Эффективные методы комплексного отбора проб доступных тканей у взрослых Xenopus

Summary

Это первая часть комплексного протокола отбора проб Xenopus . Образцы тканей включают желудочек сердца, артериальный ствол, левую долю печени, желчный пузырь, легкие, поджелудочную железу, селезенку, гортань, пищевод, желудок, кишечник, яички, жировые тела, яйцевод, парные почки, седалищное сплетение, кожу, тимус и весь глаз.

Abstract

Xenopus долгое время был ключевым модельным организмом для изучения развития и болезней позвоночных, предлагая глубокое понимание клеточных процессов и функций генов. Несмотря на обилие информации об эмбриональном Xenopus, остается значительный пробел в стандартизированных методах забора образцов тканей взрослого человека, особенно в современных подходах, таких как количественная протеомика. В этом исследовании представлен комплексный протокол для быстрого, точного и эффективного отбора проб нескольких тканей у взрослого Xenopus. Протокол решает проблемы, связанные с тонкими анатомическими различиями по сравнению с другими бесхвостыми, обеспечивая воспроизводимость даже для тех, кто имеет ограниченный опыт вскрытия лягушек. Этот протокол оптимизирован для высококачественного биохимического анализа с приоритетом свежести образца. Мы обеспечиваем быстрый сбор до 18 тканей в течение часа. Кроме того, методы применимы к перфузированным и неперфузированным условиям, обеспечивая гибкость для ряда экспериментальных потребностей. Эта работа не только заполняет критический методологический пробел для Xenopus laevis и tropicalis , но и служит ценным ресурсом для исследователей, адаптирующих методы к аналогичным моделям амфибий, тем самым расширяя масштабы и надежность сравнительных биологических и эволюционных исследований.

Introduction

Xenopus обладает уникальными преимуществами по сравнению с мышами, рыбками данио и другими модельными организмами для изучения болезней человека, особенно в контексте развития и эволюции. Его внешнее эмбриональное развитие и большие, легко манипулируемые эмбрионы позволяют наблюдать в режиме реального времени и проводить экспериментальные вмешательства (например, пересадку тканей, редактирование генов), которые сложны у мышей, развиваются внутри и требуют инвазивных процедур. Кроме того, трехкамерное сердце Xenopus и конечности четвероногих обеспечивают более прямой эволюционный мост для изучения врожденных дефектов<....

Protocol

Все эксперименты были одобрены и проведены в соответствии с правилами и нормами Гарвардской медицинской школы IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3). Если перед отбором проб соблюдается протокол^{перфузии 13} , перейдите к шагу 2.3.

1. Подготовка (без перфузии)

1. Убедитесь, что научно-исследовательское учреждение одобрило методику эвтаназии, описанную в этом протоколе.
2. Приготовьте раствор из 5 г/л MS-222 (трикаина метансульфоната) и 5 г/л гидрокарбоната натрия (см. Таблицу материалов). Проверьте pH, чтобы убедиться, что он ....

Results

Следуя всем шагам этого протокола, желудочек сердца, артериальный ствол, левая доля печени, желчный пузырь, легкое, поджелудочная железа, селезенка, гортань, пищевод, желудок, кишечник, яички, жировые тела, яйцевод, парные почки, седалищное сплетение, кожа, тимус и весь глаз были аккуратно удалены в течение часа после эвтаназии (см. рис. 1, рис. 2, рис. 3, рис. 4,

Discussion

Представленный здесь протокол разработан для обеспечения гибкости для пользователей с разным уровнем опыта, обеспечивая при этом своевременный и эффективный сбор необходимых тканей. Новым пользователям рекомендуется следовать каждому шагу в протоколе, как описано, чтобы обеспечить систематический сбор тканей. Однако более опытные пользователи могут пропустить определенные шаги и взять образцы только тех тканей, которые им необходимы. Например, доступ к селезенке, которая находится за бры.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5x Увеличительное стекло со светодиодной подсветкой и подставкой	amazon.com	B08QJ6J8P1	свет не должен выделять тепло
Одноразовые переводные пипетки	VWR	414004-036
Препарирующие тонкозаостренные щипцы	Fisher Scientific	08-875
Ножницы для препарирования острый пионт, прямой 6,5"	VWR	76457-374
Диссекционный лоток	Fisher Scientific	14-370-284	листы из пенополистирола являются приемлемой альтернативой
контейнеру для эвтаназии	US Plastic	Предмет  2860	альтернативных непрозрачных контейнеров приемлемая
крышка контейнера для эвтаназии	US Plastic	Предмет  3047
Ножницы для иридэктомии 6"	VWR	470018-938	Ножницы для радужной оболочки являются приемлемой альтернативой
MS-222: Синкаин (ранее трикаин)	Pentair AES	TRS1
Щипцы для зубной ткани крысы 5,5 дюйма, нержавеющая сталь	Fisher Scientific	S08100
Бикарбонат натрия, порошок, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Образец щипцов, зубчатый	VWR	82027-442
Т-образные штифты для препарирования	Fisher Scinetific	S99385