Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оптимизация процедур биопсии молочной железы и сбора образцов для мастэктомии для биобанкинга, персонализированной медицины и исследовательских приложений

1.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67193

⸱

2 сентября 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, University of the Philippines Baguio, 2Philippine Genome Center, University of the Philippines, 3Department of Surgery, Philippine General Hospital, University of the Philippines, 4Institute of Biology, College of Science, University of the Philippines Diliman, 5Department of Pathology, College of Medicine, University of the Philippines Manila, 6Institute of Human Genetics, National Institutes of Health, University of the Philippines Manila

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье представлен подробный протокол сбора образцов рака молочной железы, разработанный для оптимизации их использования для биобанкинга, персонализированной медицины и других исследовательских приложений. Подробно описан рабочий процесс сбора образцов, включая процедуры биопсии молочной железы и мастэктомии, с акцентом на минимизацию повреждения тканей и максимальное качество образцов.

Аннотация

Рак молочной железы является наиболее распространенным видом рака, поражающим женщин, особенно в Азии, с самой высокой заболеваемостью на Филиппинах. Несмотря на предпринимаемые усилия, понимание биологии рака молочной железы остается недостаточным, что усугубляется отсутствием эффективных программ скрининга и своевременного лечения. Для решения этих проблем биобанки и другие хранилища биологических образцов получили глобальный импульс. Филиппинский университет - Филиппинская больница общего профиля (UP-PGH) создал биобанк рака, демонстрируя жизнеспособность поддерживаемой правительством инициативы по исследованию рака на Филиппинах. Исследование включает в себя проспективное наблюдение за 100 филиппинскими пациентами с раком молочной железы на различных стадиях заболевания, используя опыт UP-PGH, Филиппинского центра генома (PGC) и Университета Филиппин в Дилимане - Института биологии (UPD-IB). Он объединяет сбор, обработку и хранение биологических образцов наряду с комплексными данными о пациентах. Процедуры включают экстракцию РНК, подготовку библиотеки и секвенирование. Кроме того, подгруппа пациентов участвует в эксперименте in vitro по трехмерному (3D) культивированию клеток для предварительного скрининга химиотерапии. Агрегированные данные направлены на выявление терапевтических стратегий, которые могут привести к персонализированному лечению там, где стандартные клинические подходы недостаточны. К основным методам относятся пункционная биопсия под ультразвуковым контролем, тщательный сбор нормальной ткани молочной железы и точное определение процента опухоли для обеспечения высококачественной экстракции РНК, секвенирования и 3D-культивирования клеток. В исследовании также рассматриваются проблемы, возникшие в предыдущих начинаниях в области биобанкинга. В конечном счете, это исследование направлено на то, чтобы внести значительный вклад в исследования рака молочной железы, позиционируя себя в качестве модели для совместных исследований, создания биобанков и продвижения точной медицины в развивающихся странах, таких как Филиппины.

Введение

Рак молочной железы является наиболее распространенной формой рака среди филиппинских женщин. В Азии на Филиппинах отмечается один из самых высоких показателей смертности от рака молочной железы и самое низкоесоотношение смертности к заболеваемости1. На показатели могло сильно повлиять отсутствие программ скрининга и своевременного и эффективного лечения рака молочной железы. В стране рак молочной железы обычно диагностируется на поздних стадиях, поскольку большинство онкологических пациентов обращаются за консультацией только на поздних стадиях рака. На Филиппинах, где наблюдается высокий уровень заболеваемости раком молочной железы, 53% случаев рака молочной железы были диагностированы на стадиях III и IV, и только 2-3% были диагностированы на стадии I 1,2,3. Помимо содействия скринингу и просвещению пациентов по вопросам рака молочной железы, необходимо продолжить изучение исследований и разработок, связанных с раком молочной железы, для снижения заболеваемости раком молочной железы в стране.

Создание биобанков по всему миру позволило ускорить прогресс медицины. Биобанки используются для хранения и консервации научно ценных биологических образцов для будущих исследований и разработок4. С тех пор биобанки используются для трансляционных исследований5 и совершенствования персонализированных медицинских подходов6. В Азии биобанки в основном сосредоточены в Восточной Азии, особенно в Китае, Японии и Корее4. В странах Азии с низким и средним уровнем дохода, таких как Филиппины, концепция биобанкинга все еще только формируется. Биобанки на Филиппинах в основном принадлежат частным медицинским учреждениям, где состояние здоровья и подверженность риску инфицирования более широкой филиппинской демографии может быть недостаточно представлено.

