Методическая статья

Протокол инсультной единицы мыши со стандартизированной неврологической оценкой для трансляционных исследований инсульта у мышей

DOI:

10.3791/66847

⸱

7 февраля 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology Medical School of Athens, National and Kapodistrian University of Athens, 2Institute for Stroke and Dementia Research (ISD), University of Munich Medical Center, 3Department of Neurointensive Care, Schoen Clinic Bad Aibling

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье представлен протокол для реализации высокотрансляционной и независимо доказанной концепции Stroke Unit (mSU) мыши с большим ходом. Он также предоставляет стандартизированный протокол для выполнения фокальной экспериментальной шкалы инсульта у мышей, которая оценивает дефицит фокального инсульта, обнаруженный даже в долгосрочной перспективе.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Филаментная модель окклюзии средней артерии (fMCAo) является, пожалуй, наиболее трансляционной моделью инсульта мыши, позволяющей проводить контролируемую ишемию с внутрисосудистой реперфузией/реканализацией. Тем не менее, он не согласуется с текущими клиническими достижениями в области лечения инсульта (например, инсультными отделениями), обычно использует субъективную или расплывчатую неврологическую оценку в лабораториях и демонстрирует высокую смертность в острой фазе. В этой статье мы устраняем эти ограничения с помощью проверенных протоколов с видеогидом. Мы представляем протокол Mouse Stroke Unit (mSU) с обучающими видеороликами и алгоритмом принятия решений (Risk Stratification Score), преодолевая разрыв между клиническим моделированием и моделированием инсульта у мыши. Для повышения точности и чувствительности нейрологической шкалы инсульта мы впервые представляем видеостандартизированный формат фокальной экспериментальной шкалы инсульта (fESS) и доказываем ее значение до 6 месяцев после инсульта. Кроме того, представлены протоколы теста Ladder-rung у мышей, а также известного теста Cylinder для объективной, количественной оценки двигательной функции конечностей. Результаты подчеркивают трансляционную эффективность mSU. Фокальная ЭСС (fESS) превосходит другие известные шкалы в выявлении дефицита фокального инсульта, восстановлении и поддержании чувствительности в течение 6 месяцев после инсульта. Тесты с лестницей и цилиндрами объективно количественно оценивают и контролируют двигательные дефициты передних и задних конечностей в долгосрочной перспективе. Таким образом, интеграция mSU, fESS и тестов моторных функций обеспечивает надежную основу для клинически значимых исследований инсульта. Наши протоколы повышают трансляционную ценность в исследованиях инсульта мыши.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Обширный ишемический инсульт является одной из основных причин заболеваемости и инвалидности во всем мире1. Тем не менее, исследования инсульта у мышей сталкиваются с трансляционной блокировкой почти во всех доклинически протестированных методах лечения до сих пор2. Многочисленные причины этой проблемы и усилия по ее преодолению были подробно рассмотрены в предыдущей публикации2. Эти проблемы возникают из-за ограниченной интеграции клинических достижений в соответствующие модели на животных2 и слабости поведенческих и неврологических систем оценки в точном и чувствительном выявлении постинсультного дефицита2.

Недавние открытия3 подтверждают, что филаментная модель окклюзии средней артерии (fMCAo) у мышей имеет значительные трансляционные преимущества по сравнению с другими моделями с открытым повреждением черепа и травмой 2,4. Кроме того, это единственный документ, который моделирует реперфузию и механическую тромбэктомию в условиях клинического инсульта 5,6,7. Тем не менее, модель сталкивается с высокой подострой смертностью между 3-7 днями после инсульта, что не позволяет проводить долгосрочные исследования больших инсультов и до недавнего времени считалось неотъемлемым и непреодолимым артефактом модели. Кроме того, выявление постинсультного неврологического дефицита у мышей относительно затруднительно и необъективно из-за их небольшого размера, особенно среди неклиницистов или неопытных исследователей 8,9. Чтобы решить эту проблему, разные группы разработали различные шкалы для выявления дефицита. Наиболее часто используемые и известные шкалы включают 3-балльную шкалу Бедерсона (BS)10, 5-балльную модифицированную шкалу Бедерсона (mBS)11, 5-балльную шкалу Лонга (LS) (аналогичную mBS)6, модифицированную шкалу неврологического инсульта (mNSS)12,13, 18-балльную шкалу Гарсии (GS)9 и более детальную шкалу ДеСимони14 или иначе известную как «Нейрооценка» (NS)9. Масштаб 15. К сожалению, некоторые из этих шкал либо слишком грубы и ограничены лишь несколькими днями острой фазы после инсульта (BS, mBS и LS)8,9, либо их интерпретация размыта общими дефицитами (NS).

Исходя из этого, мы ранее разработали и проверили протокол поддержки Stroke Unit (mSU) у мышей, а также экспериментальную шкалу инсульта (ESS) для мышей13. Обоснование mSU заключалось в том, чтобы адаптировать знания из клинической рутины (т.е. инсультных отделений человека) в доклинические исследования инсульта, в то время как ESS критически консолидировала ранее существовавшие, но «нечувствительные» или избыточные шкалы инсульта в практическую, уточненную, чувствительную и экономящую время. mSU состоит из частого и адаптированного мониторинга основных клинических параметров мышей с адаптированным применением поддержки животных для повышения выживаемости13.

