Протокол использует неинвазивный отбор образцов кала в сочетании с количественной полимеразной цепной реакцией, чтобы предложить удобный и быстрый метод диагностики инфекции Helicobacter pylori и ее устойчивости к кларитромицину и хинолонам.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выявление инфекции Helicobacter pylori и устойчивости к антибиотикам с помощью количественного анализа полимеразной цепной реакции кала
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Helicobacter pylori (H. pylori) широко распространена во всем мире, при этом примерно 50% населения мира имеют в анамнезе инфекцию H. pylori. В Китае уровень заражения колеблется от 40% до 70%. H. pylori в первую очередь связана с желудочно-кишечными заболеваниями, такими как хронический гастрит, язва желудка и двенадцатиперстной кишки. В настоящее время клиническое лечение инфекции H. pylori включает в себя тройную или четверную терапию. Однако широкое использование антибиотиков привело к развитию устойчивости к антибиотикам у H. pylori. Таким образом, обнаружение как H. pylori, так и ее устойчивости к антибиотикам имеет решающее значение для назначения клинического лечения.
Методы диагностики H. pylori включают уреа-дыхательный тест (UBT), тест на антиген, серологический тест на антитела, эндоскопию, экспресс-тест на уреазу (RUT) и бактериальный посев. Хотя первые три метода являются неинвазивными, они не позволяют восстанавливать бактерии и, таким образом, не могут использоваться для тестирования на устойчивость. Последние три метода являются инвазивными, дорогостоящими, требуют высокой технической квалификации и могут причинить вред пациентам.
Таким образом, неинвазивный, быстрый метод одновременного выявления инфекции H. pylori и устойчивости к антибиотикам имеет первостепенное клиническое значение для эффективной эрадикации H. pylori. Целью данной работы является внедрение специального протокола, сочетающего количественную полимеразную цепную реакцию (кПЦР) с технологией флуоресцентного зонда TaqMan для быстрого выявления инфекции H. pylori и устойчивости к антибиотикам. Этот метод обеспечивает удобный, быстрый и неинвазивный способ диагностики инфекции и резистентности H. pylori , в отличие от традиционного бактериального культивирования и других методов. qPCR используется для идентификации инфекции и обнаружения мутаций в генах 23S рРНК и gyrA , которые связаны с устойчивостью к кларитромицину и хинолонам соответственно. По сравнению с традиционными методами культивирования, этот подход предлагает неинвазивный, экономически эффективный и эффективный по времени метод выявления инфекции Helicobacter pylori и определения ее устойчивости к антибиотикам.
Введение
Helicobacter pylori – грамотрицательная спиралевидная бактерия, которая может постоянно инфицировать 1-й желудочныйэпителий человека. В 1994 году Всемирная организация здравоохранения классифицировала H. pylori как канцероген группы 1 для рака желудка, при этом у ~3% инфицированных людей в конечном итоге развилось заболевание2. Недавно опубликованный систематический обзор показал, что в последнее десятилетие наблюдалась общая тенденция к повышению устойчивости H. pylori к антибиотикам, которая достигла тревожных уровней во всем мире,особенно
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Это исследование соответствует этическим принципам, установленным Комитетом по этике Народной больницы провинции Гуандун Южного медицинского университета, Гуанчжоу, Китай (Одобрение No: KY2024-445-01). Подробную информацию о материалах, использованных в этом исследовании (реактивы, химикаты, оборудование и программное обеспечение), можно найти в Таблице материалов.
1. Отбор участников
- Выбирайте участников в возрастном диапазоне от 18 до 60 лет.
- Выбирайте участников, которые могут пройти скрининг инфекции Helicobacter pylori , таких как пациент....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Применение количественной ПЦР для выявления инфекции Helicobacter pylori и устойчивости к антибиотикам в образцах кала
Нами были разработаны праймеры и зонды на основе точечных мутаций в консервативных генах Helicobacter pylori, а также в гене 23S рРНК и гене gyrA . Эти праймеры и зонды были помечены различными флуоресцентными красителями, а затем использованы для обнаружения количественной ПЦР. Результаты к.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В последние годы методы молекулярного детектирования широко применяются в области микробиологии, что значительно изменило клиническое лечение ряда инфекционных заболеваний. Эти методы работают на генетическом уровне, позволяя не только подтвердить присутствие бактерий, но и типировать гены и тестировать устойчивость к антибиотикам. Флуоресцентная количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР) становится все более предпочтительной из-за ее короткого времени обработки, высокой чувствительнос.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Благодарности
Это исследование было профинансировано Исследовательским фондом передовых талантов Народной больницы провинции Гуандун [Грант No. KY012023293]. Эта работа была поддержана компанией Jiangsu Mole Bioscience Co. Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| BSC-1500IIA2-X | BIOBASE | SEDA | Шкаф биобезопасности |
| Одноразовая пробирка для сбора и хранения кала | Моль | Сбор образцов кала | |
| E-центрифуга | WEALTEC | Центрифуга остаточная жидкость со стенки пробирки | |
| Нуклеиновая кислота Helicobacter pylori, кларитромицин и набор для обнаружения мутаций резистентности к хинолонам Моль | Выявление инфекции Helicobacter pylori и устойчивости к антибиотикам; лиофилизированный реагент H. pylori (содержащий праймеры, зонды, Taq-полимеразу, фермент UNG, dNTP и т.д.), положительный контроль на H. pylori (содержащий Helicobacter pylori и гены-мишени β-актина человека) и отрицательный контроль на H. pylori (содержащий гены-мишени β-актина человека) | ||
| Mole 96M автоматизированный экстрактор нуклеиновых кислот | Mole | For DNA Extraction | |
| Набор для экстракции нуклеиновых кислот | Mole | To extract нуклеиновой кислоты; содержит буфер для лизиса (соль гуанидина, трис гидроксиметиламинометан, Tween-20, хлорид натрия), Wash Buffer 1 (хлорид натрия), Wash Buffer 2 (трис гидроксиметиламинометан, Tween-20), Wash Buffer 3 (магнитные шарики, Tween-20), Wash Buffer 4 (вода без нуклеазы) и Elution Buffer (трис гидроксиметиламинометан), а также полностью | |
| автоматическую систему медицинского анализа ПЦР SLAN на магнитной стойке SLAN | HONGSHI | Анализ данных | |
| SLAN-96S Машина для ПЦР в реальном времени | HONGSHI | Флуоресцентная количественная ПЦР-амплификация | |
| Сверхнизкотемпературные морозильные аппараты (DW-YL450) | MELING | SEDA | 20172220091-20 ° С для хранения реактивов |
| Vortex-5 | Kylin-bell | Для смешивания реактивов |
Ссылки
- Yuan, C., et al. The global prevalence of and factors associated with Helicobacter pylori infection in children: a systematic review and meta-analysis. Lancet Child Adolesc Health. 6 (3), 185-194 (2022).
- Watari, J., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
