Методическая статья

Ведение беременности и кормления кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированных

2.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67793

⸱

13 декабря 2024 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, Guangdong Provincial Key Laboratory of Major Obstetric Diseases, Guangdong Provincial Clinical Research Center for Obstetrics and Gynecology, Guangdong-Hong Kong-Macao Greater Bay Area Higher Education Joint Laboratory of Maternal-Fetal Medicine, The Third Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, 2Guangdong Medical Laboratory Animal Center, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University, 3Guangdong Provincial Key Laboratory of Large Animal Models for Biomedicine, School of Pharmacy and Food Engineering, Wuyi University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В данном протоколе описана методика ведения беременности и кормления кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированные, направленная на снижение смертности новорожденных кроликов и повышение эффективности подготовки генетически отредактированных кроликов.

Аннотация

С развитием научных исследований растет спрос на генетически отредактированные модели кроликов. Тем не менее, существуют ограниченные системы управления беременностью и кормлением для генетически отредактированных кроликов, что приводит к низким показателям выживаемости среди генетически отредактированных кроликов, подготовленных многими неопытными исследователями. Поэтому правильное руководство имеет важное значение. В данной статье обобщены разработанные в лаборатории автора методы стельности и кормления генетически модифицированных кроликов и изложен ряд фундаментальных процессов. К ним относятся диагностика беременности, дородовой уход, акушерство, вспомогательное грудное вскармливание, отлучение от груди и другие процедуры, а также спасение и уход за слабыми новорожденными кроликами. По сравнению с традиционными методами естественных родов и вскармливания, используемыми в кролиководческих хозяйствах, этот подход предполагает более совершенное управление, требующее дополнительного времени и усилий, но значительно повышающее выживаемость подсосных кроликов. Методы, описанные в этой статье, подходят для большинства сценариев лабораторного разведения кроликов с отредактированными генами или эмбрионами и являются простым и эффективным ориентиром для других исследователей.

Введение

Кролики являются классической животной моделью для биомедицинских исследований и все чаще становятся предпочтительной трансляционной моделью для преодоления разрыва между моделями грызунов и моделями крупных животных 1,2. По сравнению с крупными животными, кролики имеют умеренные размеры тела, небольшое пространство для кормления, низкую стоимость кормления и удобный забор крови, что способствует повторному сбору данных исследований и хирургическим операциям. Кролики характеризуются хорошей репродуктивной способностью, коротким периодом беременности (28-32 дня для новозеландских белых кроликов), большим количеством родов, быстрым ростом 3,4. По сравнению с грызунами, кролики ближе к человеку по филогенезу5. Это экономически эффективный и практичный экспериментальный заменитель свиней и нечеловекообразных приматов6. По сравнению с другими крупными и средними животными для редактирования генов (свиньи, крупный рогатый скот, овцы, кошки, собаки, обезьяны) стоимость подготовки кроликов для редактирования генов низкая, а цикл короткий. С развитием генной терапии 7,8,9, терапии стволовыми клетками 10,11,12,13, исследований в области мозга 14 и других научных областей 1,15,16,17,18 спрос на виды без грызунов в редактировании генов увеличивается.

Кролики, занимающиеся редактированием генов, когда-то считались одними из животных среднего размера, которые могли бы реализовать промышленное применение6. Однако до сегодняшнего дня кроликам с редактированием генов не удалось добиться широкомасштабного производства. Одна из основных причин заключается в том, что производство и разведение кроликов с редактированием генов является сложной задачей, и сложность намного выше, чем у мышей или крыс с редактированием генов. Существует не так много лабораторий, которые могут эффективно выращивать кроликов с редактированием генов. Новичкам часто бывает сложно успешно подготовить кроликов по редактированию генов, и они часто сталкиваются с такими неприятными проблемами, как низкая стельность19, аборты20, дистоция21, отказ от лактации самками крольчихи22, падеж подсосных крольчат23. Тем не менее, существует мало систематических данных или литературных рекомендаций по беременности и кормлению кроликов с редактированием генов или кроликов, перенесших эмбрионы. Большинство из них основаны на опыте обычных кролиководческих ферм.

