Методическая статья

Регистрация функциональной целостности барьера на клетках эндотелия сосудов bEnd.3 с помощью детектирования трансэндотелиального электрического сопротивления

5.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65938

⸱

29 сентября 2023 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4School of Pharmacy, Ningxia Medical University, 5Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает надежную и эффективную модель гематоэнцефалического барьера in vitro . Метод использует клетки эндотелия сосудов головного мозга мышей bEnd.3 и измеряет трансмембранное электрическое сопротивление.

Аннотация

Гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) представляет собой динамическую физиологическую структуру, состоящую из микрососудистых эндотелиальных клеток, астроцитов и перицитов. Координируя взаимодействие между ограниченным транзитом вредных веществ, всасыванием питательных веществ и клиренсом метаболитов в головном мозге, ГЭБ играет важную роль в сохранении гомеостаза центральной нервной системы. Построение моделей ГЭБ in vitro является ценным инструментом для изучения патофизиологии неврологических расстройств и создания фармакологических методов лечения. В данном исследовании описана процедура создания модели монослойных клеток ГЭБ in vitro путем посева клеток bEnd.3 в верхнюю камеру 24-луночного планшета. Для оценки целостности барьерной функции клеток использовали обычный эпителиальный клеточный вольтметр для регистрации трансмембранного электрического сопротивления нормальных клеток и CoCl 2-индуцированных гипоксических клеток в режиме реального времени. Мы ожидаем, что вышеуказанные эксперименты дадут эффективные идеи для создания in vitro моделей ГЭБ и препаратов для лечения заболеваний центральной нервной системы.

Введение

ГЭБ представляет собой уникальный биологический интерфейс между кровообращением и нервной тканью, который состоит из эндотелиальных клеток сосудов, перицитов, астроцитов, нейронов и других клеточных структур1. Поток ионов, химических веществ и клеток между кровью и мозгом строго регулируется этим барьером. Этот гомеостаз защищает нервные ткани от токсинов и болезнетворных микроорганизмов, а также обеспечивает надлежащую работу нервов головного мозга 2,3. Поддержание целостности ГЭБ может эффективно предотвращать развитие и прогрессирование нарушений, влияющих на центральную нервную систему, таких как дисфункция нейронов, отек и нейровоспаление4. Однако уникальные физиологические свойства ГЭБ предотвращают попадание в центральную нервную систему более 98% низкомолекулярных лекарственных препаратов и 100% высокомолекулярных фармацевтических препаратов5. Поэтому увеличение проникновения лекарственных средств через ГЭБ при разработке препаратов для центральной нервной системы имеет существенное значение для достижения терапевтической эффективности 6,7. Несмотря на то, что скрининг субстратов с помощью компьютерного моделирования значительно повысил вероятность того, что кандидаты в лекарственные препараты проникнут через ГЭБ, для удовлетворения потребностейнаучных исследований по-прежнему необходимы надежные и доступные модели ГЭБ in vitro/in vivo.

Быстрым и доступным методом высокопроизводительного скрининга лекарственных препаратов является модель in vitro 9. Для того, чтобы пролить свет на фундаментальные процессы влияния лекарственных средств на функцию ГЭБ и их роль в развитии и прогрессировании заболевания, была создана серия упрощенных моделей ГЭБ in vitro. В настоящее время распространенными моделями ГЭБ in vitro являются монослойные, кокультуральные, динамические и микрофлюидные модели 10,11,12, построенные сосудистыми эндотелиальными клетками и астроцитами, перицитами или микроглией 13,14. Несмотря на то, что 3D-клеточные культуры в большей степени соответствуют физиологической структуре ГЭБ15, их применение в качестве средства скрининга лекарств на ГЭБ по-прежнему ограничено их сложной конструкцией и низкой воспроизводимостью. В отличие от этого, модель монослоя in vitro является наиболее часто используемой для исследования ГЭБ и применима для определения экспрессии мембранных транспортеров и белков плотного соединения в конкретных клетках.

