Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Генерация сердечных органоидов человека из эмбриональных стволовых клеток с помощью ступенчатой мезодермовой индукции и 3D-самоорганизации

1.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68738

⸱

7 октября 2025 г.

 , 
1Basic Medicine Research Innovation Center for Cardiometabolic Diseases, Ministry of Education, Southwest Medical University, 2Nucleic Acid Medicine, Key Laboratory of Luzhou, Southwest Medical University, 3Department of Cardiology, The Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Southwest Medical University, 4Key Laboratory of Medical Electrophysiology, Ministry of Education, Southwest Medical University, 5Institute of Cardiovascular Research, Southwest Medical University

В этой статье

Краткое содержание

В этом протоколе описан пошаговый метод получения функциональных сердечных органоидов человека из эмбриональных стволовых клеток человека (чэск). Он включает в себя этапы размораживания клеток, дифференцировки и созревания, обеспечивая надежную платформу для развития сердца и моделирования заболеваний.

Аннотация

Сердечные органоиды, полученные из человеческих эмбриональных стволовых клеток (hESC), представляют собой многоклеточные трехмерные (3D) структуры, которые повторяют ключевые аспекты раннего развития и функции сердца человека. Эти самоорганизующиеся органоиды демонстрируют спонтанную сократительную способность, экспрессию кардиомиоцитарных маркеров и тканеподобную архитектуру, напоминающую нативный миокард. В данной работе мы представляем надежный и воспроизводимый протокол для генерации сердечных органоидов из линии H9 hESC с помощью ступенчатой дифференцировки линии. Индукцию мезодермы инициируют обработкой сфероидов в течение 36-40 ч активином А (50 нг/мл), костным морфогенетическим белком 4 (BMP4, 10 нг/мл), фактором роста фибробластов 2 (FGF2, 30 нг/мл), ладувиглусибом (CHIR99021, 3 мкМ) и ингибитором фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) (LY294002, 5 мкМ). Спецификация сердечной линии впоследствии определяется путем ежедневного воздействия BMP4 в течение четырех дней BMP4 (10 нг/мл), FGF2 (10 нг/мл), ингибитора пути Wnt (XAV-939, 5 мкМ) и ретиноевой кислоты (0,5 мкМ). Дифференцировку и созревание кардиомиоцитов дополнительно стимулируют с 5,5-го дня с помощью BMP4 (10 нг/мл), FGF2 (10 нг/мл) и инсулина (10 мкг/мл). Функциональная валидация достигается с помощью покадровой визуализации и иммунофлуоресцентного анализа, подтверждающих генерацию сократительных кардиомиоцитов, отмеченных экспрессией сердечного тропонина Т (cTnT). Кроме того, 3D-иммуноокрашивание выявляет наличие α-SMA и CDH5, что указывает на появление гладкомышечных и эндотелиальноподобных клеточных популяций. Эти сердечные органоиды постоянно демонстрируют ритмичные сокращения; Однако прямая электрофизиологическая валидация электромеханической связи не проводилась. Известные ограничения включают невозможность прохождения органоидов и потенциальный центральный некроз при удлиненных культурах. Таким образом, эта модель обеспечивает масштабируемую и физиологически актуальную платформу для изучения кардиогенеза человека, реакции на лекарства и врожденных пороков сердца.

Введение

Сердечно-сосудистые заболевания остаются основной причиной заболеваемости и смертности во всем мире, что подчеркивает настоятельную потребность в надежных моделях in vitro, которые повторяют развитие и функции сердца человека 1,2. Традиционные двумерные (2D) монослойные культуры кардиомиоцитов, хотя и ценны, не в состоянии воспроизвести пространственную сложность, многоклеточные взаимодействия и электромеханическую интеграцию нативного человеческого сердца 3,4. 3D-сердечные органоиды, полученные из плюрипотентных стволовых клеток, стали мощными платформами, которые устраняют эти ограничения, обеспечивая самоорганизующиеся многоклеточные структуры, которые имитируют ранний сердечный морфогенез и функциональное созревание in vitro5.

