Обучение лабораторных кроликов совершенствованию рутинных процедур содержания

Краткое содержание

Были разработаны протоколы обучения, включающие положительное подкрепление для рутинных процедур содержания кроликов, которые оказались успешными, так как кролики достоверно демонстрировали обученное поведение при еженедельном общем осмотре. Подбирать кроликов с помощью транспортировочного ящика было менее отвратительно, чем обычная техника обработки.

Аннотация

Неагрессивные методы обращения и обучения лабораторных животных необходимы для облегчения экспериментальных и рутинных процедур содержания, улучшая как благополучие животных, так и качество научных исследований. Обучение с помощью кликера использовалось для разработки протоколов обучения кроликов, чтобы усовершенствовать стрессовые рутинные процедуры содержания, обычно связанные с поднятием (т.е. поднятием с пола)/удержанием (т.е. удержанием на руках человека) их. Тринадцать самок новозеландских белых кроликов обучались в течение трех недель. Все кролики выучили заранее определенное целевое поведение: они следовали за целевой палочкой, запрыгивали на весы, входили в транспортировочный ящик и вставали на дыбы, положив передние лапы на руку дрессировщика. Кроме того, десять животных прыгали с пола на колени сидящего дрессировщика и позволяли дрессировщику отрывать лапы от поверхности, сидя на коленях дрессировщика. Для некоторых лиц протоколы должны были быть адаптированы с помощью дополнительных промежуточных шагов. В конце обучения кролики достоверно демонстрировали ожидаемое целевое поведение даже после коротких и длительных перерывов в тренировках. За редким исключением, знакомый человек, не являющийся дрессировщиком, мог получить от кроликов целевое поведение (генерализация), хотя для обобщения требовались дальнейшие сеансы. В тесте добровольного подхода кролики предпочитали взаимодействовать с тренером в^1-м испытании, но проводили столько же времени с незнакомым человеком, сколько и с тренером во^2-м испытании. Поведенческие наблюдения показали, что поднятие кроликов с помощью транспортировочного ящика, как описано в протоколе, вместо того, чтобы удерживать их загривком и поднимать на руку, было менее отвратительным. В целом, протоколы обучения были осуществимы и могут служить стратегией совершенствования в помещениях для лабораторных животных. В интересах благополучия животных протоколы дрессировки должны применяться везде, где это возможно.

Введение

В период с 2015 по 2019 год в Европейском союзе (и Норвегии) в научных целях использовалось более 49 миллионов животных; Из них 1 745 037 (3,5 %) были кроликами¹. Кролики в основном используются для нормативных исследований (например, контроль качества, токсичность и другие испытания на безопасность, включая фармакологию) и рутинного производства биологических веществ (например, продуктов на основе крови)². Хотя предпринимаются усилия по замене экспериментов на животных методами без животных, использование животных по-прежнему необходимо для некоторых из этих целей. Всякий раз, когда эксперимент на животных не может быть заменен, крайне важно сократить количество животных и улучшить экспериментальные условия, а также условия содержания и содержания, чтобы свести к минимуму страдания. Рассел и Берч описали эту стратегию как принцип 3R (заменить, сократить, улучшить) в 1959 году3^{, а в} 2010 году он был реализован в Директиве 2010/63/ЕС о защите лабораторных животных, используемых в научных целях⁴. Роль утонченности, которую иногда называют «Золушкой» 3R⁵, приобретает все большее значение. В то время как замена и сокращение являются долгосрочными стратегиями, направленными на достижение конечной цели Директивы по полной замене экспериментов на животных, усовершенствование позволяет немедленно^{улучшить благополучие животных}, что, в свою очередь, имеет потенциал для улучшения научного качества^. Важными частями совершенствования являются обращение с животными и дрессировка, как указано в Приложении III к Директиве 2010/63/ЕС. Директива предусматривает, что животноводческие учреждения должны разрабатывать программы привыкания и обучения лабораторных животных, адаптированные к видам, процедуре и проекту⁴. В Приложении А к ETS No 123 говорится, что персонал лабораторных животных тратит время на «беседу с животными, их обрабатывание, дрессировку и уход»⁷.

Некоторые погрузочно-разгрузочные работы вызывают стресс, особенно у наземных животных-добычи, таких как кролики. Например, их загоняют в угол, удерживают (т.е. захватывают человеком, держат на руках или обездвиживают с помощью устройства) и поднимают (т.е. поднимают с пола) для медицинского осмотра или экспериментальных процедур⁸. Опрос, посвященный домашним кроликам, показал, что 57-61% из них испытывали трудности при подъеме ^9,10, а некоторые даже проявляли агрессию, связанную со страхом (т.е. кусание)¹¹. Это подчеркивает необходимость бережного обращения и методов обучения. На примере других мелких млекопитающих, таких как мыши, уже было продемонстрировано, что мягкие методы обращения снижают беспокойство. Более того, мягкое обращение в сочетании с обучением снижает стресс, беспокойство и депрессивное поведение у мышей¹³. У макак-резусов и шимпанзе физиологические показатели, связанные со стрессом, были менее затронуты, когда они были предварительно обучены процедуре^14,15. Можно предположить, что если животное может добровольно участвовать в обучении, оно может активно участвовать в ситуации и контролировать ее, что улучшает благополучие животного, а также может способствовать получению более надежных и надежных^{научных данных.}

Многие процедуры дрессировки животных основаны на принципах оперантного обусловливания, в частности, на использовании положительного подкрепления и формировании 17,18,19. Оперантное обусловливание требует, чтобы животное вызывало поведение, которое затем может быть увеличено или уменьшено²⁰. Существует четыре общих случая, которые используются для описания оперантного обусловливания: положительное и отрицательное подкрепление, а также положительное и отрицательное наказание^21,22. У кроликов позитивное наказание используется, когда человек приближается (нежелательный стимул) к животному, чтобы отвести его от^{определенного места или} к нему. В контексте обращения с кроликом на смотровом столе примером отрицательного подкрепления является снятие давления (нежелательного стимула) на тело кролика, когда кролик остается неподвижным; Примером негативного наказания является лишение пищевого вознаграждения (желаемого стимула), когда кролик начинает бороться. Ни положительное/отрицательное наказание, ни отрицательное подкрепление не рекомендуются при дрессировке животных. Наказание вызывает негативные эмоциональные аффекты²⁴, такие как дистресс, как показано у собак²⁵. Вместо этого положительное подкрепление должно быть методом выбора при дрессировке животных^25,26. Дрессировка с положительным подкреплением (PRT) означает, что желательный стимул (например, пищевое вознаграждение) предоставляется после того, как животное продемонстрировало желаемое поведение, что увеличивает вероятность того, что животное снова будет демонстрировать желаемое поведение^{в будущем.} PRT часто включает в себя применение условного подкрепления. Условное подкрепление (вторичное подкрепление) обычно представляет собой нейтральный стимул, такой как звук, который животное учится ассоциировать с безусловным подкреплением (первичным подкреплением, например, вознаграждением за еду)²⁸. После того, как животное демонстрирует желаемое поведение, немедленно предъявляется условное поощрение, за которым следует представление пищевого вознаграждения²⁶. Хорошо известным примером PRT является обучение кликеру, где кликер используется для создания щелчка в качестве вторичного подкрепления²⁶.

Обучение должно следовать предсказуемым шаблонам, что достигается путем разработки протокола обучения. Протокол обучения описывает, как можно шаг за шагом достичь целевого поведения (т.е. формирование поведения), в то время как каждый шаг определяется объективными критериями и должен быть легко^{выполнен.} Если обучение проводится по определенному протоколу, возможно, что персонал лабораторных животных чередуется с обучением животных. Важно отметить, что персонал должен знать принципы обучения и методы обучения, чтобы правильно их применять^. Дрессировка животных часто включает в себя формирование поведения. Формирование поведения вручную было намеренно впервые использовано Скиннером и его коллегами в начале 1940-х годов^. Напротив, в предыдущей работе Скиннер скорее сосредоточился на «внесении небольших изменений в физическую среду для реализации программы последовательного приближения»²⁹. В статье, опубликованной в Scientific American, он объяснил, что подкрепление поведения увеличивает вероятность того, что поведение будет повторяться, что «позволяет формировать поведение животного почти так же, как скульптор формирует кусок глины»³⁰. С тех пор формообразование приобретает все большее значение для животных в неволе 29,30,31,32. Для воспроизведения и совершенствования протоколов формирования крайне важно проводить оценку протоколов систематическим и объективным образом 33,34,35,36.

Недавно опубликованный систематический обзор и мета-анализ Pfaller-Sadovsky et al. показали, что условное подкрепление чаще всего изучалось на лошадях и собаках, хотя кошки, крупный рогатый скот, рыбы, козы и приматы также были^{исследованы.} В лабораторных исследованиях на животных PRT широко используется для нечеловекообразных приматов 38,39,40 и собак^41,42. Кроме того, свиньи⁴³, козы⁴⁴ и даже мелкие млекопитающие, такие как мыши¹³ и крысы 45,46,47, были успешно обучены с помощью кликера в лабораторных условиях. Насколько известно авторам, о введении ГВП лабораторным кроликам сообщалось лишь изредка⁴⁸; Существующая рецензируемая литература, опубликованная несколько десятилетий назад, устарела и не соответствует критериям современных этических исследований. Хотя немногие нерецензируемые фрагменты информации свидетельствуют о том, что кролики могут быть успешно обучены с помощью PRT⁴⁹, по-видимому, не хватает знаний о подходящих протоколах обучения кроликов, которые содержатся в лабораторных помещениях для животных. Основные причины могут быть разными. Например, используемые методы обучения могут быть подробно не описаны в исследовательских статьях или данные генерируются для исследований в области регулирования и, следовательно, не публикуются. Более того, кролики могут не быть основным объектом исследований по совершенствованию, поскольку другие виды, такие как мыши и крысы, чаще используются в исследованиях. Поскольку кролики могут очень хорошо маскировать стресс и дискомфорт, их негативное эмоциональное состояние при обращении с ними часто может оставаться незамеченным. Размер кролика позволяет людям удерживать этих животных во время процедур, в то время как другие виды, такие как нечеловекообразные приматы, нельзя держать руками для подобных вмешательств, не получив серьезных травм. Однако эти факты не должны препятствовать разработке или обмену протоколами ПРТ для лабораторных кроликов.

Что касается потенциальных преимуществ ГВП, были предприняты первые попытки восполнить пробел в знаниях о подходящих протоколах обучения лабораторных кроликов. Для облегчения рутинных процедур, таких как обработка, медицинские осмотры и взвешивание, были разработаны протоколы обучения и оценена их осуществимость для самок новозеландских белых кроликов. Были проведены сравнения, чтобы оценить, является ли альтернативная техника обращения, описанная в тренировочных протоколах, менее отвратительной, чем традиционная техника дрессировки, и могут ли тренировочные протоколы служить мерами совершенствования. На рисунке 1 показан график проведения настоящего исследования.