Поэтому в данной статье обобщен зрелый опыт ведения беременности и кормления генетически модифицированных кроликов из авторской лаборатории, а также представлен комплекс основных процессов эмбрионального переноса кроликов и генетически модифицированных кроликов, включая диагностику беременности, дородовое наблюдение, акушерство, искусственное вспомогательное вскармливание, аблактацию, а также спасение и выхаживание слабых крольчат. Этот процесс специально налажен для разведения кроликов с редактированием генов или кроликов, перенесших эмбрионы. По сравнению с традиционным методом естественных родов и вскармливания на кролиководческих фермах, модель ведения беременности и кормления требует больше времени и энергии, но она может значительно снизить смертность крольчат, и усилия того стоят.

Протокол

Все протоколы экспериментов на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Центра медицинских лабораторных животных провинции Гуандун. Номер этического обзора для разведения кроликов с модифицированным геном MKRN3, участвующих в этом исследовании, составляет B202210-6. В исследовании соблюдены процедуры, соответствующие этическим нормам, изложенным в Хельсинкской декларации 1975 года (пересмотренной в 1983 году). Новозеландские кролики, использованные в этом исследовании, были получены из Центра медицинских лабораторных животных провинции Гуандун в Китае. Описанный в этой статье процесс беременности и кормления генетически модифицированных кроликов является кратким изложением ежедневной практики разведения животных в лаборатории автора. Подробная информация об используемых реагентах и оборудовании приведена в Таблице материалов.

1. Диагностика беременности

  1. На12-14 день после переноса эмбрионов (выберите одну из временных точек) подтвердите беременность путем прямой пальпации.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг можно пропустить. Если пальпация будет слишком грубой и принудительной, это может привести к выкидышу у беременных крольчих.
    1. Одной рукой придерживайте кожу шеи за ушами кролика, дайте ягодицам кролика сжаться вперед, приблизившись к брюшной полости ягодиц кролика, а затем другой рукой раскройте ладонь и аккуратно пропальпируйте задний конец живота.
    2. Надавите на живот до определенной степени. Если прощупать непрерывную нить гладких и эластичных шариков из мякоти, похожих по размеру на бобы конфорки, то считается беременность24.
  2. Если позволяют условия, используйте УЗИ на15-й день после переноса эмбрионов, чтобы определить, беременна ли крольчиха. Диагностика схватки кроликов основывается на наличии небольших, крепких эхогенных точек (гестационных мешочков) в жидкой темной зоне.
  3. В период с 16-гопо 18-й день после переноса эмбрионов наблюдайте за кроликом два раза в день утром и вечером, примерно по 15 минут каждый раз. Если во время родов или течки наблюдается такое поведение, как беспокойство, учащенное дыхание, выщипывание шерсти для строительства гнезд и т. д., это указывает на то, что самка кролика псевдобеременна и по-настоящему не забеременела.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если перенос эмбрионов не удается, у самок крольчихи будет ложная беременность, похожая на роженицу или течку, на 16-18-й день из-за снижения лютеинового гормона.

2. Дородовое наблюдение

  1. Позволяйте беременным крольчихам свободно питаться во время беременности и добавляйте свежий зеленый корм раз в неделю.
  2. Утром или вечером25-го дня после переноса эмбрионов переведите беременных крольчих в клетку для родов.
    1. Заранее продезинфицируйте клетку для родов, инкубатор для животных, обрезки бумаги или стружку.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Выбирайте клетку для доставки кроликов, которая соответствует международным критериям по размеру. Убедитесь, что в клетке для родов достаточно места для перемещения крольчихи. Выбирайте инкубатор, который сможет противостоять грызению крольчихи. Выбирайте плотные обрезки бумаги с хорошим водопоглощением. В соответствии с требованиями и предложениями местного руководства животноводческого хозяйства, выберите подходящие методы дезинфекции.
    2. Закрепите инкубатор с одной стороны клетки для родов и положите полотенца, стружку или обрезки бумаги в инкубатор для животных, чтобы беременные крольчихи могли сделать гнездо.
    3. Обеспечьте достаточное количество корма и питьевой воды.
    4. Аккуратно переместите беременных крольчат в клетку для родов.
    5. Обратите внимание на то, сделали ли беременные крольчихи гнездо в инкубаторе каждый день. Если нет, добавьте немного обрезков бумаги и полотенец за пределы инкубатора утром28-го дня беременности.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если беременные крольчихи не гнездятся в инкубаторе, они, скорее всего, не будут рожать в инкубаторе. Положите немного полотенец и обрезков бумаги за пределы инкубатора, чтобы новорожденные кролики не теряли температуру и не умирали вне коробки.