ЭСК, такие как линия H9, обладают внутренней способностью дифференцироваться во все типы соматических клеток, включая кардиомиоциты, эндотелиальные клетки и сердечные фибробласты6. В контролируемых условиях культивирования чЭСК можно проводить через последовательные стадии индукции мезодермы, спецификации сердечной мезодермы и дифференцировки кардиомиоцитов 5,7. Этот ступенчатый процесс можно регулировать с помощью специфических сигнальных молекул и ингибиторов, включая активин А, BMP4, FGF2, ингибиторы PI3K, CHIR99021, ингибиторы Wnt и ретиноевую кислоту 5,8. Точно имитируя сигнальную среду in vivo для эмбрионального сердечного развития, эти сигналы способствуют эффективному и воспроизводимому кардиогенезу in vitro 5,7.

В отличие от многих органоидных систем, которые требуют встраивания во компоненты внеклеточного матрикса (ВКМ), такие как Матригель, сердечные органоиды могут самоорганизовываться в условиях низкой адгезии без поддержки матрикса 5,9. Агрегация дифференцирующих hESCs в суспензии дает сферические 3D-структуры, которые демонстрируют спонтанное биение в течение первой недели дифференцировки. Эти органоиды содержат функционально значимые популяции сердечных клеток и демонстрируют характерные особенности, такие как саркомерная организация, переходные процессы кальция и ритмичные сокращения 11,12, предлагая физиологически значимую модель ранней сердечной ткани человека.

Способность генерировать сердечные органоиды, полученные из hESC, открывает захватывающие возможности для биологии развития, моделирования заболеваний, скрининга лекарств и тестирования кардиотоксичности13,14. Кроме того, интеграция с технологиями редактирования генома и индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками (ИПСК), специфичными для конкретного пациента, позволяет проводить персонализированное моделирование заболеваний и терапевтическое исследование наследственных сердечных заболеваний.

В этой статье мы представляем подробный пошаговый протокол получения сердечных органоидов из эмбриональных стволовых клеток человека, выделяя ключевые этапы дифференцировки, условия культивирования и методы валидации. Эта платформа представляет собой надежную, масштабируемую систему для повторения развития сердца человека и создания основы для будущих трансляционных исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры с использованием человеческих эмбриональных стволовых клеток (H9) проводились в соответствии с институциональными рекомендациями и одобрены Комитетом по биомедицинской этике Юго-Западного медицинского университета, одобрение 20241023-031. Все работы по культивированию тканей, описанные ниже, должны выполняться в колпаке класса II с ламинарным потоком. Перед использованием всегда следите за тем, чтобы среда и реагенты были при комнатной температуре, сбалансированы естественным образом. Не используйте водяную баню для подогрева среды.

1. Размораживание и рутинная культура HESCs (H9)

