Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Построение модели ксенотрансплантата аденокарциномы легкого у мышей и оценка эффективности отвара XY через путь MAPK

592 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

25 апреля 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Это исследование демонстрирует, что отвар XY оказывает терапевтическое действие против аденокарциномы легкого, регулируя путь MAPK.

Аннотация

Аденокарцинома легкого растет во всем мире, что побуждает к исследованию и разработке эффективных методов лечения. В последние годы все больше признается терапевтический потенциал традиционной китайской медицины для лечения аденокарциномы легкого, такой как отвар СяоИ (XY). Механизм действия традиционной китайской медицины в лечении аденокарциномы легкого продолжает выясняться. В этом исследовании использовались животные модели для изучения терапевтических эффектов отвара XY в лечении аденокарциномы легкого. Входящие в кровь химические компоненты отвара XY у мышей разделяли и анализировали как в положительном, так и в отрицательном ионном режимах с использованием UHPLC-QE-MS. Затем результаты были подтверждены с помощью экспериментов in vivo , которые продемонстрировали уменьшение размера опухоли, улучшение патологических изменений и увеличение апоптоза. В результате были идентифицированы пятнадцать компонентов, всасывающихся в кровь после приема XY-отвара: Стахиоза, Кверцетин-3-О-бета-глюкопиранозил-7-О-альфа-рамнопиранозид; Империалин; Спинозин В; Пеймин; Флавоновая основа + 3O, 2MeO, O-Hex; Пикроподофиллотоксин; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-дигидрокси-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-гидрокси-17-(2-гидрокси-6-метилгепт-5-ен-2-ил) 4,4,8,10,14-пентаметил-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-додекагидро-1H циклопента[a]фенантрен-3-ил]окси]-6-(гидроксиметил)оксан-3-ил]окси-6-(гидроксиметил)оксан-3,4,5-триол; Трицин; Гинзенозид Rg1; (20R)-гинзенозид Rh1; Джуджубозид В; Аукубин; гинзенозид Rg3; и бета-элемоновая кислота. Эксперименты на животных показали, что отвар XY подавляет рост опухоли, улучшает патологические изменения и способствует апоптозу опухолевых клеток дозозависимым образом. Задействованные механизмы могут быть связаны с повышением экспрессии белков p-JNK и p-P38 в пути MAPK и подавлением экспрессии белка p-ERK в пути MAPK. В заключение следует отметить, что XY-отвар обладает потенциалом для регулирования пути MAPK и оказания терапевтического эффекта против аденокарциномы легкого.

Введение

Заболеваемость раком легких растет во всем мире. На его долю приходится 18% всех злокачественных новообразований и он является причиной значительногочисла смертей, связанных с раком1,2. Немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) является распространенной формой рака легких, при этом аденокарцинома является основным патологическим типом3. Из-за своей коварной симптоматики НМРЛ часто диагностируется на поздней стадии и имеет высокий уровень летальности 4,5. Пациенты с НМРЛ IV стадии имеют пятилетнюю выживаемость всего 5%6, в то время как даже хирургически резектабельная ранняя стадия НМРЛ имеет пятилетнюю выживаемость всего 50%7.

В настоящее время лечение аденокарциномы легкого включает хирургическое вмешательство, лучевую терапию, химиотерапию, иммунотерапию и таргетную терапию. Кроме того, традиционная китайская медицина (ТКМ) для лечения аденокарциномы легкого получает все большее признание и ценится8. ТКМ имеет долгую историю и применяется в лечении различных онкологических заболеваний с эффективными терапевтическими результатами 9,10. Он рассматривает человеческое тело как единое целое, с терапевтическим принципом, направленным на восстановление движения Ци (Ци относится к жизненной энергии, которая способствует циркуляции крови и жидкостей организма, способствуя повышению иммунитета и уменьшению воспаления у пациентов с НМРЛ) во внутренних органах для восстановления общего баланса и замедления прогрессирования рака.

ТКМ не только лечит онкологические заболевания с низкой токсичностью, множественностью мишеней и высокойэффективностью11, но также облегчает восстановление повреждений, вызванных лучевой терапией и химиотерапией, тем самым продлевая выживаемость12.

