Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение микроглии гипоталамуса из свежеперфузированного мозга взрослой мыши методом магнитно-активируемой сортировки клеток

2.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/66769

⸱

6 сентября 2024 г.

 ,  ,  , 
1University of Bordeaux, INSERM, Neurocentre Magendie

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Мы описываем протокол выделения микроглиальных клеток из гипоталамуса мыши (или эквивалентных небольших структур мозга) с помощью магнитно-активированной сортировки клеток (MACS) за относительно короткое время. Отсортированная по методу MACS микроглия гипоталамуса может быть использована для анализа ex vivo и может быть покрыта для выполнения анализов in vitro .

Аннотация

Микроглии, как резидентные макрофаги мозга, необходимы для поддержания гомеостаза мозга. Они формируют нейронные цепи во время развития, исследуют окружающую среду на предмет мусора или мертвых клеток, а также реагируют на инфекции и повреждения в мозге, среди многих других функций. Тем не менее, их важная роль в развитии нервной системы, синаптической пластичности и патофизиологии не была полностью определена, что подчеркивает необходимость дальнейших исследований. Чтобы получить более полное представление о роли микроглии в этих процессах, нам необходимо изолировать микроглию и охарактеризовать ее генетически, метаболически и функционально. Тем не менее, выделение микроглии от взрослых мышей, особенно от небольших структур мозга, является сложной задачей, поскольку они представляют собой небольшой процент от общего числа клеток мозга, а выход выделенной микроглии часто слишком низок. Магнитная изоляция микроглии с помощью микрогранул CD11b+ позволяет нам сортировать микроглиальные клетки гипоталамуса только что перфузированного мозга взрослой мыши. Используемый в настоящее время метод позволяет добиться относительно высокой чистоты и выхода продукции за короткий период времени при сохранении жизнеспособности клеток.

Введение

Микроглия соответствует 5-20% от общего числа нервных клеток и является единственными глиальными клетками, которые происходят из эритромиелоидных предшественников в желточном мешке и начинают колонизировать развивающийся мозг примерно на эмбриональный день E9.5 1,2. Это долгоживущие клетки, обладающие способностью к медленному самообновлению, независимо от клеток, полученных из костного мозга3. Являясь одними из наиболее высокодинамичных клеток, они способны приобретать различные фенотипы в ответ на контекстуальные и экологические сигналы 2,4. Среди сигналов, способных модулировать их активность, наиболее сильными являются повреждение центральной нервной системы (ЦНС), активность нейронов, а также питательные вещества. Растущее количество исследований демонстрирует ключевую роль микроглии в развитии травм, нейродегенеративных заболеваний и ожирения 2,5,6. Тем не менее, точная роль микроглии как в физиологических процессах, так и в патофизиологии требует дальнейшего изучения. Поэтому их транскрипционная, метаболическая и функциональная характеристика в различных условиях имеет большое значение и требует их выделения, так как исследования in situ пригодны для локализации и качественного сравнения ДНК, РНК и белков, а также морфологической характеристики микроглии.

Существуют различные методы выделения микроглии, среди которых градиентный метод Перколля7, сортировка клеток с помощью проточной цитометрии (FACS)8 и сортировка магнитно-активированных клеток (MACS). Выбор подходящего метода зависит от целей исследования и требуемого уровня чистоты для последующих применений. Выделение чистой микроглии из мозга взрослой мыши, особенно из небольших структур мозга, таких как гипоталамус, является сложной задачей из-за ограниченного количества микроглиальных клеток. Автоматизированная щадящая диссоциация гипоталамуса с использованием технологии Miltenyi позволяет очищать относительно высокий выход микроглии за короткое время с возможностью одновременной обработки до восьми образцов с помощью gentleMACS Octo Dissociator.

