Анализы тромболизиса in vitro часто изо всех сил пытались воспроизвести условия in vivo, будь то в модельном тромбе, который переваривается, или в среде, в которой происходит тромболизис. В данной работе мы исследуем, как сочетание петли Чандлера и флуориметрического анализа проточного фибринолиза в реальном времени (RT-FluFF) используется для высокоточного мониторинга лизиса сгустков ex-vivo.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Отслеживание фибринолиза цельных кровяных сгустков, образованных петлей Чандлера, под действием сдвигового потока в модели тромболизиса in vitro
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Тромбоэмболия и связанные с ней осложнения являются основной причиной заболеваемости и смертности во всем мире, и были разработаны различные анализы для проверки эффективности тромболитических препаратов как in vitro , так и in vivo. Существует растущий спрос на более физиологически релевантные модели тромбов in vitro для разработки лекарств из-за сложности и стоимости, связанных с животными моделями, в дополнение к их частой непереносимости на физиологию человека. Поток, давление и скорость сдвига являются важными характеристиками системы кровообращения, при этом сгустки, которые образуются под действием потока, имеют другую морфологию и характеристики пищеварения, чем статически образующиеся сгустки. Эти факторы часто не представлены в обычных анализах переваривания сгустков in vitro , что может иметь фармакологические последствия, влияющие на показатели успеха трансляции препарата.
Орометрическийанализ Real-T ime Flu Flowing Fibrinolysis (RT-FluFF) был разработан в качестве высокоточной платформы для тестирования тромболизиса, в которой используются флуоресцентно помеченные сгустки, образующиеся под действием поперечного потока, которые затем расщепляются с использованием циркулирующей плазмы в присутствии или без фибринолитических фармацевтических агентов. Изменение скорости потока как на этапе образования тромба, так и на этапах его расщепления позволяет системе имитировать артериальные, легочные и венозные состояния в самых разнообразных экспериментальных установках. Измерения могут проводиться непрерывно с помощью встроенного флуориметра или путем измерения дискретных временных точек, а также обычного измерения массы конечного сгустка. Анализ RT-FluFF представляет собой гибкую систему, которая позволяет отслеживать расщепление сгустков в режиме реального времени в условиях потока, которые более точно отражают физиологические условия in vivo, сохраняя при этом контроль и воспроизводимость системы тестирования in vitro.
Введение
Заболевания, в основном обусловленные тромбоэмболической этиологией, представляют собой основной источник заболеваемости и смертности в современном обществе. Проявления тромбоэмболического патогенеза включают, но не ограничиваются ими, инфаркт миокарда, ишемические инсульты, тромбозы глубоких вен и легочную эмболию1. Огромное количество текущих исследований, охватывающих несколько дисциплин, вращается вокруг разработки безопасных и эффективных методов борьбы с патогенным тромбозом. Вариации артериальных и венозных проявлений тромбоза и различные анатомические локализации привели к разработке различных подходов к лечению. Тем не менее, острое лечение, как правило, основано на использовании фармакологического тромболизиса с помощью активаторов плазминогена с потенциалом механической тромбэктомии при определенных клинических обстоятельствах2.
Разработка новых стратегий фармакологического лечения в основном опирается как на животные модели in vivo, так и на модели экстракорпорального разложения для доклинических испытаний 3,4. Модели in-vivo, естественно, выигрывают от своей способности фиксировать сложное взаимодействие различных физиологических параметров на эффективность лечения, включая клиренс фармацевтических агентов, а также клеточные взаимодействия с лекарствами. Тем не менее, эта же сложность часто делает такие модели довольно дорогостоящими и создает дополнительные проблемы при попытке изолировать лежащую в основе фармакодинамику/кинетику у животных, которые значительно отличаются от физиологии человека. Разработка моделей in vitro помогла в этом, облегчив условия дистиллированного тестирования, в которых можно проводить разработку лекарств и скрининг, но часто им не хватает точности, необходимой для повторения изучаемого состояния заболевания.
