Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Влияние и механизм действия таурурсодезоксихолевой кислоты в желчи голубой лисицы на острое алкоголь-ассоциированное повреждение печени у мышей

743 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68763

⸱

17 октября 2025 г.

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

В этом исследовании оценивались гепатопротекторные эффекты желчи голубой лисы на вызванное алкоголем повреждение печени у мышей. Желчь голубой лисицы, содержащая TUDCA, УДХК, билирубин и TCDCA, снижала маркеры повреждения печени и действовала через путь AGE-RAGE, AKT1 и PPARG, демонстрируя противовоспалительные и антиоксидантные свойства.

Аннотация

Желчь животных, такая как медвежья желчь, издавна используется в народной медицине благодаря своим лечебным свойствам. Голубая лисья желчь, похожая на медвежью желчь, в некоторых традиционных практиках считается обладающей гепатопротекторными свойствами. В этом исследовании изучались компоненты и влияние желчи голубой лисы на повреждение печени, связанное с алкоголем у мышей. Желчь собирали у 30 голубых лисиц и перерабатывали в сухой порошок. Химический состав желчи голубой лисы был проанализирован с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и сверхэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрией. Сетевая фармакология была использована для идентификации потенциальных биологически активных соединений, мишеней и путей, связанных с повреждением печени, связанным с алкоголем. Мышиная модель алкоголь-ассоциированного повреждения печени была создана с использованием мышей Куньмина, которым вводили порошок желчи голубой лисы в низких и высоких дозах. Измеряли уровень аланинаминотрансферазы в сыворотке крови, аспартатаминотрансферазы и общего холестерина. Ткани печени оценивали с помощью окрашивания гематоксилином и эозином и анализа малонового диальдегида. Молекулярный докинг был выполнен для прогнозирования аффинности связывания между активными соединениями и основными мишенями. Было обнаружено, что желчь голубой лисы содержит таурурсодезоксихолевую кислоту (TUDCA), урсодезоксихолевую кислоту, билирубин и таурохенодезоксихолевую кислоту. Гистопатологический анализ не выявил существенных отклонений или токсических эффектов в основных органах после перорального приема порошка желчи голубой лисы. Основными мишенями желчи голубой лисы были белок AKT1, PPARG, IGF1, MMP9 и CASP3. Лечение желчью голубой лисицы снижало уровни АЛТ, АСТ, холестерина и MDA в мышиных моделях повреждения печени, связанного с алкоголем. Сетевая фармакология и молекулярный докинг позволяют предположить, что гепатопротекторные эффекты желчи голубой лисы могут быть связаны с рецептором конечного продукта гликирования для сигнального пути конечного продукта гликирования. В целом, голубая лисья желчь, содержание TUDCA в которой аналогично содержанию медвежьей желчи, нацелено на белки, такие как AKT1 и PPARG, демонстрируя потенциальные противовоспалительные и антиоксидантные эффекты при лечении повреждения печени, связанного с алкоголем.

Введение

Алкоголь-ассоциированная болезнь печени (АБП) охватывает спектр поражений печени, начиная от бессимптомных лабораторных аномалий и заканчивая прогрессирующим заболеванием печени с циррозом печени и, в его наиболее тяжелой форме, опасной для жизни терминальной стадией заболевания печени, сопровождающимся полиорганной недостаточностью1. Распространенность АБП, включая алкоголь-ассоциированную жировую болезнь печени, представляет собой относительно легкую и потенциально обратимую форму АБП1. Алкоголь-ассоциированный гепатит характеризуется воспалением с клиническими проявлениями от бессимптомного стеатогепатита до острого алкогольного гепатита, который проявляется острой желтухой и может прогрессировать до печеночной недостаточности с высокой краткосрочной смертностью. Алкоголь и его метаболиты изменяют липидный обмен и способствуют накоплению липидов (стеатозу) с помощью нескольких механизмов, включая ингибирование окисления β митохондриальных жирных кислот и стимуляцию липогенеза. Этанол повышает экспрессию рецептора трансферрина 1, тем самым увеличивая усвоение железа печенью2. Как алкоголь, так и ацетальдегид могут напрямую повреждать гепатоциты, что приводит к усилению окислительного стресса, ингибированию регенерации s-аденозилметионина, высвобождению молекулярных паттернов, связанных с повреждением (DAMPS), воздействию бактериальных эндотоксинов в портальной циркуляции и образованию белковых аддуктов2. Ведение АБП остается сложной задачей из-за многочисленных патогенных путей3. Будущие стратегии включают эмпирические пробиотики, факторы роста, антиоксиданты, моноклональные антитела, нацеленные на факторы, связанные с воспалением, и технологические поведенческие вмешательства. Тем не менее, дополнительные комплексные терапевтические стратегии еще предстоит изучить.