Создание биобанка рака в Филиппинской больнице общего профиля (PGH) Филиппинского университета в Маниле (UPM) доказало целесообразность создания поддерживаемого государством биобанка рака, который может способствовать проведению исследований, связанных с раком, на Филиппинах7. Опираясь на этот фундамент благодаря совместным усилиям, которые объединяют медицинский опыт, инновации в области исследований и политику здравоохранения, мы стремимся создать позитивный сдвиг в ландшафте лечения и исследований рака молочной железы на Филиппинах. В связи с этим существует настоятельная необходимость в рабочем процессе биобанкинга феномена рака и расширенном подходе, который оптимизирует сбор обширных и стратифицированных данных о пациентах в национальном масштабе. В этом исследовании описывается протокол процедур биопсии молочной железы и сбора образцов мастэктомии, уделяя особое внимание их интеграции в систему биобанкинга. Предвидя не только углубление нашего понимания патогенеза рака молочной железы в контексте филиппинской популяции, но и способствуя разработке точных методов лечения, которые соответствуют уникальным генетическим, экологическим и клиническим характеристикам пострадавших людей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это проспективное обсервационное исследование с коллекцией обезличенных биообразцов (опухоли и нормальной ткани молочной железы) и клинико-патологических данных, данных о лечении и исходах 100 филиппинских пациенток с раком молочной железы различных стадий. Это совместная работа Филиппинской больницы общего профиля (PGH), Филиппинского центра генома (PGC) и Института биологии (IB) Университета Филиппин в Дилимане, перед каждым из которых поставлены определенные задачи. Протокол был зарегистрирован в Управлении по присуждению исследовательских грантов (RGAO-2020-0933), рассмотрен и одобрен Советом по этике исследований Университета Филиппин в Маниле (UPMREB) для реализации под номером разрешения по этике UPMREB 2020-822-01. Все используемые лаборатории придерживаются рекомендаций по биобезопасности каждого учреждения. Набор пациентов из PGH обеспечил вариативность и репрезентативность с точки зрения клинико-патологических факторов, этнической принадлежности и воздействия окружающей среды. Стандартная операционная процедура (СОП), разработанная и проверенная в предыдущих проектах, была использована в качестве основы для приобретения, сбора, транспортировки и других логистических мероприятий, связанных с образцами.

ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 1 - Схематический рабочий процесс протокола приводится краткое описание протокольного рабочего процесса и роли каждого учреждения, участвующего в исследовании.

1. Процедура сбора образцов молочной железы

  1. Выявление и скрининг пациентов, подходящих для включения в исследование, во время клинической консультации или предоперационной конференции.
    1. Критерии включения онкологических больных
      1. К ним относятся филиппинки, женщины в возрасте 19-75 лет с диагнозом рак молочной железы 1, 2 и 3 стадии, а также филиппинки в возрасте 19-70 лет с диагнозом рак молочной железы 3B и 4 стадии.
      2. Включают клинически подозреваемые или патологически диагностированные случаи инвазивного рака молочной железы любой стадии.
      3. К ним относятся пациентки, которым будет проведено хирургическое лечение (модифицированная радикальная мастэктомия или радикальная мастэктомия) либо заранее (клиническая стадия I или II), либо пост-неоадъювантная химиотерапия (стадия IIIB, IIIC). Пациенты со стадией IIIA могут пройти либо предварительную операцию, либо неоадъювантную терапию в соответствии с рекомендациями врача. Для пациентов IV стадии – желающих пройти пункционную биопсию опухоли молочной железы и прилегающих нормальных тканей. Пациенты с раком молочной железы IV стадии не будут подвергаться хирургическому лечению.
      4. Включите пациентов с раком молочной железы III стадии, которые прошли неоадъювантную терапию до набора, и у которых есть полная медицинская и клиническая запись ответа на лечение.
      5. Включайте пациентов, которые могут понимать и подписывать информированное согласие.
    2. Критерии исключения для онкобольных
      1. Исключите пациенток с предшествующим или сопутствующим злокачественным новообразованием, включая предшествующий диагноз рака молочной железы.
      2. Исключить пациенток с двусторонним раком молочной железы.
      3. Исключить пациентов, ранее проходивших неоадъювантную лучевую терапию или гормональную терапию.
      4. Исключить пациентов, которым ранее была проведена пункционная или инцизионная биопсия, если нет согласия на повторную процедуру биопсии, для тех пациентов, которым будет проводиться неоадъювантная химиотерапия (поскольку до химиотерапии невозможно получить свежий образец опухоли)
      5. Исключить пациентов, которым ранее была проведена эксцизионная биопсия без остаточной опухоли.
      6. Исключить пациентов с сопутствующими заболеваниями, исключающими хирургическое лечение или неоадъювантную химиотерапию.
    3. Критерии вывода средств
      1. Сообщите участникам, что они могут отказаться от участия в любое время по соображениям безопасности или по другим причинам, не влияя на их медицинское обслуживание. Это неинтервенционное исследование не повлияет на выбор лечения для участников.
  2. Получите согласие пациента и заполните форму сбора данных.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Назначенный ответственный научный сотрудник (FIC) или консультант вместе с научным сотрудником университета (URA) получают согласие.
  3. Получить и проверить график проведения пациентом процедуры пункционной биопсии после подтверждения его участия в исследовании.
  4. Проводить процедуры в соответствии с руководящими принципами, установленными и утвержденными Комитетом по этике и Комитетом по биобезопасности учреждения.

