Методическая статья

Точная визуализация рецепторов инсулина А и В в мозге мышей с помощью гибридизационного анализа РНК in situ

843 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68677

⸱

15 июля 2025 г.

 ,  ,  ,  , 
1Diabetes Section/Laboratory of Clinical Investigation, National Institute on Aging, National Institutes of Health

В этой статье

Краткое содержание

Мы разработали дуплексный гибридизационный анализ in situ для картирования изоформ рецепторов инсулина IR-A и IR-B в сосудистом сплетении мыши, преодолевая ограничения традиционных методов. Этот подход с высоким разрешением выявляет изоформ-специфичную экспрессию, предлагая новое понимание передачи сигналов инсулина в мозге и потенциальных изоформ-таргетных методов лечения неврологических расстройств.

Аннотация

Рецепторы инсулина (ИР) широко экспрессируются во всех тканях и во всех типах клеток. Он существует в двух функционально различных изоформах — IR-A и IR-B — отличающихся 12 аминокислотами из-за альтернативного сплайсинга экзона 11. Эти изоформы демонстрируют ткане- и клеточно-специфичные паттерны экспрессии, при этом их относительная распространенность меняется на протяжении развития, старения и болезни. Из-за их высокого сходства последовательностей дифференциация между IR-A и IR-B с использованием традиционных иммунологических методов была сложной задачей. В данной статье мы описываем новый метод дуплексной гибридизации in situ (ISH), который позволяет визуализировать экспрессию IR-A и IR-B в тканях. Используя этот подход, мы впервые демонстрируем, что, хотя обе изоформы экспрессируются в сосудистом сплетении мыши, преобладает IR-A. Этот метод является мощным инструментом для исследования пространственного распределения изоформ рецепторов инсулина in situ в различных тканях. В то время как кПЦР в реальном времени может обнаруживать IR-A и IR-B транскрипты в моноклеточных культурах in vitro , ей не хватает возможности пространственной локализации в сложных тканях, что подчеркивает необходимость и полезность метода Duplex ISH.

Введение

Инсулиновый рецептор (ИР) представляет собой однопроходный трансмембранный ферментативный рецептор, который опосредует различные физиологические эффекты инсулина. Он функционирует как димерный белок, при этом каждый мономер состоит из двух пептидных цепей, соединенных дисульфидной связью: внеклеточной α-субъединицы, которая содержит лиганд-связывающий домен, и трансмембранной β-субъединицы, внутриклеточная последовательность которой обладаетвнутренней тирозинкиназной активностью. Посредством альтернативного сплайсинга экзона 11 транскрипция гена IR приводит к появлению двух вариантов мРНК IR. В IR-A отсутствует экзон 11, в то время как в IR-B он сохраняется. Следовательно, IR-A и IR-B различаются последовательностью из 12 аминокислот вблизи С-конца α-субъединицы, что приводит к отчетливому связыванию факторов роста помимо зрелого инсулина и различным нисходящим сигнальным свойствам. В то время как оба варианта демонстрируют сходное сродство к инсулину, IR-A имеет более высокое сродство к инсулиноподобному фактору роста-II (ИФР-II) и проинсулину по сравнению с IR-B. Паттерны экспрессии IR-A и IR-B варьируют в зависимости от типа ткани и клеток, а также от состояния заболевания2.

Их дифференциальная экспрессия в тканях и заболеваниях подчеркивает их уникальный вклад в физиологию и патологию. Сосудистое сплетение (ЦП), специализированная структура, которая вырабатывает спинномозговую жидкость (СМЖ) и является частью гемато-ликворного барьера, играет важнейшую роль в транспортировке питательных веществ, выведении отходов и нейропротекции, особенно во время воспаления. Обе изоформы IR экспрессируются в CP, где они, вероятно, регулируют объем и состав ликвора. IR-A, благодаря высокоаффинному связыванию с IGF-II, вероятно, способствует клеточной пролиферации и восстановлению тканей в эпителии CP. IR-B, с другой стороны, участвует в транспортировке инсулина через гемато-ликворный барьер, поддерживая доступность инсулина в мозге для астроцитов, нейронов, глии и гомеостаза глюкозы 3,4.