Технология жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (ЖХ-МС) объединяет жидкостную хроматографию с масс-спектрометрией для достижения разделения и обнаружения компонентов в сложных смесях соединений13. LC-MS обладает высоким разрешением, высокой чувствительностью и высокой специфичностью, что позволяет разделять и идентифицировать различные химические компоненты в отварах традиционной китайской медицины (ТКМ). В сочетании с химическими веществами сыворотки, которые отделяют и обнаруживают активные компоненты, поступающие в кровь после перорального приема14,15, LC-MS позволяет прогнозировать и анализировать потенциальные механизмы действия лекарственных средств. Этот подход помогает понять химический состав и фармакологические компоненты отваров ТКМ, предоставляя важные данные для углубленных исследований их фармакологических эффектов и клинического применения, что делает его очень применимым в исследованиях ТКМ16,17.

Сигнальный путь MAPK играет решающую роль в генезе, прогрессировании, метастазировании и инвазии рака легких, при этом важными подсемействами являются Erk, p38 и JNK. Было показано, что отвары ТКМ влияют на экспрессию белков в пути MAPK18. Отвар XiaoYi (XY) получен из отвара YiGuan и используется для лечения аденокарциномы легкого в Первой аффилированной больнице Чанчуньского университета китайской медицины (Рисунок 1), демонстрируя точную клиническую эффективность. Однако его терапевтический механизм остается неясным.

В этом исследовании была использована ультравысокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрией Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) для выяснения возможного терапевтического механизма применения отвара XY против аденокарциномы легкого, и его эффекты были подтверждены в ходе исследований in vivo .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры на животных были одобрены Комитетом по этике животных Чанчуньского университета традиционной китайской медицины (Этика No 2024008). Шестинедельные самцы мышей C57BL/6 (20 ± 2 г), выведенные в специфических условиях, свободных от патогенов (SPF), демонстрировали типичные модели физической активности в контролируемой среде с постоянной температурой и влажностью. Они имели свободный доступ к пище и воде и поддерживались в течение 12-часового цикла свет/темнота. Подробная информация о реагентах и оборудовании, использованных в данном исследовании, представлена в Таблице материалов.

1. Приготовление XY отвара водного экстракта

  1. Положите в баночку для отвара женьшень Panax C.A. Mey (Renshen, 15 г), Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 г) и Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 г). Добавьте 1000 мл деионизированной воды и замочите на 30 минут при комнатной температуре.
  2. Отварите три травы с шага 1.1 в течение 1 ч. Одновременно замочите Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 г), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Тяньхуафэнь, 30 г), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Штапф (Yiyiren, 20 г), Paeonia lactiflora Pall. (Байшао, 30 г), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 г), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 г), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 г), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 г), Ziziphus jujuba Mill. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 г), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Чуаньлянцзы, 5 г), Fritillaria thunbergii Miq. (Жебейму, 15 г), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Жиму, 10 г), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 г), Polygala tenuifolia Willd. (Юаньчжи, 15 г) и Phragmites communis Trin. (Люген, 30 г) в другую емкость на 30 мин. После замачивания переложите их в кастрюлю с отваром с шага 1.1.
  3. Отварите все 18 трав из шагов 1.1 и шага 1.2 в течение 30 минут. Вылейте травяную жидкость, добавьте 1000 мл деионизированной воды и кипятите еще 30 минут. Повторите этот процесс кипячения три раза, чтобы получить три порции травяной жидкости, затем соедините и тщательно перемешайте их.
  4. Перемешанную травяную жидкость процедите через ткань с плотностью 400 меш. Концентрируйте фильтрат под пониженным давлением, затем передайте концентрированную травяную жидкость в охлаждающее оборудование для дальнейшей обработки.
  5. Перелейте концентрированную травяную жидкость в лоток для лиофилизации и поместите его в камеру предварительного замораживания вакуумного лиофилизатора. После завершения предварительного замораживания перенесите лоток в сублимационную сушильную камеру для удаления воды.
  6. Удалите остатки влаги при высокой температуре. Измельчите лиофилизированный растительный экстракт с помощью пульверизатора, чтобы получить мелкодисперсный лиофилизированный порошок отвара XY (Рисунок 2).

2. Препарат из содержащей сыворотки

  1. Случайным образом распределите шестинедельных мышей-самцов C57BL/6 (20 ± 2 г) либо в группу XiaoYi (XY), либо в контрольную группу.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мышиная доза была рассчитана с использованием коэффициента пересчета человека в мышь:
    Эквивалентная экспериментальная доза для мышей (г/кг) = {Доза для человека (г/кг) / Масса тела (70 кг)} x 9,1
    На основании этого расчета была определена дозировка для мышей в размере 2,6 г/кг.
  2. Взвесьте 0,9152 г лиофилизированного порошка отвара XY и растворите его в 3,2 мл дистиллированной воды для приготовления раствора препарата.
    Примечание: Мышей голодали в течение 12 ч перед пероральным введением.
  3. Вводите отвар XY мышам в группе XY через зонд, в то время как контрольной группе вводите эквивалентный объем деионизированной воды.
  4. Через 2 ч после перорального приема обезболить мышей пентобарбиталом натрия (в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами). Энуклеация глазных яблок с помощью пинцета для сбора образцов крови, затем эвтаназия мышей с помощью удушенияCO2 с последующим вывихом шейки матки в соответствии с этическимипринципами.
  5. Дайте образцам крови стабилизироваться при комнатной температуре в течение 90 минут. Центрифугируйте при 3450 x g (4 °C) в течение 15 минут для сбора надосадочной жидкости.

3. Анализ ВЭЖХЛХ-КЭ-МС

  1. Добавьте 100 мг лиофилизированного порошка отвара XY в 500 μл экстракционного раствора (метанол: вода = 4:1). Тщательно перемешать, обработать ультразвуком и выдерживать на ледяной водяной бане в течение 1 ч.
  2. Выдерживайте смесь при температуре -40 °C в течение 1 часа, затем центрифугируйте при 13 800 x g (4 °C) в течение 15 минут. Отфильтруйте надосадочную жидкость через фильтрующую мембрану толщиной 0,22 мкм, затем смешайте по 100 мкл каждой надосадочной жидкости для создания образцов для контроля качества (QC).
  3. После размораживания образцов плазмы отберите 400 мкл образца плазмы контрольной группы и 400 мкл образца плазмы группы XY. Добавьте 40 μL соляной кислоты (2 моль/л) в каждый образец. Вдохните в течение 1 минуты и дайте смеси настояться при температуре 4 °C в течение 15 минут. Повторите этот шаг четыре раза.
  4. Добавьте 1,6 мл ацетонитрила и вортекс на 5 минут. Центрифуга при 13 800 x g в течение 5 мин при 4 °C. Подвергнуть 1 800 мкл надосадочной жидкости азотной сушке.
  5. Восстановите высушенные образцы в 150 мкл 80% метанола, содержащего 10 мкг/мл внутреннего стандарта, путем вортексирования в течение 5 минут. Центрифугируйте при 13 800 × г в течение 5 мин при 4 °C, затем перенесите 120 мкл надосадочной жидкости в свежий стеклянный флакон для анализа LC-MS (рис. 3).

4. Клеточная культура и подготовка животных

  1. Засейте 1 мл клеток карциномы легкого Льюиса в чашке для культивирования, содержащей модифицированную орлиную среду Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 1% пенициллина/стрептомицина. Инкубируйте клетки в контролируемых условиях при 37 °C с 5%CO2.
  2. Когда клетки достигнут 80% слияния, пропустите их с помощью 0,25% трипсина. Продолжайте процеживание до тех пор, пока состояние клеток не стабилизируется, затем отрегулируйте концентрацию клеток до 3 x 106 клеток/мл.
  3. Введите 0,1 мл приготовленной клеточной суспензии подкожно в правую подмышечную впадину самцов мышей C57BL/6 для установления модели аденокарциномы легкого.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Опухолевая ткань может быть пальпирована в подмышечной впадине мышей через 5 дней после инокуляции.
  4. Через 5 дней случайным образом разделите мышей на пять групп (n = 6 в группе): Модельная группа (M) - Без лечения; XY отвар низкодозированной группы (XY-L) - 1,3 г/кг; XY отвар средней дозы группы (XY-Z) - 2,6 г/кг; XY отвар высокодозированной группы (XY-H) - 5,2 г/кг; Группа цисплатина (ДДП) - обрабатывается цисплатином20.
  5. Растворите порошок отвара XY в 200 μл дистиллированной воды в соответствующей дозе и вводите через зонд. Группы M и DDP получают равный объем дистиллированной воды через зонд.
  6. Вводите цисплатин в группу ДДП путем внутрибрюшинной инъекции (3 мг/кг) один раз в 3 дня. Введите такой же объем физиологического раствора в другие группы.

5. Патологоанатомический анализ опухолевой ткани

  1. Через 21 день усыпить всех мышей с помощью удушения CO2 с последующим вывихом шейки матки (в соответствии с этическими нормами) и иссечь опухолевую ткань21. Измерьте объем и вес опухоли (рисунок 4).
  2. Зафиксировать иссеченные опухолевые ткани в 4% параформальдегиде на 24 ч). Обезвоживайте ткани с помощью градуированных растворов этанола.
  3. Очистите обезвоженные блоки ткани с помощью ксилола, затем погрузите их в расплавленный парафин. Дайте воску застыть в парафиновый блок. Разрежьте тканевый блок на срезы толщиной 5 мкм с помощью микротома.
  4. Депарафинизация срезов тканей в ксилоле с последующей регидратацией в дифференцированных растворах этанола. Срезы окрашивать гематоксилином в течение 5 минут, затем промыть деионизированной водой.
  5. Срезы закрасить 0,5% раствором эозина в течение 1 мин. Наблюдайте за окрашенными срезами под оптическим микроскопом и делайте снимки для анализа.

6. Иммуногистохимический анализ опухолевой ткани

  1. Выполните депарафинизацию и регидратацию в соответствии с процедурами, описанными в шагах 5.2-5.4.
  2. Инкубировать срезы в эндогенном блокаторе пероксидазы при комнатной температуре в течение 15 мин. Блокируйте неспецифическое связывание путем инкубации участков с козьей сывороткой.
  3. Применяют первичные антитела: Ki-67 (1:600) и Каспазу-3 (1:100). Инкубируйте секции в течение ночи при температуре 4 °C. Промойте буфером PBS), затем нанесите вторичное антитело общего назначения (1:500) и инкубируйте при 37 °C в течение 30 минут.
  4. Развивайте цветовую реакцию, добавляя раствор DAB. Срезы закрасьте раствором гематоксилина.
  5. Проведите обезвоживание, очистку и герметизацию испачканных участков. Наблюдайте за экспрессией белков под оптическим микроскопом и получайте изображения для анализа.

7. Вестерн-блоттинг

  1. Гомогенизируйте опухолевую ткань с помощью тканевого лизера. Извлеките общий белок и определите его концентрацию с помощью набора для анализа бицинхониловой кислоты (BCA) (см. Таблицу материалов).
  2. Выполните количественное определение белка с последующим электрофорезом SDS-PAGE и переносом белка на мембрану.
  3. Инкубировать мембрану в течение ночи при 4 °C с первичными антителами: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-актином (1:200) (см. Таблицу материалов).
  4. На следующий день инкубируйте мембрану с конъюгированным вторичным антителом к пероксидазе хрена (HRP) при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Обнаружение белковых полос с помощью системы усиленной хемилюминесценции (ECL).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Интенсивность белковой полосы была количественно определена с помощью программного обеспечения ImageJ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Порошковый раствор XY и образцы сыворотки из контрольной группы и группы XY были проанализированы с помощью UHPLC-QE-MS, выявив хорошо разделенные пики. Диаграммы суммарной ионизации для мод положительных и отрицательных ионов показаны на рисунке 3. Состав отвара XY был идентифицирован на основе времени удержания, режима получения и фрагментов масс-спектра. Пятнадцать компонентов кровотока были идентифицированы путем сравнения сыворотки группы холостого и XY ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Заболеваемость раком ежегодно растет, привлекая значительный клинический и исследовательский интерес22,23. Недавние исследования продемонстрировали эффективность традиционной китайской медицины (ТКМ) в лечении рака легких 24,25,26. Например, было показано, что отвар маймендонга увеличивает количество и активность NK-клеток, тем самым под...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана пунктом (YDZJ202301ZYTS459) Плана развития науки и технологий провинции Цзилинь.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
АцетонитрилCNW Technologies08.05.1975
2-хлор-L фенилаланинShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Раствор гидроксида аммонияКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Антитело-&бета;-актинAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) АнтителоAbcamab4819
Анти-ERK1/ERK2 АнтителоAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) АнтителоAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 АнтителоAbcamab208035
Anti-Ki67Антитело Клеточная сигнальная технологияGB121141
Anti-p38 (фосфо T180) АнтителоAbcamab178867
Антитело Anti-p38 альфа/MAPK14Abcamab170099
Набор для анализа концентрации белка BCABoster Biological Technology17E17B46
Бычья сыворотка альбумин (BSA)DAKOBIOFROXX
Ингибитор фосфатазы широкого спектра действия (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 мышейLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Хроматографическая колонкаWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2,1 * 100 мм
ЦисплатинКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.232120
Раствор для извлечения антигена цитрат (pH 6,0)Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Чехол СлипЦзянсу Шитай Лабораторное оборудование Ко., Лтд.10212432C
Криогенная сценаWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Хромогенный наборJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.
Шейкер для обесцвечиванияBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
ДегидраторWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.Сушильный шкаф JJ-12J
Shanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Модифицированная средаGibco8121587
EDTA (pH 8.0) Раствор для извлечения антигенаDulbecco Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) Раствор для извлечения антигенаWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Буфер для электрофорезаNCM Biotech20230801
Встраиваемая машинаWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
ЭтанолКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.
Фетальная бычья сывороткаGibco2166090RP
Муравьиная кислотаSIGMA64-18-6
GraphPad Prism программное обеспечениеGraphPad software, LLCВерсия 9.0.0
ГематоксилинКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
Высокоэффективная жидкостная хроматографияAgilent1260 Infinity II Prime
Высокоскоростная рефрижераторная центрифугаThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
Масс-спектрометрия высокого разрешенияThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP-конъюгированная козья антимышьSeraCare5220-0341
HRP-конъюгированное козье анти-кроличьи антителаSeraCare5220-0336
HRP-конъюгированное козье анти-кролик/мышь универсальное вторичное антителоDAKOK5007
HRP-конъюгированное козье анти-крысиное SeraCare5220-0364
HRP-конъюгированное кролико-противокозье анти-козьеSeraCare5220-0362
Соляная кислотаКитайская национальная фармацевтическая группа Химический реагент Ко., Лтд.H9892
Перекись водородаКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Гиперчувствительный набор для хемилюминесценцииECL NCM BiotechP10300
Программное обеспечениеImageJ Национальные институты здравоохраненияv1.8.0
Система визуализацииNikon (Япония)NIKON DS-U3
Клетки карциномы легких ЛьюисаКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.
Сетчатая тканьBaijie100110779650
Металлический прибор для контроля температуры нагреваBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
МетанолАладдинM116118
МикропипеткаDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Предметное стекло для микроскопаJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
МикротомШанхай Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Микроволновая печьGalanz Microwave Electrical Appliances Co., Ltd.P70D20TL-P4
Нейтральный бальзамКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.
Оптический микроскопNikon (Япония)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Набор для быстрого приготовления геля PAGEBiosharpPL566B-5
ПараформальдегидКитайская национальная фармацевтическая группа Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Фосфатно-солевой буфер (1x)Gibco8120485
Предварительно окрашенный маркер цветного белка (10-180 кДа)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Буфер для загрузки белка (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
измельчительShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0,45 μ m)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Решение для быстрого мембранного переносаCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
RIPA лизат BosterBiological Technology Co., Ltd.AR0105
TBS буферNCM Biotech23HA0102
Тканевая флотационная рабочая станцияJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., провинция Чжэцзян.KD-P
Трансмембранный буферNCM Biotech23CA2000
Трипсин (0,25%, 1x)HyCloneJ210045
Аппарат для ультразвукового разрушения клетокNingbo Xinyi ultrasonic equipment Co., Ltd.JY92-IIDN
Вертикальный оптический микроскопNikon (Япония)Nikon Eclipse CI
Lanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Вихревой смесительKylin-BellXW-80A
XyleneChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
2005289212954493511 покрытие 9002010410004160Вакуумный лиофилизатор 214736

Ссылки

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно

Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.