3. Роды

ПРИМЕЧАНИЕ: День 0 относится к вскоре после оплодотворения и образования прокариот. Кролики – животные, стимулирующие овуляцию, у которых происходит овуляция через 10-12 ч после спаривания. Эмбрионы одноклеточной стадии, полученные на следующий день после спаривания, считаются эмбрионами на0,5-й день. Если эмбрионы одноклеточной стадии культивируют in vitro всего 2-3 ч, а затем переносят суррогатным кроликам, то это также считается0,5-й день беременности.

  1. Пренатальное наблюдение
    ПРИМЕЧАНИЕ: Срок беременности кроликов составляет 28-32 дня. Если крольчиха рожает до30-го дня беременности, то размеры плода обычно относительно небольшие, и бывают редкие случаи тяжелых родов. До30-го дня не требуется чрезмерного вмешательства.
    1. Утром30-го дня беременности у крольчих проводят абдоминальную пальпацию, чтобы примерно определить количество, размеры и активность плода.
      1. Одной рукой придерживайте кожу шеи за ушами кролика, дайте ягодицам кролика сжаться вперед, приблизившись к брюшной полости ягодиц кролика, а затем другой рукой раскройте ладонь и аккуратно пропальпируйте задний конец живота. Сила должна быть легкой.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Надавливание на живот в определенной степени приведет к пальпации нескольких эллипсоидов размером с яйцо, которые могут ощущать движение плода.
    2. Если установлено, что количество плодов, зачатых беременными крольчихами, составляет всего 1-2, то на30-й день беременности в 17 часов внутримышечно вводят 0,02 мг клопростенола, чтобы вызвать роды у крольчат на следующий день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Беременные крольчихи имеют только 1-2 плода, которые склонны к дистоции или срыву родов в зрелом возрасте.
  2. Ускорьте роды
    Примечание: Если беременная крольчиха не рожает утром31-го дня беременности, она может рассмотреть вопрос о том, нужно ли ей ускорить роды в соответствии со следующими условиями. Если плода больше 2, никаких дальнейших действий предпринято не будет.
    1. Если беременная крольчиха беременна только 1-2 плодами и накануне ей ввели клопростенол, утром31-го дня беременности введите 10 единиц окситоцина в мышцы, чтобы вызвать роды.
    2. Если у беременной крольчихи наблюдаются признаки родов (такие как беспокойство, учащенное дыхание, расширение сосудов уха, выщипывание и изготовление гнезда, планирование грунта и т.д.), введите в мышцы 10 единиц окситоцина, чтобы вызвать родовую деятельность.
    3. Если у беременной крольчихи нет признаков родоразрешения и движения плода в норме, продолжайте наблюдение. Если родов нет утром32-го дня беременности, введите 10 единиц окситоцина в мышцы, чтобы вызвать роды.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обычно, применение окситоцина может решить сложные роды. Как правило, через 5-10 минут после введения окситоцина у беременных крольчих начинаются роды. Окситоцин эффективен в течение примерно получаса и может быть введен повторно через полчаса. Не рекомендуется вызывать роды окситоцином более 3 раз. Если окситоцин неэффективен, попросите ветеринара провести кесарево сечение. В противном случае плод погибнет в матке, размягчится, и будет выделяться из влагалища.