Преддиабетические уровни ИР были связаны с повышенным уровнем тау-белка в спинномозговой жидкости у бессимптомных лиц с генетическим риском развития болезни Альцгеймера (БА)5, а изменения в соотношении IR-A/IR-B были связаны с резистентностью к инсулину, старением и повышением пролиферативной активности-факторов, которые могут способствовать развитию рака и других патологий6. Идентификация изоформ-специфичных паттернов экспрессии IR-A и IR-B представляет собой важный шаг на пути к разработке новых терапевтических стратегий для сложных расстройств центральной нервной системы. Однако современные подходы, такие как иммуноокрашивание и кПЦР, ограничены: не все белки могут быть надежно иммуномечены из-за отсутствия валидированных антител, и, хотя кПЦР обладает высокой специфичностью, ей не хватает пространственного разрешения.

Чтобы преодолеть эти ограничения, мы использовали Duplex in situ гибридизацию (ISH) — передовую технологию обнаружения РНК, основанную на платформе RNAscope BaseScope. В этом анализе используется уникальная конструкция зонда с двойным Z-покрытием, которая требует тандемного связывания с целевой РНК, что обеспечивает высокую специфичность и чувствительность даже для транскриптов с низким содержанием. Флуоресцентный или хромогенный сигнал усиливается за счет нескольких событий связывания зонда, улучшая обнаружение и снижая фон7. В отличие от стандартного РНК-скопа, этот анализ оптимизирован для обнаружения коротких последовательностей РНК (50-300 оснований), что делает его особенно подходящим для идентификации альтернативных событий сплайсинга, однонуклеотидных вариантов и редких транскриптов в сложных тканях, таких как мозг8.

Этот анализ визуализирует цели одновременно в виде отчетливых зеленых (C1) и красных (C2) хромогенных сигналов в светлом поле. Он обеспечивает успех при использовании тканей, зафиксированных в 4% параформальдегиде (PFA) или 10% нейтральном буферизованном формалине (NBF) и срезанных в 5-15 μm (замороженных/FFPE), содержащих РНК с низким и высоким содержанием. Из-за чувствительности к деградации РНК, чрезмерной фиксации и ошибкам зонда нам необходимо оптимизировать предварительную обработку, конструкцию зонда и контроль для максимальной специфичности и минимизации фона. В данной работе мы применили этот дуплексный анализ ISH для характеристики паттернов экспрессии IR-A и IR-B в мышином CP, что позволило по-новому взглянуть на пространственную биологию изоформ IR и их возможную роль в здоровье мозга и заболеваниях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры на животных проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Национальным институтом по проблемам старения (NIA), который полностью аккредитован Американской ассоциацией по аккредитации ухода за лабораторными животными (AAALAC). Протоколы были рассмотрены и одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Программы внутренних исследований NIA (IRP/NIA). Мыши содержались в помещении с регулируемой температурой в течение 12-часового цикла свет/темнота, с ограниченным доступом к воде и стандартному корму, если не указано иное. Самцы мышей C57BL/6J были получены из лаборатории Джексона и использовались для экспериментов в возрасте 3–4 месяцев.

1. Исправлена подготовка замороженных образцов

  1. Перфузируйте мышь свежеприготовленным 4% PFA в 1x PBS и поместите весь мозг в свежеприготовленный 4% PFA на 17–24 часа при 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ткань помещают в 4% PFA (по 10 мл на каждый мозг) не более чем на 24 ч.
  2. Погрузите салфетку в 10% (10 мл) сахарозы в 1x PBS при температуре 4 °C, пока ткань не опустится на дно контейнера. Затем последовательно перенесите ткань на 20% сахарозы и, наконец, на 30% сахарозы, позволяя ей опускаться на каждом этапе.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время, необходимое для погружения ткани, зависит от типа и размера ткани. Для мозговой ткани требуется примерно 18 часов.
  3. Заморозьте ткань в среде для наращивания ОКТ и храните тканевые блоки в герметичном контейнере при температуре -80 °C.
  4. Коронально разрезают фиксированные формальдегидом замороженные ткани мозга на срезы размером 10 мкм и хранят при температуре −80 °C до использования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Закрепите срезы на положительно заряженных предметных стеклах микроскопа; Другие типы предметных стекол могут привести к потере тканей. Если предметные стекла не используются сразу, храните их при температуре -80 °C до 3 месяцев.