Новые данные свидетельствуют о том, что желчь животных может иметь терапевтический потенциал в лечении алкоголь-ассоциированных заболеваний печени (АБП) благодаря своим противовоспалительным и антиоксидантным свойствам 4,5. Желчь животных является важным компонентом традиционной китайской медицины (ТКМ)6. В ТКМ животная желчь используется для укрепления функции печени и желчного пузыря и облегчения боли, лихорадки, кашля и воспаления. Он используется для лечения заболеваний печени, включая циррозпечени 6. Желчь животных обладает противовоспалительными и антиоксидантными свойствами6, а воспаление и окислительный стресс играют центральную роль в патогенезе АБП7. Также сообщалось, что добавки желчных кислот улучшают стеатоз печени8. В настоящее время медвежья желчь является наиболее широко используемым лекарственным средством на основе желчи, основными активными компонентами которого являются урсодезоксихолевая кислота (УДХК) и таурохолевая кислота (ТУДХК) 6,9. Примечательно, что TUDCA отсутствует в желчи других животных, таких как овцы, коровы, куры и змеи6. TUDCA продемонстрировала терапевтический потенциал в лечении острого повреждения печени10. В настоящее время TUDCA получают путем дренирования медвежьей желчи (что вызывает опасения по поводу благополучия животных), химического синтеза (что является дорогостоящим) или биотрансформации порошка куриной желчи в эквивалент медвежьей желчи (который остается неэквивалентным подлинной медвежьей желчи)11,12. Голубая лисица (Alopex lagopus), также известная как песец, выращивается в неволе в первую очередь из-за ее меха. Китай является одним из трех крупнейших экспортеров меховой одежды в мире, и внутренние органы добытой голубой лисицы обычно выбрасываются. Это дает возможность повысить ценность желчного пузыря как потенциального медицинского ресурса. Голубые лисы и медведи являются плотоядными животными, имеющими сходство в физиологии пищеварения, метаболизме и диете, что позволяет предположить, что их желчный состав и эффекты также могут быть схожими. Однако такая возможность до сих пор не изучена.

Таким образом, данное исследование было направлено на изучение фармакологических действий и основных механизмов желчи голубой лисицы в моделях АБД. Полученные результаты могут предоставить новые направления исследований для разработки заменителей медвежьей желчи, создать научную основу для использования желчного пузыря голубой лисицы в качестве медицинского ресурса, превратить промышленные отходы в ценные продукты и информировать о будущих терапевтических разработках.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Протокол исследования был рассмотрен и одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных Хэйлунцзянского университета китайской медицины (одобрение #2023021101). Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами ARRIVE, а также соответствующими национальными и институциональными рекомендациями по уходу за лабораторными животными и их использованию. Поскольку это исследование включало эксперименты на животных, информированное согласие не было применимо. Все процедуры разведения животных и добычи пушнины строго соблюдались в соответствии с китайским Техническим регламентом по управлению разведением диких животных. Исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментов на животных Хэйлунцзянского университета китайской медицины, Китай (одобрение #2023021101).