2. Процедура забора образца биопсии молочной железы

ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 2 представлен подробный рабочий процесс процедуры пункционной биопсии молочной железы у пациентов III и IV стадий, показывающий распределение образцов для каждой процедуры.

  1. Предварительно пометьте пробирки перед сбором образца как GB, что означает Genomics - Breast (исследование, в котором находится образец), xxx, которое является номером участника и может варьироваться от 001 до 100 или более, а также буквы A, C и D. Ниже приведены буквенные коды, которые должны использоваться при маркировке пробирок:
    А - означает пункционную биопсию, опухолевую ткань, для отправки в ПГК
    С - означает ядерную игольчатую биопсию, опухолевую ткань, для биобанкинга
    D - означает пункционную биопсию, нормальные ткани
    1. Присвойте образцам, отправленным на секвенирование, этикетку лаборатории: «BC» и два двузначных номера образцов (например, BC01, BC21). Каждый образец имеет соответствующий код «GB», который коррелирует с кодом, присвоенным во время сбора образца.
  2. Получите до девяти кернов тканей с помощью пистолета для игольчатой биопсии 14 G под ультразвуковым контролем в амбулаторной клинике, операционной или в других асептических условиях.
    1. Для каждого ядра возьмите образец молочной железы длиной примерно 2 см в центре опухоли и на расстоянии 1 см от опухоли для прилегающих нормальных тканей. Соберите у каждого участника два типа образцов: опухолевую ткань и нормальную ткань.
    2. Передайте каждый образец в URA для помещения в чашку Петри, содержащую фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).
      Примечание: В данном исследовании пункционная биопсия проводилась только у пациенток с раком молочной железы III и IV стадии. Для пациентов III стадии пункционная биопсия предоставила образцы опухолей, не поддающиеся химиотерапии. У пациенток IV стадии в качестве первичного образца опухоли послужила пункционная биопсия, так как мастэктомия не проводилась. Пациентам с раком молочной железы I и II стадии пункционная биопсия не проводилась. Вместо этого опухоль и прилегающие нормальные ткани были получены из образцов мастэктомии.
  3. Разрежьте образцы биопсии пополам, чтобы равномерно распределить их между исследованием и гистопатологическим анализом.
    1. Для опухолевой ткани необходимо получить до 9 ядер на исследуемого пациента с помощью иглы 14-G.
    2. В чашке Петри полученные ядра опухоли разделить на 2 группы: образцы для анализа РНК (6 ядер) и образцы для биобанкинга (3 ядра).
    3. Разрежьте каждую сердцевину на 2 части, но в тех случаях, когда это сделать затруднительно, разрежьте ядра на 2 поперек. Используйте стерильное лезвие, чтобы разрезать сердцевину. Отправьте половину ядра ткани на анализ РНК или сохраните для биобанка. Отправьте вторую половину тканевого ядра в патологоанатомическое отделение для рутинного гистопатологического анализа.
    4. Для нормальной ткани необходимо получить до 3 ядер на исследуемого пациента с помощью иглы 14 G. Во избежание загрязнения используйте иглу, отличную от той, которая используется для получения тканей опухоли. В тех случаях, когда это невозможно, сначала получите нормальные ткани молочной железы, прежде чем получать опухолевые ткани.
    5. Поместите каждую полученную нормальную ткань в чашку Петри аналогично тому, как это было сделано с опухолевыми тканями, и разрежьте ядра пополам. Распределите образцы для исследования и в патологоанатомическое отделение для проведения гистопатологического анализа.
  4. После сбора образцов распределите образцы по пробиркам, следуя способу и в порядке приоритета.
    1. Поместите половину ядер в предназначенный для этого криовиальный раствор объемом 2 мл, предварительно заполненный 1,25 мл раствора для стабилизации РНК (все ядра для анализа РНК помещены вместе в 1 флакон, а все ядра для биобанкинга в отдельный флакон, все время храните образцы при низкой температуре) и поместите соответствующие половины этих ядер в обычный флакон/пробирку для образцов и зафиксированные 10% нейтральным буферным формалином (10% NBF). для гистопатологического анализа. Убедитесь, что две соответствующие полугруппы, та, которая направляется в назначенный центр (например, образцы, отправленные на анализ РНК), и соответствующий образец патологии имеют один и тот же код образца.
  5. Завершите хирургическую патологию формами. Вместе с формами сдайте образцы патологии, зафиксированные формалином, в отделение патологии для рутинной гистопатологии.
  6. Запечатайте парапленкой ядро иглы биопсии, смоченные в пробирках, содержащих раствор для стабилизации РНК (в идеале соотношение раствора к ткани 5:1, то есть при 0,25 см ткани, 1,25 мл раствора для стабилизации РНК).
  7. Храните образцы при температуре 4 °C в течение 24 часов, а затем перенесите их в морозильную камеру при сверхнизкой температуре, с температурой -80 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Руководство по хранению будет обсуждаться в разделе 4 (Хранение, упаковка и транспортировка образцов).