Содержание животных

Тринадцать самок новозеландских белых кроликов были получены из коммерческих источников (поступление в животноводческое учреждение в возрасте примерно семи недель). Животные были свободны от всех вирусных, бактериальных и паразитарных патогенов, перечисленных в рекомендациях FELASA⁵¹. Защитная одежда и снаряжение (перчатки, маски, сетки для волос) были надеты при выполнении шагов настоящего протокола. Группа из шести и группа из семи животных были размещены вместе в напольном загоне площадью 2,8 м × 2,8 м (напольное содержание) соответственно. Пол был покрыт тонким и слоеным деревянным постельным материалом (автоклавным). Кроме того, поверх подстилки рассыпали материал для гнездования и бумажную вату. Укрытиями служили три пластиковых дома с двумя проемами каждый (37 см × 60 см; высота 30 см) и пластиковый туннель (длина: 58 см; диаметр: 16 см). Кроме того, были предоставлены предметы обогащения, такие как деревянные грызущие блоки, шарики сена и ивы, а также шарики для закусок, наполненные пищевыми гранулами, которые выпадают при перемещении мяча. Кролики имели свободный доступ к водопроводной воде, гранулированному корму, автоклавному сену и соломе. Дополнительная информация о продуктах питания и обогащении приведена в Таблице материалов. Комнату для животных убирали по четвергам.

Кроликов содержали в стандартных условиях (комнатная температура и относительная влажность, указанные как среднее значение ± стандартное отклонение: 20,3 ± 0,4 °C и 50 ± 5 %) по циклу свет:темнота 12:12 ч (искусственное освещение с дополнительным количеством дневного света). Радио включали за 30 минут до начала световой фазы примерно на 8 часов, чтобы приучить кроликов к окружающим шумам.

Протокол

Содержание животных было одобрено Берлинским государственным органом ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", номер разрешения: ZH3 - Немецкий федеральный институт оценки рисков, Берлин). Протоколы обучения были разработаны в рамках рутинного животноводства для совершенствования таких процедур, как обработка, проверка состояния здоровья и взвешивание. Поскольку протоколы обучения не причиняли никакой боли, страданий или вреда, а все наблюдения проводились в контексте обычного животноводства, это исследование не рассматривалось как эксперимент на животных в соответствии с европейским законодательством.

1. Общие требования к обучению

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие пункты, как правило, необходимы для дрессировки животных, независимо от настоящего протокола.

1. Четко пометьте животных для идентификации.
2. Убедитесь, что у вас есть награда высокого качества, например, очень вкусная еда.
3. Определите план дрессировки, включающий все шаги к целевому поведению, т.е. желаемому поведению, которое должно демонстрировать животное.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение формируется шаг за шагом, при этом каждый шаг определяется объективными критериями и должен быть легко выполним.
4. Определите, должны ли животные успешно выполнить 80% или 100% шагов дрессировки, прежде чем переходить к следующему шагу.
5. Подготовьте документацию (например, дополнительную таблицу 1).
6. Не дрессируйте животных в спешке и следите за манерами, тоном голоса и скоростью движений, т.е. разговаривайте мягко и спокойно, двигайтесь медленно и предсказуемо.
7. Протестируйте шаги, которые были обучены в предыдущем обучении.
8. Не дрессируйте животное, если общее состояние здоровья животного нарушено и/или животное не заинтересовано во взаимодействии с дрессировщиком.

2. Тренировочные программы для настоящего протокола

ПРИМЕЧАНИЕ: Для настоящего протокола были определены следующие тренировочные процедуры.

1. Установите манеж для дрессировки в помещении/загоне для животных (рис. 2) и, в зависимости от целевого поведения, которое необходимо дрессировать, поместите весы или транспортировочный бокс (пол 30 см × 50 см; дверь 27 см × 25,5; с отверстием в крышке 16 см × 39 см) в манере.
2. Поместите весы и транспортировочный ящик за пределами арены, чтобы познакомить кроликов с этими новыми объектами до того, как будут обучены целевое поведение «взвешивание» и «транспортировочный ящик».
3. Для определения целевого поведения (см. шаги 6-9) выведите кролика на арену дрессировки, как описано в шаге 5.7.
4. Сядьте на пол или используйте низкий табурет/ступеньку, чтобы сесть на тренировочной арене.
5. Тренируйте целевое поведение одно за другим, в порядке, описанном в протоколе, а не одновременно. Сделайте исключение, если животное не выучило шаг целевого поведения в течение двух дней подряд - в этом случае одновременно тренируйте следующее целевое поведение. Измените порядок целевого поведения, если это облегчает процесс обучения человека.
6. После привыкания и знакомства с кликером начинайте тренировать всех животных на^1-м шаге поведения цели «следование за целью» (т.е. мяч на конце джойстика-мишени определяется как мишень). Обратите внимание, что в зависимости от их индивидуальных результатов в этот день они могут выполнять разные тренировочные шаги. Продолжайте обучение в соответствии с индивидуальным прогрессом животных в последующие дни.
7. Запланируйте тренировку (например, примерно 30 минут для группы из шести-семи животных) на каждый рабочий день в течение недели.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Тренировка начинается, когда дрессировщик находится в помещении для животных/загоне и готов начать дрессировку. Сеанс заканчивается, когда либо ни один из кроликов не участвует в обучении (больше), либо все кролики достигли последнего шага обучения целевому поведению, которое должно быть обучено в этом сеансе. Начинайте каждую тренировку с последнего успешного шага протокола. Сеанс состоит по крайней мере из одного или нескольких испытаний на животное.
8. Начните испытание, попросив животное выполнить определенный шаг дрессировки (т.е. шаг 3.1 после того, как кролик научился касаться цели носом/ртом) и закончите испытание, когда животное больше не участвует в дрессировке или животное достигло последнего шага дрессировки целевого поведения, которое необходимо обучить. В конце тренировки откройте тренировочную арену и выведите кролика из арены; Затем держите палку-мишень (мишенью к потолку), а также миску с наградами перед сундуком.
9. Запланируйте обучение перед кормлением, чисткой, лечением или экспериментальными процедурами.
10. Используйте миску с наградами со встроенным кликером (рис. 3, файл дополнительного кодирования 1) и, для некоторых видов поведения целей, дополнительную мишенную палочку.
11. Наполните миску с наградами вкусной едой, например, семенами подсолнечника и лакомствами на основе зерна.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Кролики - листоядные, и эти примеры вознаграждения не являются оптимальными; однако из-за гигиенических ограничений в помещении для лабораторных животных они были лучшей доступной альтернативой для этих животных. По возможности в качестве продовольственного вознаграждения следует отдавать предпочтение свежей зелени. Обратите внимание, что награда является наградой только в том случае, если кролик действительно ее одобряет.
12. Убедитесь, что миска с наградами всегда находится в одном и том же положении, например, перед сундуком, и начинайте перемещать миску с наградой в сторону кроликов только после щелчка. За исключением голевого поведения «встать на дыбы» и «прыгнуть на коленях», держите мишень в одной руке, а миску с наградами в другой руке.
13. Преподнесите награду в том месте, где был нос/рот кролика, когда желаемое поведение было показано правильно.
14. Следите за тем, чтобы кролик съел только небольшое количество пищи при вручении награды.
15. Если кролик демонстрирует желаемое поведение по крайней мере четыре раза в блоке из пяти попыток (80% успеха), переходите к следующему шагу. Если животное не в состоянии выполнить следующий шаг (т.е. не может выполнить шаг более одного раза), вернитесь к предыдущему шагу протокола. Если необходимо было вернуться к предыдущему шагу или кролик не участвует в дрессировке, пересмотрите протоколы дрессировки (например, определите более мелкие шаги дрессировки), выберите другое (более вкусное) вознаграждение за еду или проверьте навыки дрессировки дрессировщика.
16. Если кролик правильно выполняет заключительный этап дрессировки целевого поведения, завершите тренировки для этого кролика в тот же день.
17. Распечатайте лист документации (Дополнительный файл 1), подробные протоколы обучения, а также упрощенные протоколы обучения (Дополнительный файл 2) и прикрепите их к буферу обмена или откройте на планшете. Используйте лист документации, чтобы отметить этапы дрессировки, выполняемые отдельными животными на каждом занятии.

3. Контекстуальное обусловливание/привыкание

ПРИМЕЧАНИЕ: Сеансы контекстного обусловливания/привыкания проводятся ежедневно дрессировщиком и лицами, ухаживающими за животными, в течение примерно 15 минут на группу кроликов в течение пяти дней подряд (с понедельника по пятницу).

1. Мягко разговаривайте с кроликами.
2. Предлагайте вкусные награды.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Имейте в виду, что внезапные изменения в рационе могут вызвать проблемы с пищеварением у кроликов. Поэтому медленно вводите новое вознаграждение за еду.
3. Переместите миску с наградой, наполненную вкусной едой, к кроликам и дайте им поесть из нее.
4. Аккуратно прикасайтесь к кроликам за шею, плечи, спину и круп, не сдерживая их.

4. Представляем кликер

ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение: Подойдите к тренеру и съешьте награду из миски после клика. Цель состоит в том, чтобы кролик ассоциировал пищевое вознаграждение с щелчком, т.е. кролик съедал пищевое вознаграждение после щелчка.

1. Пусть кролик приблизится.
2. Нажмите один раз и переместите миску с наградой к кролику (это называется «щелчок и угощение» или C и T).
3. Повторите шаг 4.2 десять раз. При нажатии в десятый раз подождите секунду до вручения награды и понаблюдайте за поведением кролика.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Если животное ищет награду сразу после щелчка, можно предположить, что обусловливание вторичного подкрепления было успешным.
4. Повторите шаги 4.1.-4.3. на следующий день, если кролик не съел награду за еду после щелчка не менее восьми раз.

5. Следование цели

ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение: Следуйте за целью и коснитесь ее носом/ртом. Целевое поведение в разделах 6-9 является модификацией целевого поведения, представленного в разделе 5.