  1. Витронектиновое покрытие культуральных планшетов
    1. Разморозьте бульон витронектина на льду и разбавьте до рабочей концентрации 10 мкг/мл в холодной среде Е8.
    2. Добавьте 1 мл на лунку разбавленного раствора витронектина в 6-луночный планшет. Перед использованием инкубируйте планшет в инкубаторе с температурой 37 °C, 5% CO2 в течение 1-4 часов.
    3. Перед посевом клеток аспирируйте избыток Витронектина и не промывайте.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубация в инкубаторе для клеточных культур улучшает однородность покрытия и улучшает прикрепление клеток, что особенно важно для чувствительных hESCs. Не допускайте высыхания раствора покрытия. В этом протоколе пластины, покрытые витронектином, используются только на этапах размораживания и расширения hESC для получения определенного, связанного с поверхностью заменителя ECM. Сердечные органоиды впоследствии образуются путем самоагрегации в условиях низкой адгезии суспензии, без необходимости проведения ЭКМ.
  2. Размораживание криоконсервированных HESC (H9)
    1. По крайней мере, за 30-60 минут до этого дайте всем необходимым средам и реагентам (например, среде Е8, ингибитору Е8 + ROCK, PBS) естественным образом сбалансироваться до комнатной температуры.
    2. Извлеките один криовиал эмбриональных стволовых клеток человека H9 из хранилища жидкого азота с использованием соответствующих средств индивидуальной защиты. Немедленно погрузите криовиал в водяную баню при температуре 37 °C. Аккуратно поворачивайте флакон и внимательно наблюдайте.
    3. Как только останется небольшой кристалл льда (~90% размороженного, ~1-2 минуты), немедленно переложите флакон в шкаф биобезопасности. Перед вскрытием продезинфицируйте внешнюю часть криовиала 75% этанолом.
    4. Медленно переложите содержимое криовиала по каплям в коническую пробирку объемом 15 мл, содержащую 5 мл среды E8 комнатной температуры с добавлением 10 мкМ Y-27632 (ингибитор ROCK). Аккуратно перемешивайте, пипетируя вверх и вниз с помощью наконечника пипетки с широким отверстием.
    5. Центрифуга при 200 × г в течение 5 мин при комнатной температуре. Осторожно отаскайте надосадочную жидкость и ресуспендируйте клеточную гранулу в 2 мл среды E8 + Y-27632.
    6. Пластинчатые ячейки на 6-луночный планшет, покрытый витронектином (подготовленный заранее) с желаемой плотностью посева (обычно 150 000-200 000 клеток/лунка). Осторожно покачайте пластину, чтобы равномерно распределить ячейки, и переведите в инкубатор с температурой 37 °C, 5%CO2 .
      ПРИМЕЧАНИЕ: Использование ингибитора ROCK (Y-27632) имеет решающее значение в течение первых 24 часов после оттаивания для предотвращения анойкиса и поддержания выживаемости.
  3. Регламентные работы и пассаж
    1. Ежедневно меняйте среду, используя 2 мл свежей среды Е8 на лунку.
    2. Ежедневный мониторинг под фазово-контрастным микроскопом; пассажные клетки, когда они достигают ~70-80% конфлюенции, обычно каждые 3-4 дня.
      1. Для пассажа: Отсадить среду и аккуратно промыть 1 мл DPBS.
      2. Добавьте 0,5 мл реагента для диссоциации стволовых клеток и инкубируйте при комнатной температуре в течение 3-5 минут. Осторожно постучите по пластине, чтобы выбить колонии.
      3. Соберите клеточную суспензию и переложите ее в соотношении 1:3-1:4 в свежепокрытые витронектином лунки в среде E8, содержащей 10 μM Y-27632. Через 24 часа замените носитель на E8 без ROCKi.
        Примечание: Для оптимального восстановления и последующей эффективности дифференцировки HESC следует пропускать в виде небольших кластеров по 2-10 клеток.
        Для минимизации напряжения сдвига рекомендуется использовать наконечники с широким отверстием. Для смешивания можно использовать наконечник для дозатора объемом 5 мл или серологический пипетку на 10 мл.