Действительно, данные нашей лаборатории и других лабораторий подтверждают ценность обоих методов. mSU транслирует клинические базовые поддерживающие меры и продвигает7 от человека к мышам, значительно снижает смертность fMCAo у мышей с 60-70% до 10-15%13, что позволяет проводить исследования более крупных инсультов, и с тех пор может эффективно применяться в независимых лабораториях 16,17,18,19. Кроме того, ESS может различать очаговые (фокальный компонент ESS, fESS) и общие (общий компонент ESS, gESS) постинсультные дефициты и симптомы, моделирует клиническую оценку человека (дифференциация между фокальными и общими признаками и симптомами у людей), линейно связан с размером инсультного поражения и в долгосрочной перспективе чувствителен к дефицитам13,20. Тем не менее, несмотря на доказанную ценность и эффективность как mSU, так и ESS, отсутствие четких, визуализированных, стандартизированных инструкций даже для неопытных исследователей оставляет несколько открытых вопросов о применении mSU и значительную субъективность в оценке дефицита фокуса на fESS.

Таким образом, наша настоящая статья направлена на предоставление четких инструкций по протоколам mSU и fESS с помощью видео. Мы твердо верим, что это поможет исследователям инсульта повысить трансляционную эффективность их исследований инсульта, значительно сократить потери животных в течение первых 3-10 дней после инсульта, снизить затраты на эксперименты и, в конечном итоге, воспроизвести оценку неврологических дефицитов в течение нескольких месяцев после инсульта. Кроме того, дополнительная комбинация теста Лестницы и Цилиндрического теста может легко количественно оценить парез фокальных конечностей (передних и задних конечностей) из-за fMCAo.

Чтобы продемонстрировать эффективность mSU и fESS, мы предоставляем среднесрочные (14 дней) и долгосрочные (6 месяцев) данные о мышах после fMCAo. Двенадцатинедельных самцов мышей C57Bl/6J (n= 31) использовали и содержали при контролируемой температуре (22 ± 2 °C) с 12-часовым периодом цикла «свет-темнота» и доступом к гранулированной пище и воде в неограниченном количестве. Мыши были разделены на две когорты, за которыми наблюдали в течение 14 дней (n=10, когорта 1) и 6 месяцев (n=15, когорта 2) соответственно. Эти мыши были подвергнуты 60-минутной ишемии головного мозга с использованием хорошо описанной модели fMCAo 13,20,21 под анестезией изофлурана. В качестве контроля применялись фиктивно оперированные животные (n=6, оперировались как две вышеуказанные когорты, но ишемия не индуцировалась), за которыми наблюдали в течение 6 месяцев. Бупренорфин применяли в качестве пред- и 3-дневного послеоперационного анальгетика. Тесты с лестницей и цилиндрами также проводились для 6-месячной когорты в рамках неврологической шкалы.

В течение первых 14 дней после отравления все животные ежедневно проверялись на гуманные конечные точки, определяемые как: 1) тяжелая гипотермия (<33 °C) и/или неподвижность (например, 4 балла по тесту 6 fESS или тест на «спонтанную активность» gESS), которые не были улучшены при лечении «мышиной инсультной единицей» (т.е. пассивное нагревание и активное кормление, см. 1.4). 1.6, 1.8) в течение одного часа, 2) признаки болевого или тревожного поведения (например, оценка >2 балла в тесте gESS «тревожность/автоматическое поведение»), даже после послеоперационной анальгезии в соответствии с протоколом.

В этом протоколе постинсультное сопровождение мышей в виде mSU начинается сразу после восстановления мышей после операции fMCAo. Она состоит из 3 фаз: фаза А (0-48 ч после реперфузии), фаза В (>48 ч и до «окончания необходимой активной поддержки», обычно на 10-14 день, в зависимости от фазы В у конкретного животного) и фаза С (14 день и далее). Она включает пять значимых вмешательств (посещения/оценка стратификации риска, кормление, жидкостное питание, температура и местная дезинфекция; см. 1.1 - 1.8. ниже), адаптированных к каждому животному, в соответствии с каждой фазой (А, В или С) и его ежедневным фактическим клиническим состоянием, оцениваемым по шкале стратификации риска (RSS), см. дополнительный рисунок 1 и таблицу 1 с тремя типичными примерами. Необходимые материалы и инструменты для mSU показаны на рисунке 1a и описаны в таблице материалов. Мы также предоставляем шаблон для мониторинга животных во время mSU (см. Дополнительный файл 1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эксперименты, описанные в этой статье, были проведены в соответствии с национальными и европейскими рекомендациями по использованию экспериментальных животных и были одобрены греческими правительственными комитетами (Афины, лицензия No "843895_06-09-2022").

1. «Блок хода мыши» (mSU)