Измерение трансмембранного электрического сопротивления (TEER) — это метод оценки и мониторинга слоя клеток поперек сопротивления, а также оценки целостности клеток и проницаемости барьера. При одновременном введении двух электродов в питательную среду или буферный раствор с обеих сторон монослоя можно измерить переменный ток или электрический импеданс через компактный слой ячейки16,17. Для того, чтобы определить, правильно ли была создана модель ГВВ in vitro, в качестве золотого стандарта обычно используется измерение TEER18. С другой стороны, тенденция действия лекарств на проницаемость ГЭБ может быть точно предсказана путем измерения изменения электрического сопротивления клеточного слоя после введения препарата19. Например, Feng et al. обнаружили, что catalpol (первичный активный мономер rehmanniae) может эффективно обратить вспять вызванную липополисахаридами подавление регуляции белков плотных соединений в ГЭБ и повысить значение TEER20-го слоя эндотелиальных клеток головного мозга мыши.

Нейровоспалительная реакция обычно является основной причиной дисбаланса гомеостаза ГЭБ21. Гипоксическое лечение для индуцирования нейровоспалительного повреждения является основным методом разрушения гематоэнцефалического барьера, в основном включающим физические методы и методы химических реагентов. В первом случае в основном используется инкубатор из трех газов для изменения содержания кислорода в среде роста клеток для моделирования гипоксических условий22, в то время как второй достигается путем искусственного введения дезоксиреагентов, таких как CoCl2, в средуклеточной культуры 23. Клетки останутся в деоксигенированном состоянии, если Fe2+ будет заменен на Co2+ в геме. Если Fe2+ заменить Co2+ в каталитической группе, активность пролингидроксилазы и аспартатгидроксилазы будет ингибирована, что приведет к накоплению гипоксически-индуцируемого фактора-1α (HIF-1α)24. При персистирующей гипоксии дефосфорилирование HIF-1α в цитоплазме вызывает гибель клеток и активирует фактор роста эндотелия сосудов, что в конечном итоге повышает проницаемость сосудов. В предыдущих исследованиях25,26 было хорошо продемонстрировано, что гипоксия может значительно снижать экспрессию эндотелиальных белков плотного соединения для увеличения проницаемости ГЭБ. В этом исследовании была измерена кривая сопротивления времени клеток bEnd.3, засеянных в 24-луночные планшеты, чтобы создать прямолинейную модель ГЭБ. Используя эту модель, мы охарактеризовали изменения в клеточном TEER после вмешательства CoCl2 с целью построения клеточной модели, которая может быть использована для скрининга лекарств на защиту от ГЭБ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Эндотелиальные клетки, полученные из мозга мышей.3 (bEnd.3), были инокулированы в камеры 24-луночного планшета для построения простой модели ГЭБ in vitro в определенных условиях среды. ТЭЭР нормальных и гипоксических клеток измеряли с помощью измерителя TEER (рис. 1 и рис. 2).

1. Приготовление раствора

  1. Приготовьте питательную среду для клеток DMEM, содержащую FBS (10%, v/v), 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина (см. таблицу материалов).
  2. Приготовьте 100 мМ исходного раствора CoCl2 , добавив 1,30 мг CoCl2 в 100 мкл раствора ДМСО.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все вышеуказанные растворы хранились при температуре 4 °C, а исходный раствор перед использованием разбавляли в соответствии с желаемой концентрацией.
  3. Приготовьте 5% раствор гипохлорита натрия (v/v), добавив 2 мл раствора гипохлорита натрия к 38 мл воды двойной дистиллированной воды.

2. Клеточная культура и жизнеспособность клеток

  1. Высевают 1 мл клеток bEnd.3 в чашку для культивирования (100 мм), содержащую среду DMEM плотностью 1 x 106 клеток/мл и культивируют при 37 °C во влажной атмосфере 5% CO2. Меняйте среду каждые 2-3 дня и субкультивируйте клетки 2 раза в неделю.
  2. После bEnd.3 клетки вырастают до 80 % слияния, переваривают клетки с 0,25 % трипсина в течение 30 с.
  3. Изготовьте суспензию клеток bEnd.3 плотностью 7 x 104 кл/мл с использованием среды DMEM через счетчик клеток. Затем высевают 100 мкл клеточной суспензии bEnd.3 в 96-луночный планшет.
  4. После адгезии клеток очищают клетки PBS и культивируют клетки 100 мкл питательной среды или лекарственной среды (100 мкМ, 200 мкМ, 300 мкМ, 400 мкМ, 500 мкМ CoCl2) в течение 24 ч в тех же условиях. После удаления среды внутри лунки и очистки ее PBS добавьте 100 мкл раствора CCK-8.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не образуйте пузырьков в лунке, которые могут повлиять на значения оптической плотности (OD).
  5. Поместите 96-луночные планшеты в среду 37 °C и инкубируйте в течение 1 ч. Измерьте абсорбцию 96-луночных планшетов на длине волны 450 нм с помощью микропланшетного ридера.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать внутригрупповых различий, планшеты лунок перед обнаружением охлаждали до комнатной температуры.
  6. Рассчитайте жизнеспособность клеток, индуцированную различными концентрациями CoCl2, по формуле [OD Drug - ODBlank] / [OD Control-ODBlank] x 100%. Выберите концентрацию CoCl2 со значимой разницей в снижении жизнеспособности клеток по сравнению с контрольной группой для следующего эксперимента.