2. Дифференцировка HESCs (H9) в сердечную линию

  1. Индукция мезодермальной дифференцировки (день 0-1,5)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте прямой дифференцировки только что размороженных HESCs (H9) в сердечные органоиды. Крайне важно, чтобы клетки сначала были пассажены и поддерживались по крайней мере в течение одного пассажа, прежде чем начать дифференцировку, чтобы обеспечить оптимальную жизнеспособность клеток и здоровую дифференцировку. Дифференцировка клеток сразу после размораживания может привести к плохим результатам из-за нарушения здоровья клеток.
    1. Прединдукционный посев: Когда hPSCs достигают примерно 70% конфлюенции, аккуратно диссоциируйте клетки на небольшие кластеры с помощью соответствующего реагента для диссоциации. Ресуспендируют кластеры в 2 мл среды E8 с добавлением 10 мкМ ингибитора ROCK (Y-27632).
    2. Агрегация: Засейте 200 мкл клеточной суспензии (обычно 12 000-15 000 клеток) в каждую лунку 96-луночного планшета со сверхнизким присоединением, а затем центрифугируйте планшет при концентрации 200 × г в течение 3 минут при комнатной температуре, чтобы облегчить агрегацию клеток на дне каждой лунки.
    3. Инкубация: Поместите планшет в инкубатор с температурой 37 °C и 5%CO2 и культивируйте на 24 часа, чтобы обеспечить образование компактных и однородных эмбриоидных тел (EB).
    4. Приготовьте базальную питательную среду (BC-M) путем смешивания 50% IMDM, 50% смеси питательных веществ F12, 15 мкг/мл инсулин-трансферрина-селена (ITS-G), 450 мкМ монотиоглицерина и 5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина фракции V.
    5. Приготовьте МД-М, добавив в BC-M активин А (50 нг/мл), BMP4 (10 нг/мл), CHIR99021 (3 мкМ), FGF2 (30 нг/мл) и LY294002 (5 мкм).
    6. Мезодермальная индукция: через 24 ч после агрегации индуцировать БЭ в течение 36 ч с помощью MD-M.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить эффективность индукции и консистенцию сердечных органоидов, мы строго ограничили использование H9 hESCs в пределах трех пассажей после размораживания. Эта стратегия имеет решающее значение для поддержания высокой эффективности дифференцировки и общей надежности эксперимента.
      Бережное обращение во время обмена среды имеет решающее значение для сохранения целостности формируемых агрегатов. Избегайте нарушения сферической морфологии БЭ.
  2. Индукция мезодермальной дифференцировки сердца (1.5-5.5 дни)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ингибитор передачи сигналов Wnt (XAV-939) имеет решающее значение для подавления задних мезодермальных сигналов и способствует спецификации сердечной линии. Ретиноевая кислота играет дозочувствительную роль в переднезаднем структурировании; Чрезмерное РА может привести к спецификации передней кишки.
    1. Дополните BC-M (состав, описанный в шаге 2.1) BMP4 (10 нг/мл), FGF2 (10 нг/мл), ретиноевой кислотой (0,5 мкМ) и XAV-939 (5 мкМ) для получения сердечной мезодермальной дифференцировочной среды (CMD-M).
    2. Через 36-40 ч мезодермальной индукции осторожно аспирируйте МД-М и замените его на КМД-М в течение 4 дней со сменой среды каждый день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Осторожно обращайтесь с заполнителями во время смены среды, чтобы избежать механических разрушений или апоптоза, вызванного напряжением.
      В этот период сфероиды становятся более компактными и организованными. Ранние признаки приверженности сердечной линии можно наблюдать при светлопольной микроскопии к 5-му дню.
  3. Спецификация сердечных органоидов (дни 5.5-7.5)
    1. Дополните BC-M (состав, подробно описанный в шаге 2.1) BMP4 (10 нг/мл), FGF2 (10 нг/мл) и инсулин (10 мг/мл) для получения среды, специфичной для сердечных органоидов (COS-M).
    2. На 5,5-й день осторожно аспирируйте CMD-M и замените на COS-M на 2 дня со средней сменой каждый день.
      ПРИМЕЧАНИЕ: BMP4 и FGF2 синергетически способствуют расширению сердечных предшественников и подавляют несердечные судьбы на этой стадии. Инсулин поддерживает метаболическую активность и структурное развитие дифференцировочных кардиомиоцитов.
  4. Созревание органоидов сердца
    ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте полной диссоциации или пипетирования сфероидов во время переноса. Кардиомиоциты очень чувствительны к напряжению сдвига.
    1. Дополните BC-M (состав, подробно описанный в шаге 2.1) инсулином (10 мг/мл) для приготовления среды созревания сердечных органоидов (COM-M).
    2. Начиная с дня 7.5, переход на COM-M. Ежедневно меняйте среду для поддержания уровня питательных веществ и удаления метаболических отходов, сводя к минимуму стресс.
    3. С 8-го по 12-й день ищите спонтанное биение сердечных органоидов, которое обычно становится очевидным под световым микроскопом.
    4. К Дню 12+ убедитесь, что сократительный ритм регулярный и устойчивый.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Частота и морфология биения могут быть количественно измерены с помощью покадровой микроскопии и инструментов анализа изображений.
      Электрофизиологический анализ (например, визуализация кальция или МЭА) может быть выполнен с 12-го дня для оценки функциональной зрелости.

