Проведение полногеномного скрининга CRISPR in vitro в Т-клетках химерного антигенного рецептора

Carli Stewart; Claudia Manriquez Roman; Saad S. Kenderian

doi:10.3791/67338

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Проведение полногеномного скрининга CRISPR in vitro в Т-клетках химерного антигенного рецептора

1.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67338

⸱

31 января 2025 г.

Carli Stewart¹^,²^,³ , Claudia Manriquez Roman¹^,⁴ , Saad S. Kenderian¹^,⁵^,⁶

¹T Cell Engineering, Mayo Clinic, ²Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, ³Department of Molecular Pharmacology and Experimental Therapeutics, Mayo Clinic, ⁴Center for Regenerative Biotherapeutics, Mayo Clinic, ⁵Division of Hematology, Mayo Clinic, ⁶Department of Immunology, Mayo Clinic

В этой статье

Краткое содержание

В статье описан протокол применения in vitro модели истощения для завершения полногеномного скрининга нокаута CRISPR в Т-клетках здорового донорского химерного антигенного рецептора.

Аннотация

Клеточная терапия химерным антигенным рецептором Т (CART) является инновационной формой таргетной иммунотерапии, которая произвела революцию в лечении рака. Тем не менее, долгосрочная реакция остается ограниченной. Недавние исследования показали, что эпигенетический ландшафт преинфузионных клеточных продуктов CART может влиять на ответ на терапию, и в качестве решения было предложено редактирование генов. Тем не менее, необходимо провести дополнительную работу, чтобы определить оптимальную стратегию редактирования генов. Полногеномный скрининг CRISPR стал популярным инструментом как для исследования механизмов устойчивости, так и для оптимизации стратегий редактирования генов. Тем не менее, их применение к первичным клеткам сопряжено со многими проблемами. Здесь мы описываем метод завершения полногеномного скрининга нокаута CRISPR в клетках CART от здоровых доноров. В качестве экспериментальной модели мы разработали этот метод для исследования развития истощения в клетках CART, нацеленных на антиген CD19. Тем не менее, мы считаем, что этот подход может быть использован для рассмотрения различных механизмов резистентности к терапии в различных конструкциях CAR и моделях опухолей.

Введение

Клеточная терапия химерным антигенным рецептором Т (CART) показала впечатляющие успехи в лечении злокачественных новообразований В-клеток; Тем не менее, устойчивая реакция ограничена 30-40%1,2,3,4,5. В то время как исследователи разработали и протестировали несколько подходов к устранению механизмов резистентности к клеточной терапии CART, включая оптимизацию дизайна CAR, редактирование генов и комбинированную терапию, развитие резистентности остается в значительной степени....