Гомогенизация тканей сопровождается очисткой микроглии с помощью колоночной технологии MACS и сверхмагнитных наноразмерных гранул CD11b+. Таким образом, все образцы обрабатываются точно таким же образом, в результате чего получаются неповрежденные клетки CD11b+. Следует отметить, что CD11b присутствует не только в микроглии, но также экспрессируется на других клетках миелоидной линии, включая макрофаги имоноциты9. Чтобы ограничить это, перфузия мозга ледяным физиологическим раствором перед экстракцией гипоталамуса (см. протокол шаг 2.6) обеспечивает элиминацию большинства миелоидных клеток, оставляя только потенциально небольшую часть резидентных макрофагов или тех, которые прилипают к кровеносным сосудам. Резидентные макрофаги и моноциты здоровой равновесной ЦНС составляют незначительный процент от общего числа иммунных клеток головного мозга (~10% и <2% соответственно)10,11. Таким образом, когда клетки мозга сортируются с помощью гранул CD11b+, можно выделить как микроглию, так и макрофаги, хотя подавляющее большинство из них являются микроглией.

Конечный выход микроглии и поддержание ее жизнеспособности позволяют проводить анализы ex vivo, а также in vitro, с преимуществом анализа конкретных областей мозга, представляющих интерес. Последние данные показали, что популяция микроглии очень неоднородна, представляя специфическую для региона экспрессию генов и морфологические характеристики и функцию 2,12,13. Таким образом, текущий протокол направлен на изоляцию и анализ микроглии взрослого человека в зависимости от региона. Действительно, мы можем охарактеризовать генетические, транскрипционные и трансляционные профили микроглии гипоталамуса у взрослых с помощью таких методов, как ОТ-кПЦР и секвенирование РНК, а также выполнить функциональный анализ in vitro.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все описанные эксперименты на животных были проведены в строгом соответствии с рекомендациями Европейского Союза (2013/63/EU) и одобрены местным этическим комитетом Университета Бордо (CEEA50) и Министерством высшего образования, исследований и инноваций Франции (нетехническое резюме утвержденного проекта NTS-FR-619193 v.1, 23-12-2022).

Следующий протокол выполняется на взрослых мышах C57BL/6 со средним возрастом 2-4 месяца. Тем не менее, его можно проводить у мышей всех возрастов и состояний, учитывая, что иммунный клеточный ландшафт ЦНС может быть изменен и процент резидентных макрофагов и моноцитов может быть увеличен (например, при старении и нейродегенерации).

1. Приготовление растворов

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие объемы и растворы строго относятся к выделению клеток Cd11b+.

  1. Определите общий необходимый объем D-PBS/0,5% альбумина бычьей сыворотки (BSA) в зависимости от количества образцов. Приготовьте раствор с использованием коммерчески доступного D-PBS с кальцием и магнием и порошком BSA (см. Таблицу материалов).
  2. Подготовьте помеченные пробирки для диссоциации (С-пробирки) и заполните каждую из них 1900 мкл буфера Z, входящего в комплект для диссоциации тканей мозга у взрослого человека (см. Таблицу материалов). Разморозьте ферменты и держите их на льду вместе со всеми буферами, необходимыми для следующих шагов.
  3. Приготовьте и положите на лед соответствующий объем 1x фосфатно-солевого буфера (PBS) (см. Таблицу материалов), необходимый для перфузии (шаг 2.6). Рассчитайте 10 мл на каждое животное плюс 10% излишка.
  4. Для анализа ОТ-кПЦР приготовьте буфер для количественной ПЦР на образец: 2,5 мкл тиоглицерина + 250 мкл буфера для лизиса, используя коммерчески доступный набор для очистки РНК (см. Таблицу материалов).
  5. Для количественного определения белка готовят буфер для лизиса, разбавляя коктейль ингибиторов фосфатазы и коктейль ингибиторов протеазы 1:100 в буфере для экстракции млекопитающих (см. Таблицу материалов).
  6. Для определения активных форм кислорода (АФК) и анализа на фагоцитоз приготовьте 1x HBSS из коммерчески доступного 10x HBSS (см. Таблицу материалов). Затем подготовьте буфер FACS, добавив 0,2% BSA к 1x HBSS.