3. Процедура забора образцов для мастэктомии молочной железы

  1. Следуйте процедуре сбора образцов молочной железы, описанной в разделе 1.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Пациенткам I, II и III стадий, включенным в исследование, будет проведена мастэктомия в операционной (операционной). Для пациенток I и II стадий мастэктомия будет выполнена заранее, в то время как для пациенток III стадии мастэктомия будет проводиться только после завершения 8 циклов неоадъювантной терапии. Для стадии 4 образцы мастэктомии не собираются. На рисунке 3 приведен подробный протокол сбора образцов для мастэктомии молочной железы, показывающий распределение образцов по процедурам.
  2. Согласуйте график с сотрудниками и отделением патологии. Сделайте это не менее чем за 2 дня до назначенной даты процедуры. В случае изменения установленного графика немедленно сообщите об этом заинтересованному персоналу, чтобы избежать каких-либо конфликтов в графике.
  3. Предварительно пометьте пробирки перед сбором образца как GB, что означает Genomics Breast (исследование, в котором находится образец), xxx, которое является числом участников и может варьироваться от 001 до 100 или более, а также буквы E и F. Ниже приведены буквенные коды, которые должны использоваться при маркировке пробирок:
    Е - означает мастэктомию, опухолевую ткань, для отправки в PGC, IB, а также для биобанкинга
    F - означает мастэктомию, нормальные ткани
    1. Присвойте образцам, отправленным на секвенирование, этикетку лаборатории: «BC» и двузначный номер образца (например, BC01, BC21). Каждый образец имеет соответствующий код «GB», который коррелирует с кодом, присвоенным во время сбора образца.
  4. Заполните формы хирургической патологии во время операции, в ожидании образца. Отправьте обновленную информацию главному патологоанатому, чтобы он провел все необходимые приготовления к сбору образцов.
  5. Поместите образец в чистый пластиковый пакет сразу после извлечения и документирования образца молочной железы. Убедитесь, что образец для мастэктомии немедленно доставлен в патологоанатомическое отделение для общего анализа, чтобы свести к минимуму время ишемии холода. Не помещайте образец в формалин после сдачи.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Примеры фотографий во время мастэктомии показаны на рисунке 4 (Репрезентативные изображения сбора образцов во время процедуры мастэктомии).
  6. При выявлении получите два типа образцов из каждого образца: опухолевую ткань и нормальную ткань.
    1. Опухолевая ткань
      1. Получите минимум один блок (желательно больше) размером от 1 см × 1 см × 1 см опухолевой ткани на один образец.
      2. Разрежьте полученный тканевый блок далее на две части, при этом каждая полуколодка размером 1 см × 0,5 см × 0,5 см. Передайте половину тканевого блока в URA для биобанкинга и анализа, а затем закрепите другую половину в формалине для рутинной гистопатологии.
      3. Равномерно рассекаем втрое половину блока свежей ткани. Он будет предназначен для секвенирования РНК, биобанкинга и культивирования органоидов.