1. Поместите мишень близко к носу/рту кролика.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Мяч на конце мишени определяется как мишень.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что нос/рот кролика не касается палки в любом неопределенном месте, кроме мяча.
   2. Уберите цель из поля зрения кролика во время награды.
   3. Повторяйте все вышеперечисленные шаги в течение пяти раз, пока кролик успешно не выполнит этот шаг по крайней мере четыре раза из пяти (вероятность успеха 80%).
2. Поместите мишень в другое место, где ее можно коснуться носом/ртом движениями головы, не двигая всем телом.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом, и выполнять шаги 5.1.2 и 5.1.3.
3. Поместите мишень на более широком расстоянии от кролика и дайте кролику потянуться к ней.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом, и выполнять шаги 5.1.2 и 5.1.3.
4. Еще больше увеличьте расстояние между целью и кроликом, требуя, чтобы животное сделало один прыжок, чтобы добраться до цели.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом, и выполнять шаги 5.1.2 и 5.1.3.
5. Поместите мишень прямо перед носом/ртом кролика, чтобы кролик мог коснуться цели, а затем медленно отодвиньте мишень от кролика. Убедитесь, что кролик должен сделать переменное количество прыжков, чтобы следовать за целью.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В блоке из пяти попыток^1-й,^2-й,^3-й,^4-й и^5-й раз кролик получает вознаграждение после 2, 1, 2, 3 и 2 прыжков соответственно (в среднем: после 2 прыжков).
   1. С и Т, когда кролики сделали необходимое количество хмеля, и следуют шагам 5.1.2 и 5.1.3.
6. Повторите шаг 5.5 и переместите цель через коридор между двумя объектами.
   ПРИМЕЧАНИЕ: На этом этапе два объекта, такие как туннели, размещаются параллельно друг другу и образуют коридор.
   1. С и Т, когда кролики сделали необходимое количество прыжков, и следуйте шагам 5.1.2 и 5.1.3.
7. Повторите шаг 5.5 и переместите мишень в сторону тренировочной арены так, чтобы кролик вышел на нее.
   1. С и Т, когда кролики сделали необходимое количество прыжков, и следуйте шагам 5.1.2 и 5.1.3.

6. Взвешивание

ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение: Оставайтесь на весах не менее одной секунды. Если поверхность весов слишком скользкая, сверху можно положить нескользящую накладку. Однако некоторые кролики склонны грызть подушечку.

1. Ведите кролика мишенной палочкой к весам, как описано в шаге 5.5.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом.
   2. Уберите цель из поля зрения кролика во время награды.
   3. Повторяйте все вышеописанные шаги пять раз, пока кролик успешно не выполнит этот шаг по крайней мере четыре раза из пяти (вероятность успеха 80%).
2. Переместите мишень немного выше чешуи так, чтобы кролик наступил на нее передними лапами, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и следовать шагам 6.1.2 и 6.1.3.
3. Переместите мишень немного за центр шкалы так, чтобы кролик наступил на нее передними лапами и вытянулся над шкалой, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и следовать шагам 6.1.2 и 6.1.3.
4. Переместите мишень дальше за центр весов так, чтобы кролик наступил на весы передними и задними лапами, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и следовать шагам 6.1.2 и 6.1.3.
5. Подведите кролика на весы, как описано в 4.4. и подождите несколько секунд перед C и T.
   ПРИМЕЧАНИЕ: На этом этапе вознаграждайте кролика после того, как он посидит на весах в течение разного количества времени. В блоке из пяти попыток,^1-й,^2-й,^3-й,^4-й и^5-й раз, кролик получает вознаграждение через 0,5, 1,0, 2,0, 0,5 и 1,0 секунды соответственно (в среднем: 1,2 с). Пока кролик остается неподвижным в течение этого времени, вес можно считать с весов. Если весам требуется больше времени для стабилизации и измерения веса, увеличьте время сидения животного на весах.
   1. С и Т и следовать шагам 6.1.2 и 6.1.3.

7. Вход в транспортировочный бокс

ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение: Вход и выход из транспортной коробки. Для тренировки используйте транспортировочный ящик (пол 30 см × 50 см; дверь 27 см × 25,5 см) с отверстием в крышке (16 см × 39 см), дно которого покрыто загрязненным подстилочным материалом.

1. Ведите кролика с помощью целевой палки к коробке, как описано в шаге 5.5.
   1. C и T, когда кролик находится перед входом в коробку.
   2. Уберите цель из поля зрения кролика во время награды.
   3. Повторите все вышеописанные шаги пять раз, пока кролик не выполнит задание успешно не менее четырех раз из пяти (вероятность успеха 80%).
2. Проведите мишень через отверстие крышки и переместите его в коробку, тем самым мотивируя кролика войти в коробку передними лапами.
   1. С и Т и выполнить шаги 7.1.2 и 7.1.3.
3. Выполните шаг 7.2 и заведите кролика в коробку (т.е. все передние и задние лапы вошли в коробку).
   1. С и Т и выполнить шаги 7.1.2 и 7.1.3.
4. Выполните шаг 7.3 и закройте дверцу коробки на несколько секунд. Затем снова откройте дверь.
   1. С и Т и выполнить шаги 7.1.2 и 7.1.3.
5. Выполните шаг 7.3 и закройте дверцу коробки. Аккуратно приподнимите ящик немного (т.е. на несколько сантиметров над полом). Поставьте коробку обратно на пол и откройте дверцу.
   1. С и Т и выполнить шаги 7.1.2 и 7.1.3.
6. Выполните шаг 7.5. Затем выведите кролика с мишенью палкой из коробки.
   1. С и Т и выполнить шаги 7.1.2 и 7.1.3.

8. Выращивание

ПРИМЕЧАНИЕ: Поведение в воротах: Положите передние лапы на ладонь во время вставания на дыбы. Во время тренировки держите в одной руке палку-мишень и миску с наградами.

1. Поместите мишень над головой кролика так, чтобы кролик вытянул нос вверх, чтобы коснуться цели носом/ртом, в то время как все лапы остаются на земле.
   1. С и Т.
   2. Уберите цель из поля зрения кролика во время награды.
   3. Повторяйте все вышеописанные шаги пять раз, пока кролик успешно не выполнит этот шаг по крайней мере четыре раза из пяти (вероятность успеха 80%).
2. Поместите мишень над головой кролика, как описано в шаге 8.1. После того, как кролик вытянул нос вверх, переместите мишень дальше вверх, чтобы кролик оторвал передние лапы от земли и коснулся цели носом/ртом.
   1. С и Т и выполнить шаги 8.1.2 и 8.1.3.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если кролик не выполняет 8.2, после 8.2 можно добавить промежуточный шаг. Для этого следуйте 8.2, а затем подойдите и коснитесь передних лап кролика (ладонная поверхность) ладонью свободной руки. С и Т и выполнить шаги 8.1.2 и 8.1.3.
3. Положите ладонь свободной руки перед кроликом и переместите мишень над головой кролика так, чтобы кролик положил передние лапы на руку, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. C и T через одну секунду и выполнить шаги 8.1.2 и 8.1.3.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В то время как передние лапы лежат на руке дрессировщика, брюшную полость кролика можно визуально осмотреть.

9. Прыжки на круге

ПРИМЕЧАНИЕ: Целевое поведение: Запрыгивайте на колени тренера и оставайтесь на месте, пока к вам прикасаются. Для шагов 9.5-9.9 держите мишень и миску для наград в одной руке, так как одна рука должна касаться кролика.

1. Подведите кролика с целевой палкой к тренажеру, как описано в пункте протокола 5.5.
   1. C и T, когда кролик касается цели носом/ртом.
   2. Уберите цель из поля зрения кролика во время награды.
   3. Повторяйте все вышеописанные шаги пять раз, пока кролик успешно не выполнит этот шаг по крайней мере четыре раза из пяти (вероятность успеха 80%).
2. Переместите мишень над ногами дрессировщика так, чтобы кролик положил передние лапы на ноги, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
3. Переместите мишень над ногами и немного дальше от кролика, чтобы кролик положил передние лапы на ноги и потянулся вперед, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если кролик не выполняет 9.4, промежуточный шаг может быть добавлен после 9.3. Для этого выполните шаг 9.3, а затем заманите кролика миской с наградами на колени. Когда кролик положил все четыре лапы на колени, С и Т и выполните шаги 9.1.2 и 9.1.3.
4. Переместите мишень над ногами и еще дальше от кролика, чтобы кролик запрыгнул на колени, чтобы коснуться цели носом/ртом.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
5. Выполните шаг 9.4. и осторожно погладьте кролика свободной рукой от краниальной к хвостовой (начиная с плеча), пока кролик сидит на коленях.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
6. Выполните шаг 9.4 и осторожно погладьте уши кролика свободной рукой от краниальной к хвостовой, пока кролик сидит на коленях.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
7. Выполните шаг 9.4. и осторожно возьмитесь за одно из ушей кролика, чтобы визуально осмотреть уши.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
8. Выполните шаг 9.4. и погладьте переднюю или заднюю лапу свободной рукой, пока кролик сидит на коленях.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Если правая сторона тела кролика обращена к дрессировщику, а левая сторона тела от дрессировщика, можно осторожно коснуться левых лап (и наоборот). Обязательно тренируйте обе стороны поочередно.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.
9. Выполните шаг 9.4. и осторожно поднимать переднюю или заднюю лапу свободной рукой, пока кролик сидит на коленях.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Когти можно осмотреть, когда лапы подняты. Обязательно тренируйте обе стороны поочередно.
   1. С и Т и выполнить шаги 9.1.2 и 9.1.3.

Результаты

В следующих разделах представлена информация о материалах и методах, выходящих за рамки протокола, вместе с репрезентативными результатами.

Статистика

Данные, полученные из упомянутого выше протокола, хранились в электронных таблицах и анализировались с помощью программного обеспечения для расширенного статистического анализа (Table of Materials). Тесты на нормальность (визуальный осмотр гистограмм и qq-графиков, сравнение среднего, стандартного отклонения и медианы) проводились для непрерывных параметров. Различия между параметрами, исследуемыми в тесте произвольного подхода (время, продолжительность, взаимодействие с тренером и незнакомым человеком, прикосновения передних лап и ног), были проанализированы с помощью теста знакового ранга Вилкоксона. Различия между методами обработки анализировались либо с помощью теста знакового ранга Вилкоксона, либо с помощью теста Макнемара (если двоичный). Различия считались значимыми при p < 0,05. При использовании критерия знакового ранга Вилкоксона распределение различий должно было быть симметричным в соответствии с визуальным осмотром гистограммы.

Исследование было исследовательским. Анализ мощности, основанный на продолжительности времени, в течение которого кролики взаимодействовали с «манипуляторами», был проведен после исследования (критерий Вилкоксона; мощность ≥ 0,999) с использованием G*Power (версия 3.1.9.7)⁵².