  1. Ежедневно оценивать клиническое состояние животного («посещения») и рассчитывать его показатель RSS
    1. Распечатайте дополнительный файл 1, желательно перед операцией на животном, для записи данных и мониторинга.
    2. Клинически оценивайте каждое животное в стандартные временные точки (посещения): рано утром (около 08:00), в полдень (с 14:00 до 16:00) и поздно ночью (около 22:00 - 23:00).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Адаптируйте эти стандартные посещения в соответствии с фазой последующего наблюдения за животным: проверяйте состояние животного 2 раза в день (утро-ночь) для фазы А, 3 раза в день для фазы В и один раз в день для фазы С. Дополнительно адаптируйте частоту посещений в соответствии с оценкой RSS (см. 1.1.6). Для снижения нагрузки желательно работать в команде от >2 человек. Утренние и ночные визиты имеют решающее значение для успешной поддержки, мониторинга и снижения смертности, потому что ночная (активная) фаза мышей увеличивает метаболические и энергетические потребности 13,22,23 и связана с увеличением ночной постинсультной смертности.
    3. Взвесьте мышь с помощью чувствительных стандартных весов во время утреннего визита.
    4. Измерьте температуру с помощью бесконтактного термометра, помещенного над его брюшным центром тела во время утреннего визита. Удерживайте и обездвиживайте мышь тыльной стороной. Снимите показания в течение первых нескольких секунд после иммобилизации (см. рисунок 1f).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не используйте ректальный термометр из-за возможного разрыва кишечника после повторных измерений с сопутствующим перитонитом.
    5. Оценивайте и записывайте общее клиническое состояние мыши (подвижность, раны, шапочка мочеиспускательного канала, реактивность, шерсть, состояние гидратации и т. д.) во время утреннего визита для всех фаз, ежедневно до 14-го дня.
    6. Рассчитайте балл RSS во время утреннего визита, суммировав баллы в соответствии с весом, температурой и баллом fESS животного, как описано на дополнительном рисунке 1. Для автоматического вычисления RSS в таблице электронной таблицы используйте и адаптируйте формулу, приведенную в таблице 1. Усыпьте животное методом, одобренным учреждением, если присутствуют гуманные конечные точки (см. выше).
    7. Регулируйте как частоту посещений, так и интенсивность поддержки, ежедневно в соответствии с оценкой RSS и фазой животного после инсульта.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Фаза В является наиболее критичной для смертности. Увеличьте частоту посещений и интенсивность поддержки RSS ≥3 (определение и инструкции см. в таблице 1). Если животное продолжает проявлять RSS >3 в фазе С, посетите его и поддержите его так же, как и в фазе В. Используйте RSS и общие описания (например, выздоравливающий, стабильный, больной низким/средним уровнем и критически больной), чтобы описать его клиническое состояние среди группы поддержки. После 14-го дня сократите количество посещений животных до тех случаев, когда это требуется в соответствии с протоколом эксперимента (например, для поведенческой/неврологической оценки).
  2. Приготовление гелевого корма для нутритивной поддержки
    1. Измельчите обычные пищевые гранулы с помощью блендера (рис. 1a).
    2. Добавляйте коммерческий сахар в количестве 5-10% для повышения калорийности пищи.
    3. Добавьте воду, чтобы создать гелеобразную жидкую текстуру (Рисунок 1b).
    4. Используйте этот гелевый корм как для пассивной, так и для активной питательной поддержки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: По желанию используйте готовый к использованию коммерческий гелевый корм. Готовая пища может пролежать в холодильнике 2-3 дня.
  3. Пассивная нутритивная поддержка мышей
    1. Наполните чашку Петри гелевым кормом и поставьте ее на пол клетки (пассивная питательная поддержка путем предоставления гелевого корма для легкого доступа мыши). Оставьте 2-3 гранулы еды рядом с чашкой Петри.
    2. Ежедневно освежайте чашку Петри гелевым кормом. В течение первых нескольких дней мыши могут заполнять или накрывать чашку Петри клеточной подстилкой. Некоторые начнут есть из него (Рисунок 1в).
  4. Активная нутритивная поддержка (активное кормление)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Активное кормление происходит во время фазы В. Стандартная частота кормления составляет 3 раза в день и адаптируется к большему количеству раз в соответствии с оценкой RSS (например, даже 4-5 раз в день). Иногда для мышей, которые постоянно имеют показатель RSS 0-1 (т.е. небольшой инсульт) и активно едят самостоятельно, снижают частоту до 1-2 в день.
    1. Предварительно наполните шприцы объемом 1 мл гелем для еды.
    2. Держите мышь мягко, но крепко от шерсти на шее, как показано на рисунке 1d (красный стрелка).
    3. Стабилизируйте щеку мыши средним пальцем, как показано красными стрелками на рисунке 1d: крепко удерживая мышь, проведите пальцем в сторону к носу мыши к ее щеке. Удерживайте позицию.
    4. Поместите кончик шприца в рот мыши между зубами и направьте кончик к внутренней стороне щеки (красная стрелка, рисунок 1e).
    5. Давайте примерно 40-50 μL гелевой пищи каждый раз (полный рот).
    6. Аккуратно верните мышь на решетку клетки. Дайте время на жевание.
    7. Повторите кормление через 1-2 минуты, пока каждая мышь не съест 1-1,5 мл гелевого корма.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Кормить 5-10 мышей за один выгон (1-2 клетки); Другие едят и глотают гелевую пищу, пока каждая мышь получает полный рот. Этот процесс не вызывает стресса у мышей. Также было замечено, что некоторые животные в конечном итоге принимают положение для хватания и кормления.
  5. Добавки с обычным солевым раствором
    1. Взвесьте мышь во время утреннего визита (см. 1.1.2 и 1.1.3).
    2. Рассчитайте его потерю/прибавку в весе по сравнению с предыдущим измерением, вычитая значения.
    3. Дополните его дефицит веса (в граммах) мл нормального физиологического раствора (подкожно).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте перегрузки жидкостью и отеков любой ценой. Не превышайте 1-2 мл на дозу и 3-4 мл жидкости в день. Начинают через 36 ч после fMCAo.
  6. Добавки глюкозы
    1. Проверьте рассчитанную оценку RSS мыши и ее общее движение.
    2. Введите 0,5 - 1 мл 5% глюкозы подкожно, если RSS >3 и у мыши наблюдаются сопутствующие признаки гипотермии (<34°C) или иммобилизации/брадикинезии. Колоть желательно только во время ночного визита.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте гипергликемии после инсульта любой ценой. Постинсультная гипергликемия токсична7. Таким образом, добавляйте глюкозу только после активного кормления и в случаях тяжелого клинического состояния или для предотвращения гипогликемии во время ночной активности. Активное кормление (см. 1.4) должно быть основным показателем поддержки, так как оно обеспечивает более плавную и длительную энергетическую поддержку и соответствует клиническим рекомендациям. Не принимайте добавки глюкозы до 3-го дня.
  7. Управление температурой (пассивное)
    1. Измеряйте температуру поверхности тела животного до операции на исходном уровне и после операции при каждом посещении (Рисунок 1a). Измерьте так, как показано на рисунке 1f и описано в разделе 1.1.4. Запишите значения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Гипотермия у мышей определяется как температура тела <35 °C 24,25. Предыдущие данные13 указывают на то, что любая температура ниже 34 °C является предупреждающим знаком для поддержки после инсульта (см. ниже).
    2. При гипотермии от 33 до 34 °C пассивно согрейте мышь в клетке на нагревательной пластине (или любом другом пассивном согревающем устройстве) до тех пор, пока она не достигнет температуры тела >34 °C. Активно кормите мышь, чтобы обеспечить ее энергией для активного производства тепла животным (более длительный запас энергии).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Держите животное на пассивном обогреве от 1 до нескольких часов. Избегайте пассивной гипертермии любой ценой.
    3. При гипотермии при температуре <33 °C увеличьте поддержку с помощью дополнительного подкожного введения глюкозы (быстрое, но кратковременное поступление энергии; см. 1.6 выше).
  8. Чистка гениталий и/или раны на шее (местная «дезинфекция»)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Иногда может наблюдаться расхождение раны или пробка уретры. Расхождение раны встречается редко. Пробка из уретры представляет собой твердую пробку на кончике гениталий мыши (Рисунок 1g) и наблюдается более часто, особенно у животных с более высокой тяжестью инсульта. Когда пробка блокирует мочеиспускательный канал, может возникнуть обструктивный синдром мочевыводящих путей, который может привести к заболеваемости и смерти26. Поэтому его следует хорошо очистить.
    1. Пропитайте уретральную пробку, если таковая имеется, обычным физиологическим раствором, чтобы облегчить ее удаление.
    2. Аккуратно удаляйте уретральную пробку с помощью небольшого тампона или простого пинцета при каждом осмотре/посещении животного. Продезинфицируйте мочеиспускательный канал с помощью манометра или тампона, смоченного антисептическим раствором.
    3. Если присутствует расхождение раны, продезинфицируйте его локально любым распространенным хирургическим антисептическим раствором (например, Октанисептом) и регулярно зашивайте рану, используя предпочтительно шелковый шов 5/0.