2. Удаление головного мозга

  1. Успокоить животное дозой 20 мг/кг ксилазина; Затем усыпьте мышь с помощью передозировки 400 мг/кг пентобарбитала и поместите ее лежа на спине в лоток для препарирования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Другие комбинации анестетиков для усыпления животного также могут работать.
  2. Наполните шприц объемом 10 мл 10 мл ледяного 1x PBS и прикрепите его к игле для бабочки 21 G.
  3. Как только мышь полностью обезболилась (убедитесь, защипнув лапы, чтобы убедиться в отсутствии реакции), дыхание остановилось, а сердце находится в фибрилляции, наложите на кожу щипцы и вскройте ножницами грудную полость, на уровне последних ребер и грудины.
  4. С помощью ножниц сделайте глубокий надрез по бокам грудной клетки по направлению к верхней части грудной клетки, чтобы обнажить сердце.
  5. Введите иглу 21 G в дистальную часть левого желудочка (убедитесь, что примерно 1/3 иглы находится внутри желудочка). Сразу же сделайте надрез через правое предсердие с помощью ножниц.
  6. Добавьте 10 мл ледяного 1x PBS, чтобы очистить мозг от любых циркулирующих иммунных клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Визуально проверьте мозг, чтобы убедиться, что он чистый и хорошо проработанный.
  7. Отрежьте голову мыши, осторожно извлеките мозг и поместите его на чашку Петри, наполненную льдом и покрытую алюминиевой фольгой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чашка Петри и фольга помогают увидеть части мозга. Полезно поддерживать прохладную среду во время измельчения мозговых частей, чтобы ограничить метаболическую активность.
  8. Изолируйте гипоталамус с помощью щипцов и разрежьте его на мелкие кусочки бритвенными лезвиями.
    1. Чтобы идентифицировать и препарировать гипоталамус, поместите мозг вверх ногами так, чтобы кора головного мозга была вентральной, а гипоталамус был виден дорсально на верхней поверхности. Отделите гипоталамус, который расположен в нижней части мозга по обе стороны от третьего желудочка, с помощью изогнутых щипцов. Средний вес гипоталамуса у взрослых мышей C57BL/6 составляет 15 мг.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Части мозга должны быть как можно меньше (<0,5 мм). Разрезание на мелкие кусочки является критически важным шагом, поскольку это позволяет лучше диссоциировать и получить более высокий выход клеток.
  9. Соберите кусочки гипоталамуса в диссоциационные трубки (С-трубки), предварительно заполненные 1900 мкл буфера Z (шаг 1.2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы получить хороший выход клеток микроглии, достаточный для проведения анализов, объедините минимум два (для количественного определения белка) или три (для количественного определения белка) или три (для количественной ПЦР и РНКсеквировки) гипоталамов на пробирку.

3. Диссоциация тканей

ПРИМЕЧАНИЕ: Все шаги должны выполняться на льду. Ни в коем случае не делайте вихревую суспензию клетки; Тщательно перемешивайте только с помощью пипетки объемом 1 000 μл.

  1. Приготовьте ферментную смесь 2 согласно таблице 1 (расчет общего объема для всех пробирок + 10% избытка). В каждую С-пробирку добавьте 50 мкл фермента, содержащегося в смеси 1 (см. Таблицу 1) и 30 мкл смеси ферментов 2. Все ферменты входят в состав набора для диссоциации тканей мозга у взрослых (см. Таблицу материалов).
  2. Закройте С-образные трубки и поместите их вверх ногами в диссоциатор с нагревательными кронштейнами в соответствии с инструкциями производителя. Запустите программу 37C_ABDK_02.
  3. Приготовьте защелкивающиеся пробирки объемом 15 мл (см. Таблицу материалов) с ситочками 70 мкм на них. Смочите ситечко 2 мл D-PBS.
  4. Когда программа диссоциации/разложения будет завершена, опорожните С-образную пробирку на ситечко и потрите наконечником объемом 200 мкл, чтобы уменьшить потерю клеток за счет увеличения фильтрации клеток и снижения адгезии тканевого гомогената к фильтру.
  5. Промойте пробирку 2 x 5 мл D-PBS, вылейте промывку на ситечко и поцарапайте наконечником объемом 200 мкл между промывками.
  6. Центрифугировать при 300 × г в течение 10 мин при 4 °C и полностью аспирировать надосадочную жидкость. Осторожно ресуспендируйте клеточную гранулу с соответствующим объемом холодного D-PBS в соответствии с таблицей 1.
  7. Немедленно тщательно перемешайте с 450 мкл градиентного реагента плотности (раствор для удаления мусора, см. Таблицу материалов) и очень аккуратно посыпьте 2 мл холодного D-PBS (см. Таблицу 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения слоев с различным градиентом плотности, D-PBS необходимо аккуратно накладывать каплю за каплей, с наименьшим возможным «возмущением», по 1 мл за раз с помощью пипетки объемом 1 мл.
  8. Центрифуга при 3 000 × g в течение 10 мин при 4 °C с медленным ускорением и медленным торможением (если 9 эквивалентно полному объему, используйте 5).
  9. Формируются три фазы. Полностью вдохните две верхние фазы и откажитесь от них. Следите за тем, чтобы не отсасывать третью нижнюю фазу.
  10. Наполните 1800 мкл холодной D-PBS и аккуратно переверните трубку 3 раза.
  11. Центрифугируйте при 1 000 × g в течение 10 минут при 4 °C с полным ускорением и полным тормозом и полностью аспирируйте надосадочную жидкость. Осторожно ресуспендируйте клеточную гранулу путем медленного пипетирования вверх и вниз 2 мл D-PBS/BSA.

