protein disulfide isomerase. Blood. 121 (12), 2324-2335 (2013).
  9. Bogdanov, V. Y., et al. Alternatively spliced human tissue factor: a circulating, soluble, thrombogenic protein. Nature Medicine. 9 (4), 458-462 (2003).
  10. Mackman, N. Alternatively spliced tissue factor - one cut too many. Thrombosis and Haemostasis. 97 (1), 5-8 (2007).
  11. Censarek, P., Bobbe, A., Grandoch, M., Schror, K., Weber, A. A. Alternatively spliced human tissue factor (asHTF) is not pro-coagulant. Thrombosis and Haemostasis. 97 (1), 11-14 (2007).
  12. Gyorgy, B., et al. Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles. Cellular and Molecular Life Sciences. 68 (16), 2667-2688 (2011).
  13. Osterud, B., Bjorklid, E. Tissue factor in blood cells and endothelial cells. Frontiers in Bioscience (Elite Edition). 4 (1), 289-299 (2012).
  14. Hisada, Y., Mackman, N. Cancer cell-derived tissue factor-positive extracellular vesicles: biomarkers of thrombosis and survival. Current Opinion in Hematology. 26 (5), 349-356 (2019).
  15. Vatsyayan, R., Kothari, H., Pendurthi, U. R., Rao, L. V. 4-Hydroxy-2-nonenal enhances tissue factor activity in human monocytic cells via p38 mitogen-activated protein kinase activation-dependent phosphatidylserine exposure. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (7), 1601-1611 (2013).
  16. Mackman, N., Sachetto, A. T. A., Hisada, Y. Measurement of tissue factor-positive extracellular vesicles in plasma: strengths and weaknesses of current methods. Current Opinion in Hematology. 29 (5), 266-274 (2022).
  17. Lee, R. D., et al. Pre-analytical and analytical variables affecting the measurement of plasma-derived microparticle tissue factor activity. Thrombosis Research. 129 (1), 80-85 (2012).
  18. Claussen, C., et al. Microvesicle-associated tissue factor procoagulant activity for the preoperative diagnosis of ovarian cancer. Thrombosis Research. 141, 39-48 (2016).
  19. Mackman, N., Hisada, Y., Archibald, S. J., et al. Tissue factor and its procoagulant activity on cancer-associated thromboembolism in pancreatic cancer: Comment by Mackman et al. Cancer Science. 113 (5), 1885-1887 (2022).
  20. Sachetto, A. T. A., et al. Evaluation of four commercial ELISAs to measure tissue factor in human plasma. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 7 (3), 100133(2023).
  21. Archibald, S. J., Hisada, Y., Bae-Jump, V. L., Mackman, N. Evaluation of a new bead-based assay to measure levels of human tissue factor antigen in extracellular vesicles in plasma. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 6 (2), e12677(2022).
  22. Tatsumi, K., et al. Evaluation of a new commercial assay to measure microparticle tissue factor activity in plasma: communication from the SSC of the ISTH. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 12 (11), 1932-1934 (2014).
  23. Hisada, Y., et al. Measurement of microparticle tissue factor activity in clinical samples: A summary of two tissue factor-dependent FXa generation assays. Thrombosis Research. 139, 90-97 (2016).
  24. Tatsumi, K., Hisada, Y., Connolly, A. F., Buranda, T., Mackman, N. Patients with severe orthohantavirus cardiopulmonary syndrome due to Sin Nombre Virus infection have increased circulating extracellular vesicle tissue factor and an activated coagulation system. Thrombosis Research. 179, 31-33 (2019).
  25. Schmedes, C. M., et al. Circulating Extracellular Vesicle Tissue Factor Activity During Orthohantavirus Infection Is Associated With Intravascular Coagulation. Journal of Infectious Diseases. 222 (8), 1392-1399 (2020).
  26. Rosell, A., et al. Patients with COVID-19 have elevated levels of circulating extracellular vesicle tissue factor activity that is associated with severity and mortality-Brief report. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 41 (2), 878-882 (2021).
  27. Campbell, R. A., et al. Comparison of the coagulopathies associated with COVID-19 and sepsis. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 5 (4), e12525(2021).
  28. Guervilly, C., et al. Dissemination of extreme levels of extracellular vesicles: tissue factor activity in patients with severe COVID-19. Blood Advances. 5 (3), 628-634 (2021).
  29. Hisada, Y., Mackman, N. Measurement of tissue factor activity in extracellular vesicles from human plasma samples. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 3 (1), 44-48 (2019).
  30. Sachetto, A. T. A., et al. Tissue factor activity of small and large extracellular vesicles in different diseases. Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 7 (3), 100124(2023).
  31. Bom, V. J., Bertina, R. M. The contributions of Ca2+, phospholipids and tissue-factor apoprotein to the activation of human blood-coagulation factor X by activated factor VII. Biochemical Journal. 265 (2), 327-336 (1990).
  32. Tilley, R. E., Holscher, T., Belani, R., Nieva, J., Mackman, N. Tissue factor activity is increased in a combined platelet and microparticle sample from cancer patients. Thrombosis Research. 122 (5), 604-609 (2008).
  33. Gurung, S., Perocheau, D., Touramanidou, L., Baruteau, J. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Communication and Signaling. 19 (1), 47(2021).
  34. Garnier, D., et al. Cancer cells induced to express mesenchymal phenotype release exosome-like extracellular vesicles carrying tissue factor. Journal of Biological Chemistry. 287 (52), 43565-43572 (2012).
  35. Park, J. A., et al. Tissue factor-bearing exosome secretion from human mechanically stimulated bronchial epithelial cells in vitro and in vivo. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 130 (6), 1375-1383 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Extracellular VesiclesFXa Generation AssayPlasma SamplesActivity Based AssayAntigen Based AssayFlow CytometryChromogenic SubstrateAnti TF AntibodyPlate Reader

Похожие статьи