Методическая статья

Создание экспериментальной мышиной модели эндометриомы для изучения связанного с ней бесплодия

2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/66240

⸱

5 апреля 2024 г.

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynaecology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 2Reproduction and Development, Li Ka Shing Institute of Health Sciences, The Chinese University of Hong Kong, 3School of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 4Chinese University of Hong Kong-Sichuan University Joint Laboratory in Reproductive Medicine, The Chinese University of Hong Kong

В этой статье

Краткое содержание

В этом исследовании представлена новая мышиная модель, специально разработанная для моделирования эндометриомы, клинически значимого подтипа эндометриоза. Используя мышей C57BL/6J, модель направлена на выяснение патофизиологических механизмов, лежащих в основе бесплодия, связанного с эндометриомой, предлагая усовершенствованный инструмент для преодоления существующего пробела в знаниях в репродуктивной медицине.

Аннотация

Эндометриома (ОМА), подтип эндометриоза, характеризующийся образованием эндометриоидных кист в яичниках, поражает 17-44% лиц с диагнозом эндометриоз. Женщины с ОМА часто испытывают нарушение фертильности, но точные механизмы, лежащие в основе бесплодия, связанного с ОМА, остаются неясными. Примечательно, что существующие животные модели имитируют поверхностный перитонеальный эндометриоз (SUP) и глубокий инфильтрирующий эндометриоз (DIE), оставляя заметный пробел в исследованиях, посвященных OMA. В ответ на пробел в знаниях в этой статье представлена новаторская модель мыши, имитирующая OMA, и дается всестороннее описание методов и процедур, используемых в модели. С высоким уровнем успеха в 83% и специфичностью поражения яичников, эта модель имеет значительные перспективы для улучшения нашего понимания ОМА, особенно в контексте бесплодия. Он предлагает ценную платформу для проведения целенаправленных исследований проблем, связанных с фертильностью, связанной с ОМА, потенциально прокладывая путь к улучшению диагностических и терапевтических стратегий в области репродуктивной медицины.

Введение

Эндометриома (ОМА) является наиболее преобладающим подтипом эндометриоза, наблюдается примерно у 17-44% лиц с диагнозом эндометриоз 1,2. Для него характерно образование эндометриоидных кист внутри яичников. Эти цисты, в просторечии называемые «шоколадными цистами», получили свое название из-за их характерной коричневой, похожей на смолу консистенции3. Помимо ОМА, эндометриоз также может проявляться в виде поверхностного перитонеального эндометриоза (SUP) и глубокого инфильтрирующего эндометриоза (DIE). SUP относится к поражениям на перитонеальной слизи, тогда как DIE относится к поражениям, проникающим более чем на 5 мм ниже поверхности брюшины4. Гетерогенность по локализации, внешнему виду и глубине поражения среди этих подтипов эндометриоза приводит к различным клиническим симптомам и различной тяжести заболевания 5,6. ОМА особенно связана с более тяжелыми стадиями эндометриоза и связана с бесплодием, тазовыми спайками и повышенным риском рака яичников 1,7,8,9.

Связь эндометриоза, особенно ОМА, с бесплодием является клинической проблемой, вызывающей серьезную озабоченность. Эндометриоз присутствует у 25-50% бесплодных женщин, при этом у 30-50% женщин с диагнозом эндометриоз наблюдается бесплодие 10,11,12,13,14. В то время как точные механизмы бесплодия, ассоциированного с ОМА, остаются неясными, были выдвинуты некоторые гипотезы. Одно из них предполагает, что эндометриоз приводит к хроническому воспалительному состоянию, которое может нарушить нормальную функцию яичников и ухудшить качество ооцитов15,16. Другой предполагает аномальную перегрузку железом в фолликулярной жидкости яичников, которая, как полагают, связана с нарушением созревания ооцитов. Другие исследования посвящены нарушениям гормональной регуляции17, качеству ооцитов18 и развитию эмбриона19.

Исторически сложилось так, что модели грызунов сыграли решающую роль в углублении нашего понимания эндометриоза, особенно в изучении его патологии, влияния на фертильность и механизмов боли 20,21,22,23. Грызуны, особенно крысы и мыши, широко использовались в качестве животных моделей для изучения причинно-следственных связей, основных механизмов, потенциальных методов диагностики и терапевтических вмешательств для этого заболевания 22,24,25,26. Важно понимать, что все животные модели имеют свои конкретные применения и ограничения. Выбор той или иной модели зависит от конкретного результата или аспекта, который измеряетсяили изучается. Например, модель на крысах показала, что стресс может усугублять проявления эндометриоза и влиять на параметры воспаления, что дает представление о потенциальныхтриггерах заболевания.