4. Акушерство

  1. Обустройте и подготовьте инкубаторы (рисунок 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовьтесь заранее, прежде чем крольчиха родит. Размер инкубатора, использованного в данном исследовании, составляет 45 см × 30 см × 15 см в длину × ширину × высоту.
    1. Добавьте стерильную абсорбирующую набивку. Рекомендуется использовать гранулы кукурузного початка.
    2. Расстелите полотенце в виде коврика, покрытого искусственным пухом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Материалом искусственного пухового хлопка является детское полиэфирное волокно, которое не токсично. Искусственный пух очень подходит для новорожденных кроликов, согревающихся в тепле. Тем не менее, его нельзя использовать для создания гнезда для матери-крольчихи, или он может быть съеден в желудок.
  2. Быстро вытрите слизь на новорожденных крольчатах полотенцем. Убедитесь, что они дышат ровно, а затем поместите их в инкубатор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если дыхание новорожденных крольчат остановилось, немедленно надавите на грудную клетку для вспомогательного дыхания (25-35 раз/мин) для уменьшения диаметра грудной клетки на 25%-30% до восстановления спонтанного дыхания.
  3. После рождения беременных крольчих подсчитайте количество родившихся плодов. Наклейте на инкубатор информационные карточки: измененные гены, количество новорожденных крольчат, дата рождения и т.д.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подходящая температура окружающей среды для новорожденных кроликов составляет 30-32 °C. Помещение в инкубатор соответствующего количества кроличьей шерсти или искусственного пухового хлопка может достичь хорошего изоляционного эффекта. В кроличьем домике следует поддерживать температуру 16-25 °C. У самок кроликов обычно 6-8 сосков. Если малышей слишком много, некоторых малышей могут кормить другие крольчата-мамы.

5. Послеродовой уход

  1. Уход за крольчатами (Рисунок 2)
    ПРИМЕЧАНИЕ: После родов дайте крольчихе отдохнуть около 1 часа перед кормлением грудью. Кроликов обычно кормят грудью 1-3 раза в день.
    1. Перед первым кормлением очистите все соски крольчихи спиртовой ватой. За исключением грудного вскармливания, в остальное время крольчат и крольчат содержат отдельно.
    2. Аккуратно помассируйте каждый сосок и аккуратно выдавите первую каплю молока.
    3. Кормление 1-2-дневных крольчат: Каждый раз кладите крольчатину на коврик в боковом положении или в положении лежа и прикладывайте сосущих кроликов по одному к их соскам, чтобы они сосали молоко (Рисунок 2А). 1-2-дневных кроликов нужно кормить 2-3 раза в день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Недоношенные кролики или крольчата с низкой массой тела при рождении склонны к гипогликемии. Кормите 1 мл 5% глюкозы и употребите грудное молоко как можно скорее. Если крольчиха слишком слаб для питья, то сразу вводят 1 мл 5% глюкозы в брюшную полость.
    4. На второй день после рождения с помощью маркера пронумеруйте спину каждого крольчатина. Обрежьте небольшое количество ткани хвоста для генотипирования.
    5. Кормление крольчат старше 2 дней: Во время кормления поместите крольчатину в инкубатор и дайте ей самостоятельно кормить грудью (Рисунок 2B). 2-9-дневных кроликов нужно кормить 1-2 раза в день, а свыше 9-дневных кроликов нужно кормить один раз в день до отъема. Убедитесь, что крольчата сыты (рисунок 2C).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если крольчиха не желает кормить грудью, ее можно кормить свежими овощами, чтобы она была более склонна к сотрудничеству. При необходимости крольчат-матерей можно кормить грудью после помещения в устойчивое положение. Аккуратно выдавите первую каплю молока из каждого соска крольчихи, чтобы облегчить набухание и боль в груди, что полезно для крольчат сосать молоко. Если вышеперечисленные методы неэффективны, для кормления следует использовать других кормящих крольчат-матерей.
    6. В течение первых 4 дней после рождения очищайте промежность крольчатина два раза в день влажными ватными шариками, чтобы стимулировать выведение мекония и мочи (рисунок 2D).
    7. По мере того, как шерсть крольчатина отрастает, каждый день убирайте из инкубатора немного пуховой ваты.
    8. Меняйте полотенце один раз в день, пока крольчиха не вырастет до такой степени, что все его тело будет покрыто шерстью.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Как правило, полотенце больше не нужно на8-й день после рождения.
    9. Если у крольчат (в возрасте 1-2 недель) наблюдается диарея, немедленно скармливайте 3 капли гентамицина животного происхождения (концентрация 0,04 г/мл) два раза в день в течение 5 дней подряд.
      Примечание: Диарея у крольчат обычно вызвана сосанием молока у крольчат с маститом или высокой температурой и влажностью окружающей среды. Смертность крольчат при диарее очень высока.
    10. После того, как молодой кролик откроет глаза (возраст около 2 недель), переместите его в клетку для кормления с помощью полотенца. Добавьте немного зеленого корма и ежедневный рацион.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Подходящая температура для крольчат (в возрасте 2-3 недель) составляет 23-30 °C.
    11. Отделите крольчатину от крольчат и открывайте перегородку только один раз в день для кормления грудью.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это может помешать крольчатам кусать сосок матери-крольчихи.
  2. Послеродовой уход за матерью-крольчихой
    1. Во время лактации позволяйте крольчихам свободно пить и есть и кормите их подходящими зелеными кормами, чтобы обеспечить достаточное питание.
    2. Если крольчиха страдает маститом, немедленно прекратите грудное вскармливание и назначьте соответствующие ветеринарные антибиотики для лечения (рекомендуются цефалоспорины). Скармливайте молодых крольчат другим кормящим крольчихам с аналогичными сроками родов.