Подготовка образцов желчи голубой лисицы
Ресурс желчи голубой лисы приведен в Таблице материалов. В общей сложности 30 голубых лисиц (Vulpes lagopus) были усыплены электрошоком с последующим сбором меха и желчного пузыря. Желчный пузырь голубой лисы имеет овальную форму, с узким верхним отделом и вздутым нижним отделом. Его внешняя поверхность темно-коричневого цвета с видимыми складками, а мембрана капсулы тонкая. Желчь немедленно отсасывалась с помощью стерильного одноразового шприца объемом 1 мл и приобретала темно-черный или темно-зеленый цвет. Затем желчные пузыри высушивали при 37 °C в течение 48 ч для получения сухого порошка желчи голубой лисы (рис. 1). Полученный порошок желчи имел желто-коричневый оттенок с блестящей, рыхлой текстурой. Средний выход сухого порошка желчи на один желчный пузырь составил примерно 0,82 ± 0,30 г. Для подготовки образца 250 мг порошка высушенной желчи голубой лисицы (как описано выше) или медведя (см. Таблицу материалов) растворяли в 1 мл 70% метанола хроматографического качества. Раствор подвергали ультразвуковой обработке ультразвуком (40 кГц, 300 Вт), фильтровали через мембрану размером 0,22 мкм, разбавляли до конечного объема 50 мл (т.е. до 5 мг/мл) и далее разбавляли до рабочей концентрации 0,5 мг/мл для последующего анализа. Общий экспериментальный рабочий процесс кратко представлен на дополнительном рисунке 1.

В этом исследовании диапазон дозировки порошка желчи голубой лисицы, используемого для экспериментов на животных, составлял 5-10 г/кг на основании предыдущих оценок токсичности и фармакологических исследований, при этом при этих концентрацияхне наблюдалось существенных побочных эффектов. Во время приготовления порошка желчи желчные пузыри сушили при 37 °С в течение 48 ч; Однако время сушки может варьироваться в зависимости от местной влажности и объема образца, поэтому содержание влаги следует проверять, чтобы обеспечить полное обезвоживание. Для растворения концентрация 5 мг/мл в метаноле хроматографического качества была оптимальной для анализов ВЭЖХ и UPLC-Q-TOF-MS; Неполное растворение или остатки твердых частиц могут повлиять на точность анализа, что потребует дополнительной ультразвуковой обработки или фильтрации. Известным ограничением является изменчивость состава желчи из-за сезонных, диетических и индивидуальных физиологических различий среди голубых лисиц, которые могут влиять на относительное содержание активных соединений, таких как TUDCA и UDCA16. Поэтому перед фармакологическим использованием рекомендуется проводить валидацию партии с помощью хроматографического профилирования, чтобы обеспечить постоянство профилей компонентов.

Сетевой фармакологический анализ
Химический состав желчи голубой лисы был проанализирован с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (см. Таблицу материалов) и ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрией (UPLC-Q-TOF-MS). ВЭЖХ проводили с использованием колонки SB-C18 (4,6 мм x 150 мм, 5 мкм) с подвижной фазой, состоящей из 0,03 М дигидрофосфата натрия (pH скорректирован до 4,4 с использованием фосфорной кислоты) в качестве фазы А и метанола (см. Таблицу материалов) в качестве фазы В (Таблица 1). Длина волны детектирования была установлена на уровне 210 нм, скорость потока подвижной фазы составила 1,0 мл/мин, а температура колонки составила 40 °C. Объем инъекции составил 10 мкл. Анализ UPLC-Q-TOF/MS проводили с использованием колонки UPLCTM HSS T3 (см. Таблицу материалов). Подвижная фаза состояла из ацетонитрила (А)-0,1% водного раствора муравьиной кислоты (В; см. таблицу материалов). Программа градиентного элюирования была следующей: 0-25,0 мин, 98%-2% А, и 25,0-28,0 мин, 2%-2% А при расходе 4 мл/мин. Температура столба поддерживалась на уровне 35 °С. Масс-спектрометрию проводили с использованием источника ионизации с электрораспылением (ЭСИ) со следующими параметрами: расход газа растворителя 650 л/ч, температура газа растворителя 350 °С, расход конусного газа 50 л/ч, температура ионного источника 120 °С, капиллярное напряжение 2,8 кВ (режим положительных ионов) и 2,0 кВ (режим отрицательных ионов), напряжение конуса 25 В и энергия столкновения 6 эВ. Спектры собирали каждые 0,2 с интервалом 0,02 с. Лейцин-энкефалин (см. Таблицу материалов; [M+H]+=556,2771) использовали в качестве эталонного калибровочного раствора при концентрации 40 фмоль/мкл и расходе 15 мкмоль/мин17.