2. Предварительная обработка среза перед анализом дуплексного детектирования

  1. В день анализа промойте предметные стекла в 1x PBS в течение 5 минут, осторожно перемещая штатив для слайдов вверх и вниз, чтобы удалить остатки ОКТ.
  2. Выпекать горки при температуре 60 °C в течение 30 минут.
  3. Предварительно зафиксировать предметные стекла в предварительно охлажденном 4% PFA в 1x PBS в течение 15 минут при температуре 4 °C.
  4. Последовательно переносите слайды через серию EtOH: 50% EtOH в течение 5 мин при RT, 70% EtOH в течение 5 мин при RT, 100% EtOH в течение 5 мин при RT, снова 100% EtOH в течение 5 мин при RT.
  5. Сухие слайды на воздухе в течение 5 минут при температуре RT.
  6. Нанесите по 2–4 капли перекиси водорода на каждую секцию и выдерживайте в течение 10 минут при RT. Промойте один раз дистиллированной водой.
  7. Приготовьте 700 мл свежего раствора 1x Target Retrieval в стакане. Накройте фольгой и доведите до постоянного кипения (99–100 °C).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не кипятите более 30 минут перед использованием. Тем временем разогрейте духовку (см. Таблицу материалов) до 40 °C.
  8. Осторожно погрузите решетку для слайдов в кипящий раствор Target Retrieval и выдерживайте в течение 5 минут. Поддерживайте температуру в диапазоне 98–102 °C и внимательно следите за ситуацией.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время кипячения может потребоваться скорректировать (5–15 минут) в зависимости от типа ткани.
  9. Сразу же переложите горячую решетку в посуду с дистиллированной водой, перемещая решетку вверх и вниз в 3–5 раз. Повторите со свежей дистиллированной водой.
  10. Промойте горки в свежем 100% EtOH, перемещая их вверх и вниз в 3–5 раз. Сухие слайды на воздухе.
  11. С помощью гидрофобной барьерной ручки нарисуйте вокруг каждого участка ткани 2–3 раза. Дайте барьеру полностью высохнуть при RT.
  12. Поместите слайды в лоток для пакетных слайдов. Добавьте протеазу (см. Таблицу материалов) в каждый участок, убедившись, что ткань полностью покрыта. Выдерживать в духовке при температуре 40 °C в течение 15 минут.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время инкубации протеазы может потребовать корректировки в зависимости от типа ткани и целевого гена.
  13. Выньте выдвижной противень из духовки и поместите его в дистиллированную воду. Аккуратно промойте предметные стекла, перемещая их вверх и вниз в течение 2 минут, повторив этот шаг 2 раза со свежей дистиллированной водой.