2. Фокусный компонент экспериментальной шкалы инсульта (fESS)

  1. Подготовка тестового поля
    1. Очистите стенд 70% спиртом, чтобы удалить внешние раздражители (оптические или запахи) и подготовьте материалы для тестирования, как показано на рисунке 2а.
    2. Распечатайте оценочный лист ESS, предоставленный в качестве дополнительного файла 2 , и выполняйте тесты один за другим.
  2. Парез передних конечностей (Тест 1)
    1. Поднимите и осторожно держите мышь у основания хвоста.
    2. Проверьте и оцените визуально симметричное разгибание вперед и симметричную подвижность передних конечностей при движении мыши (рис. 2c).
    3. Оценка в зависимости от визуальных данных следующая: 0 за нормальное, симметричное разгибание и движение передних конечностей; 1 для «легкой асимметрии», определяемой как легкое сгибание и/или уменьшение подвижности контрапораженной конечности или ригидность конечности; 2 для «выраженного сгибания» контрацепционной конечности; 3 для прилегания контралучной конечности к туловищу; 4 балла за отсутствие движений тела или конечностей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет парез контралезионной передней конечности. Он также входит в состав шкал BS, LS, mNSS и NS. Оценку 1 может быть сложно определить из-за маневров убегания животного.
  3. Парез задних конечностей (Тест 2)
    1. Продолжайте удерживать мышь за основание хвоста, как описано в Тесте 1.
    2. Проверьте визуально симметричное разгибание и движение задних конечностей и пальцев ног (рис. 2в).
    3. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 за нормальное, симметричное положение/разгибание и движение задних конечностей и пальцев ног; 1 для явной асимметрии, когда значительно уменьшается подвижность и ассиметричное положение/разгибание контралатеральной (правой) задней конечности (рис. 2d).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет парез контралезионной задней конечности. Он также является частью шкалы mNSS. В этом тесте может быть сложно точно набрать баллы.
  4. Симметрия ствола (Тест 3)
    1. Продолжайте удерживать мышь за основание хвоста (далее 2.3.) и оцените движения ее туловища.
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 для нормального, без сгибания туловища или симметричного мягкого сгибания/движения туловища в обе стороны (в качестве маневра «побега»); 1 для выраженного (>30°) сгибания головы/туловища преимущественно контралезионного (вправо), в течение первых 10 секунд от удержания.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет асимметрию при односторонних двигательных поражениях. Он также является частью скоринга mNSS.
  5. Круговое поведение (Тест 4)
    1. Аккуратно положите мышь на ровную поверхность и дайте ей свободно двигаться не менее чем на 1 минуту. Наблюдайте за его манерой движения.
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 за исследовательское, яркое, линейное движение без кругового поведения; 1 за тенденцию поворачиваться в одну сторону, но не по замкнутым кругам; 2 за непостоянное движение по замкнутым кругам в одну сторону; 3 для постоянного движения по замкнутым кругам в одну сторону; 4 для поворота, раскачивания или полного отсутствия движения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет нарушения сенсомоторной и пространственной навигации. Он также является частью NS.
  6. Симметрия тела (Тест 5)
    1. Продолжите тест 4 и позвольте мыши свободно перемещаться по плоской поверхности. Наблюдайте за его осью «нос к хвосту».
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 за нормальную осанку с поднятым туловищем от скамьи и прямым хвостом; 1 для «небольшой асимметрии» при незначительном изгибе тела в одну сторону и дистально изогнутом хвосте; 2 для «умеренной асимметрии», если очевидно изгиб тела или наклон в контралезионную сторону с проксимально согнутым хвостом и/или конечностями, вытянутыми из тела; 3 за «заметную асимметрию» при выраженном изгибе тела, одна сторона непостоянно лежит на скамейке и хвост явно проксимально изогнут (более 2 баллов); 4 для "крайней асимметрии" если тело согнуто, один бок постоянно лежит на скамейке и хвост сильно согнут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Он обнаруживает сенсомоторные односторонние дефициты ствола и хвоста. Он также является частью шкалы NS.
  7. Оценка походки (Тест 6)
    1. Продолжайте с теста 5 и позвольте мыши свободно перемещаться по плоской поверхности. Понаблюдайте теперь за его походкой и проверьте наличие двигательных нарушений ходьбы, таких как парез, ригидность конечностей, спастическая походка, конечности.
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 баллов за нормальную походку, если исследовательская, симметричная и быстрая с гибкими конечностями, которые двигаются «скрытыми» под телом; 1 для жесткой, негибкой и более медленной походки свободно движущейся мыши без хромоты; 2 для четкого хромоты с ассиметричными (влево-вправо) движениями; 3 за дрожь, дрейф или падение после легкого толчка; 4 для самостоятельной ходьбы (ходьба не длиннее 3 шагов при стимуляции легким толчком).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Он обнаруживает комбинированный дефицит походки. Он также является частью NS.
  8. Обязательное кружение (Тест 7)
    1. Держите мышь за основание хвоста, чтобы поднять ее над поверхностью, и пусть она ходит только на передних конечностях. Наблюдайте за его движением.
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 для нормального линейного движения; 1 за склонность к повороту в одну сторону; 2 для поворота в одну сторону по замкнутым кругам; 3 если при повороте в одну сторону неуклюжими движениями или вяло не удается завершить круг; 4 если нет продвижения и передняя часть ствола лежит на скамейке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест дополняет тест на поведение кругов (тест 4, см. 2.5). Вероятно, он обнаруживает сенсомоторный и пространственный дефицит. Он также является частью скоринговой системы NS.
  9. Положение против боковых сил (Тест 8)
    1. Поместите мышь на ладонь так, чтобы ось хвостового носа (продольная) была параллельна сагиттальной оси ладони.