6. Аблактация

  1. Убедитесь, что большинство молодых кроликов отлучены от груди в возрасте 35 дней. Слабых кроликов отлучают от груди в возрасте 40 дней.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подходящая температура для молодых кроликов (от 3 недель до 3 месяцев) составляет 20-25 °C. Подходящая температура для молодых кроликов (3-6 месяцев) и взрослых кроликов также составляет 15-25 °C.
  2. Рассмотрите, следует ли прививать обычные вакцины в соответствии с экспериментальными требованиями после отъема.

Результаты

В данной статье описывается процедура ведения беременности и кормления кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированных. В конце 2022 года авторская лаборатория приступила к разработке платформы для подготовки генно-модифицированных кроликов. В течение этого периода было обнаружено несколько распространенных проблем, включая аборты, невыполнение родов в срок, дистоцию, неспособность выщипывать шерсть для подготовки гнезда перед родами, нежелание матерей-крольчат кормить грудью или случаи каннибализма, недостаточное количество грудного молока из-за большого размера помета и неспособность крольчат пить молоко. Эти проблемы значительно снизили эффективность разведения генетически модифицированных кроликов.

Обобщив опыт и изучив эти проблемы, был разработан протокол ведения беременности и кормления новорожденных кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированных (Рисунок 3). Этот протокол позволил значительно повысить выживаемость новорожденных кроликов и снизить смертность в период лактации (табл. 1). Для большинства случаев, за исключением специфических генетически модифицированных моделей заболеваний с тяжелыми постнатальными фенотипами генетических заболеваний, приводящими к более высоким показателям смертности, этот подход доказал свою эффективность и приемлемость.

В настоящее время авторская лаборатория перешла от традиционных естественных методов родов и вскармливания к вновь созданной модели ведения беременности и кормления. На сегодняшний день этот метод способствовал успешному выведению более десяти новых разновидностей генетически модифицированных кроликов, в результате чего было получено многочисленное потомство. Хотя такой подход увеличивает рабочую нагрузку, он очень эффективен. На рисунке 4 показан реальный пример разведения генетически модифицированного потомства кроликов MKRN3, демонстрирующий процесс от рождения до отлучения от груди.

