Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Создание системы совместного культивирования органоидов колоректальных опухолей и инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs)

3.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68346

⸱

27 июня 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1The Key Laboratory of biomarker high throughput screening and target translation of breast and gastrointestinal tumor, Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University, 2Department of General Surgery, Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University

В этой статье

Краткое содержание

В протоколе описан метод создания модели органоида колоректального рака (КРР), полученной от пациента, совместно культивируемой с инфильтрирующими опухоль лимфоцитами (TILs) для изучения их взаимодействия и терапевтического потенциала. Эта модель обеспечивает доклиническую платформу для изучения иммунных реакций в микроокружении опухоли и прогнозирования эффективности терапии на основе TIL для персонализированного лечения КРР.

Аннотация

Колоректальный рак (КРР) является третьим по распространенности онкологическим заболеванием во всем мире. Инфильтрирующие опухоль лимфоциты (TILs) были идентифицированы как важный прогностический маркер при КРР. Терапевтическое применение TILs уже показало многообещающие результаты при меланоме и раке шейки матки. Тем не менее, их использование в терапии КРР остается в исследовательской фазе. Подходящая модель in vitro для оценки эффективности TIL в настоящее время недоступна, что препятствует дальнейшему прогрессу в этой области. Модели органоидов, полученных от пациента (PDO), которые точно сохраняют характеристики исходной опухолевой ткани и отражают межпациентскую гетерогенность, обеспечивают отличную платформу для изучения взаимодействия между CRC и TILs. В данном исследовании описан метод создания модели органоида CRC, полученной от пациента, из свежерезецированной опухолевой ткани с последующей изоляцией и расширением TILs. Эта система позволяет совместно культивировать органоиды CRC и TILs, что позволяет оценить TIL-опосредованную цитотоксичность и иммунные реакции. Анализируя эффективность уничтожения TIL на органоидах, можно предсказать потенциальные результаты иммунотерапии на основе TIL для персонализированного лечения КРР. Кроме того, дальнейшая инженерия TILs может повысить их противоопухолевую эффективность, предлагая многообещающую стратегию для разработки более эффективных клеточных терапий. Эта модель совместного культивирования PDO-TIL предоставляет мощный инструмент для доклинической оценки терапии TIL и персонализированных стратегий лечения при КРР.

Введение

Колоректальный рак (КРР) является одним из наиболее распространенных и смертельных видов рака во всем мире, представляющим собой серьезную проблему общественного здравоохранения1. Несмотря на достижения в области методов лечения, включая хирургию, химиотерапию и иммунотерапию, прогноз для пациентов с КРР, особенно с метастатическим заболеванием, остается плохим. Опухолевое микроокружение (ТМЭ) играет жизненно важную роль в формировании прогрессирования рака и ответе на лечение, при этом инфильтрирующие опухоль лимфоциты (TILs) становятся ключевым компонентом, влияющим на иммунный ответ против рака2. TILs, разнообразная популяция иммунных клеток, обнаруженных в опухолях, были идентифицированы как значимые прогностические маркеры при КРР, при этом высокие уровни инфильтрации TIL часто связаны с лучшими клиническими исходами3. Недавние исследования также подчеркнули терапевтический потенциал TILs при других видах рака, таких как меланома4 и рак шейки матки5, где иммунотерапия на основе TIL показала многообещающую эффективность.

Однако, несмотря на успех TILs при некоторых типах рака, их применение при КРР остается областью продолжающихся исследований. Сложность и гетерогенность КРР в сочетании с иммуносупрессивным микроокружением опухоли создают проблемы для эффективной иммунотерапии на основе TIL6. Опухоли КРР часто демонстрируют высокоиммуносупрессивный TME7, характеризующийся наличием регуляторных Т-клеток (Tregs), миелоидных супрессорных клеток (MDSC) и опухолеассоциированных макрофагов (TAM), которые активно ингибируют функцию TIL. Кроме того, клетки CRC часто экспрессируют молекулы иммунных контрольных точек, такие как PD-L1, которые могут еще больше препятствовать TIL-опосредованному уничтожению8. Кроме того, генетическая гетерогенность опухолей КРР в сочетании с иммуносупрессивной стромой усложняет способность TILs эффективно нацеливаться на опухолевые клетки и устранять их, что затрудняет достижение того же уровня успеха, который наблюдается при меланоме и раке шейки матки9. Критическим пробелом в текущих исследованиях является отсутствие подходящих моделей in vitro , которые могли бы точно смоделировать взаимодействие между CRC и TILs. Такие модели имеют важное значение для оценки потенциала TILs в терапии КРР и оптимизации их применения для персонализированных стратегий лечения.

