Методическая статья

Извлечение яда из паразитоидной осы Trichogramma dendrolimi с использованием искусственного хозяина

DOI:

10.3791/66032

⸱

6 октября 2023 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Entomology, Nanjing Agricultural University, 2Key Laboratory of Integrated Pest Management of Crop of East China, Ministry of Agriculture, 3Sanya Institute of Nanjing Agricultural University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы представляем протокол извлечения яда из Trichogramma dendrolimi с использованием искусственного хозяина, созданного с помощью полиэтиленовой пленки и раствора аминокислоты.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Паразитоидные осы представляют собой разнообразную группу перепончатокрылых насекомых, которые служат бесценными ресурсами для биоборьбы с вредителями. Чтобы обеспечить успешный паразитизм, паразитоидные осы впрыскивают яд своим хозяевам, чтобы подавить иммунитет своих хозяев, модулировать их развитие, метаболизм и даже поведение. Насчитывая более 600 000 видов, разнообразие паразитоидных ос превосходит разнообразие других ядовитых животных, таких как змеи, конусные улитки и пауки. Яд паразитоидной ос является малоизученным источником биологически активных молекул с потенциальными применениями в борьбе с вредителями и медицине. Тем не менее, сбор паразитоидного яда затруднен из-за невозможности использования прямой или электрической стимуляции и трудности вскрытия из-за их небольшого размера. Трихограмма - это род крошечных (~0,5 мм) яиц паразитоидных ос, которые широко используются для биологической борьбы с чешуекрылыми вредителями как в сельском хозяйстве, так и в лесах. Здесь мы сообщаем о методе извлечения яда из T. dendrolimi с использованием искусственных хозяев. Этих искусственных хозяев создают с помощью полиэтиленовой пленки и растворов аминокислот, а затем прививают осам трихограммы от паразитизма. Впоследствии яд собирали и концентрировали. Этот метод позволяет извлекать большое количество яда трихограммы , избегая при этом загрязнения других тканей, вызванного вскрытием, что является распространенной проблемой в протоколах вскрытия резервуаров яда. Этот инновационный подход облегчает изучение яда трихограммы , прокладывая путь для новых исследований и потенциальных применений.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Паразитоидные осы являются паразитическими перепончатокрылыми насекомыми, которые являются важными ресурсами для биологического контроля1. Существует большое разнообразие паразитоидных ос, насчитывающее более 600 000видов2. Разнообразие паразитоидных ос намного превосходит разнообразие других ядовитых членистоногих, таких как змеи, конусные улитки, пауки, скорпионы и пчелы. Яд является важным паразитарным фактором паразитоидных ос. При успешном паразитизме яд вводится в организм хозяина, модулируя его поведение, иммунитет, развитие и метаболизм3. Кроме того, яд паразитоидных ос демонстрирует удиви....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Разведение насекомых

  1. Кормят Corcyra cephalonica на кукурузной муке при температуре 26 ± 1°С и относительной влажности воздуха 40% ± 10%.
  2. Разводить штамм T. dendrolimi из инсектария Цзилинь в помещении, используя яйца Corcyra cephalonica в качестве хозяев. Кормят взрослых ос 10%-ной сахарозой водой в трубках дрозофилы при температуре 26 ± 1 °C, относительной влажности воздуха 70% ± 10%, светлых (L): темных (D) периодов 14 ч: 10 ч.

2. Подготовка карт яиц из полиэтиленовой пленки

  1. Возьмите полиэтиленовую пленку длиной 16 см, шир....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Концентрацию белка в репрезентативных образцах яда измеряли с помощью набора для анализа белков, результаты представлены в таблице 1. Результаты показали, что концентрация белка яда, собранного этим методом, варьировала от 0,35 мкг/мкл до 0,46 мкг/мкл, в то время как отрицательный контроль раствора аминокислоты имел концентрацию белка только от 0,03 мкг/мкл до 0,05 мкг/мкл. Концентрация белка яда, собранного этим методом, намного выше, чем у отрицательного контроля, что показывает, что этот метод может х.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В данной статье мы представляем метод извлечения яда из T. dendrolimi с использованием искусственных хозяев. Ключевые моменты в эксперименте по сбору яда заключаются в следующем. (1) Во время приготовления T. dendrolimi необходимо быстро обезболивать соответствующей концентрацией CO2. Если концентрацияСО2 слишком низкая, ее будет недостаточно для быстрого обезболивания трихограммы . И наоборот, если концентрация слишком высока, трихограммы могут погибнуть, снижая .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Автору нечего раскрывать и нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Выражаем признательность за финансовую поддержку со стороны Фонда естественных наук провинции Хайнань (грант No 323QN262), Национального фонда естественных наук Китая (гранты No 31701843 и 32172483), Фонда инноваций в области сельскохозяйственной науки и технологий провинции Цзянсу (грант No 323QN262). CX(22)3012 и CX(21)3008), Фонд «Доктор Шуанчуан» провинции Цзянсу (грант No 202030472) и стартап-фонд Нанкинского сельскохозяйственного университета (грант No 804018).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
10 μ m Нейлоновая сеткаMilliporeNY1002500Для фильтрации яиц
10% Поливиниловый спиртАладдинP139533Для привлечения T. dendrolimi  для откладывания яиц
10% Вода сахарозыХимический реагент Sinopharm 10021463Feed Trichogramma dendrolimi4x
LDS загрузочный буферAce HardwareB23010301SDS-PAGE
Collection boxDeli8555Контейнер для T. dendrolimi паразитизм
Future PAGE  4– 12% (12 лунок)Ace HardwareJ70236502XSDS-PAGE
Аппарат для окрашивания белка GenScript eStain L1GenScriptL00753SDS-PAGE
Стержень для шлифования стекла   Applygentb6268Полукруглые выступы 
L- LeucineSolarbioL0011Компоненты искусственного хозяина
L-гистидинАладдинA2219458Компоненты искусственного хозяина
L-фенилаланинSolarbioP0010Компоненты искусственного хозяина
Мини-центрифугиScilogexD1008Центрифуга
MOPS-SDS беговой буферAce HardwareB23021SDS-PAGE
Набор для анализа белка Omni-Easy Instant BCAShanghai Yamay Biomedical Technology ZJ102Для оценки концентрации белка яда
ПЦР планшет с раскладкой 96 отверстийThermo FisherAB1400LПолукруглые выступы 
Полиэтиленовая пленкаСучжоу Аопанг Трейдинг  001c5427Карта для искусственных яиц
Прекрасный цветной белковый маркер (10– 180 кДа)YiFeiXue BiotechYWB007SDS-PAGE
Резиновая лентаGuangzhou qianrui биология наука и техника009Затяните пластиковую пленку и коробку для сбора
Силиконовая резиновая септа коврик, 96-лунка, круглое отверстиеSangon BiotechF504416-0001Полукруглые выступы 

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pennacchio, F., Strand, M. R. Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera. Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).
  2. Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. Research advances on....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

SDS

Похожие статьи