Привыкание

Все кролики, кроме #4 и #10, поглощали пищу из миски с наградами и позволяли дрессировщику прикасаться к ним во время всех сеансов привыкания. Кролик #4 не принял награду за еду в^1-м сеансе, но съел четыре раза из миски с наградой во^2-м сеансе. Однако количество получаемого вознаграждения увеличилось в более поздних сеансах, и кролика также можно было трогать. Кролику #10 также потребовалось больше времени, чтобы привыкнуть к дрессировщику и награде за еду. На первом занятии кролик принял вознаграждение от дрессировщика через 5 минут, но его нельзя было трогать. На 2-й сессии интереса к еде не наблюдалось. Однако в последующих сессиях кролик #10 принимал как награды за еду, так и прикосновения.

Представляем кликер

Двенадцать из тринадцати кроликов успешно выполнили раздел протокола 4 в день и связали вознаграждение за еду (первичное подкрепление) с щелчком (вторичное подкрепление) в рамках этой тренировки. Ассоциация была проверена путем наблюдения за поведением кроликов после того, как щелчок был представлен в десятый раз. Когда животное искало награду сразу после щелчка, предполагалось, что кролик ассоциировал первичное с вторичным подкреплением. Кролик #4 не съел награду за еду после клика в 1-й день. Кролику #4 потребовалось на один день больше (т.е. два дня), чтобы успешно связать клик и вознаграждение за еду.

Следование цели

В таблице 1 представлено количество тренировочных сессий (в медиане,^25-м процентиле и^75-м процентилях), необходимых для обучения кроликов целевому поведению протоколов. Кроликам потребовалось 2 тренировки (медиана), чтобы следовать за целевой клюшкой на тренировочную арену (Таблица 1). Все кролики достигли последней ступени (5,7) этого целевого поведения.

Кролику #4 и кролику #7 потребовалось 7 и 8 тренировок соответственно, прежде чем они последовали за мишенью на тренировочную арену. Поскольку кролик #7 не смог выполнить шаг 5.4 и не сделал прыжок, чтобы следовать за мишенным джойстиком, дополнительный шаг обучения (5.3+) был добавлен в протокол после шага 5.3. На шаге 5.3+ палка-мишень размещалась на более широком расстоянии от кролика, чем на 5.3, и кролик должен был тянуться к ней в разных направлениях, но палка-мишень все равно была достижима без прыжка. У кролика #4 были проблемы с шагом 5.5, и он не мог следовать за мишенью, которая была размещена прямо перед носом/ртом, для переменного количества прыжков. Поэтому в протокол был добавлен дополнительный шаг 5.4+. В этом случае палка-мишень помещалась прямо перед носом/ртом кролика, а затем перемещалась в разных направлениях, требуя от кролика одного прыжка. Этот же дополнительный шаг был успешно использован и для кролика #7. После завершения дополнительных этапов обучения с вероятностью успеха не менее 80% они смогли перейти к следующим шагам.

Взвешивание

Кроликам требовалась 1 тренировочная сессия (медиана) до выполнения шага 6.5 (т.е. пребывания на весах в течение переменного периода времени) (Таблица 1). Все кролики достигли последней ступени (6,5) этого целевого поведения.

Вход в транспортировочный бокс

Кролики успешно выполнили все шаги с 7,1 по 7,6 (т.е. вход и выход из транспортного бокса после подъема) в течение 2 тренировочных сессий (медиана) (табл. 1). Все кролики достигли последней ступени (7,6) этого целевого поведения.

Когда кролики #2 и #3 успешно выполнили шаг 7.6 в первый раз, они не хотели снова входить в транспортировочный ящик, чтобы повторить этот шаг. Поэтому был создан шаг 7.5+: после того, как животное последовало за целевой палкой в сторону коробки, миска с наградами проходила через отверстие крышки и животное заманивали внутрь коробки. Как только кролик входил в коробку, дверца закрывалась, и коробка осторожно поднималась. После того, как коробка была помещена обратно на пол, дверь открылась, и кролика вывели с помощью целевой палки из коробки. Оба животного успешно выполнили шаг 7.5+ по крайней мере 4 раза, а затем шаг 7.6 на следующий день.

Разведение

Требовалась 1 тренировочная сессия (медиана) до тех пор, пока кролики успешно не выполняли шаг 8.3 (т.е. клали передние лапы на руку дрессировщика) (Таблица 1). Поскольку 11 из 13 кроликов (т.е. все, кроме #3 и #7) не смогли выполнить шаг 8.3, для этих животных был определен дополнительный шаг обучения 8.2+ после 8.2. На шаге 8.2+ палку-мишень перемещали над головой кролика так, чтобы кролик отрывал передние лапы от земли и касался цели носом/ртом. Пока кролик касался мишени, дрессировщица подходила и касалась передних лап (ладонной поверхности) ладонью свободной руки. После того, как шаг 8.2+ был успешно выполнен по крайней мере в четырех из пяти попыток, шаг 8.3 был обучен снова и завершен.

Прыжки на круге

2.5 Тренировки (медиана) были необходимы для обучения кроликов шагам 9.1. до 9.9. (Таблица 1). Десять кроликов смогли достичь последнего шага 9.9 (т.е. принять прикосновение к своим лапам, сидя на коленях у дрессировщика). Кролик #4 достиг только шага 9.2 (т.е. положил свои передние лапы на ноги дрессировщика), а кролик #10 достиг шага 9.3 (т.е. прыгнул на колени дрессировщика). Кролик #7 достиг шага 9.3+, который был дополнительным промежуточным шагом после шага 9.3. В этом случае кролик клал передние лапы на ноги дрессировщика, как описано в шаге 9.2, а затем его приманивали миской с наградой на коленях дрессировщика. После того, как все четыре лапы были положены на колени дрессировщика, был представлен щелчок и награда. Этот шаг был успешно добавлен в протокол для восьми кроликов, чтобы облегчить выполнение следующих шагов.

Обобщение

Чтобы оценить, обобщают ли кролики обученные подсказки для выполнения целевого поведения с другими людьми, кроме дрессировщика, самка животного, которая была знакома с кроликами, но имела лишь небольшой опыт обучения кликеру, попросила кроликов выполнить обученное целевое поведение: «взвешивание», «вход в транспортный ящик», «вдыхание» и «прыжки на коленях». Если кролик ранее не выучил заключительный шаг «прыжки на коленях», следует продемонстрировать последний успешный шаг обучения.

Занятия проводились в течение пяти последовательных дней после завершения 3-недельного обучения (Рисунок 1). Смотритель животных прочитал протоколы дрессировки перед^1-м занятием. В начале^1-го занятия тренер провел краткую демонстрацию всех целевых моделей поведения. Затем она оставалась в загоне, давала инструкции во время сеансов и документировала, какой шаг целевого поведения демонстрировали кролики. Если кролик не показывал определенный шаг, смотритель животных получал указание вернуться к предыдущему шагу в протоколе.

Все кролики, за исключением кролика #4, выполняли целевое поведение «взвешивание», «вход в транспортный ящик» и «выращивание» (данные приведены в медиане) после 1 сеанса, 2 сеанса и 2 сеансов соответственно (Таблица 2). Кролик #4 не желал показывать какие-либо шаги этого целевого поведения.

Восемь из десяти животных, которые смогли показать последний шаг «прыжка на коленях» (9,9), продемонстрировали такое поведение после 3 сеансов (медиана). Хотя кролик #3 и #11 ранее выучили последний шаг «прыжка на колени» (9.9), они показали только шаг 9.3 с смотрителем животного. Кролик #4, #7 и #10 показали тот же шаг, что и с дрессировщиком (9.2, 9.3+ и 9.3).

Выполнение целевого поведения после 1-недельных перерывов на тренировку

Чтобы проверить, могут ли животные сохранить заключительные шаги «взвешивания», «входа в транспортировочный бокс», «подъема» и «прыжков на коленях», дрессировщик восстановил целевое поведение через неделю и две недели после сеансов обобщения (рис. Во время этих перерывов животные не обучались и не получали никаких наград.

В обоих временных точках все кролики были в состоянии выполнить заключительные шаги «взвешивания» (6,5), «входа в транспортировочный ящик» (7,6) и «выращивания» (8,3), которым они научились в предыдущем 3-недельном обучении. Животные (n = 10), которые выучили последний шаг «прыжка на коленях» (9,9), демонстрировали такое поведение в обеих временных точках; Те, кто не выучил последний шаг этого целевого поведения (n = 3), смогли продемонстрировать последний шаг, которого они достигли ранее (кролик #4: шаг 9.2; кролик #7: шаг 9.3+, кролик #10: шаг 9.3) после первого недельного перерыва. После второго 1-недельного перерыва эти три кролика показали те же шаги, что и неделей ранее, но их также попросили выполнить следующие шаги, и они достигли шага 9.9.

Выполнение целевого поведения после тренировочного перерыва продолжительностью около 8,5 недель

После того, как у животных был перерыв в обучении примерно на 7,5 недель (#1-5, #13) или 9,5 недель (#6-12), целевое поведение снова вспоминалось. Все животные смогли показать заключительный этап «взвешивания» (6,5), «входа в транспортировочный ящик» (7,6) и «выращивания» (8,3). Двенадцать кроликов продемонстрировали последний шаг «прыжка на коленях» (9,9), в то время как кролик #7 только положил передние лапы на ноги дрессировщика и вытянулся вперед, чтобы коснуться цели носом/ртом (9,3).

Добровольный подход к знакомому тренеру и незнакомому человеку

Через три недели после обучения было проверено произвольное поведение кроликов, чтобы исследовать их взаимодействие со знакомым дрессировщиком и незнакомым человеком (оба самки). Перед тестом оба человека принимали душ, используя один и тот же гель для душа и шампунь, надевали одинаковую одежду и средства защиты (перчатки, маски, сетки для волос). Были проведены два 5-минутных испытания с 2-минутным перерывом между испытаниями в загоне для животных. Как показано на рисунке 4А, знакомый тренер и незнакомый человек сидели (в одном и том же положении) друг напротив друга на полу загона, спиной к стене загона. Два дома были удалены из загона; Оставшийся дом и туннель были размещены рядом с двумя другими стенами на одинаковом расстоянии от обоих людей. Во^2-м испытании они поменялись местами, чтобы учесть потенциальные предпочтения кроликов. Они не двигались и не разговаривали во время 5-минутных испытаний. Если кролик грыз брюки и щипал ногу, руку осторожно перемещали к кролику, чтобы она остановилась. Следует отметить, что наблюдения за отдельными животными проводились внутри группы, т.е. кролики могли взаимодействовать друг с другом во время обоих опытов.

Видеозаписи были проанализированы ретроспективно с помощью BORIS⁵³. Согласно этограмме, определенной для этого исследования, кролик взаимодействовал с человеком, когда все четыре лапы находились в квадрате 70 см × 70 см вокруг человека или на линии границы этого квадрата. Кроме того, контролировалось, положил ли кролик обе передние лапы на ноги или запрыгнул на колени (при этом все четыре лапы были положены на колени).

