Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Влияние влажных ожоговых мазей на неоваскуляризацию раны и экзосомальный miR-31-5P в плазме крови у мышей с сахарным диабетом

623 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68649

⸱

26 августа 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описывается, как противоожоговая мазь, подвергшаяся воздействию влаги, способствует заживлению диабетической раны за счет динамической регуляции неоваскуляризации диабетической раны и экспрессии экзосомального mir-31-5p в плазме.

Аннотация

Мазь от ожогов, подвергшаяся воздействию влаги (MEBO) — это традиционная китайская медицина, используемая для лечения хронических диабетических ран; Однако основной механизм неясен. Последние данные свидетельствуют о роли экзосом и функциональных микроРНК в неоваскуляризации раны. В данной работе мы стремились изучить влияние MEBO на неоваскуляризацию раны и экспрессию экзосомального mir-31-5p (pExo-mir-31-5p) в плазме крови у мышей с диабетом. В общей сложности 120 мышей C57BL/6 были случайным образом разделены на контрольную группу без диабета (n = 24) и группу с диабетом, индуцированным стрептозотоцином (n = 96), которые были далее рандомизированы на группы контроля диабета, MEBO, бейфуксина и MHY1485 группы (n = 24 каждая). Было выделено пять групп с моделями резекции кожи на всю толщину, которые лечились физиологическим раствором, физиологическим раствором, MEBO, бейфуксином и MHY1485 соответственно. На 1, 7, 13 и 18 день скорость закрытия раны, плотность микрососудов и уровни экспрессии pExo-mir-31-5p, а также уровни мРНК VPS4a и Rab27a и белков в тканях раны анализировали с помощью ImageJ, окрашивания гематоксилин-эозином (HE), количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qPCR) и вестерн-блоттинга (WB) соответственно. Кроме того, были проанализированы корреляции между экспрессией VPS4a, белка Rab27a, pExo-mir-31-5p и плотностью микрососудов. Мы обнаружили, что MEBO способствует заживлению ран у мышей с диабетом (p < 0,050). Он усиливал неоваскуляризацию раны на ранних и средних стадиях заживления ран, но ингибировал ее на более поздней стадии (p < 0,050). MEBO повышал экспрессию мРНК и белка Vps4a и Rab27a в тканях раны, а также pExo-mir-31-5p на ранних и промежуточных стадиях заживления, одновременно подавляя их на более поздней стадии (p < 0,050). Кроме того, VPS4a, белок Rab27a, экспрессия pExo-mir-31-5p и плотность микрососудов положительно коррелировали у мышей, получавших MEBO (p < 0,050). В заключение следует отметить, что MEBO динамически регулирует неоваскуляризацию раны и экспрессию pExo-mir-31-5p у мышей с диабетом, обеспечивая новую теоретическую поддержку для его клинического применения.

Введение

Распространенность сахарного диабета у пожилых пациентов высока и ежегодно увеличивается. Заболевание связано с хроническими диабетическими ранами (ХБО), которые оказывают пагубное влияние на здоровье, функцию и общее качество жизни пациента1. Как правило, закрытие раны включает в себя четыре отдельные фазы: гемостаз, воспаление, пролиферация и реэпителизация2. Из них наиболее важной является фаза пролиферации. Во время ранней пролиферативной фазы клетки эндотелия капилляров пролиферируют и мигрируют в рану, прорастая новыми сосудами и образуя сложнуюсеть. Однако на более поздних стадиях заживления раны большая часть капиллярного просвета подвергается окклюзии, при этом меньшая часть переходит в мелкие артерии и вены. У пациентов с CDW потеря тканей, некроз и гангрена, а также различные уровни воспаления и гипергликемии нарушают динамический баланс между ангиогенезом и антиангиогенезом, задерживая заживление ран, особенно при нарушении ангиогенеза 4,5,6. Мазь от ожогов, подвергшаяся воздействию влаги (MEBO), является традиционной китайской медициной, используемой для лечения CDW, но ее механизм остается неясным. В последнее время многочисленные исследования показали, что микроРНК, каргованная экзосомами, может способствовать ангиогенезу и тем самым способствовать заживлению диабетических ран 7,8. Тем не менее, в немногих исследованиях изучалась связь между MEBO и микроРНК, переносимыми экзосомами. Таким образом, необходимо раскрыть механизм, с помощью которого MEBO стимулирует ангиогенез у CDW с точки зрения экзосом и функциональной микроРНК.