3. Дуплексный анализ обнаружения

  1. Зонды
    1. Подготовьте два дополнительных раздела для положительных и отрицательных контрольных пробников.
    2. Выберите контрольные пробники с тем же количеством пар ZZ, что и целевой пробник. Для 1 пары ZZ используйте положительный контроль и отрицательный контроль (см. Таблицу материалов).
    3. Перед использованием уравновесьте зонды при температуре 40 °C в течение 10 минут и доведите реагенты AMP1-12 до состояния РТ.
  2. Гибридизация зондов
    1. Кратковременно раскрутите щуп C2 и перемешайте в соотношении 1:50 с помощью щупа C1. Добавьте достаточное количество щупа (100–200 мкл) для полного покрытия каждой секции и выдержите предметные стекла в духовке при температуре 40 °C в течение 2 часов. Промойте предметные стекла в течение 2 x 2 минут в буфере для стирки 1x RT.
    2. Приложение Base Scope Duplex AMP1
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP1 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 30 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    3. Приложение Base Scope Duplex AMP2
      1. Удалите излишки буфера для стирки со слайдов и добавьте AMP2 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 30 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    4. Приложение Base Scope Duplex AMP3
      1. Удалите излишки буфера для стирки со слайдов и добавьте AMP3 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Не превышайте 15 минут инкубации.
    5. Приложение Base Scope Duplex AMP4
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP4 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    6. Приложение Base Scope Duplex AMP5
      1. Удалите излишки буфера для стирки со слайдов и добавьте AMP5 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 30 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    7. Применение Base Scope Duplex AMP6
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP6 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Что касается AMP3, не превышайте 15 минут инкубации.
    8. Применение Base Scope Duplex AMP7
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP7 (100–200 мкл), чтобы полностью покрыть каждую секцию, и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут.
        1. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
          ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубировать с AMP7 при комнатной температуре (RT) в течение 30 минут.
    9. Применение Base Scope Duplex AMP8
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP8 (100–200 мкл), чтобы полностью покрыть каждую секцию, и выдерживайте при комнатной температуре в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубируйте с помощью инкубации AMP8 в течение 15 минут при RT.
    10. Обнаружение красного сигнала (C2)
      1. Кратковременно убавьте скорость Fast Red-B и смешайте с Fast Red-A в соотношении 1:60.
      2. Нанесите на каждую секцию (100–200 мкл), накройте лоток крышкой и выдерживайте в течение 10 минут при RT в темноте.
      3. Простирайте 2x в 1x буфер для стирки.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте смешанный раствор Fast Red в течение 5 минут. Беречь от света (солнечных лучей или ультрафиолета).
    11. Применение Base Scope Duplex AMP9
      1. Удалите излишки буфера для стирки со слайдов и добавьте AMP9 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    12. Применение базового эндоскопа Duplex AMP10
      1. Удалите излишки буфера для стирки со слайдов и добавьте AMP10 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Верните в духовку и выдерживайте при температуре 40 °C в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
    13. Применение Base Scope Duplex AMP11
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP11 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Инкубировать при RT в течение 30 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубировать с AMP11 при RT в течение 30 минут.
    14. Применение Base Scope Duplex AMP12
      1. Удалите излишки буфера для стирки со стекол и добавьте AMP12 (100–200 μл), чтобы полностью покрыть каждую секцию. Инкубировать при RT в течение 15 минут.
      2. Стирайте 2 x 2 мин в 1x Wash Buffer.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Не превышайте 15 минут инкубации.
    15. Обнаружение зеленого сигнала (C1)
      1. Кратковременно убавьте трубку Fast Green-B и смешайте с Fast Green-A в соотношении 1:50.
      2. Нанесите раствор GREEN на каждую секцию (100–200 μл), накройте лоток крышкой и инкубируйте в течение 10 минут при RT.
      3. Постирайте в течение 5 минут в 1x Wash Buffer и кратко промойте в дистиллированной воде.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте смешанный раствор Fast Green в течение 5 минут. Беречь от света. Соотношение зеленых B к A составляет 1:50. Как красные, так и зеленые субстраты чувствительны к спирту. Не используйте реагенты, содержащие спирт.

4. Контрокрашивание

  1. Погрузите предметные стекла в 50% раствор для окрашивания гематоксилина на 1 минуту при RT, пока срезы не станут фиолетовыми.
  2. Промойте в водопроводной воде 3–5 раз, двигаясь вверх и вниз. Повторите то же самое со свежей водой из-под крана, пока фон не прояснится, но участки останутся фиолетовыми.
  3. Опустите горки в воду с содержанием аммиака 0,02% вверх и вниз 3 раза, пока секции не станут синими.
  4. Еще раз промойте в водопроводной воде 3–5 раз.

5. Монтаж

  1. Полностью высушите в сухой духовке при температуре 60 °C в течение ~15 минут.
  2. Окуните предметные стекла в свежий ксилол.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку монтажная среда является довольно вязкой, кратковременное погружение в ксилол перед монтажом способствует более плавному распределению среды по участку ткани и уменьшает образование пузырьков воздуха под покровным стеклом.
  3. Нанесите монтажный носитель (см. Таблицу материалов) на ползунок и покровное стекло, не допуская образования пузырей.
  4. Сушите горки на воздухе не менее 5 минут.