4. Магнитная изоляция CD11b+ клеток

  1. Центрифугировать при 300 × г в течение 10 мин при 4 °C и полностью аспирировать надосадочную жидкость. Осторожно ресуспендируйте клеточную гранулу в 90 мкл буфера D-PBS/BSA.
  2. Добавьте 10 мкл смеси CD11b и микрогранул и хорошо перемешайте пипеткой.
  3. Выдерживать 15 минут при температуре 2-8 °C в холодильнике, не на льду; промыть ячейки, добавив 1 мл D-PBS/BSA, и центрифугировать при 300 × г в течение 10 мин при 4 °C; полностью аспирировать надосадочную жидкость. Осторожно восстановите суспендию в 500 мкл D-PBS/BSA.
  4. Запустите программу POSSEL2 на сепараторе, следуя инструкциям на экране. Поместите маленькие столбики (см. Таблицу материалов) в магнитное поле.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для сортировки магнитных элементов можно выбрать как маленькие, так и большие столбцы в соответствии со средним ожидаемым количеством ячеек. Малые колонки имеют вместимость до 1 × 107 помеченных ячеек, а большие колонки до 1 ×10 8. При выделении клеток из небольших структур, таких как гипоталамус, рекомендуется выделять небольшие колонки. Объемы реагентов отличаются при использовании больших колонок (см. инструкцию производителя).
  5. Смочите колонны (см. Таблицу материалов) 500 мкл D-PBS/BSA. Если отрицательная фракция клеток (CD11b-) необходима для дальнейшего анализа, поместите под колонки сборную пластину, а затем нанесите на колонки клеточную суспензию.
  6. Выполните три этапа промывки, добавляя 500 μL D-PBS/BSA за раз в колонку, каждый раз ожидая, пока буфер пройдет через колонку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: важно не допустить пересыхания верхней части колонны, поэтому рекомендуется не ждать, пока пройдет весь буфер.
  7. Перекачиваем общий сток фракции CD11b- из колодцев сборной тарелки в 15-миллилитровые пробирки.
  8. Извлеките колонку из сепаратора, поместите ее на пробирку объемом 5 мл и внесите в колонку пипеткой 1 мл D-PBS/BSA.
  9. Немедленно промойте фракцию ячейки с магнитной меткой, плотно приложив плунжер, входящий в комплект колонны.
  10. В конце концов, подсчитайте CD11b+ клетки с помощью гемацитометра или любого другого метода; Ожидайте ~15 000 клеток на гипоталамус.
  11. Центрифугируйте клеточную суспензию при 300 ×г в течение 10 мин при 4 °C и выбросьте надосадочную жидкость.