Обычно встречающиеся протоколы in vitro для тестирования новых тромболитиков основаны на использовании тромбов, сформированных и лизированных в статических условиях, при этом остаточная масса тромба служит первичной конечной точкой 5,6. К сожалению, такие методы не учитывают механические аспекты лизиса тромба, такие как турбулентный поток и перепады давления через тромбы, которые могут значительно изменить фармакодинамику испытуемых препаратов. Кроме того, сгустки, образующиеся в статических условиях, содержат микроархитектуру, отличную от физиологических сгустков. Было показано, что присутствие сдвига во время образования тромба воспроизводимо влияет на результирующие характеристики тромба, такие как активация тромбоцитов и сшивание фибрина. Сгустки, образующиеся при сдвиговом потоке, демонстрируют сложную неоднородность от кончика до хвоста, которая отсутствует в статически сформированных сгустках 7,8. Такие отклонения от физиологической архитектуры тромба могут повлиять на важную характеристику разработки лекарственного средства, которая включает проникновение препарата в тромб и последующую эффективность лизиса9.
Для устранения некоторых из этих ограничений, связанных с использованием статических моделей свертывания/лизиса сгустков, наблюдается возрождение петли Чандлера как для образования сгустков, так и для лизиса сгустков в присутствии сдвига. Несмотря на то, что такие системы позволяют лучше представить динамику потока и генерировать сгустки с более физиологически релевантной архитектурой по сравнению с относительно статическими анализами, их упрощенные условия потока все же представляют собой отклонение от физиологических условий. Наконец, микрофлюидные подходы также были использованы из-за их простоты визуализации и равномерных схем течения; Тем не менее, они остаются значительным удалением от физиологических состояний, ожидаемых в крупных сосудах, в первую очередь пораженных при наиболее клинически значимых тромбоэмболических заболеваниях11,12.
Учитывая вышеизложенное, мы разработали высокоточную модель тромболизиса in vitro для доклинического скрининга тромболитических препаратов. Модель направлена на устранение некоторых из описанных выше ловушек в области скрининга новой тромболитической терапии и была проверена на воспроизводимость и чувствительность при различных концентрациях активатора тканевого плазминогена (tPA). Описанная здесь система обеспечивает физиологические сдвиговые потоки с использованием перистальтического насоса, демпфера давления, нагреваемого резервуара, двух датчиков давления, встроенного флуориметра и флуоресцентно помеченного аналога сгустка Чандлера, формируемого при сдвиге, для облегчения отслеживания фибринолиза13 в режиме реального времени. В совокупности вся система называется Флуориметрический анализ проточного фибринолиза в реальном времени (RT-FluFF Assay)14 , и в этой рукописи будут обсуждаться тонкости успешной постановки и проведения анализов в этой высокоточной модели тромболизиса in vitro .
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все методы, упомянутые ниже, соответствуют протоколам институционального наблюдательного совета (IRB) и институционального комитета по этике исследований человека. Все здоровые добровольцы предоставили письменное и информированное согласие до сдачи крови. Следует отметить, что все материалы, на которые ссылается протокол, можно найти в Таблице материалов. В то время как ВБ и плазма человека обсуждаются в настоящем протоколе, можно приобрести и заменить их кровью исследуемых животных и продуктами крови, обедненными факторами.
1. Забор цельной крови
- Соберите венозную цельную кровь (WB) у здоровых добровольцев с использованием стандартных методов флеботомии.
ВНИМАНИЕ: Убедитесь, что соблюдаются универсальные меры предосторожности для снижения риска контакта с кровью или другими потенциально инфекционными материалами на протяжении всего этого протокола. Необходимо использовать перчатки, лабораторный халат и лицевой щиток. - Соберите ~50 мл WB непосредственно в пробирки с 3,2% цитратом натрия и немедленно объедините их в пробирки объемом 50 мл для последующего использования.