    2. Поворачивайте мышь вперед и назад с постоянной скоростью, чтобы вызвать силы, перпендикулярные ее продольной оси.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это заставляет мышь сохранять вертикальное положение и балансировать против боковых сил во время замаха. Его тело в норме не соприкасается с ладонью или пальцами.
    3. Наблюдайте за визуальным изображением и чувствуйте любые контактные прикосновения ладонями левой и правой сторон мыши, когда она балансирует против качания. Проверьте наличие асимметричного падения, прикосновения к ладони или признаков боковой слабости.
    4. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0, если мышь стоит в нормальном вертикальном положении спиной параллельно ладони и может балансировать против раскачивания, не касаясь сильно ладони; 1 если мышь расплющивает свое тело во время качания для обретения устойчивости; 2 если часть мыши лежит или кратковременно касается ладони во время замаха; 3 если мышка лежит на одном боку, едва способная восстановить вертикальное положение; 4 Если мышь лежит в лежачем положении, не удается вернуться в вертикальное положение.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет постуральный дефицит на фоне бокового ускорения, но его оценка может быть субъективной. Он также является частью mNSS, NS.
  10. Целевое размещение передних конечностей (Тест 9)
    1. Держите мышь сзади или у основания хвоста. Направьте его перпендикулярно лучу, который функционирует как «мишень для достижения». Обратите внимание на симметричное «протягивание» и хватание.
    2. Как только он устойчиво возьмется за пучок, осторожно оттяните его в сторону и наблюдайте за симметричным «отпусканием» передних конечностей.
    3. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 за симметричное «дотягивание», хватание и «отпускание»; 1 за любую асимметрию в «дотянуться» и/или «отпустить», указывающую на контралезионную слабость передних конечностей.
  11. Сенсомоторный дефицит передних конечностей (Тест 10)
    1. Крепко держите мышь за спину и поверните ее вентрально (см. видео или рисунок 1e).
    2. Последовательно стимулируйте передние лапы тонким кончиком (например, деревянной зубочисткой) под слепым углом. Понаблюдайте за реакцией передней лапы.
    3. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 за нормальное, быстрое хватательное движение с обеих сторон; 1 за отсутствующее или явно запоздалое захват контралесионно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Оба теста 2.10 и 2.11 проверяют мелкий сенсомоторный дефицит передних конечностей. Они также являются частью mNSS.
  12. Ходьба по лучу (Тест 11)
    1. Разместите деревянную балку длиной 1 м (Таблица материалов) для соединения двух возвышенных поверхностей (например, скамеек, столов) на высоте 1-1,5 м над землей. Стабилизируйте края балки, чтобы избежать вибраций или неустойчивости.
    2. Поместите мышь в середину луча так, чтобы ось носа-хвоста была параллельна лучу (рис. 2e). Обеспечьте равновесие или свободную ходьбу на бревне. Наблюдайте за его равновесием или парезом и отпадением конечностей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мышь должна восстановить равновесие на луче, прежде чем забивать его. Держите толстую перчатку ниже животного (на расстоянии примерно 15-20 см), чтобы защитить его в случае падения.
    3. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0, если мышь балансирует и ходит с устойчивым положением к одной стороне луча; 1 если он ухватится за сторону балки и не ходит по ней; 2, если одна конечность отваливается от балки; 3, если с балки отваливаются две конечности; 4 если мышь пытается балансировать на луче, но падает (после 40 секунд); 5, если он падает между 20-40 секундами; 6 баллов, если он упадет без попытки балансировать или повиснет на бревне (<20 с).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест выявляет комбинированный двигательный дефицит передних, задних конечностей и туловища. Он также является частью шкалы mNSS.
  13. Ощущение уса (Тест 12)
    1. Поместите мышь на открытую столешницу (как в тестах 4 и 5). Выделите некоторое время для размещения.
    2. Стимулируйте его левый и правый усы последовательно тонким ватным тампоном с длинным кончиком «слепого угла». Наблюдайте за быстрым поворотом головы в сторону стимуляции.
    3. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 для нормального, быстрого поворота головы при стимуляции, двусторонняя; 1 для более медленного контралезионного ответа при стимуляции; 2 при отсутствии контрацепионного ответа (без поворота); 3 - при отсутствии контралепии и более медленном ипсилезионном ответе; 4 для двустороннего отсутствующего ответа.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте визуального обнаружения хлопка, потому что это может вызвать ложный ипсилатеральный поворот головы. Технически тест верен только тогда, когда мышь «удивлена» стимуляцией усов. Тест также является частью НС и выявляет сенсомоторный дефицит усов (бочкообразной коры).
  14. Скалолазание (Тест 13)
    1. Используйте поверхность с резиновым покрытием под углом 45° (рис. 2a) и поместите мышь в ее центр. Понаблюдайте за усилиями мыши, чтобы взобраться вверх.
    2. Оценка в зависимости от полученных результатов следующая: 0 (нормальный), если мышь быстро и без усилий поднимается на вершину поверхности; 1 если лезет при напряжении, при слабости конечностей; 2 если он держится на склоне, не скользя и не поднимаясь; 3 если он сползает вниз по склону, несмотря на усилия предотвратить падение; 4 если он скользит без усилий для предотвращения падения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тест также является частью NS и определяет общую моторную силу.
  15. Рассчитайте балл fESS, суммировав все баллы из тестов с 1 по 13
    ПРИМЕЧАНИЕ: оценка fESS 0 указывает на нормальную мышь, максимальная оценка равна 42. Большие инфаркты с поражениями стриарного и коркового тела обычно вызывают баллы >7-9. Обследуйте и оцените несколько нормальных мышей, прежде чем приступать к оценке мышей с инсультом, чтобы приспособиться к вариациям нормального поведения и уменьшить количество ложноположительных результатов fESS. Постоянно используйте предоставленный видеопротокол для стандартизации подсчета баллов на протяжении всего эксперимента.