В контексте исследований эндометриоза используются различные модели грызунов. Одним из часто используемых подходов является гомологичная модель, которая включает трансплантацию ткани матки грызуна в брюшную полость или брыжеечные сосуды того же вида29. Эта модель обладает преимуществами с точки зрения иммунокомпетентности и пригодности для долгосрочных исследований30. Тем не менее, ограничения возникают из-за частичного несоответствия между имплантированной эктопической тканью матки мыши и характеристиками эндометриоидных поражений человека31. Другим подходом является гетерологичная модель, при которой биопсия эндометрия человека имплантируется мыши с ослабленным иммунитетом32. Данная модель позволяет использовать эктопический эндометрий человека в качестве донорской ткани для развития поражения, обеспечивая конструктивную валидность32. Тем не менее, он полагается на мышей с ослабленным иммунитетом в качестве реципиентов, что препятствует всесторонней оценке иммунных реакций, участвующих в этиологии расстройства. Тем не менее, важно признать, что существующие модели в первую очередь сосредоточены на отражении обобщенного состояния SUP, неадекватно отражая уникальные характеристики OMA и DIE34. В настоящее время существует небольшое количество конкретных моделей для изучения DIE, существует лишь несколько моделей, включая недавнюю модель грызунов, разработанную Yan et al.35. Этот дефицит подчеркивает необходимость дальнейших исследований и разработки моделей, которые точно отражают конкретные характеристики DIE. Кроме того, наше понимание ОМА, особенно ее тонкой связи с фертильностью, также остается ограниченным26,36.

Решая существующие проблемы, в данной статье представлена новая экспериментальная гомологичная модель мыши, специально предназначенная для моделирования ОМА. Он направлен на то, чтобы дать уникальное представление о патологических механизмах, лежащих в основе бесплодия, связанного с ОМА, тем самым восполнив пробел в знаниях в этой важнейшей области репродуктивной медицины. Короче говоря, мыши C57BL/6J использовались из-за их репродуктивных признаков, схожих с человеческими. После синхронизации цикла течки ткани матки мышей-доноров были измельчены и трансплантированы в овариальную сумку мышей-реципиентов в соотношении 1:2. После 4-недельного интервала были проведены морфологическое и гистологические исследования поражений яичников для подтверждения наличия ОМА и оценки любой связанной с ней фолликулярной атрезии. С 83% успешным показателем, эта модель предлагает исследователям надежную платформу для исследований ОМА, подчеркивая развитие поражений конкретно в яичниках для целенаправленных исследований.

Протокол

Все экспериментальные процедуры, проведенные в этом исследовании, были одобрены и регламентированы в соответствии с протоколом No 21-203-MIS_[C] Этическим комитетом Китайского университета Гонконга.

1. Акклиматизация и отбор животных

  1. Подготовка мышей
    1. Приобретите 18 мышей C57BL/6J (первородящие самки, 8-9 недель: 6 доноров, 12 реципиентов) у надежного поставщика. Проверьте сертификаты о состоянии здоровья.
    2. Содержание всех мышей в контролируемых условиях содержания: 22-24 °C, уровень влажности от 40% до 60% и 12-часовой цикл свет/темнота. Используйте воздух, отфильтрованный HEPA, если он доступен.
    3. Обеспечьте 72-часовую акклиматизацию мышей с постоянным доступом к пище и воде, сводя к минимуму взаимодействие с человеком для снижения стресса.
  2. Синхронизация эстрального цикла
    1. Собрать подстилку, содержащую мужские феромоны; Вводите его в женские клетки на 48 ч.
  3. Цитология влагалища
    1. Проведите цитологическое исследование влагалища на следующее утро.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мазок необходимо проводить в одно и то же время суток, обычно в 9:00 утра.
      1. Заранее подготовьте ватные палочки с двумя головками, автоклавный PBS, чашку Петри 35 мм и стеклянные предметные стекла. Раздайте 10 мл PBS в чашке Петри. Погрузите один конец ватного тампона в PBS, чтобы он впитал жидкость.
      2. Аккуратно выньте одну мышь из клетки и положите ее на крышку пустой клетки.
      3. Обхватите хвост большим и указательным пальцами одной руки, а другой рукой возьмите смоченный ватный тампон и аккуратно введите его во влагалище мыши. Осторожно введите кончик палочки тампона на глубину примерно 1,0 см во влагалище мыши. Вращайте тампон осторожно, сохраняя при этом угол около 45° к длинной оси тела животного.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Медленное вращение тампона во время введения может способствовать более гладкой процедуре и свести к минимуму потенциальную стимуляцию шейки матки.
      4. Аккуратно удалите клетки из просвета и стенок влагалища, непрерывно вращая тампон, а затем осторожно извлеките тампон.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Во время этого процесса следите за тем, чтобы тампон постоянно вращался, стараясь при этом не соприкасаться с окружающими волосками. После этого осторожно извлеките тампон, чтобы избежать возможного загрязнения.
      5. Перенесите собранные клетки, аккуратно прокатив кончик тампона по чистому стеклянному предметному стеклу с предварительной маркировкой.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Палочку для тампона следует выбросить после переноса клеток на предметные стекла, и для каждого животного следует использовать новую.
      6. Осмотрите предметные стекла под микроскопом, чтобы обнаружить ороговевшие эпителиальные клетки. Обратите внимание на равномерное присутствие ороговевших эпителиальных клеток в цитологии влагалища, что указывает на стадию течки. Делайте фотографии и записывайте наблюдения.
        ПРИМЕЧАНИЕ: При наличии соответствующих знаний окрашивание вагинальных мазков не требуется. Однако, если экспериментатор не может «прочитать» мазки, не испачкав их, то это необходимо.

