Method Article

Многоуровневая микродиссекция и функционально-структурное профилирование ветвей почечных артерий человека

DOI:

10.3791/68579

⸱

September 5th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Cardiovascular Sciences, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center; State Key Laboratory of Vascular Homeostasis and Remodeling, Peking University, 2Beijing Key Laboratory of Cardiovascular Receptors Research, 3Department of Cardiology and Institute of Vascular Medicine, Peking University Third Hospital, Peking University, 4Department of Urology, Peking University First Hospital; Institute of Urology, Peking University; Beijing Key Laboratory of Urogenital Diseases (Male) Molecular Diagnosis and Treatment Center, National Urological Cancer Center, 5Institute of Cardiovascular Diseases, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, 6NHC Key Laboratory of Cardiovascular Molecular Biology and Regulatory Peptides, Peking University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В данной статье представлен пошаговый протокол выделения и функциональной оценки почечных артериальных ветвей человека, облегчающий проведение доклинических исследований для фармацевтической разработки.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Почечно-сосудистая дисфункция играет решающую роль в патогенезе множественных клинических состояний, включая острое повреждение почек, ишемию почек и гипертензию, представляя значительные трудности в клиническом ведении и отрицательно влияя на исходы лечения пациентов. Выделение и функциональная характеристика внутрипочечных артерий имеют решающее значение для выяснения механизмов, лежащих в основе почечной сосудистой дисфункции, особенно связанной с повреждением почек, и для направления целенаправленной терапевтической разработки. Несмотря на клиническую значимость, стандартизированные подходы к выделению и функциональной оценке внутрипочечных артерий человека на разных уровнях ветвления остаются недостаточно разработанными. Этот протокол обеспечивает всестороннюю основу для систематической изоляции и мультимодальной оценки внутрипочечных артериальных ветвей, включая функциональные и структурные оценки как при физиологических, так и при патологических состояниях. Методология включает в себя три ключевых компонента: (1) точная анатомическая идентификация и микродиссекция внутрипочечных артерий из донорских почек, сопровождающаяся окрашиванием гематоксилин-эозином (H&E) для структурного подтверждения; (2) строгие процедуры нормализации в проволочной миографии для повышения воспроизводимости и надежности измерений; и (3) количественный анализ вазомоторных реакций с использованием методов прецизионной проволочной миографии. Нормализация основана на соотношении длины мышц и напряжения, при котором постепенное растяжение артериальных сегментов создает оптимальное напряжение в состоянии покоя для максимального перекрытия актина и миозина, тем самым вызывая пиковые сократительные реакции. При проволочной миографии изолированные сегменты сосудов подвешиваются между двумя параллельными проводами, что позволяет точно измерить сосудистое натяжение. Применяя строгие протоколы нормализации, этот метод позволяет воспроизводить и надежно количественно оценивать сосудистую реактивность при различных патофизиологических состояниях и фармакологических вмешательствах.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Почки являются жизненно важным органом, отвечающим за поддержание гомеостаза человека за счет выведения метаболических отходов, электролитного баланса и регуляции жидкости - функций, которые требуют исключительно высокого кровотока. В физиологических условиях почки получают примерно 25% от общего объема крови, перекачиваемой сердцем каждую минуту (сердечный выброс), что подчеркивает их существенную роль в системном кровотоке и критическую важность почечной перфузии для поддержания общего физиологическогобаланса. Почечная артериальная система точно регулирует эту массивную доставку крови для поддержания СКФ и ад....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол и примеры, описанные здесь, были рассмотрены и одобрены урологическим отделением Первой больницы Пекинского университета (одобрение No 2023yan500-002) и проведены в соответствии с Хельсинкской декларацией. Все участники предоставили письменное информированное согласие до начала участия.

1. Приготовление раствора

  1. Готовят раствор Кребса-Рингера (Кребса), содержащий 119,0 мМ NaCl, 4,7 мМ KCl, 2,5 мМ CaCl2, 1,0 мМ MgCl2, 25,0 мМ NaHCO3, 1,2 мМ KH2PO4 и 11,0 мМ D-глюкозы при pH 7,4.
  2. Приготовьте раствор соли с в....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В почке человека междолевая артерия проходит между почечными пирамидами вдоль соответствующей вены. Характеризуясь относительно толстой сосудистой стенкой и значительным охватом жировой ткани, эта артерия требует особенно тщательного вскрытия. Окружающая жировая ткань должна быть тщательно удалена, чтобы избежать приложения чрезмерной силы во время процедуры изоляции (Рисунок 1C).

Дугообразная артерия анатомически расположена в кортикомедуллярном переходе, образуя.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Стабильность почечной перфузии служит как важнейшей терапевтической мишенью, так и окном в гемодинамическую патофизиологию39,40. Мы представляем протокол иерархической изоляции и функциональной оценки почечных артерий человека из свежих образцов нефрэктомии, устраняя значительные пробелы в современных методологиях. В отличие от существующих подходов, ограниченных трупными образцами или животными моделями, наш метод позволяет наде.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить добровольцев за их участие в этом исследовании, а также поблагодарить хирургический персонал урологического отделения Первой больницы Пекинского университета за предоставление почечной ткани. Работа выполнена при поддержке Пекинского муниципального фонда естественных наук (F251013 Y. Z., 7232096 Y. L.); Национальный научный фонд Китая (82325004, 92168114 до Y. Z., 82170422 до Y. L.); Национальная ключевая программа исследований и разработок Китая (2021YFF0501401, 2018YFA0800501 к Y. Z., 2021YFF0501404 к Y. L., 2023YFC2415500 к L. Y.); Исследовательский проект Третьей больницы Пекинского университета в Го....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ацетилхолина хлоридSigma-Aldrich, Merck, Дармштадт, ГерманияА6625
Блюдо для культуры с черным дномDanish Myo Technology, Орхус, Дания300412
CaCl2Sangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA501330
D-глюкозаSangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA610219
Щипцы DumontDanish Myo Technology, Орхус, Дания300413
Ножницы для рассечения ГейдераDanish Myo Technology, Орхус, Дания400431
Направляющая проволокаDanish Myo Technology, Орхус, Дания400447Диаметр 40 & микро; m
KClSangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA100395
KH2PO4Sangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA100781
LabChart Professional версия 8.3 ADInstruments, Австралия-
MgCl2· 6H2OSangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA100288
Мультимиографическая система Danish Myo Technology, Орхус, Дания620 МИН.
NaClSangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA100241
NaHCO3Sangon Biotech Co., Ltd., Шанхай, КитайA100865
ФенилэфринSigma-Aldrich, Merck, Дармштадт, ГерманияП6126

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Molema, G., Aird, W. C. Vascular heterogeneity in the kidney. Semin Nephrol. 32 (2), 145-155 (2012).
  2. Jentzer, J. C., et al. Contemporary management of severe acute kidney injury and refractory cardiorenal syndrome: Jacc council perspectives.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Renal Arterial BranchesMicrodissection TechniqueWire MyographyVascular DysfunctionIntrarenal Artery IsolationVasomotor ResponsesMuscle Length TensionHematoxylin Eosin StainingPhenylephrine ContractionArterial Normalization

Related Articles