5. Анализы

  1. Для анализа методом ОТ-кПЦР суспендируйте клеточные гранулы с помощью буфера для количественной ПЦР (для приготовления см. шаг 1.3) и храните пробирки при температуре -80 °C до экстракции мРНК. Выделите общую РНК, затем обработайте и проанализируйте ее в соответствии с рекомендациями MIQE14. Наконец, синтезируйте кДНК и выполните кПЦР с помощью устройства ОТ-ПЦР. Смотрите Таблицу материалов для всех используемых коммерчески доступных наборов.
  2. Для количественного определения белка промойте клеточные гранулы D-PBS (без BSA) не менее 2 раз, чтобы устранить BSA. Затем ресуспендируйте клеточные гранулы из двух гипоталамов с 20 мкл буфера для лизиса. Проведите количественное определение белка с помощью набора для анализа белка (см. Таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы следовали инструкциям производителя15 для количественного определения белков для проведения анализа активности серин/треонинкиназ.
  3. Для обнаружения активных форм кислорода (АФК) в клетках микроглии ресуспендируйте гранулу в 1x HBSS. Обрабатывайте клетки в соответствии с протоколом производителя набора для анализа проточной цитометрии (см. Таблицу материалов). Затем ресуспендируйте обработанные клетки в 200 мкл буфера FACS (для приготовления см. шаг 1.5) и выполните FACS для обнаружения клеток, подвергшихся окислительному стрессу.
  4. Для анализа на фагоцитоз отсортированные клетки в D-PBS/BSA инкубируют с флуоресцентными латексными шариками (см. Таблицу материалов) в течение 30 минут. Отрегулируйте количество бусин так, чтобы в среднем на ячейку приходилось 4 бусины. Затем центрифугируют при 300 × г в течение 7 мин при 4 °C, ресуспендируют в 200 мкл буфера FACS и считывают флуоресцентное излучение с помощью FACS (λex 575 нм; λem 610 нм).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оценка конечного выхода зависит от уровня чистоты и количества выделенных клеток и может быть определена с помощью ОТ-кПЦР, подсчета клеток и количественного определения белка. Чистота выделенных магнитных клеток гипоталамуса была подтверждена анализом экспрессии генов CD11b, C1qa, Gad1 и GFAP с помощью ОТ-кПЦР (рис. 1). CD11b и C1qa преимущественно экспрессируются микроглией в равновесном состоянии, ЦНС16 и Gad1 и GFAP служат нейронным и астроцитарным маркером соотве...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Текущий протокол представляет собой выделение микроглии гипоталамуса из только что перфузированного мозга взрослой мыши с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток. Представленные выше результаты подтверждают чистоту и жизнеспособность выделенных клеток, а также эффективность данного метода для функциональной характеристики микроглии ex vivo, например, посредством фагоцитарной активности и количественного определения продукции АФК. Классические методы выделения специфической клеточной популяции также могут...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

AN поддерживается Institut Universitaire de France (IUF), Университетом Бордо, Французским фондом исследований мозга (FRC), GLN (Lipid-Nutrition Group) и Национальным исследовательским агентством (ANR, PRC 2023-MicroNRJ). CA был поддержан Fondation pour la Recherche Médicale (FRM-ARF201809006962). Этот проект получил финансирование в рамках Программы исследований и инноваций Европейского Союза «Горизонт Европа» в рамках MSCA Doctoral Networks 2021, No 101072759 (FuElThEbRaiNIn healtThYaging and age-related diseases, ETERNITY.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор для диссоциации мозга у взрослыхMiltenyi130-107-677Набор содержит буфер Z, буфер Y, ферменты A и P, раствор для удаления мусора, буфер A (для растворения фермента A).
Альбумин крупного рогатого скота FrV BSAEuroMedex04-100-812-C
CD11b (Microglia) Микрогранулы, человеческие и мышиные - малый размерMiltenyi130-093-636
CellROX Green Flow Cytometry Anase KitInvitrogenC10492
Центрифужная пробирка, крышка Snap-Pop 15 млCellTreat978449
DPBS, кальций, магний, глюкоза, пируватGibco14287-072
gentleMACS C TubesMiltenyi130-093-237
gentleMACS Octo Dissociator with HeatersMiltenyi130-096-427
Halt Коктейль ингибиторов фосфатазы (100x)Thermofisher78420
Halt Коктейль ингибиторов протеазы, без ЭДТА (100x)Thermofisher78437
HBSS (10x), кальций, магний, без фенола красныйThermofisher14065056
Латексные шарики, карбоксилат-модифицированный полистирол, флуоресцентный красныйSigma-AldrichL3280
LightCycler  480 SYBR Green I MasterRoche 4707516001Этот реагент использовался для проведения ПЦР.
Ситечки MACS SmartStrainers (70 и микро; m)Miltenyi130-110-916
Micro BCA Protein Analysis KitThermofisher23235
M-PER Mammalian Extraction BufferThermofisher78503
MS КолонкиMiltenyi130-042-201Упоминаются в протоколе как малые колонки.
MultiMACS Cell24 Сепаратор PlusMiltenyi130-098-637
PBSS, pH 7,4 Thermofisher10010023
qScript XLT кДНК SuperMixQuanta biosciences733-1177Набор использовался для синтеза кДНК.
ReliaPrep RNA Miniprep SystemsPromegaZ6011Набор содержит 1-тиоглицерин и буфер BL (в протоколе называется буфером для лизиса) и он использовался для выделения общей РНК.
Vacutainer safety-lok 21 GBecton Dickinson367282