На рисунке 4B показана продолжительность времени, в течение которого кролики взаимодействовали с двумя людьми. Тест Уилкоксона показал, что время взаимодействия с тренером и незнакомым человеком значительно различалось в^1-м испытании (z = -2,040, p = 0,041, коэффициент корреляции Пирсона r = 0,57), но не во^2-м испытании (z = 0,245, p = 0,807, r = 0,07). В^1-м испытании кролики проводили больше времени, взаимодействуя с дрессировщиком.

Три (#1, #5, #6) и пять (#1, #6, #7, #8, #12) кролика положили свои передние лапы на ноги дрессировщика в испытании 1 и 2 соответственно. Пять животных прыгнули всеми четырьмя лапами на колени дрессировщика (испытание 1: #1, #3, #5, #6; испытание 2: #9). В то время как четыре животных (#1, #2, #8, #9) в^1-м испытании и три (#1, #4, #8) животных во^2-м испытании забрались передними лапами на ноги незнакомого человека, ни одно из них не прыгнуло всеми четырьмя лапами ей на колени. Среднее значение различий между числом «касаний передними лапами и ногами» достоверно не различалось ни между дрессировщиком и незнакомым человеком в испытании 1 (z = -0,264, p = 0,792, r = 0,07), ни в испытании 2 (z = -0,707, p = 480, r = 0,20).

Влияние техники обращения на поведение кроликов по отношению к «манипулятору»

Чтобы выяснить, влияют ли методы, используемые для подъема кроликов с пола, на их поведение, после этой процедуры было проведено 2-минутное наблюдение за поведением в контексте общего осмотра в течение двух дней подряд (рис. 1). Это наблюдение проводилось на семи животных.

В 1-й день кроликов забрали с помощью транспортировочного ящика. Для этого они следовали за мишенью в коробку, коробку закрывали и подносили к смотровому столу, как описано в тренировочном шаге 7.5. Здесь их осторожно поднимали из коробки на стол, причем обе руки помещались ниже/вокруг тела животного. Был проведен медицинский осмотр (включающий пальпацию тела, визуальный осмотр ушей, глаз, ноздрей, резцов, аногенитальной области) и впоследствии им было предложено пищевое вознаграждение. После проверки состояния здоровья их осторожно направили руками в транспортировочный ящик. Палка-мишень не использовалась на смотровом столе, чтобы убедиться, что руки дрессировщика были свободны для закрепления животных. Когда кролики снова входили в транспортировочный ящик и дверца закрывалась, ящик переносился в загон и дверь открывалась. Кролика заставляли следовать за целевой палкой и выходить из коробки, после чего ему показывали вознаграждение за еду, как описано в шаге 7.6.

На 2-й день кроликов подбирали с помощью обычной техники, обычно используемой смотрителями животных (т.е. их удерживали за загривок одной рукой и ненадолго поднимали на другую руку головой к сгибу руки). Затем их перевели на стол для осмотра и провели проверку здоровья, как описано выше. После проверки здоровья им была предложена еда из миски с наградами. Наконец, их снова схватили за загривок и ненадолго подняли на руку, чтобы вернуть в загон. После того, как они были освобождены, им снова предложили вознаграждение в виде еды.

После того, как кроликам в загоне было предложено вознаграждение за еду, дрессировщик сел на пол загона, не взаимодействуя с кроликами, и было записано 2-минутное видео, которое было проанализировано ретроспективно с помощью BORIS⁵³. Следует отметить, что наблюдения за отдельными животными проводились внутри группы, потому что за ними нужно было наблюдать в привычной среде. Это означает, что кролики могли взаимодействовать друг с другом. Были исследованы и определены следующие параметры: продолжительность времени, затраченного на взаимодействие с тренажером или транспортировочным ящиком (т.е. кролик находился в зоне взаимодействия с тренажером или транспортировочным ящиком, когда нос находился на расстоянии менее длины тела от тренажера или ящика); продолжительность времени, проведенного в транспортировочном ящике (т.е. это событие происходило, когда животное находилось в зоне взаимодействия ящика; оно начиналось, когда кролики входили в ящик всеми четырьмя лапами, и останавливалось, когда одна или несколько лап находились за пределами ящика); продолжительность времени, затраченного на еду (т.е. кролик проглотил солому, сено, гранулы или фекалии; жевание одежды или обуви тренера не считалось едой); время, затраченное на то, чтобы прятаться (это событие начиналось, когда кролик входил в дом или туннель всеми четырьмя лапами; оно прекращалось, когда кролик покидал убежище с одной или несколькими лапами); прыжки на коленях (т.е. кролик запрыгивал на колени дрессировщика и клал на него все четыре лапы; это событие происходило, когда животное находилось в зоне взаимодействия дрессировщика); Наложение передних лап на ноги (т.е. кролик положил обе передние лапы на ноги дрессировщика; это событие происходило, когда животное находилось в зоне взаимодействия дрессировщика).

Поведенческий анализ проводился тренером и человеком, полностью слепым к проведенной процедуре. По словам Лэндиса и^{Коха 54}, надежность между инструктором и слепым человеком, рассчитанная с помощью BORIS⁵³ (Коэнс Каппа), была значительной или почти идеальной. Для дальнейшего анализа использовались данные, извлеченные слепым наблюдателем.

Тест Уилкоксона показал, что традиционная техника обращения значительно сокращает продолжительность взаимодействия с «устройством обработки», т.е. сумму времени, затрачиваемого на взаимодействие с тренажером и коробкой после того, как его подняли (z = 2,366, p = 0,018, r = 0,89; Рисунок 5А). Техника обращения существенно не влияла на продолжительность взаимодействия с тренером (z = 1,014, p = 0,310, r = 0,28; Рисунок 5B). Напротив, поднятие кроликов за коробку увеличивало продолжительность их взаимодействия с коробкой (z = 2,366, p = 0,018, r = 0,66; Рисунок 5С) и потрачено в ящике (z = 2,201, p = 0,028, r = 0,61; Рисунок 5D) по сравнению с традиционной техникой обработки. Кроме того, животные проводили больше времени, прячась в приютах после того, как их подобрали обычной техникой обращения (z = -1,992, p = 0,046, r = 0,046; Рисунок 5F).

Техника обработки не оказала существенного влияния на продолжительность времени приема пищи животными (z = 0,944, p = 0,345, r = 0,26; Рисунок 5E), количество кроликов, положивших передние лапы на ноги дрессировщика (Мак-Немар: p = 1,000) или запрыгнувших на колени дрессировщика (Мак-Немар: p = 0,500). Независимо от техники обращения, кролик #9 запрыгнул на колени дрессировщика, а кролик #12 положил свои передние лапы на ноги дрессировщика. Кроме того, кролики #8 и #11 кладут передние лапы на ноги после того, как их подбирает транспортировочный ящик.

В то время как пищевое вознаграждение, предложенное на смотровом столе, было проглочено всеми кроликами после короткой транспортировки в коробке, только один кролик (#2) принял его после обычной техники обработки. Эта разница была значимой (Макнемар: p = 0,031). В загоне вознаграждение за еду принимали шесть кроликов (т.е. все, кроме #7) после выхода из транспортного ящика и четыре кролика (#7, #9, #10 и #12) после того, как их отпускали из руки (обычная техника обращения; McNemar: p = 0,625).

Рисунок 1: Расписание. Все сеансы привыкания, обучения и обобщения, а также наблюдения за поведением проводились утром перед кормлением и уборкой. На 1-й неделе (т.е. через четыре дня после прибытия) опекунами животных и автором (все самки) было проведено пять сеансов контекстуального обусловливания/привыкания (с понедельника по пятницу; раздел 3 протокола), после чего последовал 3-недельный период обучения на 2-4 неделях (с понедельника по пятницу; раздел протокола 4-9). Учебные занятия проводились автором-корреспондентом, который является ветеринаром, специализирующимся на лабораторных животных и имеющим опыт обучения кроликов, мышей, кур и лошадей. После этого в течение двух дней подряд проводились поведенческие наблюдения, чтобы выяснить, влияет ли техника, используемая для подъема кроликов с пола, на их поведение. На 5-й неделе было проведено пять сеансов обобщения (с понедельника по пятницу), чтобы оценить, будут ли кролики выполнять целевое поведение, изученное с другим человеком, а не с тренером. На 6-й и 7-й неделе (по четвергам), а также на 14-й неделе (понедельник/вторник) дрессировщик проверял в рамках еженедельного общего медицинского осмотра, могут ли кролики сохранять и демонстрировать целевое поведение. На 7-й неделе был проведен тест на добровольный подход с тренером и незнакомым человеком, чтобы исследовать поведенческие реакции кроликов на знакомых и незнакомых людей. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 2: Тренировочная арена. Тренировочная арена (см. Таблицу материалов) была установлена за несколько минут до начала обучения. (А) Для облегчения транспортировки и установки арена состояла из двух частей, которые были соединены друг с другом в загоне. (B) Два ряда прозрачных пластиковых панелей создавали арену размером примерно 136 см × 90 см × 70 см. Дверь крепилась к другим панелям с помощью кабельных стяжек, позволяющих открывать и закрывать ее. Дверь можно заблокировать с помощью зажима. Поскольку стены тренировочной арены были прозрачными, кролик имел визуальный, обонятельный и акустический контакт с членами группы, когда он входил на тренировочную арену. Низкий табурет/ступенька в качестве сиденья для тренера и, в зависимости от целевого поведения, которое необходимо тренировать, весы или транспортировочный ящик могут быть размещены на арене. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 3: Чаша для наград со встроенным кликером. Чаша для наград была напечатана на 3D-принтере с использованием белой полимолочной кислоты (PLA). Размер квадратной миски: 8 см × 8 см × 3 см; Размер цилиндрической ручки: 9,5 см × 2,3 см. К рукоятке был прикреплен щелчок пальцем (см. Таблицу материалов). Файл 3D-печати для чаши с наградами можно найти в дополнительном файле кодирования 1. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 4: Тест произвольного подхода. (А) В двух 5-минутных испытаниях знакомый тренер и незнакомая женщина сидели друг напротив друга в загоне, спиной к стене загона. Дом и туннель были размещены рядом с двумя другими стенами на одинаковом расстоянии от обоих людей. (Б) Продолжительность времени, затраченного на взаимодействие с человеком, была проанализирована для каждого кролика. Кролик взаимодействовал с человеком, когда все четыре лапы находились в квадрате 70 см × 70 см вокруг человека или на линии границы этого квадрата. Символы указывают на данные каждого отдельного животного. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Иллюстрация поведенческих данных, собранных у семи кроликов после того, как их держали либо с помощью транспортировочного ящика, либо с помощью обычной техники (т.е. их удерживали за загривок шеи и поднимали на руку). Поскольку тренажер и транспортировочный бокс рассматривались как "погрузочно-разгрузочные устройства", (А) На этой панели показана сумма табличек В и С. Символы указывают на данные каждого отдельного животного. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Кролик	Количество сеансов обучения, необходимых для тренировки целевого поведения
	Следование цели	Взвешивание	Вход в транспортировочный бокс	Разведение	Прыжки на круге
#1	1	1	2	2	2
#2	1	1	4	1	5
#3	2	1	3	1	4
#4	7	2	1	3	2 (шаг 9.2)
#5	2	1	3	1	3
#6	2	1	2	1	1
#7	8	1	2	2	3 (шаг 9.3+)
#8	2	1	2	1	1
#9	2	1	2	1	2
#10	2	2	3	3	5 (шаг 9.3)
#11	2	1	2	2	4
#12	2	1	1	1	1
#13	2	3	1	2	4
Медиана (25–75-й процентиль)	2	1	2	1	2.5
	(2–2)	(1–1.5)	(1.5–3)	(1–2)	(1–4)*

Таблица 1: Количество сеансов, необходимых для обучения целевому поведению. Если кролик не выучил последний шаг целевого поведения, в скобках указывается последний достигнутый шаг обучения.

