Этот протокол демонстрирует новый метод извлечения экзосом из опухолевых тканей путем их естественного высвобождения и многократного сбора, чтобы обеспечить экспериментальную основу для изучения функции экзосом в развитии опухоли.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
* These authors contributed equally
Этот протокол демонстрирует новый метод извлечения экзосом из опухолевых тканей путем их естественного высвобождения и многократного сбора, чтобы обеспечить экспериментальную основу для изучения функции экзосом в развитии опухоли.
В виде везикул, секретируемых клетками, экзосомы заключают в себе и переносят различные нуклеиновые кислоты, белки и липиды, а также участвуют в коммуникации между различными клетками. Экзосомы в опухолевом микроокружении играют важную роль в биологических характеристиках опухолевых клеток и могут сильно влиять на состояния других клеток. Поэтому для дальнейшего изучения специфических функций экзосом в развитии опухолей, несомненно, необходимо извлекать и выделять экзосомы из тканей опухоли. Прямая экстракция экзосом из опухолевой ткани снижает потребность в культуре клеток in vitro , а экзосомы из опухолевой ткани могут быть более похожи на экзосомы в естественном состоянии. Поэтому поддержание естественного состояния экзосом в опухолевой ткани является ключом к процессу экстракции. Ферментативное расщепление часто сочетают с ультрацентрифугированием для извлечения экзосом из тканей опухоли. В этой статье мы предлагаем новый метод извлечения экзосом из опухолевой ткани. Мы использовали бессывороточную среду для инкубации небольших кусочков опухолевой ткани на встряхивающем столе, неоднократно собирали и извлекали экзосомы, естественно высвобождаемые из опухолевой ткани, и идентифицировали структуру, концентрацию и характеристики экстрагированных экзосом, предоставив новый метод для исследователей, изучающих функцию экзосом в развитии опухоли.
Экзосомы представляют собой подтип внеклеточных везикул, секретируемых клетками, обычно размером от 30 нм до 200 нм 1,2. Они участвуют в межклеточной коммуникации и доставляют различные сигнальные молекулы, включая нуклеиновые кислоты (например, дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), матричную РНК (мРНК), микрорибонуклеиновую кислоту (микроРНК), длинную некодирующую РНК (lncRNA), кольцевую РНК (circRNA)), белки и липиды 1,3,4,5, клеткам-реципиенуклеивам для влияния на их физиологические функции
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все эксперименты, связанные с экзосомами опухолевой ткани, проводились в соответствии с соответствующими руководствами и правилами. Данное исследование было одобрено и проведено в соответствии с руководящими принципами Комитета по этике Западно-Китайской больницы Сычуаньского университета (20220301101). Через четыре недели после инокуляции клетками SGC-7901 одна голая мышь (BALB/c, самец, 8 недель, 26 г) была усыплена через вывих шейки матки.
1. Приобретение опухолевой ткани
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
ТЭМ показала, что экзосомы, полученные из опухолевой ткани с помощью этого метода, имеют типичные чашеобразные структуры (рисунок 1A), и не было существенной разницы между формой экзосом, извлеченных этим методом, и путем ферментного расщепления (рисунок 1B). Результаты NTA показали, что средний диаметр экзосом составил 172,8 нм, что находилось в диапазоне 30-200 нм и соответствовало размеру экзосом; концентрация частиц составила 5,9 × 106/мл (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В этом методе экзосомы, полученные из опухолевой ткани, были извлечены из тканей эктопического рака желудка голых мышей, и ключевыми этапами были высвобождение, экссудация, разделение и очистка экзосом. Различные методы разделения экзосом были разработаны и проверены в соответствии с физическими свойствами и составом экзосом 2,21,28,29, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки, но .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.
Эта работа была поддержана Программой поддержки науки и технологий провинции Сычуань (2024NSFSC0592, 2023YFS0064).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| α-MEM | HyClone | SH30265.01B | |
| Anti-CD63 антитело | Bioss | bsm-43117M | |
| Anti-CD9 антитело | Bioss | bs-2489R | |
| Центрифужная пробирка | Thermo | 339650 | |
| Шейкер постоянной температуры | Thermo | MAXQ4450 | |
| Одноразовая стерильная пипетка-10 мл | JET | ||
| EDTA | Biosharp | BS107 | |
| Электрическая пипетка | Thermo | 9501 | |
| Горизонтальная контролируемая температурная центрифуга | Thermo | Sorvall ST1R plus | |
| Анализатор слежения за наночастицами | Malvin | NanoSight Pro | |
| Офтальмальные ножницы | Jinzhong | Y3D010 | |
| PBS | HyClone | SH30256.01B | |
| Фосфовольфрамовая кислота | Sigma | 455970-10G | |
| Хирургические ножницы | Jinzhong | J21010 | |
| Вторичное антитело | Bioss | Bs-0295G | Goat Anti-rabbit IgG H& L/FITC |
| Просвечивающий электронный микроскоп | Nikon | Plan Apo WF | |
| Ультрацентробежная трубка | Beckman | 355618 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Эта статья была опубликована
Видео скоро будет доступно