Экзосомы представляют собой сферические мембранные везикулы, выделяемые живыми клетками, размером 30-200 нм, плотностью 1,1-1,2 г/мл и содержащими маркерные белки, такие как CD81 и опухолевую восприимчивость 101 (TSG101)9. Производство и секреция экзосом подразделяются на эндосомальный сортировочный комплекс, необходимый для транспортных (ESCRT)-зависимых путей, и не-ESCRT-зависимых путей. Наиболее важными регуляторами в этих путях являются вакуолярная сортировка белка 4 гомолога a (VPS4a) и связанный с Ras белок Rab-27a (Rab27a)10,11,12. Vps4a действует как АТФаза, катализируя ESCRT-зависимый процесс ремоделирования мембраны, который регулирует размер экзосомы и скорость образования экзосом13,14. Rab27a является важной малой ГТФазой, которая регулирует стыковку мультивезикулярных телец с плазматической мембраной15. Секреция экзосом отрицательно регулируется мишенью рапамицина 1 (mTORC1)16 у млекопитающих, которая активируется путем конкурентного связывания с MHY1485 структурным доменом АТФ рапамицина17. В целом, MHY1485 может косвенно ингибировать синтез и секрецию экзосом. Экзосомы могут быть обнаружены практически во всех жидкостях организма. Экзосомы плазмы более продуктивны, чем экзосомы, полученные из других жидкостей организма18. Кроме того, экзосомы защищают нуклеиновые кислоты, которые они переносят, от деградации.

МикроРНК представляют собой небольшие некодирующие молекулы РНК, которые регулируют клеточную активность20. Экзосомы были в изобилии обнаружены в многочисленных микроРНК, имеющих решающее значение для усиления раневого ангиогенеза, в частности, mir-126, mir-125a и mir-31-5p. Предыдущее исследование показало, что экзосомы, полученные из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга mir-126 с гиперэкспрессией, способствуют пролиферации, миграции и образованию трубок эндотелиальных клеток пупочной вены человека in vitro путем переноса mir-12621. Другое исследование показало, что экзосомы, секретируемые мезенхимальными стволовыми клетками человека, происходящими из жировой ткани, переносят mir-125a в эндотелиальные клетки и способствуют ангиогенезу путем подавления ангиогенного ингибитора дельта-подобного 4 в ранах9. Yan et al. сообщили, что mir-31-5p, загруженный в молочные экзосомы, улучшает функции эндотелиальных клеток in vitro, способствует ангиогенезу и улучшает заживление диабетических ран in vivo22. Среди этих микроРНК mir-31-5p была единственной микроРНК, которая была значительно снижена в ранах мышей с диабетом по сравнению с таковой в обычных ранах мышей22.