3. Общая составляющая ЭСС (gESS)

ПРИМЕЧАНИЕ: Оцените gESS для выявления признаков «общего заболевания мышей», например, воспаления или инфекции, обычно присутствующих в течение первых 1-2 недель после fMCAo. Используйте лист оценок в Дополнительном файле 2. Оценивать gESS желательно после завершения fESS.

  1. Поместите мышь на ровную поверхность (скамейку) и оставьте ее свободно двигаться, как в пункте 2.5. Оцените последовательно следующие баллы.
  2. Понаблюдайте за его шерстью. Оценка в соответствии с оценочным листом gESS (баллы 0-2, см. Дополнительный файл 2).
  3. Проверьте реакцию мыши на испуг: удивите мышь внезапным хлопком в ладоши под слепым углом, когда она расслаблена. Проверьте и оцените реакцию ушей мыши в соответствии с оценочным листом gESS (баллы 0-2, см. Дополнительный файл 2).
  4. Оцените визуально глаза расслабленной мыши: проверьте наличие открытых/закрытых глаз или слизи. Оценка в соответствии с оценочным листом gESS (баллы 0-4, см. Дополнительный файл 2).
  5. Наблюдайте за общей спонтанной активностью и бдительностью мыши. Оценка в соответствии с оценочным листом gESS (баллы 0-4, см. Дополнительный файл 2).
  6. Наблюдайте за общим спонтанным поведением мыши на предмет наличия беспокойства, гипервозбудимости, агрессии или вращения вокруг своей оси во время любого обращения. Оценка в соответствии с оценочным листом gESS (баллы 0-4, см. Дополнительный файл 2).
  7. Рассчитайте балл gESS, сложив баллы всех вышеуказанных этапов (наблюдательный скоринг, шаги с 3.2. по 3.6).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Оценка gESS не обнаруживает очаговый дефицит, вызванный инсультными поражениями, и не подвержен влиянию mSU, как было показано ранее 13. Все тесты адаптированы по шкале NS 9,15.

4. Количественная оценка дефицита передних конечностей с помощью теста Cylinder Test

ПРИМЕЧАНИЕ: Испытание баллона ранее подробно описано впунктах 9,15,27 и не будет подробно описано здесь. Цилиндрический тест является независимым поведенческим тестом, который несмещенно количественно оценивает дефицит передних конечностей (см. 4.2).

  1. Запустите тест, следуя инструкциям, приведенным здесь15. Захватывайте видео и анализируйте их как в 15. Измерьте правый и левый первые конечности-контакты со стенами. На рисунках 3a, b показаны изображения установки.
  2. Рассчитайте латерализацию использования конечностей из-за контралезионного (правого) пареза в процентах. Используйте формулу: % предпочтения для левых шагов = [(влево - вправо) первые контакты / (вправо + влево) контакты] x 100.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Проведите тест базового цилиндра для каждой мыши, прежде чем вызывать инсульт. Проводите тесты во временных точках в соответствии с каждым экспериментальным планом.

5. Количественная оценка дефицита передних и задних конечностей с помощью теста Ladder-rung Test

ПРИМЕЧАНИЕ: Соорудите аппарат для мышей из плексигласа (показано на рисунке 3c): коридор длиной 1 м со стенками высотой 20 см, пластиковыми перекладинами (диаметром 3 мм), расположенными через равные промежутки 15 мм (рисунок 3c1), и ящиком для убежища на дистальном конце. Положите подстилку для животных в убежищный ящик для знакомства и немного гранул еды или арахисовое масло в качестве награды. Ширина коридора должна составлять 10 см и должна быть приподнята примерно на 30 см от земли.

