$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Для анализа данных использовали цисометрию и отслеживание активности ЭУС-ЭМГ. Метод непрерывной цистометрии предполагает вливание физиологического раствора в мочевой пузырь и одновременное измерение изменения давления и объема мочевого пузыря. Для измерения ВВ 0,4 мл физиологического раствора вводили со скоростью 0,01 мл/мин, а мочу собирали в течение 40 мин в колпачке. Остаточный остаток после мочеиспускания (PVR) может быть получен путем аспирации физиологического раствора через катетер. У нормальных мышей без клея сумма ВВ и ПЖ часто составляла менее 0,4 мл. После эксперимента шерсть в области живота и вокруг меатуса стала влажной из-за поглощения мочи (рисунок 3А). После нанесения тонкого слоя клея для покрытия мелких мехов было показано, что сумма VV и RV составила 0,4 мл, и влажного участка не было (рис. 3B, C).
Полученные в результате цистометрические исследования позволили провести подробный анализ различных параметров, включая максимальное давление сокращения мочевого пузыря при мочеиспускании (27,2 смГн2О), продолжительность сокращения (16,26 с) и интервал между сокращениями (4,48 мин). В то же время у нас была хорошая регистрация внутрипузырного давления и сигналов EUS-EMG у мышей, как показано на рисунке 4.
Многие уродинамические измерения у мышей проводятся под наркозом14. Хотя это может показаться удобным методом уменьшения шума электрических сигналов и потери мочи в результате движения животного, важно учитывать, что обезболивающие препараты могут влиять на мочеиспускание, что может привести к неточным или ненадежнымрезультатам. Поэтому уродинамическая регистрация у бодрствующих животных более популярна для получения результатов, приближенных к физиологическому состоянию. Запись уродинамики у бодрствующих животных обычно начинается после 40-50-минутного периода восстановления после приема изофлурана16. Этот процесс включает в себя тщательное наблюдение за мышами, чтобы убедиться, что они расслаблены и чувствуют себя комфортно без необходимости анестезии. В ходе нескольких экспериментов было замечено, что движение сознательной мыши может влиять на уродинамические сигналы 5,14, что приводит к неточным измерениям конкретных параметров, таких как давление в точке утечки, VV и VE17. В результате мы реализовали метод, частично ограничивающий находящихся в сознании мышей, чтобы обеспечить более надежные уродинамические результаты. Тем не менее, даже при ограниченном сдерживании, находящиеся в сознании мыши все еще испытывают трудности, когда они сразу же просыпаются от анестезии, что также может вызвать отслоение или нестабильный контакт между электродным крючком и ЭУС, а также создать значительный шум в сигналах ЭУС-ЭМГ. Как показано на рисунке 3В, чтобы свести к минимуму эти артефакты, мы применили подход фиксации электродов клеем в точке выхода из кожи. Этот метод доказал свою эффективность в минимизации движения электродов и последующих артефактов, которые они могут производить.

Рисунок 1: Смещение электродов электромиографии. Имплантация электродов (желтая звездочка) двусторонне в наружную мышцу уретры (ЭУС; черные стрелки). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 2: Удержание бодрствующей мыши. После имплантации катетера и электродов мышь была зафиксирована на пластине для устойчивости во время уродинамической записи. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 3: Области живота и меатуса после уродинамической регистрации. (A) Большая влажная область (очерченная красной пунктирной линией) была видна в области живота и гениталий. (B) Сухие, водонепроницаемые области живота и гениталий были созданы с помощью цианоакрилатного клея (обведенного красной пунктирной линией) после записи. (C) Капля мочи (желтая стрелка) образовалась в пищевом проходе во время уродинамической регистрации и оставалась в виде капли в течение длительного времени, не впитываясь кожей и шерстью. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 4: Репрезентативные следы цистометрии и электромиографии наружного сфинктера уретры (ЭУС-ЭМГ) у бодрствующей и скованной самки мыши. (А) След А: Одновременная запись непрерывной цистометрограммы (КМГ) и ЭУС-ЭМГ (верхние и нижние следы, соответственно). (В) Трасса В представляет собой расширенную часть трассы А, обозначенную прямоугольником с различными временными шкалами. Во время фазы мочеиспускания прерывистое мочеиспускание совпадало со снижением внутрипузырного давления при регистрации КМГ (верхняя трасса; стрелки), которое происходило в периоды низкой тонической и редукционной активности ЭУС-ЭМГ (нижняя кривая; стрелки). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.