2. Установление модели эндометриомы

Примечание: Отбирайте мышей только на стадии течки в качестве доноров и реципиентов в модельном учреждении. Проводя эксперименты на одной мыши, убедитесь, что она находится вне поля зрения других и что она не будет повторно введена в компанию других животных до полного выздоровления. Схему генерации модели можно найти на рисунке 1.

  1. Препарирование донорской ткани
    1. Успокоите мышей-доноров комбинацией кетамина (75 мг/кг) и ксилазина (10 мг/кг). Усыпить мышей-доноров путем транслокации шейки матки под наркозом.
    2. Продезинфицируйте область живота тампоном из 70% этанола.
    3. С помощью стерильных хирургических ножниц сделайте разрез (1 см) по средней линии брюшины, чтобы обнажить мышечный слой. Выберите еще одну пару хирургических ножниц, чтобы разрезать мышечный слой и открыть тазовую полость.
    4. Закройте кончики щипцов и аккуратно приподнимите кишечник с помощью тупой центральной части.
    5. Определите местоположение матки и тканей яичников. Проведите стерильное вскрытие всего рога матки, включая оба рога матки, убедившись, что приблизительный размер удаляемого фрагмента составляет ~1,5 см в длину. Поместите вырезанные салфетки в чашку Петри, содержащую PBS, и удалите лишние жировые ткани.
    6. Поминутно рассеките ткани на кусочки по 1 мм³ с помощью стерилизованного скальпеля. Поддерживайте влажность тканей, периодически добавляя PBS.
  2. Процедура трансплантации
    1. Обезболите мышей-реципиентов смесью кетамина (75 мг/кг) и ксилазина (10 мг/кг).
    2. Нанесите офтальмологическую мазь, чтобы предотвратить сухость глаз во время операции. Поместите мышей в лежачем положении на стерильную хирургическую доску.
    3. Определите место хирургического вмешательства, осторожно манипулируя задними лапами мыши, при этом под кожей прощупывается костный выступ. Эта выпуклая точка, хорошо видимая через кожу, служит надежным анатомическим маркером для яичников мыши-реципиента во время хирургической процедуры.
    4. Выбрейте место операции, убедившись, что 150% площади вокруг него очищено от шерсти. Затем продезинфицируйте кожу чередующимися раундами бетадина и 70% алкоголя не менее 3 раз. Используйте стерильную хирургическую простыню, чтобы предотвратить контакт между тканями, стерильными инструментами и швами с остатками шерсти. Наконец, сделайте точный боковой разрез (3-5 мм) в заранее определенном месте операции.
    5. Стабилизируйте яичник с помощью недоминантных щипцов для рук. Осторожно введите 100 мкл PBS в яичниковую сумку, наблюдая за небольшим расслоением.
    6. Создайте крошечную щель в бурсе. Пересадите фрагменты ткани матки (1 мм³) с помощью микрощипцов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте чрезмерной набивки, чтобы предотвратить давление на окружающие ткани.
    7. Для фиктивной операции повторите все шаги, кроме шага 2.2.6.
  3. Послеоперационный уход
    1. Сшить мышечные слои рассасывающимися нитями (например, 5-0 викрилом) и кожу нерассасывающимися нитями (например, 5-0 нейлоном).
    2. Поместите мышь на грелку, установленную на 37 °C, пока не вернется полное сознание. Следите за дыханием и дождитесь, когда конечности станут розовыми.
    3. Вводите бупренорфин (0,1 мг/кг, подкожно) при боли каждые 12 ч в течение 48 ч. Проверяйте наличие признаков боли, инфекции или дистресса каждые 8 часов в течение первых 24 часов, а затем 3 раза в день в течение следующих 3 дней.
      Примечание: Животное не оставляют без присмотра до тех пор, пока оно не придет в сознание настолько, чтобы поддерживать лежачее положение на грудине.