Органоиды, полученные от пациента (PDO), стали мощным инструментом для моделирования рака человека10. Эти 3D-культуры, полученные из тканей опухоли пациента, точно имитируют гистологические и генетические характеристики исходных опухолей, обеспечивая более точное представление биологии опухоли по сравнению с традиционными 2D-клеточными линиями. Модели PDO также сохраняют гетерогенность между пациентами, что делает их идеальными для подходов персонализированной медицины11. При КРР PDO использовались для скрининга лекарств и изучения биологии опухолей12, но их использование для оценки иммунных реакций, особенно в контексте TILs, остается ограниченным. Дизайн модели совместной культуры PDO-иммунных клеток должен уравновешивать сложность микроокружения с экспериментальной управляемостью. Хотя такие компоненты, как макрофаги и дендритные клетки, могут усиливать биомимикрию, мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) стали основным выбором из-за их доступности. Тем не менее, PBMC имеют низкую долю опухолеспецифичных Т-клеток, и субпопуляции моноцитов могут влиять на стабильность микроокружения13. Напротив, TILs естественным образом обогащают опухоле-реактивные клоны и несут фенотип истощения in situ, что делает их превосходной моделью для точного анализа механизмов уклонения от иммунитета при колоректальном раке.

Целью данного исследования является разработка новой платформы in vitro для оценки TIL-опосредованных противоопухолевых реакций при КРР путем создания системы совместного культивирования ДОП и TIL при КРР. Эта модель позволяет напрямую оценить цитотоксичность TIL в отношении CRC PDO и проанализировать иммунные реакции в контексте конкретного пациента. Использование этой системы может обеспечить более глубокое понимание потенциала иммунотерапии TIL при КРР и поддержать изучение стратегий повышения эффективности TIL с помощью инженерных подходов. Предыдущие методы были ограничены небольшим числом TILs14. В большинстве случаев PBMC сначала культивировали совместно с PDO в течение двух недель, после чего опухолеспецифичные TILs могли быть расширены из PBMC, а затем дополнительно культивировались совместно с PDO для наблюдения цитотоксических эффектов15. Однако этот подход также страдает от увеличенного времени моделирования и низкой общей производительности. В отличие от этого, описанный метод позволяет выделять и устанавливать PDO и TILs из небольших образцов опухолевой ткани, которые затем могут быть непосредственно совместно культивированы. Такой подход может обеспечить большее удобство как с точки зрения методологии, так и с точки зрения эффективности. В конечном счете, эта система призвана предоставить мощный инструмент для доклинической оценки терапии TIL, прокладывая путь к персонализированным стратегиям лечения, которые могут улучшить результаты у пациентов с КРР.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты с использованием материалов человеческого происхождения проводились в соответствии с Хельсинкской декларацией и были заранее одобрены Комитетом по этике больницы Чжуншань, входящей в состав Даляньского университета (номер одобрения: KY2023-206-1). Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов, предоставивших клинические образцы для данного исследования. Реагенты и оборудование, использованные в данном исследовании, перечислены в Таблице материалов.

Критерии включения включали патологически подтвержденную первичную ткань колоректального рака, достаточный размер выборки (≥1см3), отсутствие в анамнезе неоадъювантной терапии (химиолучевая или таргетная терапия) и подписанное информированное согласие. Критерии исключения включали низкое качество образца с некрозом или фиброзом, превышающим 50%, наличие сопутствующей тяжелой инфекции или аутоиммунного заболевания, наличие в анамнезе других злокачественных новообразований и отказ пациента от участия.

1. Подготовка реагентов для клеточных культур

  1. Питательная среда для CRC PDOs: Приготовьте полноценную среду CRC PDO в соответствии с составом, описанным в таблице 1.
  2. Полная среда (КМ) для TILs16: Добавка RPMI1640 среду с 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина, HEPES, 2-меркаптоэтанола и 3000 МЕ/мл IL-2.
  3. Расширяющая среда TILs (EM): Добавьте RPMI1640 среду с 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина, HEPES и 600 МЕ/мл IL-2.
  4. AdDMEM++++: Дополните Advanced DMEM 1% пенициллин-стрептомицина, 1% HEPES, 1% глутамина и 5 мМ Y-27632.
  5. Буфер для расщепления CRC: добавьте 50 мкл коллагеназы IV типа и 10 мкл раствора пенициллин-стрептомицина-амфотерицина B в AdDMEM++++.
  6. Раствор для промывки тканей: Добавьте 2% пенициллин-стрептомицин в PBS.