ПРИМЕЧАНИЕ: Перед забором крови в цитратную пробирку необходимо выбросить пробирку в дополнение к тому, чтобы пробирки были заполнены до рекомендованного производителем объема. Свежесобранный ВБ лучше всего повторит динамику свертывания крови хозяина. Допускается кратковременное хранение ВБ при комнатной температуре (≤за 4 ч до использования). WB не хранится в течение ночи, так как было показано, что это влияет на динамику свертывания крови при исследовании с помощью тромбоэластографии15.
2. Образование тромба
- В 3 мл цитратированной цельной крови добавьте флуоресцентно (флуоресцеин изотиоцианат [FITC]) меченый фибриноген (FITC-Fg) до конечной концентрации 60 г/мл (соотношение 1:50 флуоресцентно меченного фибриногена к немодифицированному фибриногену при условии концентрации эндогенного фибриногена в плазме крови 3 мг/мл).
ПРИМЕЧАНИЕ: Это соотношение может быть увеличено до 1:10 с минимальным влиянием на морфологию тромба. 13,14 Флуоресцентно меченный фибриноген может быть приобретен или получен путем реакции фибриногена с флуоресцеина изотиоцианатом (ФИТК). Смешивание фибриногена следует проводить за ≤5 минут до начала бега.- Если фибриноген был ранее аликвотирован и заморожен, осмотрите размороженный FITC-Fg, чтобы убедиться, что полимеризация не началась преждевременно, что делает его непригодным для использования (убедитесь в отсутствии частиц или волокон в растворе).
- Подготовьте установку петли Чандлера с барабаном диаметром 120 мм на водяной бане при температуре 37 °C (Рисунок 1). Убедитесь, что устройство петли Чандлера способно вращаться с фиксированной скоростью вращения от 0 до 90 об/мин в течение всего процесса образования тромба.
ПРИМЕЧАНИЕ: Дополнительные сведения о настройке и модификации петли Чендлера можно найти в работе Zeng et al.16. - Отрежьте трубку (внутренний диаметр 5/32", внешний диаметр 7/32") и сформируйте петли, которые плотно, но не плотно прилегают к барабану. Для рекомендуемого размера трубки, описанного здесь, вырежьте стандартную ПЦР-пробирку объемом 200 мкл для использования в качестве фитинга для соединения концов трубки с образованием замкнутого контура.
ПРИМЕЧАНИЕ: Трубки разных размеров могут быть использованы для получения сгустковразного размера 16. - Инициируйте свертывание крови путем добавления 200 мМ раствора хлорида кальция в соотношении 1:17 раствора кальция к цельной крови. Загрузите кровь в трубку (заполните ~50% объема пробирки) с помощью шприца объемом 3 мл. Немедленно поместите петлю на барабан петли Чандлера, соединяющий концы, и начните вращение.
- Обеспечьте правильное смешивание с помощью мягкой инверсии перед загрузкой, чтобы избежать проблем, связанных с усадкой компонентов WB.
- Убедитесь, что в каждую пробирку добавляется одинаковое количество крови, так как это может повлиять на размер тромба, если его не держать постоянно.
- Поскольку пузырьки в столбе крови также могут влиять на свертываемость крови, удалите их, осторожно перемещая трубку в виде «качелей», чтобы облегчить выход пузырьков перед загрузкой их в барабан.
- Вращайте барабан, частично погруженный в водяную баню, со скоростью вращения 40 об/мин, чтобы достичь расчетной скорости сдвига ~450 с-1.
ПРИМЕЧАНИЕ: Обратитесь к Zeng et al. для получения информации о рассчитанных ножницах на основе размера трубки и скорости вращения (от 20 до 60 об/мин)16. Типичная скорость венозного и артериального сдвига составляет 20-200 с-1 и 300-1000 с-1 соответственно, при этом ~400-500 с-1 является репрезентативной для легочной артерии. - Дайте образоваться сгусткам в течение 40-60 минут в условиях низкой освещенности, чтобы свести к минимуму фотообесцвечивание фибриногена с флуоресцентной меткой.