3. Сборка модели

  1. Промойте верхнюю камеру 24-луночных планшетов с помощью PBS.
    Примечание: Клетки росли и сливались в нижней части верхней камеры 24-луночной пластины, и постепенно образовывались плотные соединения между клетками, играющие барьерную роль. Если эндотелиальные клетки, использованные в некоторых исследованиях, не способны самостоятельно сформировать полный барьер на ПЭТ-мембранах, перед инокуляцией клеток необходимо покрыть мембраны раствором коллагена внутривенно.
  2. Смешайте клетки bEnd.3 со средой DMEM для получения суспензии плотностью 5 x 105 клеток/мл с помощью вихревого смесителя. Затем высевают 200 мкл клеточной суспензии bEnd.3 на ПЭТ-мембрану в верхней камере 24-луночного планшета (размер пор мембраны 0,33см2, 0,4 мкм).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Пилотное исследование этого протокола не обнаружило различий в результатах при использовании от 5 до 10 пассажей клеток bEnd.3 для экспериментов. Чтобы убедиться в вероятности успешного моделирования, пожалуйста, обратитесь к интервалу номеров ячеек этого протокола.
  3. Добавьте 1200 мкл полной среды в нижнюю камеру планшета, чтобы обеспечить стабилизацию осмотического давления верхней и нижней камер. Существуют различия в объеме добавляемой среды в зависимости от типа; Убедитесь, что уровень жидкости в верхней и нижней камерах находится на одном уровне.
  4. Меняйте среду верхней и нижней камеры в фиксированное время каждый день и одновременно контролируйте значение сопротивления.
    1. При смене среды целостность клеточного слоя будет нарушена искусственным прикосновением или чрезмерным движением. Чтобы избежать описанной выше ситуации, медленно удаляйте старую среду с одной стороны пипеткой с отрицательным давлением и медленно добавляйте новую среду вдоль стенки во время обмена жидкости.