3. Подготовка к криоконсервации

  1. Во избежание механического воздействия осторожно перенесите сердечные органоиды из культурального планшета с помощью пипетки с широким отверстием. Поместите их в коническую пробирку объемом 15 мл и дайте органоидам осесть естественным образом под действием силы тяжести в течение 3-5 минут без центрифугирования.
  2. Приготовьте среду для криоконсервации (Cryo-CM) со следующими компонентами (конечными концентрациями): 80% CM-M, 10% FBS, 10% DMSO.
  3. Мягко ресуспендируйте сердечные органоиды в 500 мкл Cryo-CM на криовиальную дозу.
  4. Поместите криовиалы в контейнер для заморозки на основе изопропанола. Хранить при температуре -80 °C в течение 12-24 часов, чтобы обеспечить постепенное охлаждение до ~1 °C/мин.
  5. После ночной заморозки переложите флаконы в хранилище с жидким азотом для длительного хранения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы криоконсервировали сердечные органоиды в плотности примерно 20-30 зрелых органоидов на криовиал, взвешенных в 1 мл криоконсервирующей среды.

4. Восстановление и размораживание сердечных органоидов

  1. Чтобы извлечь органоиды, быстро разморозьте флаконы на водяной бане, перенесите сердечные органоиды в среду CM-M, аккуратно центрифугируйте для удаления ДМСО и повторно суспендируйте органоиды в свежих CM-M.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Взбивание после размораживания обычно возобновляется в течение 24-48 часов, в зависимости от зрелости органоидов и качества обработки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Успешная дифференцировка H9 hESCs в сердечные органоиды начинается с активного оживления и поддержания плюрипотентных стволовых клеток. После размораживания hESCs демонстрируют высокую жизнеспособность и адгезию при нанесении на пластины, покрытые витронектином, в среде E8 с добавлением ингибитора ROCK. В течение 24-48 ч можно наблюдать компактные колонии с четко выраженными краями и высоким соотношением ядер к цитоплазме, что указывает на восстановление типичной недифференцированной морфологии (рис....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Успешное получение сердечных органоидов из H9 hESCs основано на точной временной и пространственной регуляции ключевых сигнальных путей для имитации раннего развития сердца. Этот протокол резюмирует критические этапы индукции мезодермы, спецификации сердечной линии и самоорганизации в 3D-сократительные структуры в химически определенной системе. Этот метод обеспечивает надежную и воспроизводимую платформу для моделирования развития сердца человека, врожденных пороков сердца и скрининга к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

Мы благодарим Цзюньфэн Цзи (Школа фундаментальных медицинских наук, Чжэцзянский университет, Китай) и Тао Ло (Школа фундаментальных медицинских наук, Чжэцзянский университет, Китай) за любезное предоставление hESCs (H9). Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (грант No U23A20398 для C.Z.), Сычуаньской программы науки и технологий (гранты No 2022YFS0578 и 2022YFS0614 для C.Z.), Фонд исследовательских стартапов Юго-западного медицинского университета (грант No 00040155 для C.Z.), Фонд исследовательских стартапов Юго-западного медицинского университета (грант No 00170071 для B.W.), Программы стратегического сотрудничества в области науки и технологий Муниципального народного правительства Лучжоу и Юго-Западного медицинского университета (грант No 2024LZXNYDJ088 B.W.), Проект стратегического сотрудничества в области науки и технологий Юго-западного медицинского университета (грант No 2024PZXNYD01 BW) и Фонд Юго-западного медицинского университета (грант No 2024ZKZ014 B.W.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,02% ЭДТАБейотимС0198
6 Велл  тарелкаКОРНИНГ3516
7,5% бычьего сывороточного альбуминаACMECAC11954
96-луночная сверхнизкая крепежная пластинаКОРНИНГ7007
Alexa Fluor 488 Donkey anti-Mouse IgGЙезен34106ЭС60
Alexa Fluor 555 Козий антикроликИнвитрогенА-21428
CHIR-99021 моногидрохлоридЙезен52965ЭС10
ДМСО СоларбиоД8370
Дульбекко, фосфатно-солевой буфер (D-PBS)Йезен60152ЭС76
ФБСGibco10099141С
Белок FGF2, человеческий, рекомбинантныйТаргетМолTMPY-00749-50 μ Г&нбсп;
Смесь питательных веществ Ham's F-12Технологии Life11765054
hPSC-CDM (среда Essential 8)Каулистелл400105
Рекомбинантный белок BMP-4 человекаGibcoPHC9534
IMDM, Добавка GlutaMAXТехнологии Life31980030
Инсулин-трансферрин-селен (ИТС-Г)Gibco41400045
LY294002Селлекс1105-50мг
МонотиоглицеринСигма-ОлдричМ6145
Мышь анти-αSMAАбмартMN50104
ProLong Diamond Antifade Mountant с DAPIИнвитрогенП36966
Кролик анти-CDH5АбмартТА6265
Кролик анти-кTNTИнвитроген701620
Рекомбинантный человеческий белок BMP-4Йезен92053ЭС20
Рекомбинантный человеческий инсулин Йезен40112ЭС25
Рекомбинантный белок активин А человека/мыши/крысыЙезен91702ЭС10
РеЛеСРСтволовые клетки100-0483
Ретиноевая кислотаСигма-ОлдричР2625
ВитронектинGibcoА14700
ХАВ-939СеллекС1180
Y-27632 2HCl (ингибитор ROCK)СеллекС1049