MEBO представляет собой маслянистую мазь, которую можно использовать для лечения рефрактерных ран, таких как CDW 23,24. Тем не менее, механизм MEBO, способствующий заживлению ран, не был выяснен. Предыдущие исследования показали, что MEBO способствует неоваскуляризации раны за счет повышения экспрессии фактора роста эндотелия сосудов у крыс с диабетом25. Тем не менее, лишь в нескольких исследованиях этот вопрос рассматривался с точки зрения микроРНК, переносимых экзосомами. В этом исследовании, чтобы изучить влияние MEBO на CDW, мы индуцировали модель раны полной толщины у мышей с диабетом с использованием стрептозотоцина (STZ) и диеты с высоким содержанием жиров. Мы показали, что MEBO значительно ускоряет заживление ран у мышей с диабетом. Кроме того, мы изучили влияние MEBO на плотность микрососудов, уровни экспрессии pExo-mir-31-5p вместе с мРНК VPS4a и Rab27a и белком в тканях раны. Таким образом, мы предположили, что MEBO способствует заживлению ран, регулируя pExo-mir-31-5p для регуляции ангиогенеза ран у мышей с диабетом. Схематический обзор плана исследования представлен на рисунке 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все протоколы экспериментов на животных были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Юцзянского медицинского университета для национальностей, Байсэ, Китай (2018051501). Специфические свободные от патогенов (SPF) самцы мышей C57BL/6 (в возрасте 7 недель) были размещены в Центре лабораторных животных SPF Медицинского колледжа для национальностей Юцзяна и питались обычной пищей или пищей с высоким содержанием жиров и чистой водой. На протяжении всего исследования температура в помещении для кормления животных поддерживалась на уровне от 23 °C до 25 °C, влажность составляла от 40% до 60%, а цикл света/темноты составлял 12 часов. Уход за животными осуществлялся в соответствии с рекомендациями Национальных институтов здравоохранения США и Китайского национального института здравоохранения (Пекин, Китай). Все оперативные вмешательства выполнялись под наркозом пентобарбиталом натрия (0,3%, 50 мг/кг) по стандартизированному протоколу, установленному в нашей лаборатории. Были приложены все усилия для сокращения количества используемых животных и минимизации дискомфорта для животных. Все разделы этого отчета соответствуют Руководству ARRIVE, касающемуся отчетности об исследованиях на животных.

Моделирование и лечение раны мыши
В общей сложности 120 мышей были случайным образом распределены в контрольную группу без диабета (NDB-CTR; n = 24) или диабета (n = 96). Чтобы смоделировать сахарный диабет 2 типа, мышей в группе диабетиков кормили пищей с высоким содержанием жиров и рафинированного сахара в течение 4 недель, а затем внутрибрюшинно вводили STZ (100 мг/кг) один раз в день в течение 2 дней подряд после голодания в течение 16 часов. Уровень глюкозы в крови натощак определяли на 5-й и 6-й день после введения СТЗ. Мыши с уровнем глюкозы в крови натощак более 16,7 ммоль/л в двух случаях и с такими симптомами, как полифагия, полидипсия, полиурия и потеря веса, считались успешными моделями диабета26. Через 1 неделю спинной волос сбривали, и после внутрибрюшинного введения пентобарбитала натрия (0,3%, 50 мг/кг) на спине каждой мыши образовывали круглую кожную рану полной толщины (диаметр = 15 мм). Мыши в группе диабетиков были случайным образом распределены в группы MEBO, BFX (бейфуксин), DB-CTR (диабетический контроль) или MHY1485 (MHY). Мышей в группах MEBO и BFX обрабатывали MEBO (0,2 г/см2) и гелем BFX (0,2 г/см2), наносимыми на рану один раз в сутки соответственно. Гель BFX, общее название которого — гиль на основе фактора роста фибробластов крупного рогатого скота, является препаратом местного действия, используемым для лечения хронических ран27. Мышей в группах NDB-CTR, DB-CTR и MHY лечили физиологическим раствором. В группе MHY также получали MHY1485 (10 мг/кг, ip) в течение 2 дней подряд. Мышам с диабетом подкожно вводили инсулин в дозировке 2-4 МЕ/кг один раз в сутки для контроля уровня глюкозы в крови.