4. Измерение TEER

  1. Перед началом работы поместите резистор, 5% раствор гипохлорита натрия, 75% раствор этанола и раствор двойной дистиллированной воды в сверхчистый стол. Включите УФ-облучение на 30 минут, чтобы устранить остаточные бактерии и болезнетворные микроорганизмы.
  2. Поместите электроды в 5% раствор гипохлорита натрия при медленном встряхивании на 3–5 с, а затем погрузите в 75% этанол на 15 мин. Наконец, переведите на PBS или раствор двойной дистиллированной воды до использования.
  3. Включите переключатель на задней панели измерителя резисторов, нажмите кнопку Select Plate (Выбрать пластину ) в соответствии с параметрами, приведенными в таблице 1, и выберите 24-луночную пластину.
  4. В соответствии с потребностями операции выберите подходящую последовательность обнаружения. В данном исследовании мы выбрали процедуру А1 .
  5. Вставьте резистор кОм в правый штекер для калибровки прибора. Если результат калибровки составляет 1000 ± 5 Ω, считайте точность прибора нормальной.
    1. Если результат калибровки не равен 1000 Ω, нажмите Единицы измерения режима на главном интерфейсе, чтобы выбрать OHMS, а затем нажмите Калибровка на главном экране, чтобы повторно откалибровать прибор.
  6. Вытащите кОм-резистор с правой стороны и замените измерительный электрод соединительным проводом.
  7. Поместите электрод в 24-луночную пластину без затравочных ячеек вертикально и нажмите Blank Handling (Обработка заготовки ) на главном экране прибора. Фоновое значение сопротивления пластины без засеянных ячеек составляет около 134,4 Ω.
  8. Вставьте два электрода в верхнюю и нижнюю камеры затравленной пластины с ячейками так, чтобы слой ячеек находился между ними, а затем запишите значение сопротивления, осторожно наступив на педаль.
    1. Следите за тем, чтобы электрод не касался ячеек в верхней камере и нижней части нижней камеры. Время замачивания электрода в растворе не влияет на величину сопротивления, и необходимо только убедиться, что электрод находится в правильном положении.
  9. Получите значения TEER (Омсм2) путем умножения значений электрического сопротивления (Ом) на нижнюю площадь (см2) верхней камеры, как в уравнении:
    TEER (Омсм 2) = Сопротивление (Ω) x Sвставка (см2)
  10. Нарисуйте линейный график TEER-Time (в днях). Когда значение сопротивления не увеличивается с течением времени (измеряется в течение нескольких дней), считайте, что клетка образовалась как барьер.
    NOTW: Монослойная BBB-модель клеток bEnd.3 будет успешно построена путем культивирования клеток bEND.3 с параметрами, указанными в этом исследовании, в течение примерно 6 дней. TEER модели монослоя ячейки bEnd.3 варьировал от 16,49 ± 2,12Омсм2 до 27,59 ± 1,50Омсм2 в течение 6 дней (n=8, среднее ± SD).

5. Разрушение барьеров и статистический анализ

  1. По кривой TEER - время выберите скважины с барьерной функцией и разделите их на контрольную группу и группу CoCl2 (n = 4).
  2. Добавьте питательную среду и питательную среду, содержащую 300 мкМ CoCl2 (200 мкл), в верхнюю камеру контрольной группы и CoCl2 соответственно.
  3. Определяют значения резистентности контрольной и CoCl2 групп через 12 ч и 24 ч инкубации при 37 °C, используя процедуру, описанную в шаге 4.
  4. Используйте коммерческое программное обеспечение для картирования тренда значений TEER барьера клеток, культивируемых с 300 мкМ CoCl2 или без него.
  5. Используйте программное обеспечение для статистического анализа для анализа разницы в значениях резистентности между клетками, обработанными CoCl2, и нормальными клетками (n=4, *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Этот протокол позволял регистрировать изменения значений сопротивления клеток по параметрам, заданным в трансэндотелиальном резисторном измерителе. Жизнеспособность клеток bEnd.3 (количество живых клеток), обработанных различными концентрациями CoCl2 , проводили скрининг с помощью анализа CCK-8. Большее повреждение клеток, вызванное CoCl2 , было представлено более низкой жизнеспособностью клеток. Мы обнаружили, что 300 мкМ CoCl2 были значимыми цитотоксическими in vitro, и эта кон...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Один из наиболее развитых органов тела, мозг контролирует широкий спектр сложных физиологических процессов, включая память, познание, слух, обоняниеи движение. Мозг является одним из самых сложных и больных органов человеческого тела одновременно. Возникновение многих расстройств центральной нервной системы демонстрирует тенденцию к росту из года в год из-за таких факторов, как загрязнение воздуха, нерегулярный режим питания и другие факторы 27,28,29.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы высоко ценим финансовую поддержку со стороны Национального фонда естественных наук Китая (82274207 и 82104533), Программы ключевых исследований и разработок Нинся (2023BEG02012) и Проекта содействия научным исследованиям Xinglin Университета ТКМ в Чэнду (XKTD2022013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
24-луночный трансвеллерный планшетCorning (Corning 3470, 0,33 см<суп>2, 0,4 &; m)10522023
75 % этанолаChengDu Chron Chemicals Co,. Ltd2023052901
96-луночный планшетGuangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd220412-078-B
bEnd.3 cellsHunan Fenghui Biotechnology Co., LtdCL0049
Набор для подсчета клеток-8 (CCK-8)Boster Biological Technology Co., LtdBG0025
Чашка для клеточных культур (100 мм)Zhejiang Sorfa Life Science Research Co., Ltd1192022
Хлорид кобальта (CoCl2)Sigma15862
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
модифицированная орлиная среда Dulbecco (1x)Gibco ThermoFisher Scientific8121587
фетальная бычья сывороткаGibco ThermoFisher Scientific2166090RP
GraphPad Prism программное обеспечениеПрограммное обеспечение GraphPad9.0.0(121)
Matrigel (содержит коллаген внутривенно)MedChemexpressHY-K6002
Молекулярные устройстваSpectraMax iD5
OriginPro 8 программное обеспечениеOriginLab Corporationv8.0724(B724)
Пенициллин-стрептомицин (100x)Boster Biological Technology Co., Ltd17C18B16
Фосфатно-солевой буфер (PBS, 1x)Gibco ThermoFisher Scientific8120485
гипохлорит натрияChengDu Chron Chemicals Co,. ООО2022091501
Трансмембранный измеритель сопротивленияWorld Precision Instruments ОООВОМ3 (версия 1.6)
Считыватель микропланшетов