Ссылки

  1. Savoji, H., et al. Cardiovascular disease models: A game-changing paradigm in drug discovery and screening. Biomaterials. 198, 3-26 (2019).
  2. Ni, B., Ye, L., Zhang, Y., Hu, S., Lei, W. Advances in humanoid organoid-based research on inter-organ communications during cardiac organogenesis and cardiovascular diseases. J Transl Med. 23 (1), 380(2025).
  3. Mohr, E., Thum, T., Bär, C. Accelerating cardiovascular research: Recent advances in translational 2D and 3D heart models. Eur J Heart Fail. 24 (10), 1778-1791 (2022).
  4. Thomas, D., Choi, S., Alamana, C., Parker, K. K., Wu, J. C. Cellular and engineered organoids for cardiovascular models. Circ Res. 130 (12), 1780-1802 (2022).
  5. Lewis-Israeli, Y. R., et al. Self-assembling human heart organoids for the modeling of cardiac development and congenital heart disease. Nat Commun. 12 (1), 5142(2021).
  6. Mummery, C. L., et al. Differentiation of human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells to cardiomyocytes: A methods overview. Circ Res. 111 (3), 344-358 (2012).
  7. Yang, N., et al. Human cardiac organoid model reveals antibacterial triclocarban promotes myocardial hypertrophy by interfering with endothelial cell metabolism. Sci Bull. 70 (3), 342-346 (2025).
  8. Lian, X., et al. Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/β-catenin signaling under fully defined conditions. Nat Protoc. 8 (1), 162-175 (2013).
  9. Hofbauer, P., et al. Cardioids reveal self-organizing principles of human cardiogenesis. Cell. 184 (12), 3299-3317.e22 (2021).
  10. Liu, C., Feng, X., Li, G., Gokulnath, P., Xiao, J. Generating 3D human cardiac constructs from pluripotent stem cells. EBioMedicine. 76 (1), 103813(2022).
  11. Lee, J., et al. In vitro generation of functional murine heart organoids via FGF4 and extracellular matrix. Nat Commun. 11 (1), 4283(2020).
  12. Yang, J., et al. Generation of human vascularized and chambered cardiac organoids for cardiac disease modelling and drug evaluation. Cell Prolif. 57 (8), e13631(2024).
  13. Kim, H., Kamm, R. D., Vunjak-Novakovic, G., Wu, J. C. Progress in multicellular human cardiac organoids for clinical applications. Cell Stem Cell. 29 (4), 503-514 (2022).
  14. Drakhlis, L., et al. Human heart-forming organoids recapitulate early heart and foregut development. Nat Biotechnol. 39 (6), 737-746 (2021).
  15. Klimanskaya, I., McMahon, J. Approaches for derivation and maintenance of human embryonic stem cells. Handb Stem Cells. , 1st ed, Elsevier Academic Press. (2004).
  16. Uhrig, M., Ezquer, F., Ezquer, M. Improving cell recovery: Freezing and thawing optimization of induced pluripotent stem cells. Cells. 11 (5), 799(2022).
  17. Kupfer, M. E., et al. In situ expansion, differentiation, and electromechanical coupling of human cardiac muscle in a 3D bioprinted, chambered organoid. Circ Res. 127 (2), 207-224 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Эмбриональные стволовые клетки человека3D-самоорганизациядифференцировка кардиомиоцитовспецификация клеточных линийиммунофлуоресцентный анализтайм-лапс визуализациясердечный тропонин Tгладкомышечные клетки
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.