Определение дрессировки: примерно 30 минут на группу (6-7 животных); с понедельника по пятницу в течение трех недель; начинается, когда тренер садится в загон и готов начать обучение; заканчивается, когда либо ни один из кроликов больше не участвует в дрессировке, либо все кролики достигли последнего шага целевого поведения; животное может выполнять более одного испытания за сеанс.

* Кролики #4, #7, #10 были исключены из этого расчета, так как они не достигли последней ступени «прыжка на круге».

Кролик	Количество тренировок до достижения конечного шага целевого поведения
	Взвешивание (5 шагов обучения)	Вход в транспортировочный бокс (6 шагов обучения)	Выращивание (3 этапа обучения)	Прыжки на круге (9 шагов тренировки)
#1	1	3	1	1
#2	1	3	1	1
#3	1	3	1	F (9,3)
#4	F	F	F	3 (9.2)
#5	2	3	2	2
#6	1	1	3	3
#7	1	1	3	3 (9.3+)
#8	1	1	1	3
#9	1	1	1	3
#10	1	3	3	3 (9.3)
#11	1	1	3	F (9,3)
#12	1	1	3	3
#13	1	3	2	5
Медиана (25–75-й процентиль)	1	2	2	3
	(1–1)	(1–3)	(1–3)	(1.25–3)
	(кроме #4)	(кроме #4)	(кроме #4)	(кроме #3, #4, #7, #10, #11)

Таблица 2: Обобщение. В течение пяти сеансов (с понедельника по пятницу) смотритель животных, знакомый с кроликами, просил кроликов выполнить последние шаги (или последний достигнутый шаг) обученного целевого поведения. Если последний шаг целевого поведения не был достигнут, последний достигнутый шаг обучения указывается в скобках. F (неудача) указывалась, когда животное не показывало последний шаг целевого поведения, ранее достигнутого в процессе обучения. Определение сессии: с понедельника по пятницу в течение одной недели; начинается, когда смотритель и дрессировщик животных сидят в загоне; заканчивается, когда либо ни один из кроликов не участвует (больше), либо все кролики показали последний шаг (или последний достигнутый шаг) желаемого целевого поведения; животное может выполнять более одного испытания за сеанс.

Дополнительный файл кодирования 1: файл 3D-печати «чаша с наградами». Для печати можно использовать полимолочную кислоту (PLA). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Дополнительный файл 1: Документальный лист на шесть кроликов. Лист следует распечатать или открыть на планшете, чтобы задокументировать прогресс дрессировки каждого кролика. На каждой тренировочной сессии необходимо отмечать, каких этапов дрессировки достигли отдельные животные или требуется ли адаптация к протоколу. Любые особые случаи (например, внешние факторы, ухудшение состояния здоровья) также должны быть задокументированы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Дополнительный файл 2: Упрощенные протоколы обучения. В таблицах в упрощенном виде описаны этапы разделов 3-9 протокола. Для получения более подробной информации следует ознакомиться с протокольными шагами основной рукописи. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Обсуждение

Протоколы обучения были разработаны для совершенствования рутинных процедур, таких как обращение, медицинские осмотры и взвешивание лабораторных кроликов. Их осуществимость была оценена в этом поисковом исследовании с использованием тринадцати самок новозеландских белых кроликов. Протоколы дрессировки могут быть надежно применены для успешной дрессировки кроликов. Большинство кроликов смогли выучить целевое поведение, определенное в тренировочных протоколах, менее чем за 3-недельный период обучения, запомнили их после 1-недельных перерывов в обучении и обобщили их на другого человека, а не на тренера. Пришлось внести несколько изменений в протокол, чтобы удовлетворить потребности отдельных животных. Основным выводом настоящего исследования было то, что усовершенствованная техника обращения с кроликами, описанная в протоколах дрессировки, была менее отвратительной, чем обычная техника обработки. Интересно, что дрессированные кролики показали свое исследовательское поведение не только по отношению к знакомому дрессировщику, но и к незнакомому человеку в тесте на добровольный подход.

Значение цели

Эта цель послужила основой для нынешнего протокола обучения. При введении цели животные узнали, что их поведение влияет на окружающую среду и порождает последствия. Введение мишени укрепляет доверие между человеком и животным, как продемонстрировал кролик #4, потребовалось 7 тренировок, прежде чем последовать за мишенью на арену, но он быстро научился следующему целевому поведению (т.е. в течение 1-3 тренировок). Этот кролик #4, казалось, завоевал доверие к дрессировщику во время представления цели, что облегчило тренировку других целевых моделей поведения. Однако этому кролику по-прежнему не хватало доверия к другим людям, и он не желал демонстрировать большинство целевых моделей поведения на сеансах обобщения.

Следует отметить, что цель не была определена как конечная точка в некоторых разделах протокола. Вместо этого, например, животные должны были следовать за целью в течение переменного количества прыжков или оставаться на весах в течение переменного количества секунд. Для повышения и поддержания внимания и мотивации кроликов на дрессировке была выбрана переменная схема поощрения.

Сигналы

После того, как кролики успешно выполнили шаг 5.1, во всех последующих тренировочных занятиях тренер помещал мишень на близком расстоянии от носа кролика, чтобы подать сигнал кролику о начале тренировочного испытания. Если кролик касался цели носом/ртом, то учитывалась готовность участвовать в тренировке и начиналась тренировка.

Настоящие протоколы не включали никаких дополнительных сигналов, например, весы, транспортировочный ящик или рука не считались сигналами. Вместо этого мишень использовалась для того, чтобы вывести животное на тренировочную арену, на весы, в транспортировочный ящик, в воздух (встать на дыбы) или на колени к дрессировщику. Это означает, что поведение цели «взвешивание», «вход в транспортный ящик», «вставание на дыбы» и «прыжок на коленях» были модификациями «следования за целью». Причиной этого послужили требования к протоколу дрессировки: он должен быть выполнимым персоналом зоологических учреждений, которые могут не быть экспертами в дрессировке животных, и легко интегрироваться в повседневную работу. Поэтому протоколы должны быть эффективными и быстро достигать целевого поведения.

Однако рука, которая находится перед кроликом (шаг 8.3), весы или транспортировочный ящик также могут стать как сигналом, так и мишенью для лап. Таким образом, можно определить дальнейшие шаги, выходящие за рамки настоящих протоколов и не требующие использования целевого стика. Например, как только кролик видит весы, весы сигнализируют кроликам прыгать на нее всеми четырьмя лапами.

Адаптация протоколов

Хотя можно ожидать, что фенотип почти генетически идентичных лабораторных животных очень похож, существуют поведенческие «различия между индивидуумами, которые последовательны во времени и в разных ситуациях [и] называются личностью»⁵⁵, например, некоторые животные довольно застенчивы, а другие дерзкие56. Застенчивым, менее исследовательским животным может потребоваться больше времени, чтобы изучить целевое поведение протокола (например, кролик #4). Даже если стандартные протоколы дрессировки могут подходить для большинства, дрессировка должна учитывать потребности отдельного животного и адаптироваться к ним,^{когда это необходимо}. Таким образом, дополнительные более мелкие промежуточные шаги должны быть определены для тех кроликов, которые не смогли выучить тренировочный шаг протокола. Дополнительные промежуточные этапы обучения должны помочь им успешно перейти к следующему этапу. Особенно потому, что планы обучения разрабатываются в теории, а затем проверяются на практике, может стать очевидным, что для тренировки определенного целевого поведения требуются дополнительные шаги по обучению.

Что касается настоящих протоколов дрессировки, то некоторые промежуточные шаги дрессировки должны были быть добавлены для целевого поведения «следование за целью», «вход в транспортную коробку», «встает на дыбы» и «прыжок на коленях», как подробно описано в разделе, посвященном репрезентативным результатам, поскольку отдельные животные не смогли продолжить следующий этап дрессировки. Интересно, что промежуточные шаги 8.2+ и 9.3+ требовались большинству кроликов, подчеркивая их важность. Поэтому эти шаги были добавлены в качестве примечания к протоколам обучения.

В качестве альтернативы, к определенному шагу 8.2+, дрессировщик может положить руку на пол ладонью вверх и позволить кролику наступить на руку одной, а затем обеими передними лапами. Более того, можно предположить, что кролику требуются дополнительные промежуточные шаги перед шагом 9.3+, например, сначала кролик кладет одну заднюю лапу, а затем обе задние лапы на колени дрессировщика. Если кролик не соглашается на прикосновения на этапах 9.5-9.9, продолжительность прикосновения к различным частям тела может быть постепенно увеличена. Более того, первоначально только указательный и средний пальцы можно было использовать для поглаживания животных с легким нажимом перьев. Затем количество пальцев, используемых для прикосновения, и давление могут быть увеличены в несколько этапов.

Совершенствование техники обработки

Можно предположить, что обращение вызывает сильное отвращение, особенно у кроликов с застенчивой чертой характера. Кролики являются наземными животными-добычей, и поднятие (т.е. поднятие с пола) или удержание (т.е. удержание на руках человека) для проверки состояния здоровья и экспериментальной процедуры может вызвать беспокойство и дистресс. В протоколы дрессировки был введен один из вариантов совершенствования методов обращения: вместо того, чтобы удерживать кролика за загривок и поднимать кролика на другую руку, кролика можно вести с помощью целевой палки в ящик и нести в ящике к столу для осмотра, как предлагалось ^{ранее50, 57}, где кролика аккуратно переносят из коробки на стол. В качестве альтернативы можно снять верхнюю часть коробки или направить кролика с помощью мишени из коробки.