Ссылки

  1. Kim, Y., et al. CLEC14A deficiency exacerbates neuronal loss by increasing blood-brain barrier permeability and inflammation. J Neuroinflammation. 17 (1), 48(2020).
  2. Bagchi, S., et al. In-vitro blood-brain barrier models for drug screening and permeation studies: an overview. Drug Des Devel Ther. 13, 3591-3605 (2019).
  3. Daneman, R., Prat, A. The blood-brain barrier. Cold Spring Harb perspect Biol. 7 (1), 020412(2015).
  4. Profaci, C. P., Munji, R. N., Pulido, R. S., Daneman, R. The blood-brain barrier in health and disease: Important unanswered questions. J Exp Med. 217 (4), 20190062(2020).
  5. Pardridge, W. M. Blood-brain barrier delivery. Drug Discov Today. 12 (1-2), 54-56 (2007).
  6. Eigenmann, D. E., et al. Comparative study of four immortalized human brain capillary endothelial cell lines, hCMEC/D3, hBMEC, TY10, and BB19, and optimization of culture conditions, for an in vitro blood-brain barrier model for drug permeability studies. Fluids Barriers CNS. 10 (1), 33(2013).
  7. Gajdács, M. The concept of an ideal antibiotic: Implications for drug design. Molecule. 24 (5), 892(2019).
  8. Stanimirovic, D. B., Bani-Yaghoub, M., Perkins, M., Haqqani, A. S. Blood-brain barrier models: in vitro to in vivo translation in preclinical development of CNS-targeting biotherapeutics. Expert Opin Drug Discov. 10 (2), 141-155 (2015).
  9. Helms, H. C., et al. In vitro models of the blood-brain barrier: An overview of commonly used brain endothelial cell culture models and guidelines for their use. J Cereb Blood Flow Metab. 36 (5), 862-890 (2016).
  10. Özyurt, M. G., Bayir, E., DoĞan, Ş, ÖztÜrk, Ş, Şendemİr, A. Coculture model of blood-brain barrier on electrospun nanofibers. Turk J Biol. 44 (4), 121-132 (2020).
  11. Kim, W., et al. Functional validation of the simplified in vitro 3D Co-culture based BBB model. Biochem Biophys Res Commun. 625, 128-133 (2022).
  12. Aazmi, A., et al. Vascularizing the brain in vitro. iScience. 25 (4), 104110(2022).
  13. Burkhart, A., et al. Transfection of brain capillary endothelial cells in primary culture with defined blood-brain barrier properties. Fluids Barriers CNS. 12, 19(2015).
  14. Campisi, M., et al. 3D self-organized microvascular model of the human blood-brain barrier with endothelial cells, pericytes and astrocytes. Biomaterials. 180, 117-129 (2018).
  15. Peng, Y., et al. Neuroinflammatory in vitro cell culture models and the potential applications for neurological disorders. Front Pharmacol. 12, 671734(2021).
  16. Secker, P. F., Schlichenmaier, N., Beilmann, M., Deschl, U., Dietrich, D. R. Functional transepithelial transport measurements to detect nephrotoxicity in vitro using the RPTEC/TERT1 cell line. Arch Toxicol. 93 (7), 1965-1978 (2019).
  17. Nazari, H., et al. Advances in TEER measurements of biological barriers in microphysiological systems. Biosens Bioelectron. 234, 115355(2023).
  18. Nicolas, A., et al. High throughput transepithelial electrical resistance (TEER) measurements on perfused membrane-free epithelia. Lab Chip. 21 (9), 1676-1685 (2021).
  19. Yang, Z., et al. Autophagy alleviates hypoxia-induced blood-brain barrier injury via regulation of CLDN5 (claudin 5). Autophagy. 17 (10), 3048-3067 (2021).