Анализ химического состава и прогнозирование цели
Активные компоненты желчи голубой лисы были идентифицированы с помощью ВЭЖХ и UPLC-Q-TOF/MS, с аурохолевой кислотой и таурурсодезоксихолатом натрия (см. Таблицу материалов) в качестве внутренних стандартов18. Структурные формулы идентифицированных соединений были получены из базы данных PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Для изучения потенциальных биологически активных мишеней активные компоненты желчи голубой лисы были опрошены в базе данных PharmMapper (http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/) для идентификации ассоциированных генов-мишеней.

Используя в качестве ключевых слов алкогольное повреждение печени и алкогольное повреждение печени, гены, связанные с заболеванием, были получены из баз данных GeneCards (https://www.genecards.org/) и OMIM (https://omim.org/). В базе данных GeneCards цели были отсортированы в соответствии с оценкой релевантности, при этом порог был установлен на уровне ≥ 20. Этот широко используемый эмпирический порог обеспечивает баланс между чувствительностью и специфичностью, сохраняя большинство потенциально релевантных генов (высокая память) и отфильтровывая слабородственные или зашумленные гены (высокая точность). В отличие от этого, в базе данных OMIM не применялась дополнительная фильтрация, поскольку она захватывает цели с сильными генетическими доказательствами, тем самым дополняя оценки вычислительной релевантности GeneCards. Полученные данные о целях были объединены и дублированы для идентификации целей, связанных с ALD. Мишени для активных ингредиентов и мишени для болезней сравнивали с использованием Venny 2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html) для визуализации. Пересечения были определены как потенциальные мишени желчи голубой лисы против ALD и были импортированы в базу данных STRING (http://version10.string-db.org/). В базе данных STRING сеть взаимодействия была построена с параметрами по умолчанию (средняя доверительная оценка ≥ 0,4), а свободные узлы были скрыты для улучшения наглядности визуализации. Свободные узлы были скрыты для создания диаграммы сети белок-белкового взаимодействия (PPI), которая была визуализирована с помощью программного обеспечения Cytoscape (версия 3.9.1). Топологический анализ был проведен для вычисления значений степеней, и шесть целей с наибольшими значениями степени были идентифицированы с помощью базы данных для аннотации, визуализации и интегрированного обнаружения (DAVID, https://david.ncifcrf.gov/) с порогом значимости p < 0,05. Для анализа обогащения путей использовалась база данных Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG).

Молекулярный докинг
Молекулярный докинг был проведен для оценки взаимодействий между основными белками-мишенями и биологически активными компонентами желчи голубой лисицы. Трехмерные структуры основных белков-мишеней были получены из банка данных белков (https://www.rcsb.org/) Исследовательской совместной лаборатории структурной биоинформатики (RCSB), а структуры желчных компонентов были получены из базы данных PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Моделирование стыковки проводилось с использованием программного обеспечения Molecular Operating Environment (MOE) (версия 2022.02). Для AKT1 была загружена кристаллическая структура (PDB ID: 4EKL), а предварительная обработка в MOE включала удаление молекул воды и исходных лигандов, добавление водорода с протонированием при физиологическом pH (7,0) и минимизацию энергии. Лигандные структуры (TUDCA, UDCA, TCDCA, TCA и билирубин) были извлечены из PubChem, и энергия была сведена к минимуму перед стыковкой. В процессе докинга были получены множественные конформации лигандов, и каждая конформация была помещена в связывающий карман рецептора в различных пространственных ориентациях. Стыковка была выполнена с использованием протокола Induced Fit, с London dG для первоначального размещения и Affinity dG в качестве функции оценки. Для каждого лиганда было сгенерировано тридцать конформаций, а окончательные позы были уточнены с помощью оптимизации силового поля. Все остальные параметры были установлены по умолчанию MOE без дальнейшей тонкой настройки. Сродство между конформацией каждого лиганда и рецептором оценивалось с помощью функции подсчета баллов программного обеспечения. Результаты стыковки оценивались по свободной энергии связывания, при этом в качестве репрезентативного режима связывания была выбрана наиболее отрицательная энергетическая конформация в самом большом кластере. Для визуализации был выбран режим связывания с наибольшим сродством и оптимальной конформацией. Значения сродства ниже −4,25 ккал/моль указывают на связывание лиганд-мишень, значения ниже −5,0 ккал/моль указывают на умеренное связывание, а значения ниже −7,0 ккал/моль указывают на сильное сродство связывания 19.