figure-results-1
Рисунок 1: Устройство инкубаторов для крольчат. Этапы подготовки инкубатора для крольчат: (1) Подготовка инкубатора; (2) Набивка; (3) Расстелить полотенце; (4) Добавление искусственного пуха из хлопка; (5) Помещение крольчата внутрь; (6) Прикрепление информационной карточки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Вспомогательное грудное вскармливание для крольчат. (А) Кормление крольчат в возрасте 1-2 дней. (Б) Кормление крольчат старше 2-дневного возраста. (В) Сравнение брюшной полости щенков кроликов до и после кормления, показывающее заметное выпячивание и видимое белое грудное молоко в желудке (обозначено красным кружком). (D) Выведение мекония из желудочно-кишечного тракта в течение 3 дней после рождения (обозначено красной стрелкой). Промежность требует регулярной чистки влажным ватным тампоном (обозначен желтой стрелкой). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Процесс ведения беременности и кормления новорожденных кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированных. Этапы в процессе ведения: Диагностика беременности; Дородовой уход; Акушерство; Послеродовой уход; Аблактировка. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-4
Рисунок 4: Рост и развитие генетически модифицированных кроликов от рождения до амортации. (А) Изображения крольчат в возрасте от 1 до 8 дней. (В) Пятнадцатидневные крольчата, с матерью-крольчихой слева и крольчатами справа. (В) Тридцатипятидневные молодые кролики, отлученные от груди. (D) Кривая роста крольчат в течение первых трех недель после рождения. Крольчата были из одного помета: ID1, ID2 и ID3 представляют кроликов с модифицированным геном mkrn3 , в то время как ID4, ID5 и ID6 представляют кроликов дикого типа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Традиционные естественные роды и вскармливаниеВедение беременности и кормления грудью
Количество новорожденных крольчат (8 пометов)6871
Количество выживших новорожденных крольчат4266
Количество выживших отъемышей крольчат2963
Выживаемость при рождении (= новорожденные кролики / выжившие новорожденные кролики × 100%)61.80%93.00%
Выживаемость при отъеме (= выживаемость отлученных от отъема кроликов / новорожденных кроликов × 100%)69.00%95.50%

Таблица 1: Выживаемость детенышей кроликов при различных режимах управления разведением. Сравнение показателей выживаемости детенышей кроликов при различных стратегиях управления разведением.

Обсуждение

Основными этапами ведения беременности и кормления эмбрионов и генетически модифицированных кроликов являются акушерство и раннее вспомогательное грудное вскармливание. Трудные роды – распространенная проблема у кроликов19. Длительные сроки родов часто приводят к ишемии, гипоксии и смерти плода25. Надлежащее использование окситоцина может эффективно сократить время родов и уменьшить случаи дистоции плода26. Многие первородящие крольчихи не выщипывают шерсть для подготовки гнезд, что увеличивает риск потери температуры и смертности у новорожденных крольчат27,28. Как правило, после внутримышечного введения окситоцина у крольчат в течение 5-10 мин начинаются роды, что облегчает искусственное родоразрешение и повышает выживаемость новорожденных. Плохое материнское поведение или неопытность часто препятствуют правильному росту крольчат. Управление вспомогательным кормлением обеспечивает достаточное грудное вскармливание новорожденных кроликов и размещение в комфортабельных инкубаторах, что значительно улучшает их выживаемость29.

В этом исследовании использовался простой инкубатор с использованием искусственного пухового хлопка и полотенец для согревания. Оптимальная температура окружающей среды для новорожденных крольчат составляет 30-32 °С30. Если это возможно, оборудование для контроля температуры и влажности может еще больше улучшить результаты. На поздних стадиях беременности у самок крольчихи могут проявляться такие симптомы, как учащенное дыхание, респираторные хрипы, расширение ушных сосудов и нежелание естьили двигаться. Эти симптомы напоминают гипертензию, вызванную беременностью человека, и требуют немедленного внимания. В тяжелых случаях может наступить материнская смерть и смерть плода. В таких условиях беременных крольчих следует содержать в более просторных клетках с обрезками бумаги, чтобы стимулировать гнездование, приучать к физическим упражнениям и обеспечивать их свежим зеленым кормом. Эти меры в целом облегчают неблагоприятные симптомы у беременных крольчих. Однако в критических случаях необходима внутримышечная инъекция 0,02 мг клопростенола, чтобы вызвать прерывание беременности на ранних сроках32.

В этом исследовании установлен протокол ведения беременности и кормления для эмбриональных и генетически модифицированных кроликов, что значительно повышает эффективность разведения генетически модифицированных кроликов. По сравнению с традиционными методами разведения кролиководческих ферм, такой подход требует больше рабочей силы и материальных ресурсов и предполагает более кропотливый процесс. Тем не менее, для стандартных лабораторных условий этот метод отвечает экспериментальным потребностям и предлагает практические знания и навыки.

При разведении моделей кроликов на определенные генетические заболевания, таких как мышечная атрофия кроликов или голые кролики, слабая врожденная конституция этих моделей часто приводит к их неспособности конкурировать с кроликами дикого типа в том же помете за грудное молоко, что приводит к высоким показателям смертности вскорепосле рождения. Вспомогательное сестринское обслуживание эффективно смягчает эти проблемы, предотвращая преждевременную гибель детенышей кроликов. Кроме того, этот протокол позволяет исследователям наблюдать и определять генотип новорожденных кроликов сразу после рождения, снижая опасения по поводу того, что самки кроликов могут кусать или есть их потомство. В целом, этот протокол имеет многообещающее применение в создании эмбриональных и генетически модифицированных кроликов.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (грант No 82101937), Проектом Фонда медицинских исследований науки и техники провинции Гуандун, Китай (грант No B2024069) и проектом плана науки и техники в Гуанчжоу, Китай (грант No 100). SL2023A04J02229, присвоение No 2024A04J4923).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Искусственный пуховый хлопокЯнчжоу Anguang Textile Co., Ltd, Китай5490-Jinyu
Клопростенол натрия для инъекцийShanghai Quanyu Biotechnology (Zhumadian) Animal Pharmaceutical Co., Ltd, Китай163232207
гранулы кукурузного початкаГуандунский провинциальный медицинский центр лабораторных животных, КитайYUMIXIN
Электронная платформа весовYongkang Runjin weighing instrument Co., Ltd, Китайrj-09
GentamicinShanxi Jinfukang Biological Pharmaceutical Co., Ltd, Китай041531504
Инъекции глюкозыHenan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd, КитайH41022251
ИнкубаторFoshan Chancheng Hualong Plastic Factory, КитайAAA-2Для новорожденных кроликов
Коробка инкубатора Hebei mabao wire mesh products Co., Ltd., Китайhttps://qr.1688.com/s/AJ1K7O3pВ качестве гнезда для матери кроликов
Inslin SyringeBecton, Dickinson and Company, СШАультратонкий, 328421
Инъекция окситоцинаГуанчжоу Байюньшань Mingxing Pharmaceutical Co., LtdH44025245
инъекция пенициллинаGuangdong Kangtaiyuan Animal Husbandry Co., Ltd, Китай
Клетка для доставки кроликовSuzhou Suhang Technology Equipment Co., Ltd., Сучжоу, КитайRB42-8G
ПолотенцеZhejiang Jieliya Co., Ltd, КитайW3290
300012430

Ссылки

  1. Xu, J., et al. Gene editing in rabbits: Unique opportunities for translational biomedical research. Front Genet. 12, 642444(2021).
  2. Esteves, P. J., et al. The wide utility of rabbits as models of human diseases. Exp Mol Med. 50 (5), 1-10 (2018).
  3. Song, J., et al. Genome engineering technologies in rabbits. J Biomed Res. 35 (2), 135-147 (2020).
  4. Brewer, N. R. Biology of the rabbit. J Am Assoc Lab Anim Sci. 45 (1), 8-24 (2006).
  5. Inazu, A., et al. Increased high-density lipoprotein levels caused by a common cholesteryl-ester transfer protein gene mutation. N Engl J Med. 323 (18), 1234-1238 (1990).
  6. Han, Y., et al. Genome-edited rabbits: Unleashing the potential of a promising experimental animal model across diverse diseases. Zool Res. 45 (2), 253-262 (2024).
  7. Ebrahimi, P., et al. In vivo and ex vivo gene therapy for neurodegenerative diseases: A promise for disease modification. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 397 (10), 7501-7530 (2024).
  8. Carter, J. E., Schuchman, E. H. Gene therapy for neurodegenerative diseases: Fact or fiction. Br J Psychiatry. 178, 392-394 (2001).
  9. Zha, Y., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of APOC3 stabilizes plasma lipids and inhibits atherosclerosis in rabbits. Lipids Health Dis. 20 (1), 180(2021).
  10. Khandpur, S., Gupta, S., Gunaabalaji, D. R. Stem cell therapy in dermatology. Indian J Dermatol Venereol Leprol. 87 (6), 753-767 (2021).
  11. Gao, L., et al. Stem cell therapy: A promising therapeutic method for intracerebral hemorrhage. Cell Transplant. 27 (12), 1809-1824 (2018).
  12. Alessandrini, M., Preynat-Seauve, O., De Bruin, K., Pepper, M. S. Stem cell therapy for neurological disorders. S Afr Med J. 109 (8b), 70-77 (2019).
  13. Song, J., et al. Development of the nude rabbit model. Stem Cell Reports. 16 (3), 656-665 (2021).
  14. Liu, X., et al. YIPF5 (p.W218R) mutation induced primary microcephaly in rabbits. Neurobiol Dis. 182, 106135(2023).
  15. Bhaskar, S. M. M. Incidental findings in brain imaging research: spotlight on ethical considerations. Eur Radiol. 32 (10), 6977-6978 (2022).
  16. Sá, K. N., Venas, G. Brazilian research on noninvasive brain stimulation applied to health conditions. Arq Neuropsiquiatr. 79 (11), 974-981 (2021).
  17. Fan, J., Wang, Y., Chen, Y. E. Genetically modified rabbits for cardiovascular research. Front Genet. 12, 614379(2021).
  18. Mu, Y., et al. GTKO Rabbit: A novel animal model for preclinical assessment of decellularized xenogeneic grafts via in situ implantation. Mater Today Bio. 18, 100505(2023).
  19. Castellini, C., et al. The main factors affecting the reproductive performance of rabbit does: A review. Anim Reprod Sci. 122 (3-4), 174-182 (2010).
  20. Rosell, J. M., Fuente, L. F. Reproductive diseases in farmed rabbit does. Animals (Basel). 10 (10), (2020).
  21. Dickie, E. Dystocia in a rabbit (Oryctolagus cuniculus). Can Vet J. 52 (1), 80-83 (2011).
  22. Jiménez, A., González-Mariscal, G. Maternal responsiveness to suckling is modulated by time post-nursing: A behavioral and c-Fos/oxytocin immunocytochemistry study in rabbits. J Neuroendocrinol. 31 (9), e12788(2019).
  23. Whitney, J. C., et al. Rabbit mortality survey. Lab Anim. 10 (3), 203-207 (1976).
  24. Varga, M. Rabbit Basic Science. Textbook of Rabbit Medicine. , 3-108 (2014).
  25. Hudson, R., Müller, A., Kennedy, G. A. Parturition in the rabbit is compromised by daytime nursing: the role of oxytocin. Biol Reprod. 53 (3), 519-524 (1995).
  26. Morgan, D. R. Routine birth induction in rabbits using oxytocin. Lab Anim. 8 (2), 127-130 (1974).
  27. Hamilton, H. H., Lukefahr, S. D., McNitt, J. I. Maternal nest quality and its influence on litter survival and weaning performance in commercial rabbits. J Anim Sci. 75 (4), 926-933 (1997).
  28. Benedek, I., Altbӓcker, V., Molnár, T. Stress reactivity near birth affects nest building timing and offspring number and survival in the European rabbit (Oryctolagus cuniculus). PLoS One. 16 (1), e0246258(2021).
  29. González-Mariscal, G., Gallegos, J. A. The maintenance and termination of maternal behavior in rabbits: involvement of suckling and progesterone. Physiol Behav. 124, 72-76 (2014).
  30. Saxmose Nielsen, S., et al. Health and welfare of rabbits farmed in different production systems. Efsa j. 18 (1), e05944(2020).
  31. Pinto-Pinho, P., Pinto, M. L., Monteiro, J., Fardilha, M. Pregnancy Complications and feto-maternal monitoring in rabbits. Vet Sci. 10 (10), 622(2023).
  32. Abel, M., Smith, G. W., Nathanielsz, P. W. Prostaglandin-induced parturition in the rabbit; quantitative aspects of the route and duration of administration. J Endocrinol. 58 (1), xvi(1973).
  33. Sui, T., et al. A novel rabbit model of Duchenne muscular dystrophy generated by CRISPR/Cas9. Dis Model Mech. 11 (6), 032201(2018).
  34. Deng, J., et al. The disrupted balance between hair follicles and sebaceous glands in Hoxc13-ablated rabbits. Faseb j. 33 (1), 1226-1234 (2019).

Перепечатки и разрешения

Теги

Ведение беременности и кормления кроликов, перенесших эмбрионы и генетически модифицированных
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.