  20. Feng, S., et al. RhoA/ROCK-2 pathway inhibition and tight junction protein upregulation by catalpol suppresses lipopolysaccaride-induced disruption of blood-brain barrier permeability. Molecules. 23 (9), (2018).
  21. Sulhan, S., Lyon, K. A., Shapiro, L. A., Huang, J. H. Neuroinflammation and blood-brain barrier disruption following traumatic brain injury: Pathophysiology and potential therapeutic targets. J Neurosci Res. 98 (1), 19-28 (2020).
  22. Liu, B., et al. Notoginsenoside R1 intervenes degradation and redistribution of tight junctions to ameliorate blood-brain barrier permeability by Caveolin-1/MMP2/9 pathway after acute ischemic stroke. Phytomedicine. 90, 153660(2021).
  23. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).
  24. Muñoz-Sánchez, J., Chánez-Cárdenas, M. E. The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model. J Appl Toxicol. 39 (4), 556-570 (2019).
  25. Jiang, S., et al. Salidroside attenuates high altitude hypobaric hypoxia-induced brain injury in mice via inhibiting NF-κB/NLRP3 pathway. Eur J Pharmacol. 925, 175015(2022).
  26. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240(2022).
  27. Thiebaut de Schotten, M., Forkel, S. J. The emergent properties of the connected brain. Science. 378 (6619), 505-510 (2022).
  28. Tu, W. J., et al. Estimated burden of stroke in China in 2020. JAMA Netw Open. 6 (3), 231455(2023).
  29. Alzheimers Dement. Alzheimer's disease facts and figures. Alzheimers Dement. 17 (3), 327-406 (2021).
  30. Wang, R., et al. Neutrophil extracellular traps promote tPA-induced brain hemorrhage via cGAS in mice with stroke. Blood. 138 (1), 91-103 (2021).
  31. Liu, X. X., et al. Endothelial Cdk5 deficit leads to the development of spontaneous epilepsy through CXCL1/CXCR2-mediated reactive astrogliosis. J Exp Med. 217 (1), 20180992(2020).
  32. Chen, X., et al. Modeling Sporadic Alzheimer's Disease in Human Brain Organoids under Serum Exposure. Adv Sci (Weinh). 8 (18), 2101462(2021).
  33. Qi, D., Lin, H., Hu, B., Wei, Y. A review on in vitro model of the blood-brain barrier (BBB) based on hCMEC/D3 cells. J Control Release. 358, 78-97 (2023).
  34. Artus, C., et al. The Wnt/planar cell polarity signaling pathway contributes to the integrity of tight junctions in brain endothelial cells. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (3), 433-440 (2014).
  35. Sivandzade, F., Cucullo, L. In-vitro blood-brain barrier modeling: A review of modern and fast-advancing technologies. J Cereb Blood Flow Metab. 38 (10), 1667-1681 (2018).
  36. Galla, H. J. Monocultures of primary porcine brain capillary endothelial cells: Still a functional in vitro model for the blood-brain-barrier. J Control Release. 285, 172-177 (2018).
  37. Srinivasan, B., Kolli, A. R. Transepithelial/transendothelial electrical resistance (TEER) to measure the integrity of blood-brain barrier. Blood-Brain Barrier. 142, 99-114 (2019).
  38. Liang, Y., Yoon, J. Y. In situ sensors for blood-brain barrier (BBB) on a chip. Sens Actuators Rep. 3, 100031(2021).
  39. Ozgür, B., Helms, H. C. C., Tornabene, E., Brodin, B. Hypoxia increases expression of selected blood-brain barrier transporters GLUT-1, P-gp, SLC7A5 and TFRC, while maintaining barrier integrity, in brain capillary endothelial monolayers. Fluids Barriers CNS. 19 (1), (2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

bEnd 3in vitro24

Похожие статьи