- После того, как будет достигнуто желаемое время свертывания, удалите сгустки из трубки и немедленно используйте их. Чтобы обеспечить бережное удаление сгустков без ущерба для структуры, аккуратно переверните трубку, чтобы сгусток медленно выскользнул из трубки в небольшой контейнер.
ПРИМЕЧАНИЕ: Хранение образовавшихся сгустков в цитратированной плазме или PBS в течение ночи при температуре 4 °C может повлиять на последующий анализ разложения сгустков в проточной петле.
3. Настройка прибора RT-FluFF
- Убедитесь, что устройство контура потока подключено, как показано на рисунке 2 , и что все соединения надежно защищены. Короче говоря, аппарат контура потока включает в себя, в порядке направления потока: насос > демпфер > датчик давления на входе > датчик давления > сгусток датчик давления на выходе > флуориметр > нагреваемый резервуар > насос. Отрегулируйте выбор производительности насоса, экспериментального расхода, диаметра и длины трубки, температуры, объема резервуара, а также размера/геометрии сгустка в соответствии с экспериментальными потребностями, уникальными для каждого исследования.
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом примере трубка того же диаметра, которая использовалась в петле Чандлера, была использована для RT-FluFF. Трубка может использоваться для нескольких прогонов в один и тот же день, но ее необходимо контролировать на предмет деградации или утечки и при необходимости менять/промывать ее. Промывание рекомендуется теплой дистиллированной водой между прогонами. В зависимости от экспериментального дизайна может потребоваться замена трубки после каждого прогона. - Как только все трубки будут закреплены, включите монитор давления. Убедитесь, что монитор давления показывает 0 мм рт.ст. для датчиков на входе и выходе. Если это не так, откройте клапаны, чтобы убедиться, что датчики давления открыты для атмосферного давления, и обнулите датчики.
- Включите используемый нагревательный блок или водяную баню и следите за температурой в ходе эксперимента. Поддерживайте температуру на уровне 37 °C, чтобы имитировать физиологическую температуру человеческого тела.
- Включите насос на нужный расход, чтобы проверить наличие утечек и убедиться в работоспособности датчиков давления.
ПРИМЕЧАНИЕ: Скорость потока ~160 мл/мин при этом размере трубки будет представлять скорость сдвига ~500 с-1. - Выключите насос, чтобы облегчить загрузку сгустка.
4. Загрузка сгустка в проточный контур
- Если используется ранее приготовленный сгусток, который хранился, обязательно доведите его до комнатной температуры перед загрузкой в систему проточного контура.
- Потеря массы тромба является важной конечной точкой измерения для анализов тромболизиса. Рекомендуется измерять массу сгустка непосредственно перед загрузкой его в проточный контур, а не полагаться на предварительные измерения.
- Измерения массы сгустков всегда должны проводиться одним и тем же образом, чтобы обеспечить постоянство между образцами и днями анализа, поскольку содержание жидкости внутри и на сгустках может значительно повлиять на их массу. Лучше всего аккуратно промакивать сгустки на лабораторных салфетках до тех пор, пока они не перестанут выделять значительное количество жидкости на салфетку, стараясь не сдавливать сгусток на протяжении всего процесса измерения.
- Погрузите сгусток в плазму (аутологичную или согласованную по типу) или другой подвижный фазовый раствор, используемый в контуре потока (например, PBS или определенную среду), в неглубокую емкость, такую как весовая чашка. Решение для подвижной фазы должно быть взято непосредственно из резервуара системы объемом 50 мл для контроля общего объема системы. На стадии загрузки тромба не должно присутствовать тромболитический или фармацевтический агент. Общий объем подвижной фазы для запуска проточной петли рекомендуется составлять ≥50 мл и должен быть одинаковым для всех образцов.