2. Обработка тканей, полученных от пациента

  1. Резекция ткани первичной опухоли колоректального рака (выполняется опытными хирургами). После сбора разделите ткань на две части. Поместите одну часть в AdDMEM++ ++ в холодильник и транспортируйте ее в лабораторию для диссоциации и культивирования опухолевых клеток. Поместите другую часть в 4% параформальдегид для гистопатологического анализа17.
  2. Медленно разморозьте Матригель в холодильнике при температуре 4 °C. Предварительно подогрейте буфер для лизиса эритроцитов до комнатной температуры. Подготовьте тканевые ножницы, щипцы, среду AdDMEM++++ и буфер для пищеварения CRC.
  3. Переложите салфетку в чашку Петри и промойте три раза 5 мл PBS. Замените посуду на новую и ополосните три раза буфером для стирки салфеток объемом 5 мл, чтобы свести к минимуму загрязнение.
  4. Измельчите ткань ножницами, перенесите ее в буфер для пищеварения и выдержите на водяной бане при температуре 37 °C в течение 30 минут до полной диссоциации.
  5. Разрежьте ткань ножницами для тканей и перенесите ее в раствор для разложения тканей. Переварите ткань на водяной бане при температуре 37 °C и следите за тем, пока не завершится диссоциация тканей.
  6. Добавьте равный объем AdDMEM++ ++, чтобы нейтрализовать пищеварение. Центрифугировать при 380 × г в течение 5 мин при 25 °C.
  7. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки. Следите за количеством эритроцитов в грануле. Добавьте 1-3 мл лизата эритроцитов и инкубируйте в течение 10 минут при 25 °C.
    1. Завершите лизис равным объемом AdDMEM++++. Центрифугируйте при 380 × г в течение 5 мин при температуре около 25 °C.
  8. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки и повторно суспендируйте клеточную гранулу в соответствующем объеме AdDMEM++++.
  9. Количественное определение жизнеспособных клеток с использованием исключения трипанового синего для получения одноклеточной суспензии опухолевой ткани.

3. Создание модели PDO и культура TILs

  1. Разделите одноклеточную суспензию опухолевой ткани на две части: используйте одну для создания модели PDO, а другую — для культивирования TILs.
  2. После подсчета клеток смешайте 80 000 клеток на лунку клеточной суспензии с Матригелем в соотношении 1:1 для создания модели PDO.
  3. Ресуспендировать оставшуюся клеточную суспензию в КМ в 24-луночном планшете в концентрации 1 × 106 клеток/мл для культуры TILs.
  4. Наблюдайте ежедневно. Делайте фотографии для записи состояния PDO и TIL. Меняйте среду каждые 2 дня.

4. Очистка и расширение TILs

  1. Культивируют TILs за 10-20 дней до очистки.
  2. Соберите TILs в центрифужную пробирку. Промойте лунную пластину свежей средой и соберите все оставшиеся клетки с луночной пластины.
  3. Центрифугируйте при 125 × г в течение 5 мин при температуре около 25 °C.
  4. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки. Промойте 2 мл PBS и снова центрифугируйте при 125 × г в течение 5 минут при температуре около 25 °C.
  5. Выполните подсчет клеток.
  6. Используйте магнитные шарики CD3+ для сортировки с целью выделения CD3+Т-клеток18.
  7. Инкубировать антитело с клеточной суспензией при 4 °С в течение 10-15 мин.
  8. Инкубировать магнитные шарики с суспензией антител-клеток при 4 °C в течение 10-15 минут.
  9. Поместите сортировочную колонну в сортировочный магнит. Добавьте суспензию ячеек в столбец и оставьте в столбце сортировки только положительные ячейки, помеченные магнитными шариками.
  10. Извлеките сортировочную колонну из магнитного поля. Добавьте буферный раствор для элюирования положительных ячеек, оставшихся в столбце. Ресуспендируйте клетки в 2 мл PBS и центрифугируйте при 195 × г в течение 5 мин при температуре около 25 °C.
  11. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки. Ресуспендирование клеток в 12-луночном планшете со свежей ЭМ средой в концентрации 1 × 106 клеток/мл. Добавьте 5 мкг/мл антител CD3. Пропускайте клетки в колбы с новыми культурами каждые 3 дня.

5. Гистология и характеристика ИГХ ЗОП

  1. Отсасывайте питательную среду после того, как органоиды вырастут до размера 50 мкм.
  2. Закрепите органоидные сферы непосредственно в 4% параформальдегиде. Аспирировать органоиды, центрифугировать при 195 × г в течение 5 мин при температуре около 25 °C, погрузить 2% агарозу, дать отверждению и перенести на 4% параформальдегид для фиксации на ночь.
  3. На следующий день проведите градиентное обезвоживание. Подготовить восковые блоки, вырезать срезы размером 4 мкм, регидратировать с помощью градиента и выполнить иммуногистохимическое окрашивание антителами к CK7, CK20, Ki-67 и CDX-2.

6. Характеристика ПЧ TILs

  1. Очистите TILs, культивируйте их до тех пор, пока не будет достигнуто достаточное количество, и извлеките часть для характеристики.
  2. Охарактеризовать клетки суспензии с помощью метода шелушения. Установите скорость вращения хлопьевки на 343 × g в течение 4 минут при температуре около 25 °C.
  3. Подсчитайте и засейте ячейки по 1 ×10 4 на слайде.
  4. Прочно прикрепите ячейки к предметным стеклам с помощью центрифугирования.
  5. Зафиксируйте клетки 4% параформальдегидом на 15 минут и трижды промойте PBS.
  6. Инкубировать с блокирующим раствором (PBS, содержащим 2% FBS) в течение 1 ч.
  7. Инкубировать с первичными антителами (CD45, CD3, EpCAM) в течение 1 ч при комнатной температуре. Постирайте три раза с PBS.
  8. Приготовьте и инкубируйте со вторичным антителом в соответствии с рекомендованной производителем концентрацией в течение 1 ч при комнатной температуре. Постирайте три раза с PBS.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обратите внимание на гомологию антител.
  9. Инкубировать с DAPI в течение 15 минут при температуре около 25 °C.
  10. Наблюдайте за окрашенными клетками под флуоресцентным микроскопом.

7. Система сокультуры PDO и TILs

  1. Добавьте ИФН-γ в органоидную среду для усиления презентации антигена. Инкубировать при 37 °C с 5%CO2 в течение 24 ч15.
  2. Разбавьте антитело к CD28 с помощью PBS. Покройте 96-луночный планшет, добавив 50 мкл раствора антитела в каждую лунку. Запечатайте планшет уплотнительной пленкой и выдерживайте при температуре 4 °C в течение 24 часов.
  3. Через 24 ч диссоциируйте органоиды на отдельные клетки с помощью TrypLE. Посчитайте ячейки и дважды промойте PBS.
  4. Соберите сопряженные TILs, посчитайте ячейки и дважды промойте PBS.
  5. Инокулируйте органоиды в количестве 1 × 104 клеток на лунку и инокулируйте TILs в количестве 1 ×10 5 клеток на лунку для достижения соотношения эффекторов к мишеням (E:T) 10:1 для совместного культивирования.
  6. Проводят совместное культивирование в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина, 3000 Ед/мл IL-2 и 20 мкг/мл анти-PD-1 блокирующих антител. Инкубируйте в течение 3 дней и делайте снимки для наблюдения и документирования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Настройте органоиды без TILs в качестве контрольной группы.

8. Функциональный анализ TILs методом проточной цитометрии

  1. Соберите PDO и TILs в конце периода совместной культуры.
  2. Дважды промойте клетки PBS центрифугированием при 300 × г в течение 5 мин каждый раз. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки.
  3. Приготовьте коктейль антител, содержащий CD3-FITC, CD4-APC/Cyanine7, CD8-APC, CD107a-PE-Cyanine7, CD279-PE и 7-AAD.
  4. Ресуспендируйте клетки в 100 мкл коктейля антител и инкубируйте при комнатной температуре в течение 20 мин в защищенном от света месте.
  5. Добавьте 1 мл PBS для промывания клеток. Центрифугируйте при 300 × г в течение 5 мин и выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки.
  6. Ресуспендируйте клетки в PBS объемом 500 μл.
  7. Проведите анализ проточной цитометрии. Подробная стратегия анализа приведена в дополнительном рисунке 1 .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Установление и определение характеристик CRC PDO
Образцы опухолей были получены от пациентов с КРР. Свежерезецированная опухолевая ткань КРР была использована для установления PDO и TILs, которые впоследствии были использованы в экспериментах по совместному культивированию PDO-TIL (Рисунок 1).

figure-results-1
Рису...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании используется ткань CRC, полученная от пациента, для получения как опухолевых клеток, так и TILs, из которых устанавливаются PDO и расширяются TILs. Взаимодействие между этими двумя компонентами затем исследуется через систему сокультуры.

В предыдущих исследованиях TILs экстрагировали с использованием сложных инструментов19 или непосредственно из суспензий опухолевой ткани20. Однако эти методы ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая [82172822]; Программа поддержки инноваций высокого уровня Даляньского научно-технического бюро [2021RD02]; Совместный план научно-технической программы провинции Ляонин [2024JH2/102600067]; Проект международного научно-технического сотрудничества провинции Ляонин [2024JH2/101900006].

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Усовершенствованный DMEM/F-12Gibco12634028
2-Меркаптоэтанолсигма63689
4% параформальдегидаББИE672002-0100
7-ААДБиолегенда420403
А83-01Токрис2939
Доплата B27Gibco17504-44
КД107а-ПЭ-цианин7Биолегенда328618
КД279-ПЭБиолегенда329906
Моноклональное антитело к CD3 (OKT3)Инвитроген14-0037-82
CD3-FITCБиолегенда300406
CD45 (внутриклеточный домен) (D9M8I) САНТИСТОКС13917С
CD4-APC/Cyanine7Биолегенда300518
CD8-APCБиолегенда344722
КДХ-2MXBРМА-0631
СК20MXBКит-0025
СК7MXBНабор-0021
Dylight 488, Козий антикролик IgGАббкинА23220
Dylight 549, Противомышиный IgG для козАббкинА23310
ЭФРПепротехАФ-100-15
Система EpCAMСАНТИСТОКС36746Т
Фетальная бычья сыворотка (FBS)СеллмаксСА211.02
ФГФ 10Пепротех100-26
Гастрин (человек)Токрис3006
ГлутаМакс 100xGibco35050-061
ХепесСигмаН4034
ХЕПЕССигмаН4034
Набор для разделения клеток CD3+ человека (RUO)Задний приводК1201-10
Рекомбинантный белок ИФН-гамма человекаПепроТех300-02-20УГ
Ки-67САНТИСТОКС9449с
МатригельCORNING354234
N-ацетилцистеинСигмаА9165
НикотинамидСигмаН0636
Ниволумаб (анти-PD-1)СеллеркА2002 
Пенициллин/стрептомицинСигмаV900929
пенициллин-стрептомицинНКМ БиотехС100К5
ПримоцинИнвивогенАнт-пм-1
Буфер для лизиса эритроцитовтермо-инвитроген00-4300-54
Рекомбинантный человеческий IL-2 (без носителей)Биолегенда589104
РПМИ 1640Gibco
SB202190СеллеркС1077
Морилка Трипан Синий 0.4%термо-инвитрогенТ10282
Ultra-LEAF Очищенное античеловеческое антитело к CD28Биолегенда302934
Ultra-LEAF Очищенное антитело к человеческому CD3Биолегенда317325
У-27632СеллеркС1049

Ссылки

  1. Eng, C., et al. Colorectal cancer. Lancet. 404 (10449), 294-310 (2024).
  2. Sarnaik, A. A., Hwu, P., Mulé, J. J., Pilon-Thomas, S. Tumor-infiltrating lymphocytes: A new hope. Cancer Cell. 42 (8), 1315-1318 (2024).
  3. Paijens, S. T., Vledder, A., De Bruyn, M., Nijman, H. W. Tumor-infiltrating lymphocytes in the immunotherapy era. Cell Mol Immunol. 18 (4), 842-859 (2021).
  4. Betof Warner, A., Corrie, P. G., Hamid, O. Tumor-infiltrating lymphocyte therapy in melanoma: Facts to the future. Clin Cancer Res. 29 (10), 1835-1854 (2023).
  5. Huang, H., et al. Phase I study of adjuvant immunotherapy with autologous tumor-infiltrating lymphocytes in locally advanced cervical cancer. J Clin Invest. 132 (15), e157726(2022).
  6. Mengus, C., et al. In vitro modeling of tumor-immune system interaction. ACS Biomater Sci Eng. 4 (2), 314-323 (2018).
  7. Wang, H., Tian, T., Zhang, J. Tumor-associated macrophages (tams) in colorectal cancer (crc): From mechanism to therapy and prognosis. Int J Mol Sci. 22 (16), 8470(2021).
  8. Rasyid, N. R., et al. The potential of PD-1 and PD-L1 as prognostic and predictive biomarkers in colorectal adenocarcinoma based on TILs grading. Curr Oncol. 31 (12), 7476-7493 (2024).
  9. Chen, E., Zeng, Z., Zhou, W. The key role of matrix stiffness in colorectal cancer immunotherapy: Mechanisms and therapeutic strategies. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 1879 (6), 189198(2024).
  10. Xu, H., Jiao, D., Liu, A., Wu, K. Tumor organoids: Applications in cancer modeling and potentials in precision medicine. J Hematol Oncol. 15 (1), 58(2022).
  11. Lv, J., et al. Construction of tumor organoids and their application to cancer research and therapy. Theranostics. 14 (3), 1101-1125 (2024).
  12. Ooft, S. N., et al. Patient-derived organoids can predict response to chemotherapy in metastatic colorectal cancer patients. Sci Transl Med. 11 (513), eaay2574(2019).
  13. Magré, L., et al. Emerging organoid-immune co-culture models for cancer research: From oncoimmunology to personalized immunotherapies. J Immunother Cancer. 11 (5), e006290(2023).
  14. Matsueda, S., Chen, L., Li, H., Yao, H., Yu, F. Recent clinical researches and technological development in til therapy. Cancer Immunol Immunother. 73 (11), 232(2024).
  15. Cattaneo, C. M., et al. Tumor organoid-t-cell co-culture systems. Nat Protoc. 15 (1), 15-39 (2020).
  16. Itzhaki, O., et al. Establishment and large-scale expansion of minimally cultured "young" tumor infiltrating lymphocytes for adoptive transfer therapy. J Immunother. 34 (2), 212-220 (2011).
  17. Yao, Y., et al. Patient-derived organoids predict chemoradiation responses of locally advanced rectal cancer. Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26.e16 (2020).
  18. Moore, D. K., Motaung, B., Du Plessis, N., Shabangu, A. N., Loxton, A. G. Isolation of b-cells using miltenyi macs bead isolation kits. PLoS One. 14 (3), e0213832(2019).
  19. Albrecht, H. C., et al. Generation of colon cancer-derived tumor-infiltrating t cells (tils) for adoptive cell therapy. Cytotherapy. 25 (5), 537-547 (2023).
  20. Tan, Y. S., Lei, Y. L. Isolation of tumor-infiltrating lymphocytes by ficoll-paque density gradient centrifugation. Methods Mol Biol. 1960, 93-99 (2019).
  21. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. EBioMedicine. 92, 104614(2023).
  22. Huang, H., et al. Patient-derived organoids as personalized avatars and a potential immunotherapy model in cervical cancer. iScience. 26 (11), 108198(2023).
  23. Parikh, A. Y., et al. Using patient-derived tumor organoids from common epithelial cancers to analyze personalized T-cell responses to neoantigens. Cancer Immunol Immunother. 72 (10), 3149-3162 (2023).
  24. Wherry, E. J. T cell exhaustion. Nat Immunol. 12 (6), 492-499 (2011).
  25. Xu, Y., et al. An engineered IL-15 cytokine mutein fused to an anti-PD1 improves intratumoral T-cell function and antitumor immunity. Cancer Immunol Res. 9 (10), 1141-1157 (2021).
  26. Chang, C. H., et al. Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis. Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).
  27. Trefny, M. P., et al. Deletion of Snx9 alleviates CD8 T cell exhaustion for effective cellular cancer immunotherapy. Nat Commun. 14 (1), 86(2023).
  28. Sarnaik, A. A., et al. Lifileucel, a tumor-infiltrating lymphocyte therapy, in metastatic melanoma. J Clin Oncol. 39 (24), 2656-2666 (2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Органоиды колоректального ракакокультура органоидоворганоидыполученные от пациентовэкспансия TILмагнитные бусины CD3проточная цитометрияизоляция иммунных клетокоценка цитотоксичностииммунофлуоресцентное окрашивание
Создание системы совместного культивирования органоидов колоректальных опухолей и инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs)
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.