      4. Для секвенирования РНК: Немедленно поместите в предварительно охлажденные, маркированные криовиалы объемом 5 мл, предварительно заполненные раствором стабилизации РНК объемом 2,5 мл (не более 30 минут, должны постоянно храниться в холоде).
      5. Для биобанкинга: Немедленно поместите в предварительно охлажденные, маркированные и заполненные криовиалы объемом 5 мл с раствором для стабилизации РНК объемом 2,5 мл (не более 30 минут, необходимо постоянно хранить в холоде).
      6. Для культуры органоидов: Немедленно поместите в предварительно охлажденные, предварительно маркированные и заполненные конические флаконы объемом 15 мл с 5 мл раствора для хранения тканей и 0,01 мл примоцина (не более 30 минут, необходимо постоянно хранить в холоде). Соберите вместе в одну коническую трубку одну треть всех опухолевых блоков, полученных из разных участков образца.
    2. Нормальная ткань
      1. Получите минимум один блок (желательно больше) размером от 1 см × 1 см × 1 см нормальной ткани молочной железы на один образец.
      2. Полученный тканевый блок разрезаем далее на две части, при этом каждая половинка блока размером 1 см × 1 см × 0,5 см. Передайте половину тканевого блока в URA для биобанкинга и анализа, а затем закрепите другую половину в формалине для рутинной гистопатологии.
      3. Разрежьте тканевый блок поровну на две части для исследования. Они будут предназначены для секвенирования РНК и биобанкинга.
      4. Для секвенирования РНК: Немедленно поместите в предварительно охлажденные, предварительно помеченные криовиалы объемом 5 мл, предварительно заполненные 2,5 мл криовиалов раствором для стабилизации РНК (не более 30 минут, постоянно поддерживать при низкой температуре).
      5. Для биобанкинга немедленно поместите в предварительно охлажденные, предварительно помеченные и заполненные 2,5 мл криовалиалы раствором для стабилизации РНК (не более 30 минут, постоянно поддерживать при низкой температуре).
        Примечание: Образцы опухолей, помеченные буквой «Е», обычно получают из трех или более различных участков образца. Во избежание путаницы образцы опухолей, предназначенные для анализа РНК и биобанка, следует помещать в отдельные пробирки, помеченные как Е1, Е2, Е3 и т.д., в то время как объединенные образцы опухолей, предназначенные для культивирования клеток, следует помещать в пробирки, помеченные просто как Е. Для образцов, помеченных E1, E2 и E3, следует регистрировать относительное положение/расположение каждого образца ткани по отношению к опухоли (например, центр, положение «10 часов»).
  7. Запечатайте парапленкой криовалиальные пленки, содержащие образцы, полученные в результате мастэктомии.
  8. Храните криовиалы при температуре 4 °C в течение 24 часов, а затем перенесите их в морозильную камеру со сверхнизкой температурой -80 °C для длительного хранения.
  9. Упакуйте коническую трубку, содержащую объединенные опухолевые блоки, и подготовьте ее к транспортировке. Эти опухолевые блоки будут использоваться для культивирования клеток в органоиды.