6. Оцените образцы

  1. Визуализируйте срезы под стандартным светлопольным микроскопом с 20-кратным или 40-кратным увеличением. (Рисунок 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Положительные контрольные группы должны показывать точки препинания в ячейках. Отрицательные контролы допустимы, если на 20 ячеек приходится не более 1 точки при 20-кратном увеличении.

7. Подсчет очков (по желанию)

  1. Используйте программное обеспечение для анализа изображений (например, Halo или QuPath) для количественного определения количества точек РНК на клетку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Инсулиновый рецептор (ИР) представляет собой трансмембранный рецептор тирозинкиназы, состоящий из двух внеклеточных α-субъединиц и двух трансмембранных β-субъединиц, образующих функциональный гетеротетрамер. α-субъединицы опосредуют связывание инсулина, в то время как β-субъединицы обладают внутренней тирозинкиназной активностью, которая инициирует нисходящую передачу сигналов. Альтернативный сплайсинг мРНК IR экзона 11 генерирует две изоформы IR, IR-A и IR-B. Таким образом, IR-B включает...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В мозге экспрессия рецепторов инсулина (ИР) неоднородна, с высокой плотностью, наблюдаемой в таких областях, как обонятельная луковица, гипоталамус, гиппокамп и сосудистое сплетение10. Всесторонняя характеристика паттернов экспрессии вариантов в конкретных областях мозга и типах клеток предоставила бы важную информацию, позволяющую нам изучить и понять специфическую роль инсулина и передачи сигналов ИФР-II в синаптической пластичности, обучениии ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Эта работа была поддержана Программой внутренних исследований/Национальным институтом по проблемам старения/Национальными институтами здравоохранения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Аммонийная водаЭлектронный микроскоп Наука 26754-4А
Набор реагентов BaseScope Dulplex DetectionБиография ACD323810
Датчик положительного контроля BaseScope Dulplex Duplex - мышь (мм)-C1-PPIB-1ZZ/C2-Polr2a-1ZZБиография ACD700121
BaseScope Dulplex Duplex Positive Control Probe-C1-DapB-1ZZ/C2-DapB-1ZZБиография ACD700141
Гематоксилин I ГиллаСигма-ОлдричGHS132-1L
Козье антитело против кролика IgG (H+L) с высокой степенью перекрестной адсорбции, Alexa Fluor Plus 488ИнвитрогенА32731
HybEZ ДУХОВКА, Противень, Решетка и Поддон для мытья посудыБиография ACD321721, 310012, 321716, 321717
Гидрофобная барьерная ручка ImmEdgeЛаборатория «Вектор»Н-4000
Зонды изоформы INSR A и B: BA-Mm-Insr-tv1-E10E11, BA-Mm-Insr-tv2-E11E12-C2Биография ACD717411, 717421-С2
Антитела к рецепторам инсулинаКлеточная сигнализация 23413
РНК-скоп 10x Target RetrivalБиография ACD322000
РНК-скоп перекись водорода, протеаза плюсБиография ACD322381
Цитрат физиологического раствора и натрия (ССК) 20xНаучный центр ФишераБП1325-1
Горки SuperFrost PlusНаучный центр Фишера12-550-18
VectaMount Постоянная среда для монтажаЛаборатория «Вектор»Н-5000

Ссылки

  1. Häring, H. U. The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance. Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).
  2. Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues. J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).
  3. Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).
  4. Galal, M. A., et al. Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance. Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).
  5. Starks, E. J., et al. Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers. J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).
  6. Belfiore, A., et al. Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view. Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).
  7. Wang, F., et al. RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).
  8. BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. https://acdbio.com/basescope-duplex-assay (2025).
  9. Dani, N., et al. A cellular and spatial map of the choroid plexus across brain ventricles and ages. Cell. 184 (11), 3056-3074.e21 (2021).
  10. Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications. Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).
  11. Milstein, J. L., Ferris, H. A. The brain as an insulin-sensitive metabolic organ. Mol Metab. 52, 101234(2021).
  12. Moruzzi, N., et al. Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models. J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IR AIR Bin situ

Похожие статьи