3. Валидация модели

  1. Валовая валидация
    1. Через 4 недели обезболите мышей-реципиентов комбинацией кетамина (75 мг/кг) и ксилазина (10 мг/кг). Затем под глубокой анестезией усыпляют мышей, выполняя транслокацию шейки матки.
    2. Выполните разрез по средней линии и обнажите брюшную полость для осмотра органа.
    3. Извлеките яичники с видимыми поражениями и сделайте фотографии.
    4. Тщательно осмотрите на предмет посторонних эндометриоидных образований.
  2. Гистологическая валидация
    ПРИМЕЧАНИЕ: В связи с присутствием в гистологических экспериментах потенциально раздражающих пахучих растворителей, его следует проводить в вытяжном шкафу.
    1. Зафиксируйте яичники вместе с очагами поражения в 10% нейтрально-буферизованном формалине.
    2. Обрабатывайте ткани в соответствии с теми же процедурами, которые описаны в Adeniran et al.37, включая выделение тканей, фиксацию и встраивание.
    3. Последовательно разрезают ткани толщиной 4-5 мкм, плавают в водяной бане при 45 °C и устанавливают на стеклянные предметные стекла. Четко обозначьте слайды номером мыши, стороной завязи и номером раздела. Сушите в течение ночи при температуре 37 °C.
    4. Окрашивание PAS-гематоксилином
      1. Депарафинизация: Поместите предметные стекла в ксилол или заменитель ксилола, чтобы удалить парафин.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Возможно, вам придется выполнить этот шаг пару раз.
      2. Регидратация: Постепенно увлажняйте участки тканей, помещая предметные стекла в ряд с уменьшающейся концентрацией этанола (100%, 95%, 80%, 70%).
      3. Периодическая кислотная обработка: Покройте участки тканей 1% периодическим раствором кислоты и оставьте на 5-10 минут при комнатной температуре.
        Примечание: На этом этапе гликолевые группы ткани окисляются до альдегидных групп, что позволяет провести реакцию с реагентом Шиффа и образовать пурпурно-розовое пятно, указывающее на структуры яичников.
      4. Тщательно промойте предметные стекла дистиллированной водой, чтобы удалить остатки периодической кислоты.
      5. Окрашивайте участки ткани раствором Шиффа в течение 15 минут.
      6. Промойте предметные стекла сначала в горячей проточной воде из-под крана, чтобы удалить излишки пятна, затем в дистиллированной воде.
      7. Срезы нанести в противовес 1 г/л гематоксилина Мейера в течение 2-3 мин.
      8. Промойте горки в проточной воде из-под крана в течение 2-3 минут.
      9. Нанесите реагент Bluing в течение 30 с.
      10. Промойте горки в дистиллированной воде.
      11. Постепенно обезвоживайте срезы, погружая их в концентрацию этанола с возрастающей концентрацией (70%, 80%, 95% и 100%).
      12. Погрузите срезы в очищающий агент (например, ксилол), чтобы сделать их прозрачными.
      13. Нанесите монтажный материал на секции на предметных стеклах и аккуратно наденьте защитный стекло на секции, убедившись, что на них нет пузырьков воздуха. Дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе в кожухе, чтобы облегчить затвердевание монтажной среды.
    5. Рассмотрите под световым микроскопом. Документально подтвердить наличие эндометриальных желез, стромы и геморрагических кист, подтверждающих эндометриоз в яичнике.

Результаты

Успешное создание OMA
Из 12 мышей, подвергшихся протоколу трансплантации, у 10 наблюдались характерные поражения OMA, как на валовом, анатомическом, так и на гистологическом уровне, что соответствует уровню успеха 83%. При общем обследовании были выявлены заполненные жидкостью поражения, приросшие к яичникам, напоминающие клинические проявления ОМА (рис. 2). Гистопатологическое исследование, как показано на рисунке 3, подтвердило успешную имплантацию эктопической ткани эндометрия. Кроме того, инфильтрация эндометриоидных поражений вызвала массивную атрезию фолликулов рядом с имплантатами, что указывает на ее вмешательство в среду яичников.