4. Хранение, упаковка и транспортировка образцов

  1. Немедленно запечатайте парапленкой все криовиалы, содержащие опухоль и нормальные ткани, и храните их при температуре 4 °C в течение 24 часов. Через 24 часа поместите пробирки при температуре -20 °C примерно на 2-4 часа, а затем перенесите их на неопределенный срок до -80 °C для длительного хранения до транспортировки.
  2. Обновите трекер образцов и базу данных перед транспортировкой образцов для анализа РНК, включая результаты рутинной гистопатологии и процентное соотношение опухолей, чтобы обеспечить идентичность образца.
  3. Составьте транспортировочный манифест для каждого образца перед транспортировкой. Убедитесь, что процесс упаковки быстрый, а пробирки с образцами не оставляются при комнатной температуре (RT) в течение длительного времени.
    1. Закройте все криовиальные колпачки парапленкой, чтобы предотвратить протекание.
    2. Поместите все пробирки в штатив для пробирок.
    3. Установите регистратор температуры и поместите его над стойкой рядом с трубками для транспортировки.
    4. Оберните трубки абсорбирующим материалом, затем пузырчатой пленкой и поместите предметы в закрывающийся пакет. Убедитесь, что регистратор температуры регистрирует температуру, а трубки не повреждены и расположены вертикально, прежде чем запечатывать предметы внутри пакета.
    5. Поместите гелевые пакеты на дно транспортировочной коробки из полистирола, затем установите закрывающийся пакет с тюбиками поверх гелевых пакетов. Сверху на пакет положите еще один слой гелевых пакетов. Убедитесь, что пробирки зажаты между гелевыми пакетами, чтобы образцы оставались холодными во время транспортировки.
    6. Закройте коробку из полистирола и положите ее в картонную транспортировочную коробку. Если большой картонной коробки нет, используйте полистирольную коробку большего размера. Поместите заполненный транспортный манифест в пакет с застежкой-молнией и положите его внутрь коробки. Размещение предметов внутри коробки показано на рисунке 5.
    7. Запечатайте картонную коробку и поместите соответствующую транспортную этикетку снаружи коробки.
  4. Сообщите получателю о графике сбора образцов и о том, когда будет запланирована отправка образцов.
    1. Для культивирования органоидов отправляются и используются только опухолевые ткани, полученные в результате мастэктомии. Убедитесь, что они доставлены свежими, на влажном льду и в течение 24 часов после сбора образцов. После того, как образцы упакованы и коробка запечатана, быстро вызовите курьера для их транспортировки. Следите за тем, чтобы коробки не оставлялись в помещениях с высокой температурой в течение длительного времени, так как резкое падение или повышение температуры может поставить под угрозу жизнеспособность образцов.
    2. Перед передачей курьеру обратите внимание на количество отправленных флаконов/пробирок и время, когда курьер покинул биобанк. По прибытии посылки убедитесь, что получатель принял к сведению следующее: время прибытия и получения в указанном центре, температуру по прибытии, количество полученных флаконов/пробирок и любой поврежденный образец
    3. Для анализа РНК проверьте, имеют ли доставляемые образцы соответствующий результат гистопатологии и процентное соотношение опухолей из отделения хирургической патологии, прежде чем отправлять образцы на анализ РНК. Определите и выберите тканевый блок с наибольшим содержанием опухоли для каждого пациента, который будет отправлен на экстракцию РНК. Транспортируйте образцы только с процентом опухоли.
    4. Отправляйте образцы группами не более 40 штук, чтобы облегчить обработку партий. Выбирайте любую комбинацию опухолевой ткани из пункционной биопсии или мастэктомии и нормальной ткани из мастэктомии. Проверьте следующие условия, если необходимо транспортировать нормальную ткань из пункционной биопсии:
      -Зарегистрирован как 3 стадия, но результат гистопатологии показывает 4 стадию
      - Зарегистрирован на 3 стадии, но результат гистопатологии показывает локорегионарное прогрессирование заболевания.
    5. Убедитесь, что все образцы транспортируются по влажному льду. Подобно протоколу, которому следуют при отправке образцов для 3D-клеточной культуры, после того, как образцы упакованы и коробка запечатана, немедленно закажите курьера для транспортировки. Не оставляйте коробки в помещениях с высокой температурой в течение длительного времени, так как значительные колебания температуры могут поставить под угрозу жизнеспособность образцов.
    6. Перед передачей курьеру обратите внимание на количество отправленных флаконов/пробирок и время, когда курьер покинул биобанк. По прибытии посылки обратите внимание на следующее: время прибытия и получения в назначенном центре, температуру по прибытии, количество полученных флаконов/пробирок и любой поврежденный образец (если таковой имеется).
  5. Обновите базу данных отправленных образцов и введите всю необходимую информацию перед дальнейшей обработкой образцов. Мониторинг и оценка базы данных раз в неделю.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

При сборе образцов во время пункционной биопсии проведение процедуры под ультразвуковым контролем оказало огромное влияние на удобство пациента и эффективность рабочего процесса, а также на целостность РНК образцов. Если этого не сделать, ожидаемые результаты могут быть не получены, и пациенты должны вернуться в клиники для повторения процедуры, что продлевает сбор и обработку образцов.