Поведенческие наблюдения, проведенные после того, как кролики были подобраны с использованием либо традиционной техники обращения, либо транспортировочного ящика, показали, что традиционная техника обработки была связана с более стрессовым и тревожным поведением, чем альтернативная техника. Этот вывод был сделан на основании большого количества животных, отказывающихся от пищи на смотровом столе, и увеличения продолжительности укрытия в приютах при применении традиционной техники обращения. Интересно, что техника обращения не повлияла на время взаимодействия с дрессировщиком, что указывает на то, что процесс обращения, возможно, не нарушил отношения между человеком и животным. Однако, помимо тренажера, транспортировочный ящик также служил в качестве «погрузочно-разгрузочного устройства» (т.е. погрузочно-разгрузочным устройством традиционной техники был тренажер, а погрузочно-разгрузочными устройствами альтернативной техники были и тренажер, и транспортировочный ящик). Поэтому анализировалось и время взаимодействия с транспортировочным ящиком. Хотя кроликов только что подобрали с помощью транспортного ящика, они провели больше времени, взаимодействуя с ящиком или в ящике, чем при появлении обычной техникой. Это говорит о том, что транспортировочный ящик может быть связан с положительным эффектом. При сравнении длительности, затраченной на взаимодействие с обоими «манипуляторами» (т.е. сумма времени, затраченного на взаимодействие с коробкой и дрессировщиком), техника обращения с коробкой увеличила продолжительность взаимодействия с «манипуляторами», т.е. эта техника оказала явное положительное влияние на поведенческую реакцию кроликов на «манипуляторы» в ожидании того, что их возьмут на руки. Аналогичные результаты были сделаны на лабораторных мышах, демонстрируя, что мягкие методы обращения и тренировки снижают стресс и беспокойство: животные, которых брали с помощью туннеля или сложенных в чашечку рук, проводили больше времени, добровольно взаимодействуя с «устройством для обработки», и проявляли меньше поведения, связанного с беспокойством, чем мыши с хвостом^. Тренировки, по-видимому, усиливали этот эффект. Leidinger et al. продемонстрировали, что мыши с мягким обращением (туннель/чашка) демонстрировали меньшее мочеиспускание, дефекацию и вокализацию, когда их сдерживали загривком, и меньшее плавающее поведение в тесте Морриса на водный лабиринт, когда они были обучены с использованием PRT, по сравнению с необученными мышами¹³.

Целесообразность протоколов для ежедневной работы - продолжительность обучения, удержание и обобщение

Количество сеансов дрессировки, необходимых для обучения целевому поведению, зависело от конкретного животного и целевого поведения, которое включало различное количество шагов, начиная с раздела 3 и раздела 9 протокола, представленного выше.

В зависимости от количества животных, которым удалось обучиться целевому поведению, и количества адаптаций, которые необходимо было внести в протоколы для отдельных животных, этапы обучения имели разный уровень сложности. Поведение «следование за целью» было первым опытом обучения кроликов, и, следовательно, некоторым животным потребовалось больше времени, чтобы обучиться этому поведению, чем другому целевому поведению, как обсуждалось выше. В то время как все животные могли быть обучены «взвешиванию» в соответствии с настоящим протоколом, требовались дополнительные промежуточные шаги для «входа в транспортировочный ящик» двух животных и для «выращивания», а также «прыжков на коленях» почти всех кроликов. Это можно объяснить степенью физического контакта между животным и дрессировщиком, который был необходим для выполнения различных целевых действий. «Взвешивание» и «вход в транспортный ящик» не предполагали физического контакта между животным и человеком. Заключительный этап «выращивания» (8.3) и шаги 9.2-9.4 «прыжки на коленях» требовали, чтобы кролики вступали в физический контакт с дрессировщиком. Кроме того, дрессировщик касался плеча, спины, крупа, ушей или лап кролика на этапах 9.5-9.9 «прыжка на коленях», увеличивая степень физического контакта между животным и дрессировщиком. Некоторым кроликам было сложнее принять прикосновения, чем другим. Как обсуждалось выше, было полезно адаптировать протоколы обучения этому целевому поведению и добавить промежуточные шаги.

Тем не менее, трем кроликам потребовались дополнительные тренировки, чтобы выполнить целевое поведение «прыжок на колени» (#4, #7, #10). Физические нарушения, которые не позволяли этим животным запрыгивать на колени дрессировщика, можно было исключить. Более того, кролики могли запрыгивать на свои домики, высота которых была выше, чем колени дрессировщика.

Было заметно, что двум из этих трех кроликов (#4 и #10) потребовалось больше времени, чтобы привыкнуть к дрессировщику, а также к пищевому вознаграждению во время сеансов привыкания, и частично потребовалось больше тренировок, чтобы достичь последнего шага другого целевого поведения. Это также было верно для кролика #7, у которого была травма хвоста из-за драк в группе с четвертого сеанса привыкания. Поэтому кролика #7 подобрали, перенесли на смотровой стол, лечили и осматривали ежедневно в течение 15 дней, что, возможно, привело к повышенной осторожности по отношению к людям. С одной стороны, важно отметить, что на эффективность дрессировки может повлиять, например, ухудшение состояния здоровья, повышенный уровень стресса или нарушение отношений между человеком и животным из-за других вмешательств. С другой стороны, эти наблюдения продемонстрировали важность привыкания для тренера и пищевого вознаграждения. Некоторым животным может потребоваться больше времени, чтобы ознакомиться с присутствием дрессировщика и принять вознаграждение за еду от дрессировщика. Если бы были проведены дополнительные сеансы привыкания, кролики #4 и #10, возможно, показали бы лучшие результаты в тренировочных сессиях. Об актуальности приучения кроликов к человеку уже сообщалось в литературе. Коммерческий заводчик, у которого были приобретены кролики, используемые в этом исследовании, недавно ввел регулярные сеансы контактирования, которые снизили поведение, связанное со стрессом, и устранили агрессию^. В более раннем исследовании было продемонстрировано, что поглаживание и обращение с молодыми кроликами уменьшают поведение, связанное с беспокойством, увеличивают их прибавку в весе и снижают^{уровень} смертности.

После того, как кролики научились различным целевым поведениям, они все еще были в состоянии демонстрировать их после двух коротких (одна неделя) и длинных (примерно 7,5-9,5 недель) перерывов в обучении, за исключением отдельных исключений. Эти наблюдения могут указывать на то, что достаточно просить кроликов выполнять обученное целевое поведение один раз в неделю, когда проводится общий осмотр и уборка комнаты/загона.

Для осуществимости протокола для повседневной трудовой жизни также важно, чтобы кролики обобщали тренированное целевое поведение на других людей, а не на дрессировщика. В случае отпуска или болезни другой человек должен продолжить обучение и уход за животными. Большинство кроликов (двенадцать из тринадцати) обобщали целевое поведение «взвешивание», «вход в транспортировочный ящик» и «выращивание» на смотрителя животного, хотя в некоторых случаях кроликам требовалось более одной тренировки, чтобы показать желаемое поведение. «Взвешивание», казалось, лучше всего обобщало; затем следуют «вход в транспортный ящик» и «выращивание». Однако «прыжки на коленях» оказалось труднее обобщить на другого человека. Животным потребовалось больше времени, чтобы продемонстрировать желаемое поведение (9,9), и два кролика, которые ранее выучили последний шаг 9,9, не смогли продемонстрировать это целевое поведение, возможно, из-за более высокого физического контакта (см. выше). Один кролик (#2) не показал никаких шагов целевого поведения «взвешивание», «вход в транспортный ящик» и «выращивание» и не был заинтересован во взаимодействии с смотрителем животного. Кролик #4 был одним из животных, которым потребовалось больше времени, чтобы привыкнуть к дрессировщику и вознаграждению за еду во время сеансов привыкания. Это может указывать на то, что для некоторых особей^{дополнительные} сеансы, на которых смотрители животных проводят время с кроликами, приучают их принимать от них вознаграждение за пищу и создают положительную связь. Кролики могут различать разных людей, как показано на примере крыс⁶⁰. Другими факторами, которые могут повлиять на производительность кроликов во время занятий с дрессировщиком и смотрителем животного, могут быть бессознательные сигналы, которые дрессировщик подавал животным во время тренировок, например, положение целевой палки или миски для наград, положение тела или движение. Если дрессировщик не знает об этих сигналах, они не будут задокументированы, и другие люди не будут имитировать эти сигналы.

Кроме того, навыки дрессировки людей, работающих с животными, включая рутину обращения с целевой палкой и презентацию вознаграждения, могут влиять на поведение животных. Помимо знания принципов обучения и общения с животными, для успешной дрессировки животного^и восстановления целевого поведения необходим практический опыт. Поскольку сеансы обобщения с участием квалифицированного и неквалифицированного человека не сравнивались, релевантность фактора «обучение навыкам» не может быть определена. Однако, насколько известно авторам, большая часть персонала лабораторных животных не обучена дрессировке животных, и, таким образом, условия, в которых проводились сеансы обобщения (т.е. с участием смотрителя животных, имеющего лишь небольшой опыт обучения с помощью кликера), представляли собой реалистичную обстановку в помещениях для лабораторных животных.

Репрезентативные данные протоколов дают животным представление о рабочей нагрузке, связанной с обучением различным видам целевого поведения. Эти данные могут помочь животноводческим учреждениям создавать свои собственные графики работы при реализации (части) протокола. В зависимости от индивидуального животного и целевого поведения, некоторое дополнительное время должно быть зарезервировано для процесса обобщения. Однако продолжительность времени может варьироваться при работе с кроликами-самцами или другой породой кроликов. В помещениях для животных следует обсудить вопрос о том, существует ли подходящее время и что необходимо изменить, чтобы оставить время для дрессировки животных.

Помимо времени, необходимого для дрессировки животных, необходимо учитывать, что для обучения нужны квалифицированные дрессировщики, а обучение персонала дрессировке животных также может занять много времени. Если бы обучение было обязательной частью обучения персонала лабораторных животных, т.е. лиц, ухаживающих за животными, ветеринаров и исследователей, проведение обучения животных в учреждениях было бы облегчено и занимало бы меньше времени. Согласно Приложению III к Директиве 2010/63/ЕС, «учреждения должны разработать программы приучения и дрессировки, подходящие для животных, процедур и продолжительности проекта», т.е. дрессировка животных требуется по закону. В Германии такие программы должны быть представлены при подаче заявления на получение лицензии на испытания на животных. Для этого необходимо, чтобы лица, планирующие эксперименты на животных и работающие с лабораторными животными, обладали навыками дрессировки животных. Однако, по крайней мере, в Германии дрессировка животных не является частью графика обучения лиц, ухаживающих за животными, в области исследований и клиники 62,63,64. Кроме того, он прямо не упоминается в рекомендациях ЕС по системе образования и профессиональной подготовки⁶⁵. Поэтому, пока обучение не было реализовано в этих правилах, постоянное профессиональное развитие, сосредоточенное на обучении с положительным подкреплением, требует большего внимания. Персонал лабораторных животных должен изучить принципы обучения и методов дрессировки, необходимые критерии, передачу процедур между дрессировщиками, ведение записей и то, как реагировать на животных, которые не участвуют желаемым образом, чтобы обеспечить последовательность и предсказуемость.