Специфика модели
Решающее значение для валидности модели имела ее специфичность для эндометриоза яичников. При тщательном обследовании не было выявлено никаких посторонних эндометриоидных имплантатов ни в одном другом органе таза или брюшной полости, что подчеркивает точность модели и ее потенциал в качестве надежного инструмента для исследования эндометриомы и связанного с ней бесплодия.

figure-results-1
Рисунок 1: Создание модели эндометриомы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

figure-results-2
Рисунок 2: Общая анатомия эндометриомы. По сравнению с фиктивной контрольной группой, эктопический эндометриальный кистозный рост был виден в связи с морфологией яичников через 4 недели после трансплантации в группе ОМА по морфологии. Синий пунктирный контур: эндометриозное поражение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Гистологически окрашенный срез поражения эндометрия с мышиной модели. По сравнению с фиктивной контрольной группой, эктопический кистозный рост эндометрия был виден в ассоциации с яичником через 4 недели после трансплантации в группе ОМА по гистологии. Черные стрелки указывают на атретические фолликулы. Масштабные линейки = 0,5 мм. Аббревиатура: ОМА = эндометриома. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Обсуждение

Распространенность ОМА среди женского населения мира подчеркивает критическую проблему здравоохранения38. Помимо общих симптомов эндометриоза, ОМА создает дополнительные проблемы для фертильности, включая сильную тазовую боль, возможность перекрута яичников и другие заметные последствия39,40. В то время как понимание патогенеза и прогрессирования ОМА в значительной степени окутано тайной, вакуум знаний не только препятствует формулированию целевых терапевтических стратегий, но и означает, что многие женщины продолжают страдать от неоптимального лечения и рецидивирующих симптомов. Решение многих современных женщин отложить деторождение еще больше усиливает опасения по поводу фертильности, связанные с ОМА, что делает еще более насущной необходимость всестороннего понимания и рассмотрения ее патофизиологии.

Исторически сложилось так, что одним из наиболее значительных препятствий на пути к пониманию ОМА было отсутствие решительной и точной модели на животных. Несмотря на то, что в прошлом было исследовано несколько моделей, они часто не смогли воспроизвести специфику ОМА или ввести дополнительные искажающие переменные из-за проявления поражений в органах, отличныхот яичников. Мы разработали мышиную модель, чтобы воспроизвести ОМА и улучшить наше понимание заболевания. Наша хирургическая методика заключалась в имплантации измельченных тканей матки в яичниковую сумку мышей для обеспечения развития эндометриоидных поражений в яичниках. Тщательное наблюдение после операции позволило нам оценить прогрессирование ОМА и обеспечить благополучие мышей. Чтобы повысить актуальность модели, мы сохранили яичниковую сумку нетронутой, а не удалили ее. Это изменение было направлено на предотвращение утечки имплантатов в другие органы и обеспечение специфической локализации поражений в яичниках. Кроме того, мы рассмотрели потенциальные осложнения, такие как кровотечение или инфекция, во время процедуры. В этом исследовании окрашивание PAS использовалось для выявления наличия слизи, что обычно делается для оценки гистологии фолликулов яичников42,43. Идентификация атретических фолликулов в срезах яичников, прилегающих к эндометриозному поражению, является решающим доказательством того, как эндометриоз негативно влияет на развитие фолликулов 43,44,45. Этот вывод имеет большое значение для дальнейших исследований бесплодия, связанного с эндометриомой, что подтверждается нашей моделью. Включение гистологической валидации позволило всесторонне понять патологические изменения, связанные с эндометриозом в нашей модели. Это включение повышает надежность и актуальность наших результатов и помогает установить связь между эндометриозом и дисфункцией яичников. Также важно признать ограничения нашей методики. Хотя эта модель успешно воспроизвела поражения яичников, связанные с ОМА, она может не полностью охватить сложность эндометриоза. Перенос результатов с животных моделей на людей имеет неотъемлемые ограничения из-за межвидовых различий.

В отличие от этого, это исследование основано на предыдущих исследованиях на мышиных моделях эндометриоза яичников, гдебыла проведена аналогичная процедура имплантации маточных рогов в яичники. Тем не менее, между этим методом и предыдущими моделями есть заметные различия. Во-первых, эта модель формирует поражения исключительно на яичниках, в то время как предыдущая модель показала эндометриоидные поражения и в других органах, а не только в яичниках. Это различие делает их модель более вероятной для имитации комбинированных подтипов эндометриоза, а не специфичной для ОМА. Наше целенаправленное проявление позволяет исследователям сосредоточиться именно на нюансах ОМА без искажающего влияния поражений в других органах. Преодолевая эти ограничения, наша модель обеспечивает более точное представление OMA и служит надежной платформой для будущих исследований. Во-вторых, эта модель демонстрирует похвальный показатель успеха в 83% в зеркальном отражении ОМА, обеспечивая высокую точность воспроизведения заболевания.