Кроме того, определение процентного соотношения опухолей на образец, котор...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Успешное внедрение этого протокола зависит не только от технической точности, но и от координации клинических и исследовательских групп для обеспечения стабильного качества образцов и целостности данных. Этот протокол включает в себя несколько ключевых процедур, разработанных для максимальной точности диагностики и получения высококачественных биообразцов, пригодных для последующего молекулярного анализа. Ключевые этапы включают пункционную биопсию под ультразвуковым контролем для получе...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют никакого конфликта интересов, будь то финансовый, личный или институциональный, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Это исследование финансируется Департаментом науки и технологий Филиппинского совета по исследованиям и разработкам в области здравоохранения (DOST-PCHRD) и проводится в сотрудничестве с Филиппинским геномным центром (PGC) и Университетом Филиппин в Дилимане - Институтом биологии (UPD-IB). Авторы также хотели бы поблагодарить г-на Леха Гавела Тизона, г-на Конрада Чонга и г-жу Сьюзан Валибиа за их помощь в оптимизации этого протокола, а также патологоанатомических ординаторов, которые внесли свой вклад в съемки этого протокола, доктора Клариссу Веронику Мирхан и доктора Патрисию Франко.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
37% раствор формалинаКорпорация PHILUSAН/ДИспользуется как консервант тканей для гистопатологического анализа
70% изопропиловый спиртGreen Cross Inc.Н/ДИспользуется как дезинфицирующее средство
Принтер штрих-кодовЗебраGC420tДля печати этикеток с штрихкодами, используемых для маркировки пробирок с образцами
ОтбеливательGreen Cross Inc.Н/ДИспользуется как дезинфицирующее средство; для дезактивации хирургических инструментов
Синие ледяные пакетыRubbermaid1002Для хранения образцов при низких температурах во время транспортировки
Игла с биопсией кора 14-GБардMN1410Инвазивный трубчатый хирургический инструмент, предназначенный для подключения к биопсийному пистолету для автоматического извлечения небольшого образца ткани из анатомической структуры (биопсия), при этом приводя к минимальному повреждению окружающих тканей, для патологического исследования и тестирования.
Пистолет для биопсии груди с иглой коровой иглойБардMG1522Многоразовый инструмент для биопсии керна, используемый для сбора образцов тканей во время биопсии с иглой керна
Одноразовая чашка Петри размером 90 мм x 15 ммPhoenix Biomedical ProductsЛОТ: 20220206Используется при сборе образцов биопсии с иглой керна при погружении тканей в PBS
Физиологический раствор с фосфатным буфером Дульбекко (PBS)Термо Фишер Сайентифик21600010Сбалансированный сольный раствор, используемый для различных применений в культуре клеток, таких как промывка клеток перед диссоциацией, транспортировка клеток или тканей, разбавление клеток для подсчёта и подготовка реагентов.
ЩипцыМестный поставщикН/Д
Kimtech Science KimWipes Delicate Task WipersКимберли Кларк ПрофессионалKC341204,3 x 8,4 дюйма. (11,0 см x 21,3 см); 1-слойный 280 Count; Для очистки поверхностей, деталей, инструментов и медицинских кабинетов эти салфетки легко очищают жидкости, пыль и мелкие частицы.
Решение для хранения тканей MACSMiltenyi Biotec130-100-008Решение для хранения, используемое для оптимизации хранения свежих образцов органов и тканей
МикропипеткаShanghai Lichen Instrument Technology Co., Ltd.STEM-GC-3197-Yдля пипетирования/перемещения жидкостей в небольших объёмах
Наконечники микропипетокТарсоны521100для пипетирования/перемещения жидкостей в небольших объёмах
ПарафильмParafilm M5259-04LC PM996Герметичное и влагозащищённое герметизация труб с целью предотвращения протечек
Примоцин 250 мг (5 x 1 мл)InvivoGenANT-PM-05Используется для защиты тканей от микробного загрязнения
Холодильник (4 градуса; C)LGМодель: GR-Y331SLZBДля хранения образцов тканей и реагентов
Решение RNAlaterТермо Фишер СайентификAM7021Раствор для стабилизации РНК, используемый для хранения и биобанкинга тканей
Стерильная коническая трубка объёмом 15 мл;Thermo Scientific339650Используется для изготовления аликвотов реагентов/среды, используемых в хранении тканей
Стерильные 5 мл криовиалыThermo Scientific5000-1020Используется для изготовления аликвотов реагентов/среды, используемых в хранении тканей
Лезвие стерильного скальпеля (#11)SurgitechН/ДДля разрезания опухоли и нормальных тканей молочной железы
Хирургические ножницы (18,5 см, 7 и фрак14; " str)Olten InstrumentsBO-0125Для разрезания опухоли и нормальных тканей молочной железы
Регистратор температурыExtech Instruments42280Для записи температуры и влажности при транспортировке образцов
Тканевые чернилаЭпредия3120123Для окрашивания краёв вырезанных хирургических образцов для гистопатологического анализа
Ультра-низкий морозильникHaier BiomedicalDW-86L579Для бессрочного хранения опухолевых и нормальных тканей молочной железы
Контейнер для образца мочи 60 млSure Guard0016UCS06PCДля хранения тканей для гистопатологического анализа
Пакеты с зиплокомReynolds Consumer Products LLCИспользуется при упаковке образцов для транспортировки