Сбор образцов
На 1, 7, 13 и 18 дни шесть мышей в каждой группе были случайным образом отобраны для эвтаназии путем вывиха шейки матки, а образцы кольцевидных эпидермальных тканей, включая рану, были взяты на расстоянии 0,5 см от края раны стерильными тканевыми ножницами. Затем раневые ткани собирали для окрашивания HE, количественного ПЦР-анализа и анализов WB. Образцы крови были собраны у мышей в группах DB-CTR и MEBO с использованием ретроорбитального метода под натриевой пентобарбитальной анестезией. Образцы крови смешивали с гепарином в пробирках с антикоагулянтами и центрифугировали при 3000 x g в течение 15 мин для восстановления надосадочной жидкости плазмы. Все образцы хранились при температуре -80 °C. Для расчета коэффициента закрытия раны с помощью цифровой камеры были сделаны снимки заживления ран в определенный момент времени и на равном расстоянии с градуированной шкалой сбоку. Площадь раны измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ. Коэффициент закрытия раны рассчитывали следующим образом:

коэффициент закрытия раны (%) = [W1-Wn] / W1 x 100%

где W1 и Wn относятся к раневым участкам на 1-й и n день соответственно.

Гистопатологический анализ
Окрашивание методом HE проводилось для динамического наблюдения за патологическим заживлением ран. После фиксации 4% раствором параформальдегида в течение 16 ч ткани раны обезвоживали, погружали в парафин, а затем разрезали на срезы размером 3 мкм. Окрашивание HE проводилось на предметных стеклах тканей. Для изучения плотности микрососудов раневых тканей были получены изображения предметных стекол с помощью оптического микроскопа. Чтобы количественно оценить плотность микрососудов каждого образца, мы выбрали область с самой высокой плотностью капилляров под 10-кратным микроскопом, затем отобрали и сфотографировали три неперекрывающиеся области под 20-кратным микроскопом. Плотность микрососудов рассчитывали и усредняли с помощью ImageJ.

Выделение и характеристика экзосом плазмы
Ультрацентрифугирование проводили для выделения экзосом плазмы по опубликованному протоколу с незначительными изменениями28. Вкратце, 2 мл плазмы центрифугировали при 2000 x g при 4 °C в течение 30 мин. Надосадочную жидкость снова центрифугировали при 10 000 x g при 4 °C в течение 45 мин для удаления более крупных везикул. Надосадочную жидкость фильтровали через фильтрующую мембрану толщиной 0,45 мкм, и собирали фильтрат. Затем фильтрат центрифугировали при 100 000 x g при 4 °C в течение 70 мин. После удаления надосадочной жидкости гранулу повторно суспендировали с 10 мл предварительно охлажденного 1x PBS и центрифугировали при 4 °C, 100 000 x g, в течение 70 минут. Надосадочную жидкость удаляли, а гранулу повторно суспендировали со 150 мкл предварительно охлажденного 1x PBS и хранили при -80 °C. Для подтверждения собранных выше экзосом плазмы мы использовали просвечивающую электронную микроскопию (ПЭМ) для определения морфологии экзосом, систему нанопроточной цитометрии для анализа размера и концентрации экзосом, а WB — для определения уровней экспрессии экзосомных маркеров CD81 и TSG101.

Экстракция РНК, обратная транскрибация (ОТ) и количественная ПЦР
КПЦР проводили для количественной оценки уровней экспрессии мРНК Vps4a, Rab27a и pExo-mir-31-5p. Раневые ткани собирали для выделения общей РНК с помощью реагента для экстракции РНК. Общая концентрация РНК в пределах 400-700 нг/мкл была признана приемлемой. Образцы РНК были обратно транскрибированы в кДНК с использованием обратной транскриптазы с dsDNазой в соответствии с инструкциями производителя. КПЦР проводили с использованием SYBR Green qPCR Mix (No ROX). Что касается mir-31-5p, то РНК из экзосом плазмы экстрагировали с помощью мини-набора, обратно-транскрибировали с помощью набора для синтеза кДНК First Strand и амплифицировали с помощью SYBR Green qPCR Master Mix. Экспрессию мРНК и микроРНК анализировали методом 2-ΔΔCt относительно β-актина и cel-mir-39 соответственно. Используемые грунтовки представлены в таблице 1.