Стоит отметить, что рецидив ОМА является серьезной проблемой, так как многие женщины испытывают рецидивирующие симптомы даже после первоначальных лечебных вмешательств. В нескольких исследованиях оценивали рецидив эндометриоза и диагностические тесты в этом контексте. Например, Yildiz et al. обсуждали использование трансвагинального ультразвука в качестве диагностического инструмента для выявления специфических ультразвуковых маркеров и паттернов для точной диагностики и мониторинга рецидива47. В другом исследовании основное внимание уделялось долгосрочному наблюдению за женщинами с эндометриозом и оценивалась частота рецидивов после хирургического лечения48. В этом исследовании подчеркивается важность индивидуализированных стратегий лечения, основанных на характеристиках заболевания и факторах пациента, для минимизации риска рецидива. Кроме того, некоторые исследователи изучили потенциал циркулирующих биомаркеров для прогнозирования рецидива эндометриоза49. В исследовании изучаются специфические молекулярные маркеры и их связь с рецидивом заболевания, что дает представление о разработке неинвазивных диагностических тестов и персонализированных подходов к лечению. Эти исследования подчеркивают продолжающиеся усилия по пониманию и лечению рецидивов эндометриоза, а также разработку диагностических тестов для улучшения результатов лечения пациентов. Включение знаний, полученных в ходе этих исследований, в наши исследования мышиной модели ОМА может способствовать всестороннему пониманию заболевания, закономерностей рецидивов и потенциальных диагностических стратегий для мониторинга и лечения ОМА.

В заключение следует отметить, что создание этой специфической модели мыши OMA служит краеугольным камнем для новой эры исследований в области эндометриоза. Устраняя давний пробел, он обещает каскад идей и прорывов, которые могут революционизировать то, как мы понимаем, лечим и потенциально предотвращаем эндометриому, что приведет к улучшению клинических результатов и улучшению качества жизни пострадавших женщин. Важно отметить, что, сравнивая этот метод с предыдущими моделями ОМА и учитывая результаты исследований рецидива эндометриоза и диагностических тестов, мы можем еще больше повысить актуальность и применимость наших исследований в более широком контексте исследований эндометриоза и ухода за пациентами.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Это исследование финансируется в рамках программы тематических исследований, предоставленной Советом по исследовательским грантам правительства Специального административного района Гонконг (T13-602/21-N).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Шприц объемом 1 мл с иглой 25 гBD Biosciences301320
10 мм Чашка для культуры тканейСОКОЛ353001
10% буферизованный формалинНаучный центр ФишераСФ100-4
10x буфер фосфатно-солевой буфер (PBS)Научный центр ФишераАМ9625
Игла 30 гBD Biosciences305107
5-0 черный плетеный шелк нерассасывающийся шовEthicon Inc.W500H
70% этанол
Адгезивные предметные стекла для микроскопаМариенфельд810401
Бупренорфин для инъекций Мед-Вет ИнтернэшнлRXBUPRENOR5
Ватный тампон с двойной головкойСАНЬО Ко., Лтд.ХУБИ-340
Тонкие щипцыИнструменты для точной науки11254-20
КетаминАльфасан Интернэшнл Б.В2203095-08
МикротрубкиCorning MCT-150-C
ИглодержательКорпорация «Эксета»2827-NH-35-SE-ND
Офтальмологическая мазьОсновные фармацевтические отрасли10033691
Набор для периодического окрашивания кислотой Schiff (PAS) АбкамАБ150680
Неопудренные стерильные перчаткиНаучный центр Фишера19020558
Обработка/встраивание кассетНаучный центр Фишера15-197-700А
Размер 3 скальпельНаучный центр Фишера22-079-657
Маленькие зубчатые полуизогнутые щипцыРобоз Хирургические инструменты Ко.РС-5135
Маленькие хирургические ножницыРобоз Хирургические инструменты Ко.РС-5850
Стандартный световой микроскопДля оценки цитологического анализа влагалища, мазков и гистологического анализа.
Лезвия стальных скальпелей #10Б.БраунВВ510
Стерильная марляМЕДИКОМHMWS 077
Стерилизованные чашки Петри из пирексового стеклаКорнинг70160-101
Терморегулируемая электрическая прокладка 
ВИКРИЛ РАПИД (полиглактин 910) рассасывающийся шовный материалEthicon Inc.Ш9918
Ксилазин Альфасан Интернэшнл Б.В2110333-10