- Снимите центральную секцию трубки проточной петли (между датчиками на входе и выходе) и прикрепите шприц объемом 10 мл к одному концу трубки.
- Используя свободный конец трубки, поместите ее в плазму (или подвижную фазу) и возьмите небольшой объем раствора для заполнения трубки. Затем поместите входное отверстие трубки рядом со сгустком, внимательно исследуя сгусток, чтобы определить голову (обычно немного более толстый конец сгустка) и хвост (конец напротив головки). Головка сгустка должна быть расположена по направлению к датчику давления на входе и в сторону от выпускного отверстия. Поместите трубку на «хвостовой» конец сгустка и втяните ее в трубку с помощью шприца.
ПРИМЕЧАНИЕ: в случаях, когда направленность головки/хвоста сгустка не может быть определена визуально, направленность может быть назначена наилучшим образом, основываясь на знании направления вращения петли Чендлера - головка сгустка обращена в направлении, противоположном вращению барабана. - Прикрепите трубку обратно к основному устройству таким образом, чтобы сгусток находился ближе всего к датчику давления на выходе (головка сгустка должна быть обращена в сторону от датчика выхода). Закрепите тромб на месте, проколов трубку и головку тромба двумя иглами 30 G в форме буквы «X». Оставьте эти иглы на время прогона.
ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от настроек демпфера и насоса могут потребоваться дополнительные иглы, чтобы сгусток не фрагментировался преждевременно. При необходимости к трубке после тромба может быть добавлено сито, чтобы предотвратить циркуляцию фрагментов тромба в системе. После того, как установлено определенное количество игл для удержания тромба, сохраняйте его неизменным в любых условиях. - Возьмите оставшуюся часть раствора подвижной фазы и поместите его в пробирку объемом 50 мл в качестве резервуара.
- Поместите резервуар на водяную баню и вставьте в него входную и выпускную трубки (выход идет от флуориметра, а вход идет в головку насоса).
- Убедитесь, что используемый флуориметр подключен и контролируется. Убедитесь, что начальное значение является подходящим по сравнению с базовым уровнем мобильной системы, работающей только на фазе, в начале эксперимента.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если встраиваемый флуориметр недоступен, можно проводить последовательный периодический отбор проб из резервуара через определенные промежутки времени в течение всего периода анализа проточной петли. Собранные фракции могут быть считаны с помощью 96-луночного планшета сразу после завершения эксперимента на любом коммерчески доступном спектрофотометре. - Добавьте 500 мкл 100 000 нг/мл tPA непосредственно в объем резервуара для достижения конечной концентрации 1 000 нг/мл tPA в 50 мл. Объем, концентрация и конкретное добавляемое лекарственное средство будут зависеть от желаемой целевой циркулирующей концентрации и объема резервуара системы.
- Перед запуском насоса проверьте следующее:
- Все перекрестки безопасны.
- Два клапана над датчиками давления находятся в соответствующем закрытом положении.
- Остаточная плазма (или жидкость) была заменена в резервуаре.
- Тромболитик был добавлен в резервуар и правильно перемешан.
- Входная трубка находится в нижней части резервуара (это обеспечивает минимальное количество пузырьков).
- Выпускная трубка надежно закреплена и находится на высоте, соответствующей требуемому давлению (в зависимости от того, какое местоположение резервуара моделируется).
- Направление вращения насоса правильное (Порядок потока: Насос > Демпфер > Сгусток > Флуориметр > Резервуар > Насос).
- Если частота вращения насоса установлена на очень высоких оборотах (>150 об/мин), начните с более низкой скорости и увеличивайте давление, чтобы быстрое изменение давления не привело к фрагментации тромба или утечке трубки.
- Убедитесь, что система правильно записывает данные с флуориметра и/или подготовлены расходные материалы для периодического отбора проб подвижной фазы для считывания временных точек после эксперимента.