Взаимодействие человека и животного

Интенсивное взаимодействие человека и животного во время тренировок обеспечивает оптимальные условия для укрепления отношений между отдельными кроликами и дрессировщиком^26,66. Позитивные отношения между человеком и животным полезны для благополучия животных, поскольку они могут снизить уровень стресса в условиях содержания и экспериментов^. В настоящих протоколах обучения дрессировщик учитывает свободу действий кроликов, и они могут принять решение об участии (или неучастии) в дрессировке на добровольной основе. Предоставление животным свободы действий полезно для их благополучия ¹⁶ и поэтому должно проводиться в экспериментах, а также в содержании и животноводстве. Существуют различные уровни поведенческой агентности⁶⁸; участие в ГВП может быть связано с уровнем субъектности, ориентированной на действие, т.е. «активным поведением для достижения текущих результатов [например, закупкой продуктов питания]»⁶⁸.

При анализе произвольного приближения кроликов к дрессировщику и незнакомому человеку можно было наблюдать интенсивное взаимодействие человека с животным. Результаты показали, что все кролики, за исключением одного животного в^1-м испытании (#12), взаимодействовали как с дрессировщиком, так и с незнакомым человеком. Они, казалось, узнали тренера, так как они показали явное предпочтение взаимодействию с тренером в^1-м испытании, и некоторые из них прыгнули всеми четырьмя лапами на колени тренера; поведение, которое не проявлялось по отношению к незнакомому человеку. Хотя кролики проводили больше времени, взаимодействуя с дрессировщиком, чем незнакомый человек в^1-м испытании, время взаимодействия больше не отличалось во^2-м испытании. Причиной этого наблюдения может быть то, что кролики ожидали получить пищевое вознаграждение от дрессировщика в^1-м испытании, и из-за отсутствия пищевого вознаграждения в тесте добровольного подхода они больше не проводили больше времени с дрессировщиком во^2-м испытании. Эти данные, тем не менее, подчеркивали, что дрессированные кролики быстро привыкли к присутствию незнакомого человека и никто из них не был слишком застенчивым для взаимодействия. Напротив, они были очень исследовательными и заинтересованными в незнакомом человеке. Однако, поскольку необученная контрольная группа не исследовалась, влияние тренировки на поведение кроликов при произвольном приближении неясно.

Гипотеза, объясняющая поведение кролика #12 в^1-м испытании, заключается в том, что этот человек все еще должен был привыкнуть к присутствию незнакомого человека в^1-м испытании и был более заинтересован во взаимодействии как с дрессировщиком (70 секунд), так и с незнакомым человеком (9 секунд) во^2-м испытании. Кролики имеют различные черты характера, которые могут влиять на уровень комфорта рядом с незнакомыми людьми и, в свою очередь, на латентность приближения или продолжительность времени взаимодействия с человеком^69,70.

Ограничения

Мы знаем, что все кролики в загоне/комнате, а не только тот, кто участвует в дрессировке, могут слышать щелчок (т.е. условное поощрение) во время тренировки, и его подкрепляющий эффект может быть ослаблен, поскольку пищевое вознаграждение (т.е. естественное/безусловное поощрение) не представлено. Если кролик за пределами тренировочной арены демонстрирует дрессированное поведение и слышит щелчок, но при этом не подается еда (а такой сценарий повторяется несколько раз), дрессированное поведение может быть подавлено. Это явление называют вымиранием^64,71. Однако, поскольку все целевое поведение в настоящих протоколах зависит от цели, представленной тренером, вымирание вряд ли произойдет в наших тренировочных условиях.

Поскольку стены тренировочной арены были прозрачными, а тренировочная арена располагалась в загоне, кролики могли видеть, слышать и нюхать друг друга во время тренировки, что является явным преимуществом, связанным с благополучием. Более того, кролики, возможно, наблюдали за членами своей группы во время тренировок и учились друг у друга. Ранее было показано, что у крыс особи научились выполнять целевое поведение, наблюдая за тем, как их сосед по клетке обучается PRT⁴⁵. Этот факт можно рассматривать как преимущество, так и недостаток. Прогресс обучения животных может быть быстрее, когда они могут наблюдать друг за другом. Однако на данные отдельных животных может влиять производительность членов группы, и они не могут быть отнесены исключительно к дрессировке отдельного животного. Таким образом, дрессировка животных без какого-либо контакта с членами их группы или кроликами в одном доме может занять больше времени.

Поведенческие наблюдения за индивидуумами (в тесте добровольного подхода и после применения различных техник обращения) проводились в их знакомой социальной среде и группе, чтобы избежать стресса и отвлечения, вызванных новой средой и отделением от их группы, что, в свою очередь, повлияло бы на поведенческие наблюдения. Недостатком, однако, является то, что кролики могли влиять на поведение друг друга во время сеансов наблюдения.

Эффекты методов обращения были исследованы только на семи животных с участием дрессировщика в качестве человека, работающего с животными. Авторы планируют провести последующее исследование, включающее априорный расчет размера выборки, чтобы воспроизвести результаты с другими хендлерами и дополнительно изучить различия между методами обработки.

Все люди, участвующие в обучении, обращении и тесте на добровольный подход, были женщинами. Не было исследовано, будут ли дрессировочные показатели кроликов или их поведение изменяться, если в них участвуют мужчины.

Настоящие протоколы дрессировки должны дать читателю представление о том, чему можно обучить кроликов, но не включают в себя все потенциальные целевые модели поведения, которые было бы полезно обучить лабораторному кролику. Например, маркировка кролика, как предложено в разделе протокола об общих требованиях, также стоит обучить с помощью PRT.

Как указывалось выше, выбор правильного вознаграждения не является тривиальным. Из-за гигиенических ограничений использование свежих трав в качестве пищи не допускается в некоторых помещениях для лабораторных животных, и, следовательно, необходимо использовать менее подходящие пищевые награды, такие как семена подсолнечника или лакомства на основе зерна. Что касается решения о продовольственном вознаграждении, некоторые правила и положения текущей лабораторной практики наносят ущерб благополучию животных и эффективной дрессировке и, следовательно, могут нуждаться в пересмотре в каждом конкретном случае. Также можно использовать альтернативы пищевым наградам, например, нежные прикосновения или взаимодействие с тренером или предметы обогащения. Тем не менее, дрессировщик должен убедиться в том, что для каждого отдельного животного альтернативой является вознаграждение животного, потому что вознаграждение является вознаграждением только в том случае, если кролик действительно любит его. Особенно прикосновения могут быть восприняты не всеми кроликами как награда.

Выводы

Таким образом, настоящее исследование было первым шагом к заполнению пробела в знаниях о подходящих протоколах обучения лабораторных кроликов. Самки новозеландских белых кроликов могут быть обучены рутинным процедурам содержания с использованием PRT и обобщить целевое поведение, изученное другим людям, хотя дополнительное время должно быть зарезервировано для процесса обобщения. Целевое поведение без физического контакта, по-видимому, легче освоить, чем поведение, требующее физического контакта с людьми. После того, как животные успешно завершили обучение целевому поведению, достаточно было забирать их один раз в неделю в контексте общего осмотра и чистки загона. Протоколы дрессировки, которые обычно применяются ко всем кроликам, удобны, но дрессировщик должен знать, что в некоторых случаях они должны быть адаптированы к потребностям животного. Результаты по технике обращения показали, что поднятие кроликов с помощью транспортировочного ящика вместо того, чтобы удерживать их за загривок и поднимать на руке, было менее отвратительным. В целом, настоящие протоколы предоставляют выполнимые инструкции для процесса привыкания и обучения кроликов и могут служить усовершенствованием в лабораторных условиях.

Животные не должны страдать из-за экономии труда, времени или денег (по крайней мере, в соответствии с Законом о защите животных^{No 72}). Важно ухаживать за всеми животными и обращаться со всеми животными максимально бережно. Поскольку необученные животные в большей степени страдают от беспокойства и стресса, вызванных экспериментальными и рутинными процедурами содержания, чем их дрессированные собратья¹³, дрессировка является простой мерой совершенствования, позволяющей эффективно предотвращать их негативные аффективные состояния.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Кровать-р Nest	The Andersons, Inc., Моми, США		Успешная реализация протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Finger Clicker	ASCO		https://ascoshop.de/products/fingerclicker
G*Power		version 3.1.9.7
Heu-Proppen	Ssniff Spezialdiä ten GmbH, Зост, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
IBM Corp. выпущена в 2020 году. Статистика IBM SPSS для Windows,  Армонк, Нью-Йорк: IBM Corp		IBM Corp версии 27.0.	В рукописи именуется "Программное обеспечение для расширенного статистического анализа"
Kaninchen Haltung + 25 мг/кг Salinomycin-Natrium-Sondermischung	Ssniff Spezialdiä ten GmbH, Зост, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Lignocel block	Lignocel J. Rettenmaier & Sö hne GmbH + Co KG, Розенберг, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Lillebro geschä lte Sonnenblumenkerne", Martina GmbH, Mü nchen, Германия) и Rainbow Foraging Bits (Bio-Serv, Флемингтон, США)	Martina GmbH, Mü Нхен, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Microsoft Excel для Microsoft 365 MSO	Microsoft	Corporation версии 2305	в рукописи именуется как "электронная таблица"
Новозеландские белые кролики	Charles River Laboratories France
Plattformwaage DE 35K5DL	KERN & SOHN GmbH, Балинген-Фроммерн, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Научное постельное белье премиум-класса (fine & flake)	SAFE, Augy, Франция		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Rainbow Foraging Bits	Bio-Serv, Флемингтон, США		Успешная реализация протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Snackball fü r Kaninchen – 7 cm	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Целевой стик со встроенным кликером	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Trixi Transportbox Capri Open Top	TRIXIE Heimtierbedarf GmbH & Co. KG, Tarp, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.
Weiden-Heuball	JR FARM GmbH, Хольцхайм-Пессенбургхайм, Германия		Успешное внедрение протокола не зависит именно от этого продукта. Вы можете использовать аналогичные продукты других компаний.