Ссылки

  1. Khan, K. N., et al. Pelvic pain in women with ovarian endometrioma is mostly associated with coexisting peritoneal lesions. Hum Reprod. 28 (1), 109-118 (2013).
  2. Gałczyński, K., Jóźwik, M., Lewkowicz, D., Semczuk-Sikora, A., Semczuk, A. Ovarian endometrioma - a possible finding in adolescent girls and young women: A mini-review. J Ovarian Res. 12 (1), 104(2019).
  3. Tan, Z., et al. Impacts of endometrioma on ovarian aging from basic science to clinical management. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1073261(2022).
  4. Khan, K. S., et al. Mri versus laparoscopy to diagnose the main causes of chronic pelvic pain in women: A test-accuracy study and economic evaluation. Health Technol Assess. 22 (40), 1-92 (2018).
  5. Nisenblat, V., et al. Blood biomarkers for the non-invasive diagnosis of endometriosis. Cochrane Database Syst Rev. 2016 (5), 012179(2016).
  6. Harirchian, P., et al. Lesion kinetics in a non-human primate model of endometriosis. Hum Reprod. 27 (8), 2341-2351 (2012).
  7. Santulli, P., et al. Endometriosis-related infertility: Ovarian endometrioma per se is not associated with presentation for infertility. Hum Reprod. 31 (8), 1765-1775 (2016).
  8. Dai, Y., Li, X., Shi, J., Leng, J. A review of the risk factors, genetics and treatment of endometriosis in chinese women: A comparative update. Reprod Health. 15 (1), 82(2018).
  9. Younis, J. S. Endometriosis-associated ovarian cancer: What are the implications for women with intact endometrioma planning for a future pregnancy? A reproductive clinical outlook. Biomolecules. 12 (11), 1721(2022).
  10. Bonavina, G., Taylor, H. S. Endometriosis-associated infertility: From pathophysiology to tailored treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1020827(2022).
  11. Filip, L., et al. Endometriosis associated infertility: A critical review and analysis on etiopathogenesis and therapeutic approaches. Medicina (Kaunas). 56 (9), 460(2020).
  12. Tanbo, T., Fedorcsak, P. Endometriosis-associated infertility: Aspects of pathophysiological mechanisms and treatment options. Acta Obstet Gynecol Scand. 96 (6), 659-667 (2017).
  13. Bulletti, C., Coccia, M. E., Battistoni, S., Borini, A. Endometriosis and infertility. J Assist Reprod Genet. 27 (8), 441-447 (2010).
  14. Ni, Z., et al. Iron-overloaded follicular fluid increases the risk of endometriosis-related infertility by triggering granulosa cell ferroptosis and oocyte dysmaturity. Cell Death Dis. 13 (7), 579(2022).
  15. Mohammed Rasheed, H. A., Hamid, P. Inflammation to infertility: Panoramic view on endometriosis. Cureus. 12 (11), e11516(2020).
  16. Jing, X., et al. Systemic inflammatory response markers associated with infertility and endometrioma or uterine leiomyoma in endometriosis. Ther Clin Risk Manag. 16, 403-412 (2020).
  17. Marcellin, L., et al. Serum antimullerian hormone concentration increases with ovarian endometrioma size. Fertil Steril. 111 (5), 944-952 (2019).
  18. Deng, Y., et al. Does current ovarian endometrioma increase the time for dor patients to reach live birth in ivf. BMC Pregnancy Childbirth. 22 (1), 324(2022).
  19. Dongye, H., Tian, Y., Qi, D., Du, Y., Yan, L. The impact of endometrioma on embryo quality in in vitro fertilization: A retrospective cohort study. J Clin Med. 12 (6), 2416(2023).
  20. He, Y., et al. Re-evaluation of mouse models of endometriosis for pathological and immunological research. Front Immunol. 13, 986202(2022).
  21. Kanellopoulos, D., et al. The interplay between endometriosis and fertility in rats: A systematic review. J Med Life. 15 (6), 742-746 (2022).
  22. Tejada, M. A., et al. Rodent animal models of endometriosis-associated pain: Unmet needs and resources available for improving translational research in endometriosis. Int J Mol Sci. 24 (3), 2422(2023).
  23. Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: Identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Curr Womens Health Rev. 14 (2), 173-188 (2018).
  24. Buigues, A., et al. Evaluation of pai-1 in endometriosis using a homologous immunocompetent mouse model. Biol Reprod. 99 (2), 326-335 (2018).
  25. Tirado-Gonzalez, I., et al. Endometriosis research: Animal models for the study of a complex disease. J Reprod Immunol. 86 (2), 141-147 (2010).