  1. Тренируйте мышей на аппарате за 1-3 дня до базового уровня эксперимента. Проведите обучение, как показано в шагах с 5.1.1 по 5.1.4.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Дрессировка необходима для того, чтобы приспособить животных к равномерной, нормальной ходьбе по коридору ступеней, без остановок, поворотов или исследовательского поведения. Проводите тренировку в течение 2 дней подряд (2 занятия). Каждая тренировка состоит из 3 пробежек (пробежка = одна прогулка по всему коридору к приюту). Сбор исходных данных необходим для последующего наблюдения.
    1. Очищайте перекладины и стены перед каждой пробежкой 70% спиртом, чтобы избежать запахов и «исследовательских» отвлекающих факторов/остановок мыши.
    2. Расположите мышь в начале коридора с лестницей-ступенями, лицом к сейфу, чтобы начать пробежку. Пусть мышь свободно идет к боксу-убежище в конце коридора. Не заставляйте животное ходить.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Пробежки во время тренировки обычно сильно варьируются с точки зрения продолжительности и характера ходьбы. Целью тренировки является стабильная ходьба к приюту, обычно в течение <10 с, без остановок/поворотов, что обычно достигается к концу второго тренировочного дня. Обращайтесь с животным всегда осторожно, чтобы избежать индукции стресса, которая будет отвлекать от надлежащей дрессировки. Уберите животных из коридора и повторите прогон, если они остаются в коридоре и исследуют местность в течение >1 минуты, чтобы избежать привыкания.
    3. Выполните1-й тренировочный забег. Дайте животному отдохнуть в боксе в течение 5 минут после1-го спуска.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это длительное время отдыха позволяет мыши ознакомиться с убежищем и воспринимать его как «отдыхающую/вознаграждающую» цель, которую нужно достичь. Достижение «полезного восприятия» убежища имеет решающее значение для успешных пробежек.
    4. Извлеките мышь из убежища и выполните второй и третий тренировочные заезды, как показано в пункте 5.1.2. В конце этих пробежек предоставьте более короткое время отдыха в боксе для убежища (30-60 с), чтобы избежать привыкания.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обучение завершается на 2-й день. Ко второму дню почти все животные учатся ходить по коридору в стабильном темпе. Подумайте об исключении животных из дальнейших экспериментов, если они не учатся.
  2. Проведите эксперимент на обученных мышах. Тестируйте мышей в течение 2 прогонов каждый раз во все временные точки эксперимента и исходного уровня.
    1. Выполните прогоны, как описано в шагах 5.1.1 и 5.1.2. Дайте не более 5 минут отдыха между 2 пробежками в боксе для убежища.
    2. Используйте смартфон (или аналогичную камеру) и «селфи-палку» для съемки видео (данных) животных под небольшим вентральным и «слепым» углом с некоторого расстояния (как показано на рисунке 3c2). Убедитесь, что вы захватываете конечности, когда животное идет по коридору. Не отвлекайте мышь визуально во время бега и следите за ее конечностями во время бега (рис. 3c2).
    3. Запишите оба прогона, но используйте и проанализируйте данные второго прогона.
    4. Измерьте количество шагов (падений) между ступенями для каждой конечности (левой/правой, передней/задней конечности) (рис. 3c3), просмотрев видео с помощью любого программного обеспечения медиаплеера с опциями замедленной съемки. Рассчитайте абсолютную или % разницу между ступенями дефекта правой и левой конечности, отдельно для передних и задних конечностей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Второй прогон дает более надежные результаты. Здоровая мышь обычно имеет 0-1 произвольных шагов неисправности на каждую конечность (правую или левую) во время второго запуска, что обычно дает диапазон разницы 0 ±1. Поглаженная мышь будет делать неправильные шаги своей правой (контралесионной) паретической конечностью (передней или задней), что приводит к положительной латерализации «вправо». Животное с тяжелым инсультом может быть медленнее или не завершать пробежку в течение первых 7-10 дней после инсульта, однако впоследствии оно будет выполнять правильные пробежки и демонстрировать серьезные дефициты.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

mSU, как описано выше, начинается после операции fMCAo. Наши репрезентативные результаты в двух независимых когортах мышей с инсультом и симуляцией fMCAo (рис. 4a) подтверждают ранее доказанную ценность mSU, особенно в критический период между 3 и 10 днями. В наших когортах смертность произошла у 3/15 животных когорты 1 (инсульт, наблюдение через 6 месяцев), у 2/10 животных из когорты 2 (инсульт, наблюдение через 14 дней) и у 0/6 животных, прооперированных симуляцией ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящий протокол представляет собой всеобъемлющее руководство по протоколу поддержки mSU, разработанному для снижения искусственной смертности между 3-10 днями у мышей, подвергшихся большим территориальным ударам по модели fMCAo13. Кроме того, настоящий протокол включает в себя стандартизированное видеоруководство по фокальному компоненту шкалы ESS (fESS) для снижения расширенной субъективности и смещения оценки неврологического очага у мышей после инсульта. Кро...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Никаких разглашений, о которых можно было бы сообщить.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы поблагодарить Николаоса Плакопитиса и Иоанниса Тацидиса за ценную хирургическую поддержку во время части исследования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Tools for mSU
5% раствор декстрозы VIOSER S.Ana (не применимо)Любой универсальный
бесконтактный цифровой термометрAVRONYTC20095Любой генерикон
Цифровые весыKERN & Sohn GmbhFCB6K1Любой дженерикон
Пищевые гранулыMucedola srlnaЛюбой дженерик, используйте обычный корм вашего животного помещения
Нагревательная плитаPhotaxnaPhotax подогреватель посуды 2
Жидкий антисептикSchü lke & Mayr GmbHnaOctenisept®
Обычный пищевой блендердляизмельчения гранул. Любой генерикон
Нормальный физиологический растворDEMO S.A.Хлориднатрия для инъекций 0,9%
Булавка и ватные палочкидляAny genericon
SugarнаAny genericon
(1 мл) с иглойдляAny genericon. Для введения пищевых продуктов (без иглы) и для подкожного введения жидкости (с иглой)
Tools for ESS
45° угловая поверхность конструировать егоизоргстекла или другого материала, с резиновой поверхностью, для испытаний на скалолазание
ватными тампонами Любой дженерикнакоммерческое ухо ватные палочки, делают его ватным кончиком длинным и тонким
краем заточенной деревянной палочкойЛюбой дженериконна, например, зубочистки
Длинная балка Размеры: 1 х 1 х 1 см, длина примерно 100 см, деревянный. Место между двумя краями стола для испытания на проход луча
Толстая перчатка Любые универсальныесредствадля предотвращения травм животных при падении с балки
шприцев 27 калибра