Вестерн-блот
С помощью анализа WB определяли уровни экспрессии белков Vps4a и Rab27a, а также уровни экзосомных маркеров CD81 и TSG101. Уровни общего белка в раневых тканях и экзосомах плазмы были экстрагированы с помощью буфера для лизиса RIPA, а концентрация белка определялась с помощью набора для анализа белка бицинхониновой кислоты. В общей сложности 50 мкг белка отделяли додецилсульфатом-полиакриламидом натрия. После блоттинга на мембраны из поливинилиденфторида мембраны блокировали бычьим сывороточным альбумином, затем инкубировали при 4 °C в течение ночи с антителами против Vps4a (1:3000), Rab27a (1:1000), глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) (1:5000), CD81 (1:3000), TSG101 (1:3000), затем инкубировали со вторичными антителами, конъюгированной против кроличьей пероксидазы IgG (1:3000), при 37 °C в течение 1 ч. Мембраны визуализировали с помощью набора с усиленной хемилюминесценцией.

Статистический анализ
Все данные, представленные в данном исследовании, были проанализированы на статистическую значимость с помощью программного обеспечения SPSS. Все результаты, полученные в этих анализах, были визуализированы с помощью программного обеспечения GraphPad Prism. Различия между двумя группами были изучены с помощью независимой выборки t-критерия. Для сравнения нескольких групп использовался односторонний дисперсионный анализ для однородных дисперсионных данных, тогда как тест Уэлча применялся к гетерогенным дисперсионным данным. Кроме того, мы использовали критерий наименее значимой разницы для попарного сравнения данных равной дисперсии и тест Т2 Тамхана для данных о неравной дисперсии. Количественные данные представлены в виде среднего ± стандартного отклонения. Корреляции были проанализированы с помощью корреляционного анализа Спирмена для ненормально распределенных переменных и были описаны в виде коэффициентов корреляции и 95% доверительных интервалов. P < 0,050 считался статистически значимым. Все эксперименты повторялись не менее трех раз.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

MEBO ускоряет заживление ран у мышей с диабетом
Чтобы подтвердить эффективность MEBO при диабетических ранах, мы создали модель диабетической раны и сделали фотографии на 1, 7, 13 и 18 день. Раны в каждой группе заживали постепенно с течением времени (Рисунок 2А). Раны в группе NDB-CTR полностью зажили к 18-му дню. Раны в группе MEBO заживали быстрее всего среди диабетических ран, образуя несколько розовых грануляционных частиц на 7-й день, затем увеличивая большую площад...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

CDW, осложнение диабета, могут приводить к значительной смертности и инвалидности и часто связаны с сосудистыми расстройствами29. MEBO эффективен при лечении CDW; Однако его основной механизмнеясен30. Поэтому мы поставили перед собой цель изучить его с точки зрения экзосом и функциональных микроРНК. В этом исследовании мы обнаружили, что скорость закрытия ран и плотность микрососудов в группе MEBO были самыми высокими во все моменты времени...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая в рамках гранта [номер 81960875], Фондом естественных наук Гуанси в рамках гранта [номер 2023GXNSFDA026008], проектом по разработке и применению соответствующих технологий в области медицины и здравоохранения в Гуанси в рамках гранта [номер S2022134], самофинансируемым исследовательским проектом Комиссии по здравоохранению западного района Гуанси-Чжуанский автономный район в рамках гранта [номер 20210234] и самофинансируемым Бюро традиционной китайской медицины Гуанси научно-исследовательский проект по гранту [номер GZZC2020255].