Ссылки

  1. Ginhoux, F., Lim, S., Hoeffel, G., Low, D., Huber, T. Origin and differentiation of microglia. Front Cell Neurosci. 7, 45(2013).
  2. Paolicelli, R. C., et al. Microglia states and nomenclature: A field at its crossroads. Neuron. 110 (21), 3458-3483 (2022).
  3. Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., Tetzlaff, W., Rossi, F. M. V. Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life. Nat Neurosci. 10 (12), 1538-1543 (2007).
  4. Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo. Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).
  5. Alexaki, V. I. The impact of obesity on microglial function: immune, metabolic and endocrine perspectives. Cells. 10 (7), 1584(2021).
  6. Gao, C., Jiang, J., Tan, Y., Chen, S. Microglia in neurodegenerative diseases: mechanism and potential therapeutic targets. Sig Transduct Target Ther. 8 (1), 359(2023).
  7. Lee, J. -K., Tansey, M. G. Microglia isolation from adult mouse brain. Microglia: Methods Mol Biol. 1041, 17-23 (2013).
  8. Schwarz, J. Using fluorescence activated cell sorting to examine cell-type-specific gene expression in rat brain tissue. J Vis Exp. (2015), (2015).
  9. Lee, E., Eo, J. -C., Lee, C., Yu, J. -W. Distinct features of brain-resident macrophages: microglia and non-parenchymal brain macrophages. Mol Cells. 44 (5), 281-291 (2021).
  10. Korin, B., et al. single-cell characterization of the brain's immune compartment. Nat Neurosci. 20 (9), 1300-1309 (2017).
  11. Mrdjen, D., et al. High-dimensional single-cell mapping of central nervous system immune cells reveals distinct myeloid subsets in health, aging, and disease. Immunity. 48 (2), 380-395 (2018).
  12. Grabert, K., et al. Microglial brain region−dependent diversity and selective regional sensitivities to aging. Nat Neurosci. 19 (3), 504-516 (2016).
  13. Tan, Y. -L., Yuan, Y., Tian, L. Microglial regional heterogeneity and its role in the brain. Mol Psychiatry. 25 (2), 351-367 (2020).
  14. Bustin, S. A., et al. The MIQE Guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).
  15. PamGene International B. V. 1160-Preparation-Lysates-of-Cell-Lines-or-Purified-Cells.pdf. PamGene International B. V. , (2022).
  16. Fonseca, M. I., et al. Cell-specific deletion of C1qa identifies microglia as the dominant source of C1q in mouse brain. J Neuroinflamm. 14 (1), 48(2017).
  17. Simpson, D. S. A., Oliver, P. L. ROS generation in microglia: understanding oxidative stress and inflammation in neurodegenerative disease. Antioxidants. 9 (8), 743(2020).
  18. Galloway, D. A., Phillips, A. E. M., Owen, D. R. J., Moore, C. S. Phagocytosis in the brain: homeostasis and disease. Front Immunol. 10, 790(2019).
  19. Marsh, S. E., et al. Dissection of artifactual and confounding glial signatures by single-cell sequencing of mouse and human brain. Nat Neurosci. 25 (3), 306-316 (2022).
  20. DePaula-Silva, A. B., et al. Differential transcriptional profiles identify microglial- and macrophage-specific gene markers expressed during virus-induced neuroinflammation. J Neuroinflammation. 16 (1), 152(2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Выделение микроглиимагнитная сортировка клетокмикросферы CD11bгомеостаз мозгавзаимодействие микроглии и нейроновпищевое поведениеметаболические состоянияжизнеспособность клеток
Выделение микроглии гипоталамуса из свежеперфузированного мозга взрослой мыши методом магнитно-активируемой сортировки клеток
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.