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  2. Lourbopoulos, A., et al. Translational block in stroke: A constructive and "out-of-the-box" reappraisal. Front Neurosci. 15, 652403(2021).
  3. Cai, R., et al. Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections. Nat Neurosci. 22 (2), 317-327 (2019).
  4. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
  5. Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19 (6), 641-648 (1997).
  6. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  7. Powers, W. J., et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of acute ischemic stroke: A guideline for healthcare professionals from the american heart association/american stroke association. Stroke. 50 (12), e344-e418 (2019).
  8. Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. Functional assessments in the rodent stroke model. Exp Transl Stroke Med. 2 (1), 13(2010).
  9. Ruan, J., Yao, Y. Behavioral tests in rodent models of stroke. Brain Hemorrhages. 1 (4), 171-184 (2020).
  10. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: Evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  11. Bieber, M., et al. Validity and reliability of neurological scores in mice exposed to middle cerebral artery occlusion. Stroke. 50 (10), 2875-2882 (2019).
  12. Lourbopoulos, A., Karacostas, D., Artemis, N., Milonas, I., Grigoriadis, N. Effectiveness of a new modified intraluminal suture for temporary middle cerebral artery occlusion in rats of various weight. J Neurosci Methods. 173 (2), 225-234 (2008).
  13. Lourbopoulos, A., et al. Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 37 (6), 2084-2097 (2017).
  14. De Simoni, M. G., et al. Neuroprotection by complement (c1) inhibitor in mouse transient brain ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 23 (2), 232-239 (2003).
  15. Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. Modeling stroke in mice: Permanent coagulation of the distal middle cerebral artery. J Vis Exp. (89), e51729(2014).
  16. Dzirkale, Z., et al. Long-term behavioural alterations in mice following transient cerebral ischemia. Behav Brain Res. 452, 114589(2023).
  17. Kolabas, Z. I., et al. Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders. Cell. 186 (17), 3706-3725.e29 (2023).
  18. Kestner, R. I., et al. Gene expression dynamics at the neurovascular unit during early regeneration after cerebral ischemia/reperfusion injury in mice. Front Neurosci. 14, 280(2020).
  19. Pinto, R., et al. Bridging the transient intraluminal stroke preclinical model to clinical practice: From improved surgical procedures to a workflow of functional tests. Front Neurol. 13, 846735(2022).
  20. Damigos, G., et al. Machine learning based analysis of stroke lesions on mouse tissue sections. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (8), 1463-1477 (2022).
  21. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  22. Bowman, T. A., et al. Acyl coa synthetase 5 (acsl5) ablation in mice increases energy expenditure and insulin sensitivity and delays fat absorption. Mol Metab. 5 (3), 210-220 (2016).
  23. John, L. M., et al. Housing-temperature reveals energy intake counter-balances energy expenditure in normal-weight, but not diet-induced obese, male mice. Commun Biol. 5 (1), 946(2022).
  24. Tashiro, M., Hosokawa, Y., Amao, H., Tohei, A. Duration of thermal support for preventing hypothermia induced by anesthesia with medetomidine-midazolam-butorphanol in mice. J Vet Med Sci. 82 (12), 1757-1762 (2020).
  25. Taylor, D. K. Study of two devices used to maintain normothermia in rats and mice during general anesthesia. J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (5), 37-41 (2007).
  26. Bendele, A. M. Urinary system. Jones, T. C., Hard, G. C., Mohr, U. , Springer Berlin Heidelberg. Berlin, Heidelberg. 456-462 (1998).
  27. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. Cns plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  28. Mathis, A., et al. Deeplabcut: Markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning. Nat Neurosci. 21 (9), 1281-1289 (2018).
  29. Fonarow, G. C., et al. Relationship of national institutes of health stroke scale to 30-day mortality in medicare beneficiaries with acute ischemic stroke. J Am Heart Assoc. 1 (1), 42-50 (2012).
  30. Allen reference atlas - adult mouse brain coronal. Available from atlas.Brain-map.Org. , Allen Institute for Brain Science. (2011).
  31. Groger, M., et al. Release of bradykinin and expression of kinin b2 receptors in the brain: Role for cell death and brain edema formation after focal cerebral ischemia in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 25 (8), 978-989 (2005).
  32. Kolbinger, A., et al. Behind the wall-compartment-specific neovascularisation during post-stroke recovery in mice. Cells. 11 (10), (2022).
  33. Merino-Serrais, P., et al. Microanatomical study of pyramidal neurons in the contralesional somatosensory cortex after experimental ischemic stroke. Cereb Cortex. 33 (4), 1074-1089 (2023).
  34. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. The ladder rung walking task: A scoring system and its practical application. J Vis Exp. (28), (2009).
  35. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: A new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. J Neurosci Methods. 115 (2), 169-179 (2002).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи