Методическая статья

Модифицированный метод наиболее вероятного числа для количественного определения сальмонеллы в сырых и полуфабрикатах из куриных продуктов

1.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67910

⸱

31 января 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Characterization and Interventions for Foodborne Pathogens, Eastern Regional Research Center, Agricultural Research Service (ARS), United States Department of Agriculture (USDA)

В этой статье

Краткое содержание

Точное количественное определение сальмонеллы у домашней птицы на низких уровнях является актуальной промышленной и нормативной проблемой. В этом протоколе описан анализ МПН, который позволяет количественно оценить сальмонеллу в сырых и готовых к приготовлению продуктах из птицы. Этот метод быстрый, чувствительный и соответствует рекомендациям FSIS, повышая безопасность пищевых продуктов и поддерживая усилия общественного здравоохранения.

Аннотация

Сальмонелла является основной причиной болезней пищевого происхождения в Соединенных Штатах, особенно в продуктах птицеводства. Традиционные методы обнаружения сальмонеллы сосредоточены на распространенности, а не на количественной оценке, что ограничивает их полезность для оценки уровней загрязнения и рисков. В этом исследовании представлен новый анализ наиболее вероятных чисел (MPN), предназначенный для количественной оценки сальмонеллы в готовых к приготовлению продуктах из птицы, таких как куриный кордон блю. Метод включает в себя промывку образца птицы, концентрирование ополаскивателя с помощью центрифугирования и последовательное разбавление его в 48-луночном блоке. Анализ МПН интегрирован с методом петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обеспечения чувствительной, точной и быстрой количественной оценки загрязнения сальмонеллой в те же сроки, что и существующие протоколы Службы безопасности и инспекции пищевых продуктов (FSIS). Результаты показывают сильную линейную корреляцию между измерениями MPN-LAMP и теоретическими уровнями инокуляции (R² = 0,933). Тем не менее, изменчивость при более низких концентрациях подчеркивает трудности в точном обнаружении сальмонеллы на этих уровнях, при этом практический нижний предел обнаружения оценивается примерно в 300 КОЕ/г. Потенциальные усовершенствования для улучшения применимости протокола включают увеличение количества проб для дальнейшего улучшения предела обнаружения, оптимизацию составов обогащающих сред и расширение молекулярного обнаружения для нацеливания на несколько сероваров сальмонеллы . В целом, данное исследование представляет собой практический инструмент для пищевой промышленности, позволяющий надежно количественно оценить загрязнение сальмонеллой продуктов птицеводства, способствуя повышению безопасности пищевых продуктов и здоровья населения.

Введение

Являясь основной причиной болезней пищевого происхождения, госпитализаций и смертей в США, сальмонелла оказывает значительное влияние на общественное здравоохранение и экономику. По оценкам, экономический ущерб от патогена только в 2013 году составил 3,67 млрд долларовСША1. Несмотря на то, что недавние инициативы в области регулирования направлены на снижение сальмонеллеза на 25% к 2030 году2, пробелы в текущих стратегиях выявления и смягчения последствий остаются очевидными, особенно в том, что касается согласования эпиднадзора за перерабатывающими предприятиями с результатами в области общественного здравоохранения3 .

Замороженные полуфабрикаты из птицы, которые были причастны к многочисленным вспышкам сальмонеллы , представляют собой серьезную проблему для здоровья населения. В ответ на это Служба безопасности и инспекции пищевых продуктов (FSIS) классифицировала сальмонеллу как примесь в этих продуктах. В настоящее время Руководство FSIS по микробиологическим лабораториям (MLG) 4.15 сосредоточено исключительно на определении распространенности сальмонеллы в продуктах птицеводства4. В соответствии с этим руководством собранные образцы обогащают в течение 18-24 часов, а затем проверяют с помощью молекулярной системы обнаружения (MDS), которая определяет наличие или отсутствие сальмонеллы , но не дает представления об уровне загрязнения. Хотя этот подход ценен для обнаружения присутствия патогенов, он не предоставляет количественную информацию, которая могла бы помочь производителям продуктов питания более точно оценить риски заражения и принять целенаправленные корректирующие действия.

В этом исследовании мы разработали метод расширения обнаружения от распространенности до количественной оценки микробных патогенов. Он был разработан для бесшовной интеграции в существующие процессы обнаружения сальмонеллы в продуктах птицеводства с минимальным нарушением текущих протоколов FSIS. Вместо простого обогащения объемного образца метод начинается с промывки продуктов птицеводства с использованием среды, соответствующей текущим методам FSIS. Затем промывка распределяется по первой колонне колодца глубиной 48 лунок. Последовательное разведение выполняется в оставшихся пяти колонках, и блок инкубируется в течение 18-24 ч в соответствии с протоколом MLG 4.15. После инкубации лунки проверяют на сальмонеллу, и по результатам вычисляют наиболее вероятное число (МПН)5,6. Такой подход позволяет количественно оценить загрязнение в те же сроки, что и текущий процесс FSIS, что делает его практичным вариантом как для промышленности, так и для нормативного использования. На рисунке 1 показана блок-схема, обобщающая модифицированный анализ МПН. Рисунок включает в себя фотографии, сделанные на конкретных этапах, блок из 48 лунок, используемый для разбавления и роста репликатов, и три метода, использованных в качестве ориентиров для оценки наиболее вероятного количества сальмонеллы, присутствующей в курином фарсе. На первом этапе этого исследования мы использовали облученный фарш из курицы, чтобы свести к минимуму влияние фоновой микрофлоры и неопределенность измерений относительно верифицированного инокулята перед применением протокола к образцам курицы, не подвергшимся облучению.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все работы, связанные с этим протоколом, должны проводиться в лаборатории уровня биобезопасности 2 (BSL-2). При необходимости этот протокол должен проводиться в шкафу биологической безопасности (КБП) для поддержания асептических условий и сведения к минимуму риска загрязнения проб или контакта оператора с микробными патогенами. При переносе проб за пределы ССП используйте герметичные контейнеры, чтобы сохранить целостность пробы и предотвратить разлив в случае случайного падения. Предпочтительно использовать одноразовые компоненты на протяжении всей процедуры, чтобы снизить вероятность перекрестного загрязнения. В случаях, когда одноразовые материалы невозможны, убедитесь, что все оборудование и материалы стерильны перед использованием. Надлежащее управление отходами имеет решающее значение; Все использованные одноразовые компоненты должны быть выброшены как биологически опасные отходы. Автоклавирование повторно используемых материалов перед повторным использованием для обеспечения надлежащей стерилизации и локализации потенциально опасных материалов. Соблюдение этих мер предосторожности не только гарантирует целостность пробы, но и сводит к минимуму риск контакта оператора с микробными патогенами.

1. Подготовка образцов мяса

  1. Получение и обработка образцов мяса
    1. Свежее мясо
      1. Приобретайте куриный фарш в отделе свежего мяса местных розничных продавцов. Все образцы передают на хранение при температуре 4 °C и обрабатывают в течение 24 ч после получения. Асептически разделите мясо на образцы по 25 г.
      2. Вакуумное уплотнение и облучите образец. Здесь Национальный центр электронно-лучевых исследований Texas A&M AgriLife облучил мясо, подвергнутое дозе ~25 кГр.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Несмотря на то, что облучение использовалось в качестве контрольной меры в данном исследовании для обеспечения элиминации фоновой микрофлоры, оно не является обязательным условием для применения протокола на практике, как показано на примере необлученных полуфабрикатов, использованных в следующем разделе. В полевых условиях альтернативные методы, такие как селективная среда или специфичность молекулярной диагностики, могут устранить потенциальную интерференцию от микроорганизмов, не являющихся мишенью.
    2. Полуфабрикаты из курицы
      1. Приобретайте готовые к приготовлению куриные продукты в отделе замороженных продуктов местных розничных продавцов. Асептически разделить на образцы по 25 г.
      2. Соберите образцы из центра отдельных кусочков, чтобы убедиться, что все ингредиенты (например, панировка и сыр) включены.
  2. Подготовка СМИ
    1. Приготовьте буферную пептонную воду (BPW), растворив 25 г порошка BPW в 1 л наночистого H2O.
    2. Приготовьте пластины для инфузии сердца для мозга (BHI). Для этого 37 г порошка BHI растворить в 1 л наночистого H2O и добавить в раствор BHI 15 г агара. Стерилизовать все среды путем автоклавирования при 121 °C в течение 15 минут. Налейте от 20 до 25 мл среды в чашки Петри с прозрачной крышкой (100 мм x 15 мм).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Лучше всего заливать пластины в шкаф биологической безопасности для поддержания асептических условий.

2. Культура клеток

  1. Приготовьте исходную культуру, нанеся полосы Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028 на агаровую пластину BHI и инкубируйте при 37 °C в течение ночи.
  2. Приготовьте культуры на ночь, введя 25 мл бульона BHI в одну колонию свежевыращенной сальмонеллы. Аэробно выращивайте культуры в течение ночи при 37 °C с встряхиванием при 100 об/мин.

3. Посев образцов птицы

  1. Разбавление культуры и покрытие
    1. Приготовьте серию 10-кратных разведений ночного посева в BPW для достижения конечных концентраций приблизительно от 1 x 108 до 1 x 101 КОЕ/мл. Предположим, что концентрация сальмонеллы в культуре за ночь составляет 1 x 109 КОЕ/мл.
    2. Перенесите 0,5 мл ночной культуры в 4,5 мл BPW, перемешайте, затем переведите 0,5 мл разведенного вещества в 4,5 мл BPW для каждого дополнительного разведения.
      1. Распределите 10 мкл разведения 1 x 103 КОЕ/мл на агаровой пластине BHI в трех экземплярах для подсчета клеток для расчета концентрации культуры в течение ночи.
  2. Инокуляция образцов мяса
    1. Асептически переложите 25 г облученного куриного фарша в стерильный желудочный мешок в двух экземплярах. Размер мешка составляет 7,5 х 12 дюймов, а на нем есть маркировка 1,63 л. Мешок содержит фильтрующую перегородку с диаметром отверстия 330 мкм, а на квадратный см их приходится 285.
    2. В каждый образец вводят 1 мл разведения целевой концентрации. Например, добавьте 1 мл культуры из разведения 1 x 10³ КОЕ/мл для достижения уровня контаминации примерно 1000 клеток/25 г курицы. Аккуратно распределите жидкий инокулят по поверхности образцов курицы с помощью разбрасывателя стерильных клеток и дайте ему постоять 1 ч при температуре 4 °C.
    3. Подготовьте отрицательные контрольные образцы, добавив 1 мл стерильного BPW.

4. Обработка образцов

  1. Добавьте 225 мл BPW в каждый образец. Соотношение объема и среды было выбрано в соответствии с FSIS MLG 4.154.
  2. Гомогенизируйте образцы с помощью Stomacher7 с нормальной скоростью и продолжительностью 120 секунд.
  3. Центрифугирование и ресуспендирование
    1. Осторожно удалите жидкость с отфильтрованной стороны пакета с помощью пипетки объемом 50 мл. Разделите жидкость на две стерильные центрифужные бутылки.
    2. Сбалансируйте бутылочки стерильным BPW, чтобы обеспечить одинаковый вес. Центрифугируйте образцы при давлении 10 000 x g в течение 10 минут. Выбросьте надосадочную жидкость. Суспендируйте клеточную гранулу в 3 мл бульона BPW с помощью стерильного шпателя.
    3. Добавьте еще 27 мл бульона BPW и тщательно перемешайте, помешивая лопаткой. Объедините содержимое обеих бутылок центрифуги в одну бутылку для каждого образца.

5. Настройка блока MPN

ПРИМЕЧАНИЕ: В таблице 1 изображена схема разведений в блоке с 48 лунками.

  1. Добавьте по 3 мл ресуспендированной пробы в каждую лунку в столбце 1 блока из 48 лунок (8 повторов).
  2. Приготовьте серию 10-кратных разведений в столбцах 1-6 в блоке с помощью восьмиканальной пипетки.
  3. Добавьте 0,3 мл образца в 2,7 мл пипетки BPW для смешивания. Повторяйте для каждого разведения. Инкубируйте блоки в течение ночи (~18 часов) при температуре 37 °C с встряхиванием при ~100 об/мин.

6. Гальванизация и перечисление

  1. Измененное перечисление табличек
    1. Планшет 7 мкл выращенного за ночь образца каждого разведения в сетке 4 x 6 на агаровой пластине с использованием многоканальной пипетки (рис. 2). Использование сетки 4 х 6 на двух планшетах лучше вмещает 8 образцов, в отличие от типичной сетки 6 х 6 капель8.
    2. Дайте планшетам высохнуть на воздухе в течение 10 минут перед инкубацией. Инкубировать агаровые пластины в течение ночи (~18-24 ч) при температуре 37 °C. После инкубации подсчитайте количество колоний на каждой пластине.

7. Обнаружение сальмонеллы методом количественной ПЦР

  1. Экстракция ДНК с помощью коммерческого набора
    1. Смешайте культуры в 48-луночном блоке, несколько раз пипетируя вверх и вниз. Пипетку по 200 мкл каждой культуры в 96-луночный ПЦР-планшет.
    2. Запечатайте, а затем центрифугируйте планшет при 6 600 x g в течение 10 минут. Снимите надосадочную жидкость и добавьте в гранулу 20 мкл реактива набора.
    3. Повторно суспендируйте гранулу пипетированием вверх и вниз. Закройте и нагрейте пластину при температуре 99 °C в течение 10 минут, а затем охладите до 20 °C.
    4. Снова центрифугируйте при 6 600 x g в течение 10 минут. Используйте 2 мкл надосадочной жидкости для количественного ПЦР-анализа.
  2. Настройка пластин
    1. Приготовьте реакционную смесь для количественной ПЦР в соответствии с установленным протоколом9 следующим образом: 10 μл 2x Master Mix; 0,4 мкл каждого праймера и зонда (рабочий раствор 10 мкМ): invA вперед: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAGG-3', invA обратно: 5'-GGAGGCTCTCCGGGGGTCAAG-3', invA зонд: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTACCTTCCTC-3' с маркировкой флуореновым красителем Cal Fluor Orange 560; 0,2 мкл матрицы для управления внутренней амплификацией (IAC) (6 x 104 коп./мкл)9; 0,4 мкл каждого праймера и зонда IAC (10 μM): прямой IAC: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3', обратный IAC: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3', зонд IAC: 5'-TTACAACGGGAGAAGAAGAATGCCACCA-3' меченный красителем TAMRA. Отрегулируйте объем с помощью ddH2O до 20 μL всего.
    2. Проведите ПЦР в реальном времени со следующими циклическими условиями9: 95 °C в течение 10 мин (начальная денатурация ДНК и активация полимеразы горячего старта), 40 циклов 95 °C в течение 15 с и 60 °C в течение 1 мин, используйте стандартные настройки Ct для экспорта результатов для анализа.

8. Детектирование с помощью анализа 3М МДС

  1. Следуйте протоколу набора для молекулярного обнаружения сальмонеллы . Смешайте культуры в 48-луночном блоке, несколько раз пипетируя вверх и вниз. Пипетка нанесет 20 μл каждого образца в прилагаемую набором пробирку для лизиса.
  2. Нагрейте образцы до 100 °C в течение 15 минут. Раствор превратится из розового в желтый. Инкубируйте образцы в течение 10 минут при комнатной температуре. Раствор изменится с желтого на розовый.
  3. Перелейте 20 мкл лизата в пробирку с реагентом и загрузите пробирки с реагентом в держатель.
  4. Добавьте держатель к прибору MDS и настройте программное обеспечение для передачи информации о наборе и образце. Прибор требует, чтобы каждая лунка была помечена номером партии для анализа и названием образца. Запустите программное обеспечение MDS и экспортируйте отчет.

9. Анализ данных

  1. Классификация положительных и отрицательных результатов.
    1. Для покрытия 4 x 6 капель оцените пятна на агаровых пластинах с хотя бы 1 колонией как положительные, а пятна на агаровых пластинах без роста как отрицательные.
    2. Для количественной ПЦР оценивайте лунки с Ct меньше или равным 30 как положительные, а лунки с Ct больше 30 как отрицательные.
    3. Для MDS используйте результаты из системы MDS, сообщенные как положительные или отрицательные.
  2. Расчет MPN
    1. Анализируйте аннотированные положительные и отрицательные результаты, используя простой метод максимального вероятностного разрешения (SMPR), описанный ранее6, или альтернативные проверенные калькуляторы MPN. 10

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Облученное мясо
В регрессионном анализе наклон 1 указывает на то, что с каждой единицей увеличения независимой переменной (ось x) зависимая переменная (ось y) увеличивается ровно на 1 единицу. Это предполагает пропорциональную связь между двумя переменными, а это означает, что изменение зависимой переменной отражает изменение независимой переменной. Пересечение 0 означает, что если независимая переменная равна 0, то зависимая переменная также равна 0. Это говорит о том, что в связи между двумя перемен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Значение протокола
Сальмонелла остается серьезной проблемой для безопасности пищевых продуктов, особенно в продуктах птицеводства, которые часто являются причиной вспышек болезней пищевого происхождения13,14. Являясь основной причиной бактериальных болезней пищевого происхождения в Соединенных Штатах, надежные методы обнаружения сальмонеллы как в свежих, так и в готовых к приготовлению проду...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Данное исследование было поддержано Министерством сельского хозяйства США, Службой сельскохозяйственных исследований (USDA-ARS), Национальной программой 108, Информационной системой текущих исследований No 8072-42000-093-000-D и 8072-42000-094-000-D. Упоминание торговых названий или коммерческих продуктов в этой статье предназначено исключительно для предоставления конкретной информации и не подразумевает рекомендацию или одобрение со стороны Министерства сельского хозяйства США. Министерство сельского хозяйства США является поставщиком равных возможностей и работодателем.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Блок для глубоких скважин 4,6 млFisher Scientific International, IncNC1964628
Агар - Затвердевающий агент (Difco)Becton, Dickinson and Company (BD)281230
Аналитические весыMettler ToledoJL602-G/LEquipment 
Аналитические весыMettler ToledoAB54-SEquipment 
Автоклав - Amsco Lab250, лабораторный паровой стерилизаторSteris plcLV-250Equipment 
Шкаф биологической безопасности, тип A2, очиститель Logic+Labconco Corporation302411101Equipment 
Инфузия сердца для мозга (BHI) БульонBecton, Dickinson and Company (BD)237500
Буферизованная пептонная водаBio-Rad Laboratories Inc.
Распределитель ячеек - L-образнаяVWR76208-438
Микроцентрифуга 5424Eppendorf5424
Центрифуга для оборудования, Avanti J-25Beckman Coulter, Inc. Оборудование
для экстракции ДНК - реагент для подготовки образцов PreMan Ultra Thermo Fisher Scientific Inc. 
Куриный фарш Местные розничные продавцы
IAC forward  праймер: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3'IntegratedDNA Technologies 
Зонд IAC: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGC
CACCA-3' меченый обратным праймером 5'TAMRA/3' BHQ-2		Biosearch Technologies
IAC: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTA-3'IntegratedDNA Technologies 
Инкубатор - шейкер инкубатора Inova 4230Brunswick Scientific4230Equipment 
Инокуляционная петля - Combi Loop  10&микро; L и 1&микро; Л Fisher Scientific International, Inc22-363-602
invA forward primer: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG
G-3'Integrated		DNA Technologies 
Зонд invA: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTAC
CTTCCTC-3' меченый 5'Cal Fluor Orange 560/3' BHQ-1		Biosearch Technologies
invA обратный праймер: 5'-GGAGGCTCTCCGGGTCAAG-3'IntegratedDNA Technologies 
Лучевая терапияTexas A & M Agrilife Research Национальный центр электронно-лучевых исследований
Лурия Бертани (LB) БульонBecton, Dickinson and Company (BD)244620
Ручная пипетка Pipet-Lite LTS Пипетка L-1000XLS+Mettler Toledo17014382Оборудование
Ручная пипетка Pipet-Lite LTS L-100XLS+Mettler Toledo17014384оборудование
Ручная пипетка Pipet-Lite LTS Пипетка L-10XLS+Mettler Toledo17014388Оборудование
Ручная пипетка Pipet-Lite LTS Пипетка L-200XLS+Mettler Toledo17014391Оборудование
Ручная пипетка Pipet-Lite LTS Пипетка L-20XLS+Mettler Toledo17014392Оборудование
Ручная пипетка Pipet-Lite Multi Pipette L8-200XLS+Mettler Toledo17013805
Оборудование Ручная пипетка Pipet-Lite Мультипипетка L8-20XLS+Mettler Toledo17013803
Оборудование Бутылка для хранения медиа -PYREX 1L Квадратное стекло  Бутылка, с завинчивающейся крышкой GL45Corning Inc.1396-1л
Оборудование Бутылка для хранения носителей -PYREX 2L Круглая бутылка с широким горлышком, с завинчивающейся крышкой GLS80Corning Inc.1397-2LОборудование
Микротитровальная пластина, 96-луночная пластина, плоское дно, полистирол, 0,34 см2, стерильный, 108/csMilliporeSigmaZ707902
смеситель - Vortex Genie 2Scientific Industries Inc.SI-0236Оборудование
молекулярного анализа 2-сальмонеллыNeogenMDA2SAL96
Инструмент для молекулярного обнаружения Оборудование NeogenMDS100 
Моторизованный контроллер пипетки, PIPETBOY2INTEGRA Biosciences Corp.155019Оборудование
PCR Mastermix 2× Экспрессия генов TaqMan Thermo Fisher Scientific Inc. 
Вращатель чашки Петри -  bioWORLD Inoculation Поворотный столFisher Scientific International, Inc3489E20Оборудование
Чашки Петри с прозрачной крышкой (100 мм x 15 мм)Fisher Scientific International, IncFB0875713
наконечники для пипеток GP LTS 1000µ L S 768A/8Mettler Toledo 
Наконечники для пипеток GP LTS 20µ L 960A/10Mettler Toledo30389270
наконечники для пипеток GP LTS 200µ L F 960A/10Mettler Toledo30389276
Готовые к приготовлению куриные продуктыМестные розничные торговцы
Резервуар для реагентов, стерильный резервуар объемом 25 мл используется с многоканальными пипеткамиThermo Fisher Scientific Inc. 8093-11
Система для ПЦР в реальном времени - 7500 Система для ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния)2750036476Оборудование
Серологические пипетки, Нунц-серологические пипетки (10 мл)Thermo Fisher Scientific Inc. 170356N
Серологические пипетки, серологические пипетки Nunc (2 мл)Thermo Fisher Scientific Inc. 170372N
Серологические пипетки, серологические пипетки Nunc (25 мл)Thermo Fisher Scientific Inc. 170357N
Серологические пипетки, серологические пипетки Nunc (50 мл)Thermo Fisher Scientific Inc. 170376N
Разбрасыватель - Разбрасыватели L-образных ячеек FisherbrandFisher Scientific International, Inc14-665-230
Мешок для желудка, Nasco Whirl-Pak Write-On Гомогенизатор Блендер Фильтровальные мешкиThermo Fisher Scientific Inc. 01-812
Блендер Stomacher 80 Biomaster Лабораторный блендерSeward30010019Оборудование
Термоамплификатор (GeneAmp PCR system 9700)Прикладные биосистемы535028293оборудование
для фильтрации воды - Elga Veolia Purelab Flex Elga LabWaterPF2XXXXM1-USОборудование
Whirlpak мешки 1,63 л ВВР11216-777
3564684 центрифуга 4318930 New для 436954230389273

Ссылки

  1. Batz, M., Hoffmann, S., Morris, J. G. Disease-outcome trees, eq-5d scores, and estimated annual losses of quality-adjusted life years (qalys) for 14 foodborne pathogens in the united states. Foodborne Pathogens and Disease. 11 (5), 395-402 (2014).
  2. The Grand Challenge: Salmonella. , United States Department of Agriculture. https://tellus.ars.usda.gov/stories/articles/the-grand-challenge-salmonella (2024).
  3. National Advisory Committee on Microbiological Criteria in Foods (NACMCF). Response to questions posed by the food safety and inspection service: Enhancing Salmonella control in poultry products. J Food Prot. 82 (4), 645-668 (2019).
  4. Food Safety and Inspection Service. 4.15 Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, siluriformes (Fish) products and carcass and environmental sponges. , (2024).
  5. Irwin, P., Reed, S., Brewster, J., Nguyen, L., He, Y. P. Non-stochastic sampling error in quantal analyses for campylobacter species on poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 405 (7), 2353-2369 (2013).
  6. Irwin, P., Tu, S., Damert, W., Phillips, J. A modified gauss-newton algorithm and ninety-six well micro-technique for calculating mpn using excel spreadsheets. Journal of Rapid Methods & Automation in Microbiology. 8 (3), 171-191 (2000).
  7. Ravishankar, S. Food microbiology: A laboratory manual. Food Microbiology. Ahmed, E. Y., Carlstrom, C. 21, wiley-interscience. singapore. 489(2004).
  8. Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and mpn enumeration of campylobacter jejuni, listeria monocytogenes, and escherichia coli. J Microbiol Methods. 55 (2), 475-479 (2003).
  9. Suo, B., He, Y., Tu, S. I., Shi, X. A multiplex real-time polymerase chain reaction for simultaneous detection of salmonella spp., escherichia coli o157, and listeria monocytogenes in meat products. Foodborne Pathogens and Disease. 7 (6), 619-628 (2010).
  10. Jarvis, B., Wilrich, C., Wilrich, P. T. Reconsideration of the derivation of most probable numbers, their standard deviations, confidence bounds and rarity values. J Appl Microbiol. 109 (5), 1660-1667 (2010).
  11. Stevens, R., Poppe, K. Validation of clinical prediction models: What does the "calibration slope" really measure. Journal of Clinical Epidemiology. 118, (2019).
  12. Miller, M. E., Hui, S. L., Tierney, W. M. Validation techniques for logistic regression models. Statistics in Medicine. 10 (8), 1213-1226 (1991).
  13. Galán-Relaño, Á, et al. Salmonella and salmonellosis: An update on public health implications and control strategies. Animals. 13 (23), 3666(2023).
  14. Gorski, L., et al. Growth assessment of salmonella enterica multi-serovar populations in poultry rinsates with commonly used enrichment and plating media. Food Microbiology. 119, 104431(2024).
  15. Schmidt, J. W., et al. Evaluation of methods for identifying poultry wing rinses with salmonella concentrations greater than or equal to 10 cfu/ml. J Food Prot. 87 (11), 100362(2024).
  16. Gorski, A., Liang, L. S. Effect of enrichment medium on real-time detection of salmonella enterica from lettuce and tomato enrichment cultures. Journal of Food Protection. 73 (6), 1047-1056 (2010).
  17. Guillén, S., Nadal, L., Álvarez, I., Mañas, P., Cebrián, G. Impact of the resistance responses to stress conditions encountered in food and food processing environments on the virulence and growth fitness of non-typhoidal salmonellae. Foods. 10 (3), 617(2021).
  18. Rohde, A., Hammerl, J. A., Appel, B., Dieckmann, R., Al Dahouk, S. Sampling and homogenization strategies significantly influence the detection of foodborne pathogens in meat. BioMed Research International. 2015, (2015).
  19. Wang, D., Wang, Z., He, F., Kinchla, A. J., Nugen, S. R. Enzymatic digestion for improved bacteria separation from leafy green vegetables. Journal of Food Protection. 79 (8), 1378-1386 (2016).
  20. Pitard, F. F. Theory of sampling and sampling practice. , Chapman and Hall/CRC. (2019).
  21. Sharpe, A. in Detecting pathogens in food. , Elsevier. 52-68 (2003).
  22. Hannah, J., et al. Effect of stomaching on numbers of bacteria recovered from chicken skin. Poultry Science. 90 (2), 491-493 (2011).
  23. Mcmeekin, T., Thomas, C. Retention of bacteria on chicken skin after immersion in bacterial suspensions. Journal of Applied Bacteriology. 45 (3), 383-387 (1978).
  24. Rodrigues-Szulc, U., Ventoura, G., Mackey, B., Payne, M. Rapid physicochemical detachment, separation and concentration of bacteria from beef surfaces. Journal of Applied Bacteriology. 80 (6), 673-681 (1996).
  25. Vibbert, H. B., et al. Accelerating sample preparation through enzyme-assisted microfiltration of salmonella in chicken extract. Biotechnol Prog. 31 (6), 1551-1562 (2015).
  26. Armstrong, C. M., et al. Use of a commercial tissue dissociation system to detect salmonella-contaminated poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 416 (3), 621-626 (2024).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Salmonella

Похожие статьи