  26. Lagana, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: A long and windy road. Ann Transl Med. 6 (22), 431(2018).
  27. Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. Role of animal models in biomedical research: A review. Lab Anim Res. 38 (1), 18(2022).
  28. Cuevas, M., et al. Stress exacerbates endometriosis manifestations and inflammatory parameters in an animal model. Reprod Sci. 19 (8), 851-862 (2012).
  29. Nunez-Badinez, P., et al. Preclinical models of endometriosis and interstitial cystitis/bladder pain syndrome: An innovative medicines initiative-paincare initiative to improve their value for translational research in pelvic pain. Pain. 162 (9), 2349-2365 (2021).
  30. Umezawa, M., et al. Expression profile of extracellular matrix and adhesion molecules in the development of endometriosis in a mouse model. Reprod Sci. 19 (12), 1365-1372 (2012).
  31. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. 12 (5), 641-649 (2006).
  32. Tejada, M. A., et al. Identification of altered evoked and non-evoked responses in a heterologous mouse model of endometriosis-associated pain. Biomedicines. 10 (2), 501(2022).
  33. Bruner-Tran, K. L., Carvalho-Macedo, A. C., Duleba, A. J., Crispens, M. A., Osteen, K. G. Experimental endometriosis in immunocompromised mice after adoptive transfer of human leukocytes. Fertil Steril. 93 (8), 2519-2524 (2010).
  34. Malvezzi, H., Marengo, E. B., Podgaec, S., Piccinato, C. A. Endometriosis: Current challenges in modeling a multifactorial disease of unknown etiology. J Transl Med. 18 (1), 311(2020).
  35. Yan, D., Liu, X., Guo, S. -W. The establishment of a mouse model of deep endometriosis. Human Reproduction. 34 (2), 235-247 (2018).
  36. Santulli, P., et al. Protein oxidative stress markers in peritoneal fluids of women with deep infiltrating endometriosis are increased. Hum Reprod. 30 (1), 49-60 (2015).
  37. Adeniran, B. V., Bjarkadottir, B. D., Appeltant, R., Lane, S., Williams, S. A. Improved preservation of ovarian tissue morphology that is compatible with antigen detection using a fixative mixture of formalin and acetic acid. Hum Reprod. 36 (7), 1871-1890 (2021).
  38. Sima, R. M., et al. Novel diagnosis of mesenteric endometrioma: Case report. Medicine (Baltimore). 98 (29), e16432(2019).
  39. Eskenazi, B., Warner, M. L. Epidemiology of endometriosis). Obstet Gynecol Clin North Am. 24 (2), 235-258 (1997).
  40. Laufer, M. R., Goitein, L., Bush, M., Cramer, D. W., Emans, S. J. Prevalence of endometriosis in adolescent girls with chronic pelvic pain not responding to conventional therapy. J Pediatr Adolesc Gynecol. 10 (4), 199-202 (1997).
  41. Tan, Z., et al. What we have learned from animal models to understand the etiology and pathology of endometrioma-related infertility. Biomedicines. 10 (7), 1483(2022).
  42. Meyerholz, D. K., et al. Glycogen depletion can increase the specificity of mucin detection in airway tissues. BMC Research Notes. 11 (1), 763(2018).
  43. Fang, E., et al. Cpeb3 deficiency in mice affect ovarian follicle development and causes premature ovarian insufficiency. Cell Death Dis. 13 (1), 21(2021).
  44. Zhou, J., Peng, X., Mei, S. Autophagy in ovarian follicular development and atresia. Int J Biol Sci. 15 (4), 726-737 (2019).
  45. Kitajima, M., et al. Enhanced follicular recruitment and atresia in cortex derived from ovaries with endometriomas. Fertil Steril. 101 (4), 1031-1037 (2014).
  46. Hayashi, S., et al. Novel ovarian endometriosis model causes infertility via iron-mediated oxidative stress in mice. Redox Biol. 37, 101726(2020).
  47. Yildiz, S., et al. The pain symptoms and mass recurrence rates after ovarian cystectomy or uni/bilateral oophorectomy procedures in patients over 40 years old with endometriosis. Ginekol Pol. 91 (6), 295-300 (2020).
  48. Guney, G., et al. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin serum level: A potential noninvasive biomarker of endometriosis. Medicine (Baltimore). 102 (41), e35539(2023).
  49. Kaya, C., et al. The role of serum caspase 3 levels in prediction of endometriosis severity. Gynecol Obstet Invest. 83 (6), 576-585 (2018).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи