Методическая статья

Введение δ 9-тетрагидроканнабинола (ТГК) подросткам и взрослым мышам

1.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68358

⸱

1 августа 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Neurobiology, University of California, Irvine, 2Department of Biological Chemistry, University of California, Irvine, 3Department of Pharmaceutical Sciences, University of California, Irvine

В этой статье

Краткое содержание

Δ 9-тетрагидроканнабинол (ТГК) является опьяняющим компонентом каннабиса и контролируемым веществом в Соединенных Штатах. В этой статье изложены стандартные процедуры получения, хранения и введения ТГК мышам в соответствии с действующими правовыми нормами и кратко представлен метод оценки основных фармакодинамических эффектов ТГК у грызунов.

Аннотация

Δ-9-тетрагидроканнабинол (ТГК) отвечает за опьяняющие (психотропные) эффекты каннабиса и продуктов, полученных из каннабиса, доступных в настоящее время на легальном и нелегальном рынках. Психотропные эффекты ТГК проявляются в результате активации каннабиноидных рецепторов CB1 в головном мозге, которые обычно взаимодействуют с эндогенными каннабиноидными (эндоканнабиноидными) веществами. Вне мозга ТГК способствует регуляции широкого спектра физиологических процессов, активируя рецепторы CB1 и CB2. Физиологические функции, выполняемые эндоканнабиноидными веществами и каннабиноидными рецепторами, известные как эндоканнабиноидная система, значительно изменяются на протяжении всей жизни, причем подростковый возраст является периодом повышенной чувствительности к вкладу этого сигнального комплекса. В данной статье описан протокол подготовки ТГК к парентеральному введению и оценки его острых фармакодинамических эффектов у мышей обоих полов на двух стадиях развития: подростковом и юношеском возрасте. Сосредоточив внимание на трех дозах, которые широко используются в литературе (1, 5 и 10 мг/кг) и внутрибрюшинном пути, проиллюстрированы хорошо известные эффекты индукции ТГК-каталепсии, ингибирования двигательной активности и подавления ноцицепции. Более того, учитывая статус ТГК как контролируемого вещества в Соединенных Штатах, кратко изложены процедуры его получения и хранения в соответствии с действующим законодательством.

Введение

Распространенность употребления каннабиса среди взрослого населения Соединенных Штатов постоянно росла в последние десятилетия и оставалась высокой в 2023 году. Среди взрослых в возрасте от 19 до 30 лет примерно 42% сообщили об употреблении каннабиса в прошлом году, 29% в прошлом месяце и 10% сообщили о ежедневном или квазиежедневном употреблении (20 или более раз за последние 30 дней)1. Для взрослых в возрасте от 35 до 50 лет эти показатели составляют 29%, 19% и 8% соответственно. Хотя эти оценки статистически не отличаются от полученных в 2022 году, они указывают на рост за последние 5 и 10 лет для обеих демографических групп1. Важно отметить, что современные данные свидетельствуют о том, что примерно у 9% людей, употребляющих каннабис, развивается толерантность и зависимость от него - состояние, известное как расстройство, связанное с употреблением каннабиса (SUD)2 , и потенциальнаяпроблема со здоровьем.

Как и в случае с другими психоактивными веществами, употребление каннабиса обычно начинается в раннем подростковом возрасте и постепенно увеличивается на протяжении всего подросткового возраста. В 2023 году 8% учеников8-х классов в США, 18% учащихся10-х классов и 29% учащихся12-х классов сообщили, что употребляли наркотик хотя бы один раз4. Несмотря на относительную стабильность в течение последних нескольких лет, даже в условиях снижения восприятия риска 5,6, эти цифры остаются слишком высокими. В дополнение к своему широкому немедицинскому использованию, каннабис продемонстрировал терапевтический потенциал при ряде медицинских состояний 7,8. Синтетическая форма его интоксикационного (психотропного) компонента, Δ 9-тетрагидроканнабинола (ТГК) (Рисунок 1), используется в течение более 40 лет в качестве рецептурного препарата для лечения тошноты и потери аппетита у пациентов с ВИЧ и раком, проходящих химиотерапию 9,10. Как ТГК, так и его аналог каннабидиол (КБД) (рис. 1), который не является психотропным, участвуют в лечении боли, воспаления и различных неврологических расстройств11,12. Таким образом, быстрое распространение лекарственных продуктов, полученных из каннабиса, например, при детской эпилепсии и аутизме, также знакомит с этим наркотиком новые группы молодых людей. Эти события особенно тревожны в социальном контексте, где законодательные изменения и растущее признание подпитывают финансовые интересы, которые могут перевесить проблемы общественного здоровья и безопасности13.

Каннабис, содержащий ТГК («марихуана»), употребляется в различных формах, включая курение, испарение, пищевые продукты, настойки и масла. После приема внутрь ТГК распространяется по всему телу и попадает в мозг, где вызывает эйфорию, расслабление, измененное сенсорное восприятие и повышение аппетита, хотя он также может вызывать беспокойство и паранойю унекоторых людей. ТГК взаимодействует с эндоканнабиноидной (ЭКБ) системой, активируя два типа каннабиноидных (КБ) рецепторов, расположенных как внутри, так и снаружи мозга15,16. В мозге, где рецепторы CB1 наиболее распространены, их активация влияет на настроение, восприятие боли, аппетит и когнитивные функции, а также на другие функции. ТГК также активирует рецепторы CB1 и CB2 в периферических органах, влияя на системный энергетический метаболизм, включая поступление, усвоение и хранение питательных веществ, а также на инициацию боли, воспаление и иммунитет17,18.

ТГК оказывает как острое, так и стойкое воздействие, и по-прежнему требуются дополнительные доклинические и клинические исследования долгосрочных последствий употребления каннабиса. Особое внимание следует уделить потенциальным побочным реакциям на высокие дозы ТГК, учитывая, что средняя концентрация ТГК в каннабисе, продаваемом в Соединенных Штатах, увеличилась за последние десятилетия с 8,9% в 2008 году до 17,1% в 2017году19 и даже выше в последние годы. «Высокоэффективные продукты каннабиса» (продукты, содержащие высокую концентрацию ТГК) распространены на многих легальных рынках по всей территории Соединенных Штатов, где среднее содержание ТГК в цветках каннабиса составляет 20-35%, а некоторые экстрактивные продукты достигают 90% ТГК. При таких высоких дозировках ТГК может иметь качественно иные эффекты, чем те, которые производит традиционный «низкоэффективный каннабис», используемый в 1970-х и 1980-х годах, который содержал 6% ТГК или менее20. Таким образом, понимание фармакологии сильнодействующих продуктов каннабиса имеет решающее значение для информирования о профилактических стратегиях и руководства нормативной и фискальной политикой. Кроме того, понимание того, как такие факторы, как возраст, генетика и ранее существовавшие заболевания, влияют на индивидуальную реакцию на ТГК, может помочь адаптировать профилактику и лечение к конкретным группам населения. В частности, последствия употребления каннабиса подростками и будущими или кормящими матерями должны быть дополнительно изучены, поскольку воздействие каннабиноидов в пренатальный/перинатальный и подростковый периоды, в которых система ЭКБ играет ключевую роль в развитии нервной системы, может привести к стойким негативнымпоследствиям. Кроме того, необходимы дополнительные исследования, чтобы понять, как ТГК взаимодействует с другими лекарствами или веществами. Исчерпывающие данные о безопасности и эффективности ТГК могут быть использованы при принятии нормативных решений и политике общественного здравоохранения, обеспечивая безопасное использование как в медицинском, так и в немедицинском контексте.

Здесь мы описываем стандартные процедуры получения, хранения и введения ТГК в лабораторных условиях в соответствии с действующим законодательством США (Закон о контролируемых веществах 1971 года). Сосредоточив внимание на трех дозах ТГК, широко используемых в научной литературе (1, 5 и 10 мг/кг)22 и внутрибрюшинном (внутрибрюшинном) пути введения, были проиллюстрированы три классических эффекта на ТГК: индукция каталепсии, ингибирование двигательной активности и антиноцицепция. Этот протокол также может быть использован после нескольких инъекций ТГК для изучения последствий хронического употребления ТГК, которое приводит к толерантности и ряду последствий для психического здоровья, которые обычно не наблюдаются при остром введении у людей.

Протокол

Все процедуры были одобрены IACUC Калифорнийского университета в Ирвайне и проводились в строгом соответствии с рекомендациями Национальных институтов здравоохранения (NIH) по уходу и использованию экспериментальных животных.

1. Порядок получения и хранения ТГК

ПРИМЕЧАНИЕ: В Соединенных Штатах использование ТГК в академических исследованиях требует выполнения нескольких шагов, требуемых правовым статусом каннабиса. Как каннабис, так и ТГК, полученный из каннабиса, классифицируются как контролируемые вещества Списка I. По этой причине, прежде чем можно будет приобрести каннабис или ТГК, исследователи должны получить лицензию от Управления по борьбе с наркотиками (DEA). Обзор этого процесса, который может занять до 6 месяцев и более, представлен ниже.

  1. Определение объема исследования: Определите цель и задачи исследовательского процесса и укажите, почему необходим ТГК. Разработайте протокол исследования с подробным описанием необходимого количества ТГК, его коммерческого источника, а также того, как он будет обрабатываться и храниться. Включите как можно больше релевантных деталей.
  2. Получение одобрения институционального регулирующего органа: Подайте предложение об исследовании в Комитет по уходу за животными и их использованию (IACUC) местного учреждения (для доклинической работы) или Институциональный наблюдательный совет (IRB) (для клинической работы). Этот этап обзора защищает права субъектов исследования и гарантирует, что исследование соответствует этическим нормам.
  3. Соответствие государственным нормам: Помните о любых нормативных актах штата, касающихся исследований каннабиса, поскольку они могут значительно различаться. Например, в Калифорнии получите одобрение от Исследовательской консультативной группы Калифорнии (RAPC)23.
  4. Получение ТГК: Приобретайте каннабис и ТГК у культиваторов или производителей, имеющих лицензию для этой цели.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Список утвержденных культиваторов доступен на веб-сайте DEA. Национальный институт по борьбе со злоупотреблением наркотиками (NIDA) предоставляет ТГК в рамках Программы поставок лекарств NIDA24. Чтобы подать заявку на участие в этой программе, необходимо предоставить информацию об учреждении, подробный протокол исследования и документацию по институциональным правилам, такую как письма IACUC или IRB. Заполнение Формы 222 DEA, которая представляет собой одностраничную форму, специально предназначенную для каждого регистрационного номера DEA, требуется для покупки или передачи контролируемых веществ, включенных в Список 1.
  5. Получение и хранение ТГК
    1. Храните ТГК в надежно запираемом сейфе или хранилище, которое соответствует дизайну, одобренному DEA. Доступ в зону исследования должен контролироваться (например, двери здания и/или лаборатории должны быть заперты). Только уполномоченный персонал должен иметь доступ к ТГК.
    2. Подготовьте и составьте список лиц, которым разрешен доступ к нему, и регулярно обновляйте этот список. Четко маркируйте контейнеры с ТГК с названием, концентрацией, датой получения и предупреждениями об опасности.
    3. Следуйте установленным процедурам утилизации, которые требуют специальной документации и соблюдения федеральных и государственных правил. Держите ТГК на уровне -20 °C или ниже.
  6. Управление запасами:
    1. Внедрите надежную систему инвентаризации для отслеживания количества, использования и местонахождения ТГК. Подготовьте связующее средство для контролируемых веществ, которое включает в себя лицензию Списка 1, информацию об уполномоченном персонале, записи обо всех поступлениях, утилизациях и любом использовании вещества (Рисунок 2).
    2. Проводите регулярные аудиты инвентаризации и хранения, заполняя журнал инвентаризации два раза в год, чтобы обеспечить соответствие нормативным требованиям. Периодически проверяйте журналы доступа и инвентарные записи.
  7. Обучение и протоколы: Обучение должно быть обеспечено для всего персонала, работающего с ТГК. Должны быть установлены четкие протоколы хранения, обработки и утилизации препарата.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Внедряя эти методы, академические лаборатории могут обеспечить соответствие законодательным требованиям и поддерживать безопасную исследовательскую среду.

2. Порядок введения мышам ТГК путем внутримышечного введения

ПРИМЕЧАНИЕ: При работе с ТГК важно контролировать температуру и защищать соединение от света, чтобы сохранить его стабильность. ТГК чувствителен к теплу и должен храниться при температуре -20 °C или ниже для длительного хранения. Для кратковременного хранения ТГК можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике при температуре 4 °C в течение нескольких часов. ТГК также чувствителен к ультрафиолетовому (УФ) и видимому свету, который может вызвать деградацию из-за окисления. Чтобы этого не допустить, ТГК следует хранить в герметичных стеклянных контейнерах янтарного цвета или прозрачных контейнерах, завернутых в алюминиевую фольгу, и хранить в темноте. Рекомендуется маркировать все образцы с указанием дат и условий хранения, чтобы обеспечить надлежащее отслеживание и стабильность.

  1. Материалы
    1. Все растворы готовят с использованием сверхчистой воды и реагентов аналитического класса. Получите ТГК от Cayman Chemical (Анн-Арбор, Мичиган) или RTI International (Research Triangle Park, NC) или через Программу поставок лекарств NIDA24.
  2. Оборудование и расходные материалы
    1. Перед началом процедуры убедитесь, что элементы, перечисленные в Таблице материалов , готовы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При работе с ТГК важно использовать стеклянные флаконы (8 мл или аналогичные) и контейнеры. Пластик может вступать в реакцию с гидрофобными молекулами, такими как ТГК, или поглощать их, что может привести к потере образца или непостоянным концентрациям. Стекло химически стабильно и не вступает в реакцию, что помогает предотвратить нежелательные взаимодействия с гидрофобными молекулами.
  3. Порядок введения ТГК мышам
    1. Извлеките контейнер с ТГК из защитного шкафчика в морозильной камере.
    2. Держа емкость на льду, извлеките соответствующий объем ТГК с помощью пипетки и осторожно добавьте его на дно стеклянного флакона объемом 8 мл. Рассчитайте объем исходя из дозы (мг/кг) и массы тела мышей (г).
    3. Переместите флакон в вытяжной шкаф для химикатов и аккуратно испарите растворитель до полного высыхания с помощью слабой струи газообразного азота. Будьте осторожны, чтобы не разбрызгать раствор, содержащий ТГК, на стенки флакона, так как это приведет к серьезным потерям. Этот процесс занимает примерно 5-10 минут.
    4. Запишите в журнале использования контролируемых веществ I в папке с контролируемыми веществами, сколько ТГК было взято из используемого в данный момент флакона.
    5. Когда растворитель полностью высохнет, добавьте соответствующий объем Tween-80. Это объем Tween-80, необходимый для получения конечной 5%-ной концентрации Tween-80 в физрастворе, как показано на шаге 2.3.8.
    6. Нагрейте флакон в стакане с горячей водой при температуре 60 °C или ниже. Перебейте флакон в вихрь, чтобы полностью растворить ТГК, и повторите по мере необходимости.
    7. Постепенно добавляйте стерильный физиологический раствор с небольшими примесями: например, 200 μл, 300 μл, 500 μл и 1 мл. Вихрь и нагреть.
    8. Повторяйте шаги 2.3.6 и 2.3.7 до тех пор, пока не будет добавлен общий объем необходимого физиологического раствора для получения окончательного раствора ТГК в 5% Tween-80 и 95% физиологического раствора, и раствор не будет полностью растворен.
    9. (НЕОБЯЗАТЕЛЬНО) Обработайте флакон ультразвуком на ультразвуковой водяной бане, установленной примерно на 100% мощности при частоте 40 кГц и 37 °C в течение 5 минут. Убедитесь, что раствор прозрачный и не содержит нерастворенных веществ. Цвет жидкости может варьироваться в зависимости от используемого автомобиля.
    10. Взвесьте мышь и определите подходящее количество для инъекции. Объем инъекции должен составлять 10 мл/кг на одну мышь.
    11. Продолжайте делать внутрибрюшинные (внутрибрюшинные) инъекции. Убедитесь, что растворы ТГК свежеприготовлены в день использования.

3. Процедуры оценки фармакологических эффектов ТГК

  1. Животные
    1. Для этого исследования используйте мышей обоих полов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В данном исследовании использовались мыши-подростки (послеродовой день, ПНД, 30-35) и взрослые (ПНД 70-75) C57BL/6J обоих полов из лабораторий Джексона (Фармингтон, Коннектикут).
      Процедура применима и к другим линиям мыши.
    2. Размещайте мышей в проветриваемых клетках (по 4-5 человек в клетке) с едой и водой, доступными в неограниченном количестве. Случайным образом распределите животных по возрасту и весу в группы лечения и дайте им акклиматизироваться не менее чем за 1 неделю до экспериментов.
    3. Поддерживайте в жилых помещениях 12-часовой световой / 12-часовой темный цикл (свет включается в 6:30 утра) с постоянной температурой (20 ± 2 °C) и относительной влажностью (55%-60%).
  2. Экспериментальные группы
    1. Разделите каждую возрастную и половую группу на четыре группы лечения: одну контрольную группу носителя и три группы лечения ТГК в дозах 1, 5 и 10 мг/кг.
  3. Медикаментов
    1. Свежеприготовьте ТГК, как описано выше, в средстве с 95% физиологическим раствором и 5% Tween-80 и введите путем внутривенного введения.
  4. Поведенческое тестирование
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом примере каждое животное прошло описанные ниже тесты для отслеживания эффектов ТГК22. Три поведенческих теста были проведены последовательно на одной и той же когорте животных. Порядок процедур был следующим: локомоция (через 30 минут после приема ТГК), каталепсия (через 45 минут после приема ТГК) и погружение хвоста (через 60, 180 и 300 минут после приема ТГК) (Рисунок 3). Для экспериментов с подростками женского пола мы повторно использовали ту же группу, получавшую терапию, а затем вводили либо 1 мг/кг, либо 10 мг/кг ТГК той же когорте для проведения тестов на каталепсию и погружение хвоста. Такой подход позволил нам достичь достаточной статистической мощности при минимизации количества используемых животных в соответствии с этическими принципами. Поведение записывалось с помощью видеокамеры, а видеофайлы анализировались с помощью программного обеспечения для отслеживания поведения.
    1. Тест на каталепсию
      Каталепсия у мышей — это (патолого)физиологическое состояние, характеризующееся отсутствием произвольного движения, ригидностью позы и сопротивлением внешним изменениям положения тела. Он считается одним из четырех стандартных эффектов ТГК, наряду с торможением опорно-двигательного аппарата, антиноцицепцией и снижением температуры тела. В данном примере каталептическое поведение оценивали на основе установленных процедур22, как подробно описано ниже:
      1. Установка: Подготовьте горизонтальную перекладину (7 см в длину), приподнятую на 4 см над поверхностью чистого лабораторного стола с нормальным освещением окружающей среды (160 люкс). Поставьте рядом электронный таймер, готовый к использованию.
      2. Перенесите мышь из помещения в испытательную лабораторию и акклиматизируйте ее в клетке в течение 60 минут перед тестированием. Наденьте чистый лабораторный халат и никаких духов.
      3. Используя чистые латексные перчатки, осторожно извлеките мышь из клетки, безопасно введите необходимое количество ТГК или транспортное средство и поместите ее обратно в клетку.
      4. В подходящее время после инъекции ТГК (в данном случае 45 минут) извлеките мышь из клетки и аккуратно положите ее передние лапы на турник.
      5. Записывайте время неподвижности с помощью электронного таймера.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Время неподвижности определяется как время, прошедшее с момента, когда мышь находится на перекладине, до момента, когда она убирает одну или обе лапы.
      6. Останавливайте таймер, когда мышь убирает одну или обе лапы от планки или когда достигается время отсечения в 10 с.
      7. Повторите тест дважды для каждой мыши, с интервалом отдыха 2 минуты между попытками.
      8. Используйте среднее значение двух времен неподвижности для окончательного анализа данных.
      9. Критерия оценки исхода: Используйте время неподвижности (в секундах) в качестве индикатора каталепсии.
    2. Тест в открытом поле (локомоторная активность в новой среде)
      ПРИМЕЧАНИЕ: Гиполокомоция, вызванная ТГК, оценивается с помощью теста на открытом воздухе и в соответствии с установленным протоколом25.
      1. Настройка: Для этого теста используйте арену с открытым полем, оснащенную оборудованием для видеослежения. Убедитесь, что арена на открытом воздухе чистая и на ней нет запахов, полученных в ходе предыдущих экспериментов.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Эффективная очистка может быть выполнена с использованием коммерчески доступных продуктов, описанных в Таблице материалов.
      2. Перенесите мышь из помещения в испытательную лабораторию и акклиматизируйте ее в клетке в течение 60 минут перед тестированием. Убедитесь, что испытательная комната имеет освещение низкой интенсивности (10 люкс)25. Носите чистый лабораторный халат и не пользуйтесь духами.
      3. Надев чистые перчатки, осторожно извлеките мышь из клетки, безопасно введите необходимое количество ТГК или средства массовой информации и поместите мышь обратно в клетку.
      4. В подходящее время после инъекции ТГК (в данном случае через 30 минут) осторожно поместите мышь в центр арены, стараясь свести к минимуму стресс при обращении.
      5. Записывайте 10-минутные сеансы с помощью видеокамеры и программного обеспечения для отслеживания поведения.
      6. После теста верните мышь в домашнюю клетку и тщательно очистите арену описанным выше чистящим раствором.
      7. Оценка результата: Рассчитайте общее пройденное расстояние, измеренное в метрах, в качестве основного параметра для количественной оценки двигательной активности.
    3. Тест на погружение хвоста (ноцицептивные пороги, также называемый тестом на отвод хвоста горячей водой)
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ноцицепцию оценивают с помощью теста на погружение хвоста, как описано ранее26. Этот тест используется для оценки эффективности потенциальных анальгетиков и оценки толерантности к их эффектам. Во время теста на хвост мыши воздействуют тепло в качестве болевого стимула, а также измеряется время, необходимое для отвода хвоста от источника тепла.
      1. Установка: Приготовьте водяную баню при температуре 54 °C при нормальном освещении окружающей среды (160 люкс). Поставьте рядом электронный таймер, готовый к использованию.
      2. Аккуратно зафиксируйте мышь с помощью кармана для мягких тканей, изготовленного с использованием подушечек для дрессировки домашних животных (Glad), чтобы хвост оставался доступным.
      3. Погрузите дистальную треть хвоста в водяную баню и одновременно запустите таймер.
      4. Запишите задержку до отвода хвоста (в секундах), определяемую как рефлекторное взмах хвостом.
      5. Установите максимальное время отсечения 10 с, чтобы предотвратить повреждение тканей и дискомфорт.
      6. Повторите измерение дважды для каждой мыши в каждый момент времени (в данном случае через 60, 180 и 300 минут после инъекции ТГК) с 5-минутным интервалом между попытками.
      7. Усреднить два измерения задержки для анализа данных.
      8. Критерия оценки исхода: Рассчитайте латентность до отмены хвоста, измеряемую в секундах, в качестве первичной переменной результата для оценки антиноцицептивных эффектов.
  5. Статистический анализ
    1. Выразите результаты как средства ± SEM. Определите значимость с помощью двустороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом множественных сравнений Шидака или трехфакторным ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Тьюки. Учитывайте различия существенными, если P < 0,05.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для выполнения анализа использовался GraphPad Prism версии 10.4.

Результаты

Чтобы проиллюстрировать описанный выше протокол, мы представляем результаты по острым фармакологическим эффектам ТГК. Четыре группы мышей (по 8 в группе), подросток мужского пола, взрослый самец, подросток женского пола и взрослая самка, получали три дозы ТГК - 1, 5 и 10 мг/кг - вместе с носителем в качестве контрольной группы. Затем оценивали каталепсию, локомоторную активность и ноцицепцию, уделяя особое внимание дозозависимости эффектов и различиям между полами и возрастами.

Во-первых, что касается острых каталептических эффектов, ТГК вызывал дозозависимую каталепсию у мышей-подростков и взрослых самцов (Рисунок 4А и Таблица 1). Продолжительность ответа зависела от дозы (P<0,0001, двусторонний ANOVA), при этом 5 и 10 мг/кг вызывали статистически значимые эффекты в обеих возрастных группах по сравнению с контрольной группой (P < 0,0001 по критерию множественных сравнений Шидака). При дозе 10 мг/кг ТГК вызывал каталепсию как у подростков, так и у взрослых самок мышей (Рисунок 4B и Таблица 2), причем взрослые самки демонстрировали менее выраженную реакцию по сравнению с самками-подростками (P < 0,0001 по результатам многократного сравнительного теста Шидака). Наборы данных были дополнительно проанализированы, чтобы определить, влияет ли секс на каталепсию, вызванную ТГК. Умеренная, но значимая реакция на половой диморфизм наблюдалась у девочек-подростков по сравнению с мальчиками (P = 0,0204) (Рисунок 4C и Таблица 3). Значительно более сильный эффект секса был обнаружен у взрослых самок, которые были значительно менее чувствительны к каталептическим эффектам ТГК по сравнению с самцами взрослых мышей (P < 0,0001) (Рисунок 4D и Таблица 4).

Во-вторых, что касается острых локомоторных эффектов, ТГК снижает локомоторную активность у самцов мышей (Рисунок 5А и Таблица 5). Этот эффект зависел как от дозы ТГК, так и от возраста животных (P < 0,0001 и P = 0,0042 соответственно), при этом мыши-подростки были более чувствительны к эффекту ТГК по сравнению со взрослыми мышами. Последующий многократный сравнительный тест показал, что при дозе 5 мг/кг ТГК мыши-подростки двигались значительно меньше, чем взрослые мыши (P < 0,0001). ТГК снижал локомоторную активность также у самок мышей (Рисунок 5B и Таблица 6). Двусторонний ANOVA показал значимые эффекты как дозы, так и возраста также у самок мышей (P < 0,0001 и P = 0,0103 соответственно) (рисунок 5B и таблица 6). Тем не менее, постфактумные множественные сравнительные тесты не выявили статистически значимых различий между подростками и взрослыми самками мышей в дозах 0 или 10 мг/кг ТГК (рис. 5B). Эти наборы данных были дополнительно проанализированы, чтобы определить, влияет ли секс на гиполокомоцию, вызванную ТГК. Половой диморфизм не наблюдался у мышей-подростков (рисунок 5C и таблица 7); тем не менее, взрослые мыши продемонстрировали статистически значимый половой диморфизм (P = 0,0046), при этом взрослые самки демонстрировали значительно более высокую подвижность по сравнению со взрослыми самцами. Тем не менее, постфактумные множественные сравнительные тесты не выявили статистически значимых различий между полами при дозах 0 или 10 мг/кг ТГК (Рисунок 5D и Таблица 8).

В-третьих, что касается острого антиноцицептивного эффекта, ТГК снижал ноцицепцию погружения хвоста у самцов мышей (подростки, рисунок 6А и таблица 9; взрослые, рисунок 6C и таблица 11). У подростков мужского пола ТГК проявлял значительные антиноцицептивные эффекты при дозах 5 и 10 мг/кг, испытываемых через 60, 180 и 360 минут после введения (P < 0,0001 по результатам многократного сравнения Шидака, относительно латентности взмаха хвостом у контрольных мышей с транспортным средством) (рисунок 6A и таблица 9). Двусторонняя ANOVA подтвердила сильное влияние дозы ТГК на латентность хвостового щелчка (P < 0,0001) и показала зависящее от времени снижение антиноцицептивных эффектов, особенно при самой высокой дозе (P = 0,0133) (Рисунок 6A и Таблица 9). Аналогичный дозозависимый эффект ТГК, но не эффект времени, наблюдался у самок мышей-подростков (P < 0,0001 и P = 0,9923 соответственно) (рисунок 6B и таблица 10). У взрослых мужчин ТГК проявлял значимые антиноцицептивные эффекты только при самой высокой дозе (10 мг/кг) и в самой ранней временной точке (через 60 минут после введения) (P < 0,0001 по результатам теста Шидака, по сравнению с контрольной группой) (Рисунок 6C и Таблица 11). Двусторонний ANOVA показал значимый эффект как дозы, так и времени (доза P < 0,0001; время, P = 0,0007) (табл. 11). У взрослых самок значительный антиноцицептивный эффект наблюдался только при самой высокой дозе (10 мг/кг) и в самой ранней временной точке (через 60 мин после введения) (P < 0,0012 по критерию множественных сравнений Шидака по сравнению с контрольной группой) (рис. 6D и таблица 12). Что касается влияния пола и возраста на индуцированную ТГК антиноцицепцию, двусторонняя ANOVA показала, что влияние ТГК на латентность щелчка хвоста зависит как от возраста, так и от пола (рис. 6E, F, Таблица 13 и Таблица14). Самый сильный эффект наблюдался у подростков мужского пола через 60 минут после введения ТГК, хотя все четыре группы мышей продемонстрировали значительную антиноцицепцию, индуцированную ТГК, по сравнению с соответствующими контрольными группами в этот момент времени (рис. Интересно, что значительный эффект пола наблюдался у подростков, но не у взрослых мышей через 60 минут после приема ТГК (подростки, P = 0,0083; взрослые, P = 0,9919 по критерию множественных сравнений Шидака) (рисунок 6E и таблица 13). Через 300 минут после приема ТГК значимые антиноцицептивные эффекты были обнаружены только у мышей-подростков, как самцов, так и самок, но не у взрослых мышей (рисунок 6F и таблица 14). Трехфакторный ANOVA проверил три переменные: дозу, возраст и пол одновременно и выявил значимые эффекты как времени и дозы (P = 0,0007 и P < 0,0001 соответственно), так и значимого взаимодействия между временем и дозой (P = 0,0022) (Таблица 15).

figure-results-1
Рисунок 1: Химические структуры фитоканнабиноидов, ТГК и КБД, а также эндоканнабиноидов, анандамида и 2-AG. Дельта-9-тетрагидроканнабинол (ТГК) вырабатывается в соцветиях женского растения каннабиса и отвечает за его психотропное действие; ТГК действует путем связывания с рецепторами CB1 и CB2, связанными с G-белком, в мозге и других тканях организма. Каннабидиол (КБД) является непсихотропным каннабиноидом с противоэпилептическими и, возможно, антипсихотическими и противовоспалительными свойствами. Два основных эндогенных активатора КБ-рецепторов, анандамид и 2-арахидоноил-sn-глицерин (2-AG), являются липидными мессенджерами в головном мозге и периферических тканях, вырабатываются по требованию и участвуют в различных краткосрочных сигнальных процессах, таких как тонкая настройка синаптической пластичности в ЦНС. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Пример журнала использования контролируемого вещества I. Любое употребление ТГК должно быть зарегистрировано в специальном журнале использования контролируемых веществ I, который хранится в папке с контролируемыми веществами, хранящейся в запертом шкафу или безопасном офисном помещении. Эта форма должна включать имя и принадлежность главного исследователя, который должен быть зарегистрирован для получения лицензии Списка 1, информацию о включенном в список препарате и точной серии, номер протокола, уполномоченное лицо, которое использует препарат, а также количество и баланс для каждого использования. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Схема, показывающая порядок проведения экспериментов по поведенческому тестированию. Порядок процедур был следующим: локомоция (через 30 минут после приема ТГК), каталепсия (через 45 минут после приема ТГК) и погружение в хвост (через 60, 180 и 300 минут после приема ТГК). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-4
Рисунок 4: Вызванная ТГК острая каталепсия у мышей. ТГК вызывает каталепсию у подростков и взрослых мышей (А) самцов и (В) самок. Реакцию оценивали с помощью барного теста после внутримышечного введения ТГК в указанной дозе. Тот же набор данных был проанализирован на предмет влияния секса на каталепсию, индуцированную ТГК, у (C) подростков и (D) взрослых самцов и самок мышей. Результаты были выражены в виде средних значений ± SEM. Значимость определяли с помощью двустороннего ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Шидака. Различия считались значимыми, если P < 0,05. P < 0,0001 по сравнению с контрольной группой, ##P < 0,01, а ####P < 0,0001 по сравнению с подростковой группой 10 мг/кг на панели B или мужской группой 10 мг/кг на панелях C и D. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-5
Рисунок 5: Вызванная ТГК острая гиполокомоция у мышей. ТГК снижает спонтанную локомоторную активность у подростков и взрослых мышей (А) самцов и (В) самок. Реакцию оценивали с помощью теста в открытом поле после внутримышечного введения ТГК в указанной дозе. Тот же набор данных был проанализирован на предмет влияния секса на гиполокомоцию, вызванную ТГК, у (C) подростков и (D) взрослых самцов и самок мышей. Результаты были выражены в виде средних значений ± SEM. Значимость определяли с помощью двустороннего ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Шидака. Различия считались значимыми, если P < 0,05. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 и ****P < 0,0001 по сравнению с контрольной группой, и ####P < 0,0001 по сравнению с подростковой группой 5 мг/кг на панели А. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-6
Рисунок 6: Вызванная ТГК острая анальгезия у мышей. Острые антиноцицептивные эффекты ТГК были измерены с помощью теста погружения хвоста у (А) подростка мужского пола, (В) подростка женского пола, (В) взрослого самца и (Г) взрослых самок мышей через 60, 180 или 300 минут после внутримышечного введения ТГК в указанной дозе. Тот же набор данных был проанализирован на предмет влияния возраста и пола на индуцированную ТГК антиноцицепцию после (E) через 60 минут или (F) через 300 минут после введения THC. Результаты были выражены в виде средних значений ± SEM. Значимость определяли с помощью двустороннего ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Шидака. Различия считались значимыми, если P < 0,05. *P < 0,05, ***P < 0,001 и ****P < 0,0001 по сравнению с контрольной группой, а ##P < 0,01 между группами подростков мужского и женского пола с дозой 10 мг/кг, а также @P < 0,05 и @@P < 0,01 по сравнению с группами взрослых мужчин и взрослых женщин с дозой 10 мг/кг соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Таблица 1: Двусторонний анализ ANOVA острых эффектов ТГК на развитие каталепсии у мышей-подростков и взрослых самцов (см. рисунок 4A) (n = 7-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 2: Двусторонний анализ ANOVA острых эффектов ТГК на развитие каталепсии у мышей-подростков и взрослых самок (см. рисунок 4B) (n = 5-8 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 3: Двусторонний анализ ANOVA острых эффектов ТГК в развитии каталепсии у мышей-подростков мужского и женского пола (см. рисунок 4C) (n = 5-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 4: Двусторонний анализ ANOVA острых эффектов ТГК в развитии каталепсии у взрослых самцов и самок мышей (см. рисунок 4D) (n = 7-10 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 5: Двусторонний анализ ANOVA острого воздействия ТГК на локомоцию у мышей-подростков и взрослых самцов (см. рисунок 5A) (n = 7-9 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 6: Двусторонний анализ ANOVA острого воздействия ТГК на локомоцию у мышей-подростков и взрослых самок (см. рисунок 5B) (n = 5-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 7: Двусторонний анализ ANOVA острого воздействия ТГК на локомоцию у мышей-подростков мужского и женского пола (см. рисунок 5C) (n = 5-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 8: Двусторонний анализ ANOVA острого воздействия ТГК на локомоцию у взрослых самцов и самок мышей (относящийся к рисунку 5D) (n = 7-9 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 9: Двусторонний анализ ANOVA острых анальгетических эффектов ТГК у мышей-подростков мужского пола (см. рисунок 6A) (n = 7-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 10: Двусторонний анализ ANOVA острых обезболивающих эффектов ТГК у самок подросткового возраста (см. рисунок 6B) (n = 5-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 11: Двусторонний анализ ANOVA острых обезболивающих эффектов ТГК у взрослых самцов мышей (см. рисунок 6C) (n = 6-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 12: Двусторонний анализ ANOVA острых анальгетических эффектов ТГК у взрослых самок мышей (см. рисунок 6D) (n = 7-8 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 13: Двусторонний анализ ANOVA острых обезболивающих эффектов ТГК у подростков и взрослых, самцов и самок мышей, протестированных через 60 минут после введения 10 мг/кг ТГК (согласно рисунку 6E) (n = 5-8 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 14: Двусторонний анализ ANOVA острых обезболивающих эффектов ТГК у подростков и взрослых, самцов и самок мышей, протестированных через 300 минут после введения 10 мг/кг ТГК (согласно рисунку 6F) (n = 5-8 на группу). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Таблица 15: Трехфакторный анализ ANOVA острых анальгетических эффектов ТГК у подростков и взрослых, самцов и самок мышей, протестированных через 60, 180 и 300 минут после введения 10 мг/кг ТГК (согласно рисункам 6E и 6F) (n = 7-8 в группе). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Обсуждение

В данной статье представлен обзор процедур получения и хранения ТГК в соответствии с действующими нормами США и изложен протокол подготовки ТГК для внутрибрюшинного введения и введения его подросткам (PND 30-35) и молодым взрослым мышам (PND 70-75). Крайне важно получать ТГК из законного источника и соблюдать все применимые правила. В Соединенных Штатах исследователи должны удовлетворять как федеральным, так и государственным нормативным требованиям, даже в тех штатах, где каннабис разрешен как для медицинского, так и для немедицинского использования. Использование сертифицированного источника обеспечивает доступ к ТГК исследовательского качества, который производится под строгим контролем, гарантирующим постоянную эффективность и чистоту. Напротив, использование нерегулируемого или несанкционированного источника ставит под угрозу научную честность, создает риск утечки и подвергает исследователей юридическим последствиям.

Мы рассмотрели три стандартные фармакологические реакции на ТГК - каталепсию, снижение локомоции и анальгезию. Мы воспроизвели обширные литературные данные (см., например, ссылки 27,28,29), показывающие, что ТГК влияет на эти реакции дозозависимым образом. Эти тесты используются в доклинических исследованиях для оценки фармакологических свойств агонистов каннабиноидных рецепторов, хотя их актуальность для человеческого опыта может варьироваться. Каталепсия относится к состоянию, при котором субъект испытывает сниженную способность двигаться или участвовать в нормальных двигательных функциях. Это проявляется в виде физической обездвиженности или ригидности, когда субъект принимает необычные позы. Сниженная локомоция (или гиполокомоция) относится к снижению общего уровня горизонтальной двигательной активности, что проявляется в замедлении или менее частом движении. Это может быть связано с седативным эффектом, двигательными нарушениями или просто отсутствием мотивации к движению. В исследованиях на животных это часто наблюдается как снижение исследовательского поведения или общего уровня активности в новой среде. Третий тест, антиноцицепция, относится к способности ТГК увеличивать латентность вывода хвоста в тесте на погружение хвоста. На животных моделях, где оценка субъективного компонента анальгезии требует специализированных тестов, иммерсионная антиноцицепция с погружением хвоста дает полезное, хотя и ограниченное представление о том, как лекарства влияют на ноцицептивную функцию.

Представленные здесь результаты показывают, что ТГК дозозависимо индуцирует каталепсию независимо от пола и возраста, в частности в дозах 5 мг/кг и 10 мг/кг. Возрастной и половой эффект наблюдался у взрослых самок мышей, у которых наблюдалось значительное притупление каталепсии по сравнению с самцами или самками мышей-подростков. Гиполокомоция, вызванная ТГК, в новой среде была сильнее у мышей-подростков по сравнению со взрослыми мышами, независимо от пола. Это возрастное различие было отличимо от селективных гиполокомоторных эффектов ТГК у взрослых в их домашней клетке, в знакомойобстановке. Что касается острого антиноцицептивного действия ТГК, то статистически значимые эффекты были обнаружены при дозах 5 мг/кг и 10 мг/кг у мышей-подростков, но у взрослых самцов мышей эффективной оказалась только доза 10 мг/кг. Среди трех протестированных здесь временных точек антиноцицептивные эффекты ТГК были самыми высокими через 60 минут после приема ТГК и впоследствии ослабли. Подростки мужского пола были наиболее чувствительны к антиноцицептивным эффектам ТГК среди четырех возрастных групп, и значительная разница между полами наблюдалась в группах мышей-подростков через 60 минут после инъекции 10 мг/кг ТГК. После 300 минут приема ТГК был обнаружен явный эффект возраста, при котором значительные антиноцицептивные эффекты наблюдались у подростков, но не у взрослых мышей, независимо от пола. В целом, мыши-подростки демонстрировали повышенную чувствительность к ТГК по сравнению со взрослыми, особенно в показателях локомоции и ноцицепции. В целом, эти результаты указывают на то, что подростковый возраст является чувствительным периодом для острых фармакологических эффектов ТГК, хотя это можетзависеть от тестов. Полученные результаты также определяют влияние возраста и пола на воздействие ТГК, предполагая, что взрослые женщины наименее чувствительны к ТГК.

Воздействие ТГК в подростковом возрасте, особенно при частом приеме и в больших дозах, может нарушить функцию эндоканнабиноидной системы во всем организме,включая мозг. Это нарушение может привести к долгосрочным последствиям как для психического, так и для физического здоровья 32,33,34. Эпидемиологические исследования за последние три десятилетия неизменно показывали связь между употреблением каннабиса подростками и долгосрочными нарушениями когнитивных функций, настроения и психосоциального функционирования, причем эти эффекты потенциально распространяются и на взрослую жизнь, даже после прекращения употребления 32,33,34,35,36. Кроме того, сообщалось о долгосрочных изменениях массы тела, метаболизма и иммунной функции. Хотя эти связи хорошо задокументированы, крайне важно установить причинно-следственную связь между употреблением каннабиса и его потенциальным воздействием на здоровье. Для оценки причинно-следственной связи в человеческих популяциях могут быть использованы различные методы, включая анализ дискордантных близнецов, менделевскую рандомизацию и квазиэкспериментальные вмешательства. Тем не менее, эксперименты на лабораторных животных также играют жизненно важную роль в выяснении причинно-следственнойсвязи. Результаты нашей лаборатории, финансируемой Национальным институтом по борьбе со злоупотреблением наркотиками, с использованием модели умеренного, но частого воздействия ТГК на грызунах в подростковом возрасте, подтверждают гипотезу о том, что подростковый возраст является уязвимым периодом для воздействия ТГК 17,18,25,38,39,40 . Даже умеренные дозы препарата в течение этого критического окна развития могут оказывать длительное воздействие на различные компоненты эндоканнабиноидной системы взрослого человека. Эти эффекты связаны с нейроповеденческими изменениями, а также с нарушениями иммунных реакций и способности справляться с психосоциальным стрессом. Наше предыдущее исследование также выявило неожиданные изменения в функции жировой ткани, что дало потенциальное молекулярное объяснение долгосрочным метаболическим изменениям, наблюдаемым урегулярных потребителей каннабиса. Неправильно активируя рецепторы CB1 в мозге в важные периоды развития нервной системы, такие как подростковый возраст, ТГК может нарушить баланс, необходимый для созревания мозга, что приводит к структурным и функциональным изменениям, которые могут сохраняться и во взрослом возрасте.

У людей курение и вейпинг являются наиболее распространенными методами потребления каннабиса во всех возрастных группах. Наш текущий протокол описывает введение ТГК внутрибрюшинным путем, который является практичным, воспроизводимым и вызывает фармакокинетические и фармакодинамические реакции у грызунов, которые в некоторых отношениях напоминают те, которые наблюдаются у людей, употребляющих каннабис. Например, было показано, что внутривенная доза 5 мг/кг ТГК у мышей-подростков и взрослых самцов приводит к пиковым концентрациям в крови, сравнимым с теми, которые были зарегистрированы у взрослых людей. Аэрозольная доставка ТГК (в просторечии называемого «паром») изучается в качестве дополнения к внутривенному введению. Этот подход основан на предпосылке, что пассивное вдыхание аэрозольного ТГК, как курение или вейпинг, приводит к легочной абсорбции, что приводит к более быстрому возникновению эффектов, снижению метаболизма печени при первом прохождении и потенциально отличным психоактивным исходам по сравнению с парентеральным введением. Примечательно, что предыдущие исследования показали, что крысы самостоятельно вводят аэрозольные экстракты каннабиса или смеси ТГК/каннабидиола в оперантных поведенческих парадигмах, что подчеркивает потенциал этого метода для изучения усиливающих свойств ТГК.

В заключение следует отметить, что данный протокол основан на установленных методах оценки индуцированного каннабиноидами тетрадного поведения41,42, которое зависит от активации нейрональных рецепторов43 CB1, предлагая несколько ключевых обновлений и усовершенствований. Во-первых, мы описываем процедуры, которые согласуются с текущими правилами DEA и институциональными правилами для получения, обработки и администрирования критически важных для ТГК соображений для всех, кто не имеет практического опыта. Во-вторых, мы применяем парадигму тетрады к мышам-подросткам (PND 30-35) и молодым взрослым (PND 70-75) мышам, двум стадиям развития, которые имеют большое значение для раннего и нового воздействия каннабиса у взрослых, но остаются недостаточно представленными в доклинических исследованиях. Результаты этого исследования повторяют известные дозозависимые эффекты ТГК на каталепсию, локомоцию и анальгезию, в то же время выявляя повышенную чувствительность к ТГК у мышей-подростков, особенно в ноцицептивной и локомоторной областях. Это возрастное понимание и нормативное соответствие делают этот протокол особенно ценным для новичков в исследованиях каннабиноидов и для исследователей, изучающих влияние каннабиноидов на развитие.

Раскрытие информации

Авторы не сообщают о биомедицинских финансовых интересах или потенциальном конфликте интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным институтом по борьбе со злоупотреблением наркотиками (грант No 2P50DA044118 [для DP]).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1 мл шприцев TBБД309659200/кейс; Стерильный, одноразовый.
Стеклянные флаконы объемом 8 млFisher Scientific W224584144/Корпус, используется для приготовления раствора для инъекций ТГК.
Программное обеспечение ANY-лабиринтANY-лабиринт6000Используется для записи видео поведенческих тестов и количественной оценки элементов тестов для анализа данных.
Мыши C57BL/6JЛаборатории Джексона#000664Мыши дикого типа, используемые для всех экспериментов; Можно указать точный возраст и желаемый пол.
Весы Compass CXОхаусКР221Используется для взвешивания мышей, чтобы определить количество ТГК для инъекции; 220 г максимум, d = 0,1 г.
Горячая пластина Corning PyroceramНаучный центр Фишера11500151Используется для нагрева водяной бани для теста Tail Flick.
Дельта-9-тетрагидроканнабинолКайман Кемикал 12068Хранится в надежно запирающемся сейфе для препаратов Списка 1 при температуре -30 °Ордм; C морозильной камерой.
Нитриловые перчатки FisherbrandНаучный центр Фишера19-181-610100/упаковка; Одноразовые перчатки, не содержащие латекса, используемые для надлежащего использования средств индивидуальной защиты.
ГрафПад Призма v10.4ГрафПадн/дПрограммное обеспечение для статистического анализа, используемое для анализа экспериментальных данных и проведения статистических тестов.
Сверхмощный стаканНаучный центр ФишераС81280Используется для удержания горячей воды во время теста Tail Flick.
Газообразный азот высокой чистотыВоздушный газООН1066  Используется для выпаривания этанола из стокового раствора ТГК.
Веб-камера Logitech C920Компания Logitech960-001055Используется для записи поведенческих тестов на животных; Carl Zeiss 1080p/30 кадров в секунду HD USB.
Ящик для открытого поляСтоелтинг Ко60101Коробка с непрозрачными бортиками для проведения испытаний в открытых полевых условиях; Боковые стороны легко снимаются для очистки.
Коврики для дрессировки домашних животныхРадостныйB088G1N2H885/упаковка; 22 дюйма. &острый; 22 дюйма; используется для обертывания и удержания мышей для теста Tail Flick.
Иглы PrecisionGlideБД305109100/кейс; 0,4 мм и острый; 13 мм; Стерильный, одноразовый.
СолянойFisher Scientific (Cytiva)З1377Бутылки объемом 1 л, USP Sterile Grade.
СКОЭ 1xБиоФОГР-СКЧистящий раствор, используемый для очистки материалов поведенческих испытаний.
Твин-80Сигма ОлдричП8074-500МЛBioXtra, вязкая жидкость; КАС # 9005-65-6.
Ультразвуковая водяная баняFisher Scientific (Брэнсон)CPX2800Контроль температуры; Цифровой ультразвуковой очиститель.
Вихревой смесительНаучный центр Фишера2215365Используется для смешивания содержимого раствора ТГК для инъекций по мере его приготовления.

Ссылки

  1. Patrick, M. E., Miech, R. A., Johnston, L. D., O'Malley, P. M. Monitoring the future panel study annual report: National data on substance use among adults ages 19 to 65, 1976-2023. , At. https://monitoringthefuture.org/wp-content/uploads/2024/07/mtfpanel2024.pdf (2024).
  2. Lopez-Quintero, C., et al. Probability and predictors of transition from first use to dependence on nicotine, alcohol, cannabis, and cocaine: Results of the National Epidemiologic Survey on Alcohol and Related Conditions (NESARC). Drug Alcohol Depend. 115 (1-2), 120-130 (2011).
  3. Cerda, M., et al. Association between recreational marijuana legalization in the United States and changes in marijuana use and cannabis use disorder from 2008 to 2016. JAMA Psychiatry. 77 (2), 165-171 (2020).
  4. Miech, R. A., et al. Monitoring the future national survey results on drug use, 1975-2023: Secondary school students. , https://archive.org/details/mtf2023 (2023).
  5. Pacek, L. R., Mauro, P. M., Martins, S. S. Perceived risk of regular cannabis use in the United States from 2002 to 2012: Differences by sex, age, and race/ethnicity. Drug Alcohol Depend. 149, 232-244 (2015).
  6. Hammond, C. J., Chaney, A., Hendrickson, B., Sharma, P. Cannabis use among U.S. adolescents in the era of marijuana legalization: A review of changing use patterns, comorbidity, and health correlates. Int Rev Psychiatry. 32 (3), 221-234 (2020).
  7. National Academies of Sciences, Engineering, and Medicine. The health effects of cannabis and cannabinoids: The current state of evidence and recommendations for research. , Natl Acad Press. (2017).
  8. Health effects of cannabis and cannabinoids and barriers to research: Report to Congress pursuant to requirements of the Medical Marijuana and Cannabidiol Research Expansion Act. Dept Health Hum Serv. , National Institutes of Health. (2023).
  9. Maccarrone, M., et al. Goods and bads of the endocannabinoid system as a therapeutic target: Lessons learned after 30 years. Pharmacol Rev. 75 (5), 885-958 (2023).
  10. Whiting, P. F., et al. Cannabinoids for medical use: A systematic review and meta-analysis. JAMA. 313 (24), 2456-2473 (2015).
  11. Montagner, P., et al. Charting the therapeutic landscape: A comprehensive evidence map on medical cannabis for health outcomes. Front Pharmacol. 15, 1494492(2024).
  12. Manzoni, O. J., Manduca, A., Trezza, V. Therapeutic potential of cannabidiol polypharmacology in neuropsychiatric disorders. Trends Pharmacol Sci. 46 (2), 145-162 (2025).
  13. Kalant, H. Cannabis control policy: No rational basis yet for legalization. Clin Pharmacol Ther. 97 (6), 538-540 (2015).
  14. Huestis, M. A. Pharmacokinetics and metabolism of the plant cannabinoids, delta9-tetrahydrocannabinol, cannabidiol and cannabinol. Handb Exp Pharmacol. 168, 657-690 (2005).
  15. Grotenhermen, F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of cannabinoids. Clin Pharmacokinet. 42 (4), 327-360 (2003).
  16. Jung, K. M., Piomelli, D. Cannabinoids and Endocannabinoids. Neuroscience in the 21st Century. , Springer. New York. (2016).
  17. Jung, K. M., Lin, L., Piomelli, D. Overactivation of the endocannabinoid system in adolescence disrupts adult adipose organ function in mice. Cells. 13 (5), 461(2024).
  18. Lin, L., et al. Adolescent exposure to low-dose THC disrupts energy balance and adipose organ homeostasis in adulthood. Cell Metab. 35 (7), 1227-1241.e7 (2023).
  19. Chandra, S., et al. New trends in cannabis potency in USA and Europe during the last decade (2008-2017). Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 269 (1), 5-15 (2019).
  20. Petrilli, K., et al. Association of cannabis potency with mental ill health and addiction: A systematic review. Lancet Psychiatry. 9 (9), 736-750 (2022).
  21. Bara, A., et al. Cannabis and synaptic reprogramming of the developing brain. Nat Rev Neurosci. 22 (7), 423-438 (2021).
  22. Mabou Tagne, A., et al. Delta(9)-tetrahydrocannabinol alleviates hyperalgesia in a humanized mouse model of sickle cell disease. J Pharmacol Exp Ther. 391 (9), 174-181 (2024).
  23. Research advisory panel. , Office of the Attorney General, State of California. At https://oag.ca.gov/research (2024).
  24. NIDA drug supply program. , National Institute on Drug Abuse. At https://nida.nih.gov/research/research-data-measures-resources/nida-drug-supply-program (2024).
  25. Lee, H. L., et al. Frequent low-impact exposure to THC during adolescence causes persistent sexually dimorphic alterations in the response to viral infection in mice. Pharmacol Res. 199, 107049(2024).
  26. Mabou Tagne, A., et al. Persistent exposure to delta(9)-tetrahydrocannabinol during adolescence does not affect nociceptive responding in adult mice. J Pharmacol Exp Ther. 378 (3), 215-221 (2021).
  27. Martin, B. R., et al. molecular modeling evaluations of cannabinoid analogs. Pharmacol Biochem Behav. 40 (3), 471-478 (1991).
  28. Fride, E., Mechoulam, R. Pharmacological activity of the cannabinoid receptor agonist, anandamide, a brain constituent. Eur J Pharmacol. 231 (2), 313-314 (1993).
  29. Pertwee, R. G. The central neuropharmacology of psychotropic cannabinoids. Pharmacol Ther. 36 (2-3), 189-261 (1988).
  30. Torrens, A., et al. Comparative pharmacokinetics of delta(9)-tetrahydrocannabinol in adolescent and adult male mice. J Pharmacol Exp Ther. 374 (1), 151-160 (2020).
  31. Rubino, T., Parolaro, D. Long lasting consequences of cannabis exposure in adolescence. Mol Cell Endocrinol. 286 (1-2 Suppl 1), S108-S113 (2008).
  32. Schneider, M. Puberty as a highly vulnerable developmental period for the consequences of cannabis exposure. Addict Biol. 13 (2), 253-263 (2008).
  33. Chadwick, B., Miller, M. L., Hurd, Y. L. Cannabis use during adolescent development: Susceptibility to psychiatric illness. Front Psychiatry. 4, 129(2013).
  34. Renard, J., et al. Long-term consequences of adolescent cannabinoid exposure in adult psychopathology. Front Neurosci. 8, 361(2014).
  35. Albaugh, M. D., et al. Association of cannabis use during adolescence with neurodevelopment. JAMA Psychiatry. 78 (9), 1-11 (2021).
  36. Schweinsburg, A. D., Brown, S. A., Tapert, S. F. The influence of marijuana use on neurocognitive functioning in adolescents. Curr Drug Abuse Rev. 1 (1), 99-111 (2008).
  37. Rubino, T., Parolaro, D. The impact of exposure to cannabinoids in adolescence: Insights from animal models. Biol Psychiatry. 79 (7), 578-585 (2016).
  38. Lee, H. L., et al. Frequent low-dose delta(9)-tetrahydrocannabinol in adolescence disrupts microglia homeostasis and disables responses to microbial infection and social stress in young adulthood. Biol Psychiatry. 92 (11), 845-860 (2022).
  39. Lim, J., et al. Adolescent exposure to low-dose delta9-tetrahydrocannabinol depletes the ovarian reserve in female mice. Toxicol Sci. 193 (1), 31-47 (2023).
  40. Torrens, A., et al. Comparative pharmacokinetics of delta9-tetrahydrocannabinol in adolescent and adult female mice. Cannabis Cannabinoid Res. 9 (6), 1537-1542 (2024).
  41. Fride, E., et al. Behavioral methods in cannabinoid research. Methods Mol Med. 123, 269-290 (2006).
  42. Metna-Laurent, M., et al. Cannabinoid-induced tetrad in mice. Curr Protoc Neurosci. 80, 9.59.1-9.59.10 (2017).
  43. Monory, K., et al. Genetic dissection of behavioural and autonomic effects of delta(9)-tetrahydrocannabinol in mice. PLoS Biol. 5 (9), e269(2007).

Перепечатки и разрешения

Теги

Введение δ 9-тетрагидроканнабинола (ТГК) подросткам и взрослым мышам
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.