- Включите насос и настройте его на достижение желаемого объемного расхода 160 мл/мин или увеличивайте расход до достижения желаемого давления. Система заполнится жидкостью и пузырьками. Пузырьки будут искусственно повышать флуориметрические показания, поэтому следите за тем, чтобы пузырьки не исчезли. Как только они это сделают, выключите свет и начните сбор данных.
- Оставьте насос включенным до тех пор, пока сгусток значительно не разложится или не истечет желаемое время эксперимента (≥60 мин). Добавляйте реагенты по мере необходимости в систему на протяжении всего эксперимента через резервуар для создания уникальных экспериментальных условий, тестируя различные вариации тромболитических изменений.
ПРИМЕЧАНИЕ: Время эксперимента будет зависеть от расхода насоса (уровня сдвига) и концентрации тромболитика. - После завершения анализа уменьшите объемный расход и удалите входную трубку, пока насос все еще работает, чтобы протолкнуть большую часть жидкости из системы в резервуар (в трубке останется некоторая подвижная фаза). Отсоедините секцию трубки, содержащую сгусток, со стороны датчика давления на выходе трубки и опустите ее в лодку для взвешивания.
- Удалите иглы, которые удерживают тромб на месте, чтобы собрать остаточную жидкость из системы и сгусток/сгустки. При необходимости используйте шприц для очистки системы.
- Взвесьте и обработайте оставшийся сгусток для дополнительного анализа, такого как расчет процента потери массы или для гистологии.
5. Чистка системы
- Между образцами промойте всю систему теплой водой на высоких оборотах (>150 об/мин). Загрузите воду в резервуар и пропустите через систему не менее 2 минут, опорожните и снова запустите для двух полных промывок системы. После этих полосканий, если показания флуориметра не возвращаются к исходному уровню, повторите процесс полоскания для дополнительного цикла. Если он все еще не вернулся к исходному уровню, полностью замените трубку перед анализом следующего образца.
ПРИМЕЧАНИЕ: Во время экспериментов трубки могут быть повторно использованы между образцами; Однако из-за перфорации иглами, используемыми для удержания тромба на месте, участок трубки между датчиками давления на входе и выходе следует заменять после каждого прогона. В некоторых экспериментальных условиях может потребоваться замена всего комплекта трубок после каждого прогона или кластерных анализов для устранения любого перекрестного загрязнения пробы. - После того, как все образцы были проверены для экспериментов в этот день, удалите все трубки и выбросьте. Потрите Т-образные соединения горячей водой и щеткой со щетиной до чистоты и дайте высохнуть и промойте демпферы шприца горячей водой. Используйте 70% EtOH для поддержания стерильности.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Образование тромба петли Чандлера
При формировании тромбов мы, как правило, стремились к квадрупликатам, чтобы гарантировать, что при наличии каких-либо выбросов сгустков (на основе общей морфологии и массы) у нас все еще есть возможность проводить тройной анализ тромболизиса. При оптимальных условиях нагрузки, все сгустки должны быть достаточно однородными по длине (~3,3 см), весу (~100 мг) и внешнему виду, как показано на рисунке 3. При использовании FITC-Fg мы также ст...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Образование сгустков и маркировка
Было продемонстрировано, что петля Чандлера является простым и эффективным средством воспроизводимого образования тромбов, имитирующих тромбы 16 in vivo. Точная настройка таких параметров, как размер трубки, скорость вращения, диаметр барабана и время свертывания, позволяет быстро образовывать сгустки при различных условиях сдвига, которые могут улавливать архитектурные особенности, оцененные в ряде тромбов, имитирующих как артериальны...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Благодарности