Ссылки

  1. Wu, T., Lee, J. Promoting breast cancer awareness and screening practices for early detection in low-resource settings. Eur J Breast Health. 15 (1), 18-25 (2018).
  2. De Leon Matsuda, M. L., et al. BRCA1 and BRCA2 mutations among breast cancer patients from the Philippines. Int J Cancer. 98 (4), 596-603 (2002).
  3. Ngelangel, C. A., Wang, E. H. M. Cancer and the Philippine Cancer Control Program. Jpn. J Clin Oncol. 32 Suppl, S52-S61 (2002).
  4. Lee, S., Jung, P. E., Lee, Y. Publicly-funded biobanks and networks in East Asia. SpringerPlus. 5 (1), 1080(2016).
  5. Murtagh, M. J., Demir, I., Harris, J. R., Burton, P. R. Realizing the promise of population biobanks: a new model for translation. Hum Genet. 130, 333-345 (2011).
  6. Coppola, L., et al. Biobanking in health care: evolution and future directions. J Transl Med. 17 (1), 172(2019).
  7. Sajo, M. E. J. V., et al. A pilot cancer-phenome biobanking system in a low-resource Southeast Asian setting: The Philippine general hospital biobank experience. Biopreserv Biobank. 18 (3), 180-188 (2020).
  8. Considerations for RNA Seq Read Length and Coverage. , Illumina Knowledge. https://knowledge.illumina.com/library-preparation/rna-library-prep/library-preparation-rna-library-prep-reference_material-list/000001243 (2024).
  9. Evidence-based clinical practice guidelines for early breast cancer. Phil J Surg Specialties. 68 (2), 41-74 (2013).
  10. Al-Ismaeel, A. H., Nugud, A., Nugud, A., Nugud, S. Ultrasonography-guided core needle biopsy diagnostic value in breast lump assessment: An experience from the Middle East. J Diagn Med Sonogr. 37 (1), 5-11 (2021).
  11. Poontananggoon, S. Accuracy of ultrasound-guided core-needle biopsy on non-palpable breast masses. Srinagarind Med J. 35 (2), 125-128 (2020).
  12. Finak, G., et al. Gene expression signatures of morphologically normal breast tissue identify basal-like tumors. Breast Cancer Res. 8 (5), R58(2006).
  13. Johnson, K. C., et al. Normal breast tissue DNA methylation differences at regulatory elements are associated with the cancer risk factor age. Breast Cancer Res. 19 (1), 81(2017).
  14. Smits, A., et al. The estimation of tumor cell percentage for molecular testing by pathologists is not accurate. Mod Pathol. 27, 168-174 (2014).
  15. Busheri, L., et al. Breast cancer biobank from a single institutional cohort in an urban setting in India: Tumor characteristics and survival outcomes. Cancer Treat Res Commun. 28, 100409(2021).
  16. Pekar, G., et al. Biobanking multifocal breast carcinomas: sample adequacy with regard to histology and DNA content. Histopathology. 68, 411-421 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Биобанкинг рака молочной железытрепан-биопсиясеквенирование РНКкультура органоидовсбор опухолевой тканисбор нормальной тканибиопсия под контролем УЗИхранение в криопробиркахтрехмерное культивирование
Оптимизация процедур биопсии молочной железы и сбора образцов для мастэктомии для биобанкинга, персонализированной медицины и исследовательских приложений
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.