Вклад автора:
Юаньюань Сюй: Написание - оригинальный проект, программное обеспечение, методология, исследование, формальный анализ, концептуализация. Цзяньчан Сюй: ресурсы, методология, исследование. Анбанг Чжоу: Расследование, Формальный анализ. Нимиао Цэнь: Визуализация, Лина Хуан: Супервизия. Бяолян Ву: Написание-рецензирование и редактирование, Ресурсы, Управление проектами, Методология, Привлечение финансирования, Курирование данных, Концептуализация.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1&раз; ПБС Solarbio (Пекин, Китай)#P1020Буферное решение
4% раствор параформальдегидаSolarbio (Пекин, Китай)#P1110Фиксация тканей
конъюгат антикроличьей IgG-пероксидазы Сходство#S0001Вторичные антитела
Бейфуксин гельEssexbio (Чжухай, Китай)#042404A06Мазь для лечения хронических ран
Антитела к CD81Антитела к сигнальному пути#41779Первичное антитело
Набор для усиленной хемилюминесценции Epizyme(Китай)#SQ101Набор для хемилюминесценции для белковой ленты
Антитела к глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе (GAPDH)Сходство#AF7021Первичное антитело
ГрафПад Призмаhttps://www.graphpad.com/prism/Визуализация
ИзображениеJ https://imagej.net/ij/Измерьте площадь раны 
Набор для анализа белка на бицинхониновую кислоту быстрого приготовления (BCA) Epizyme(Китай)#ZJ102Определение концентрации белка
Система LightCycler96РошОборудование для количественной ПЦР
MHY1485MedChemExpress (США)#326914-06-1Активатор мишени рапамицинового комплекса 1 (mTORC1) у млекопитающих 
Комплект miRNeasy Mini Tiangen (Китай)#217004Экстракция РНК (микроРНК)
Мазь от ожогов, подвергшаяся воздействию влагиMebo (Шаньтоу, Китай)#2403103BМазь для лечения хронических ран
MonAmp SYBR Зеленая смесь для количественной ПЦР (без ROX) Монада (Китай)#MQ10101Sнабор для количественной ПЦР (мРНК)
Универсальный микс MonScript RTIII с dsDNase Монада (Китай)#MR05101SНабор для обратной транскрипции (мРНК)
Система нанопроточной цитометрииN30E (Китай)Оборудование для анализа размера и концентрации экзосом
оптический микроскопOlympus (Токио, Япония)Наблюдение за патоморфологией тканей
физиологический растворКелунь (провинция Сычуань, Китай)#L24041709Физиологический раствор
поливинилиденфторидные мембраныMillipore(США)#IPVH00010Западная блоттинговая мембрана
ГрунтовкиGeneray Biotech Co., Ltd. (Шанхай, Китай)
Антитела к Rab27aТехнология клеточной сигнализации#69295Первичное антитело
RevertAid Набор для синтеза кДНК на первой цепиThermo Fisher (США)#K1622Набор для обратного транскрибирования (микроРНК)
Буфер для лизиса RIPASolarbio (Пекин, Китай)#R0010Экстракция общего белка
Додецилсульфат натрия– полиакриламид Epizyme(Китай)#PG222Буфер для электрофореза
Пентобарбитал натрияMerck (Шанхай, Китай)#P3761Анестезирующий
Специфические безпатогенные самцы мышей C57BL/6Guangdong Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd (Гуандун, Китай)Подопытные животные
СПССhttps://www.ibm.com/spssСтатистический анализ
стрептозотоцинSolarbio (Пекин, Китай)#S8050Индуцирование диабетической мышиной модели 
SYBR Green qPCR Master Mix Roche (Швейцария)#4943914001-SRнабор для количественной ПЦР (микроРНК)
Просвечивающая электронная микроскопияHitachi (Япония)ХТ-7700Аппаратура для определения морфологии экзосом
ТРИЗОЛ Invitrogen (США)#15596026CNЭкстракция РНК (мРНК)
Антитело TSG101Абкам# ab125011Первичное антитело
Антитела Vps4aАбкам# ab197896Первичное антитело

Ссылки

  1. Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
  2. David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
  3. Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  6. Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
  8. Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
  9. Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
  10. Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
  11. Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
  12. Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
  13. Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
  14. Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
  15. Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
  16. Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
  17. Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
  18. Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
  19. Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
  20. Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
  21. Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
  22. Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
  23. Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
  24. Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
  25. Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
  26. Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
  27. Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
  28. Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
  29. Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
  30. Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
  31. Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
  32. Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
  33. Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
  34. Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
  35. Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
  36. Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
  37. Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
  38. Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
  39. Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
  40. Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
  41. Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
  42. Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
  43. Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
  44. Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
  45. Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
  46. Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
  47. Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
  48. Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
  49. Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
  50. Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
  51. Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Rab27a
Видео скоро будет доступно
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.