Исследование, представленное в этой публикации, было поддержано Национальным институтом сердца, легких и крови Национальных институтов здравоохранения в рамках премии No R01HL167877. Ответственность за содержание лежит исключительно на авторах и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 30 Г Одноразовые иглы для подкожных инъекций | Exel International | 26439 | Другие расходные материалы |
| 6 мм Токарный станок из быстрорежущей стали Инструмент для заготовки 150 мм Длина | uxcell | B07SXGSQ82 | петля Чандлера, |
| 96-луночный прозрачный плоский дно УФ-прозрачный микропланшет | Corning | 3635 | другие расходные материалы, необработанный акриловый сополимер, нестерильный |
| Air-Tite Luer-lock нестерильные шприцы 60 мл | Air-Tite | MLB3 | RT-fluFF аппарат, демпферы |
| Arium Mini Plus Сверхчистая водная система | Sartorius | NA | DI источник воды |
| хлорид кальция | миллипоры Sigma | C5670 | Другие расходные материалы |
| Одноразовые преобразователи АД | Инструменты AD | MLT0670 | аппарат RT-FluFF |
| Drager Siemans HemoMed Pod | Drager | 5588822 | Аппарат RT-FluFF |
| Аппарат Dräger Siemans Монитор пациента | Dräger | SC 7000 | RT-FluFF Аппарат |
| барабан (цилиндр, диаметр 120 мм, ширина 85 мм) | Петля Чандлера,Лицевой | ||
| щиток | Moxe | SHIELDS10 | Петля Чендлера, |
| Фибриноген из плазмы человека, Alexa Fluor 488 Конъюгат | Thermo Scientific | F13191 | Другие расходные материалы |
| Фитинг, поликарбонат, четырехпозиционный запорный кран, наружный замок Люэра, нестерильный | Masterflex | 30600-04 | RT-fluFF Аппарат |
| флуоресцеина (FITC) | Thermo Scientific | 119245000 | другие расходные материалы |
| Водяная баня общего назначения | Thermo Scientific | 2839 | Петля Чендлера, |
| Конфорка 4 × 4 | Fisher Scientific | 1152016H | RT-FluFF аппарат |
| человеческий источник плазма свежезамороженная | Zen-bio | SER-SPL | другие расходные материалы, CPDA-1 антикоагулянт |
| человек цельная кровь | Zen-Bio | SER-WB-SDS | Другие расходные материалы, антикоагулянт CPDA-1 |
| L/S Easy-Load II Насосная головка для высокопроизводительных прецизионных трубок, корпус PPS, ротор из нержавеющей стали | Masterflex | 77200-62 | RT-FluFF, Насосная головка |
| L/S Насос с регулируемой частотой вращения с цифровым приводом и дистанционным вводом/выводом, от 6 до 600 об/мин; от 90 до 260 В переменного тока | Masterflex | 7528-10 | RT-FluFF, |
| регулятор скорости двигателя насоса | CoCocina | ZK-MG | Chandler loop, |
| Трубки Nalgene Т-образные соединители | Thermo Scientific | 6151-0312 | Аппарат RT-FluFF |
| Трубки перистальтического насоса | Мастерфлекс | 06424-15 | Другие расходные материалы |
| Фосфат буферный физиологический | Millipore Sigma | P3813 | Другие расходные материалы, Порошок, pH 7,4, для приготовления растворов 1 л |
| Коммутационный источник питания | SoulBay | UC03U | Chandler loop, |
| Thermo Scientific National Target Цельнопластиковые одноразовые шприцы 10 мл | Thermo Scientific | S751010 | другие расходные материалы |
| Активатор плазминогена для тканей, человеческие | миллипоры Sigma | T0831 | Другие расходные материалы |
| Трубки ID 1/4'', наружный диаметр 3/8'' Fisher | Scientific | AGL00017 | другие расходные материалы, разрезанные на секции 1,5 см Используются для подключения трубки к разъемам |
| Т-типаТрубка ID 5/32", наружный диаметр 7/32" | Tygon | ND-100-65, ADF 00009 | Другие расходные материалы |
| V3 365 нм Mini - Черный свет УФ-фонаря | uvBeast | uvB-V3-365-MINI | петля Чендлера, используется для проверки завершенных сгустков |
| ZGA37RG ZYTD520 двигателе постоянного тока, 12 В, 100 об/мин | Pangyoo | ZGA37RG | петле Чендлера, |
Ссылки
- Ali, M. R., et al. Aspect of thrombolytic therapy: a review. Scientific World Journal. 2014, 586510(2014).
- Bhogal, P., Andersson, T., Maus, V., Mpotsaris, A., Yeo, L. Mechanical thrombectomy-A brief review of a revolutionary new treatment for thromboembolic stroke. Clin Neuroradiol. 28 (3), 313-326 (2018).
- Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
- Kaiser, E. E., West, F. D. Large animal ischemic stroke models: replicating human stroke pathophysiology. Neural Regen Res. 15 (8), 1377-1387 (2020).
- Elnager, A., et al. In vitro whole blood clot lysis for fibrinolytic activity study using d-dimer and confocal microscopy. Adv Hematol. 2014, 814684(2014).
- Prasad, S., et al. Development of an in vitro model to study clot lysis activity of thrombolytic drugs. Thromb J. 4, 14(2006).
- Robbie, L. A., Young, S. P., Bennett, B., Booth, N. A. Thrombi formed in a Chandler loop mimic human arterial thrombi in structure and RAI-1 content and distribution. Thromb Haemost. 77 (3), 510-515 (1997).
- Mutch, N. J., et al. Model thrombi formed under flow reveal the role of factor XIII-mediated cross-linking in resistance to fibrinolysis. J Thromb Haemost. 8 (9), 2017-2024 (2010).
- Blinc, A., Kennedy, S. D., Bryant, R. G., Marder, V. J., Francis, C. W. Flow through clots determines the rate and pattern of fibrinolysis. Thromb Haemost. 71 (2), 230-235 (1994).
- Mutch, N. J., et al. The use of the Chandler loop to examine the interaction potential of NXY-059 on the thrombolytic properties of rtPA on human thrombi in vitro. Br J Pharmacol. 153 (1), 124-131 (2008).
- Herbig, B. A., Yu, X., Diamond, S. L. Using microfluidic devices to study thrombosis in pathological blood flows. Biomicrofluidics. 12 (4), 042201(2018).
- Jigar Panchal, H., Kent, N. J., Knox, A. J. S., Harris, L. F. Microfluidics in haemostasis: A review. Molecules. 25 (4), 833(2020).
- Zeng, Z., et al. Fluorescently conjugated annular fibrin clot for multiplexed real-time digestion analysis. J Mater Chem B. 9 (45), 9295-9307 (2021).
- Zeng, Z., Christodoulides, A., Alves, N. J. Real-time tracking of fibrinolysis under constant wall shear and various pulsatile flows in an in-vitro thrombolysis model. Bioeng Transl Med. 8 (3), e10511(2023).
- Christodoulides, A., Zeng, Z., Alves, N. J. In-vitro thromboelastographic characterization of reconstituted whole blood utilizing cryopreserved platelets. Blood Coagul Fibrinolysis. 32 (8), 556-563 (2021).
- Zeng, Z., Nallan Chakravarthula, T., Christodoulides, A., Hall, A., Alves, N. J. Effect of Chandler loop shear and tubing size on thrombus architecture. J Mater Sci Mater Med. 34 (5), 24(2023).
- Touma, H., Sahin, I., Gaamangwe, T., Gorbet, M. B., Peterson, S. D. Numerical investigation of fluid flow in a chandler loop. J Biomech Eng. 136 (7), (2014).
- Wojdyla, M., Raj, S., Petrov, D. Absorption spectroscopy of single red blood cells in the presence of mechanical deformations induced by optical traps. J Biomed Opt. 17 (9), (2012).
- Wu, J. H., Diamond, S. L. A fluorescence quench and dequench assay of fibrinogen polymerization, fibrinogenolysis, or fibrinolysis. Anal Biochem. 224 (1), 83-91 (1995).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