Мышиные модели ALD
Для этого исследования было приобретено 30 специфических мышей породы Куньмин без патогенов (18-22 г, в возрасте 6-8 недель, 15 самцов, 15 самок). Животные содержались в контролируемых условиях при температуре 25 ± 2 °C с относительной влажностью 60% ± 10%, с ограниченным доступом к пище и воде. Перед началом эксперимента мышей акклиматизировали в течение 1 недели.

Модель НОП была создана следующим образом. Раствор этанола 70% v/v получали путем отмеривания 70,21 мл безводного этанола в мерной колбе и добавления сверхчистой воды до конечного объема 100 мл. Раствор перемешивали магнитной мешалкой в течение 1 мин и давали постоять 5 мин до тех пор, пока не наблюдалось разделение фаз. Доза зонда составляла 2 мл/кг массы тела, вводилась один раз в сутки в течение 7 дней подряд. Утром 7-го дня, через 4 ч после окончательного зондирования, были собраны образцы крови и тканей печени для дальнейшего анализа. Становление модели подтверждено оценкой типичных показателей поражения печени. Определяли сывороточные уровни аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), общего холестерина (T-CHO) и малонового диальдегида (MDA). Кроме того, ткани печени подвергали гистопатологическому исследованию с использованием окрашивания гематоксилином и эозином (H&E) для оценки морфологии гепатоцитов, цитоплазматической вакуолизации, некроза и воспалительной инфильтрации клеток. Мыши были случайным образом распределены на пять групп (n=6 в группе): контрольная группа получала 2 мл/кг дистиллированной воды; модельная группа получала 2 мл/кг 70% этанола без обработки; положительной контрольной группе вводили гепатопротекторные таблетки в дозе 0,4 г/кг (см. таблицу материалов); Группе с высокими дозами порошка желчи голубой лисы вводили 10 г/кг порошка желчи голубой лисицы; Группе с низкими дозами порошка желчи голубой лисы вводили 5 г/кг порошка желчи голубой лисицы. Во всех группах, кроме контрольной группы, перорально вводили 70% этанол (2 мл/кг) один раз в день в течение 7 дней подряд для индуцирования алкогольного повреждения печени. На 7-й день, через 4 ч после введения этанола, были назначены соответствующие методы лечения (гепатопротекторные таблетки или порошок желчи голубой лисы) и проведены последующие эксперименты. Контрольная группа получала дистиллированную воду на протяжении всего эксперимента.

Определение сывороточных трансаминаз (АЛТ и АСТ) и набора общего холестерина (T-CHO)
Образцы крови центрифугировали при 1000 х г в течение 15 мин при 4 °С для получения сыворотки. Образцы хранились при температуре -20 °C до проведения анализа. Коммерческие наборы использовались для измерения уровней ALT, AST и T-CHO (см. Таблицу материалов) в соответствии с инструкциями производителя.

Контроль массы тела
После 7 последовательных дней приема этанола лечение проводилось на 7-й день, а эксперименты проводились через 4 часа после утреннего приема. Масса тела регистрировалась 2 раза в день в течение периода наблюдения. Массу тела без голодания измеряли с помощью электронных аналитических весов на 1, 2, 3, 5, 7, 10 и 14 день после приема.

Обработка образцов тканей
На 14-е сутки после приема препарата регистрировалась масса тела и оставшийся прием пищи. Затем животных постили во второй половине дня со свободным доступом к воде. На следующий день (после периода голодания в 12-16 часов) масса тела натощак измерялась перед эвтаназией по вывиху шейки матки. Макроскопические патологоанатомические исследования были проведены для оценки морфологических изменений в основных органах, включая, помимо прочего, сердце, печень, селезенку, легкие, почки, надпочечники, мозг, желудок, кишечник, яички, простату, яичники и матку. Образцы тканей из сердца, печени, селезенки, легких, почек, желудка и кишечника были случайным образом собраны из контрольной группы (CN) и группы голубой лисы (LH) с низкими дозами, зафиксированными в 4% параформальдегиде, погруженными в парафин, разрезанными и окрашенными гематоксилином и эозином (H&E) для гистопатологической оценки. Срезы тканей были исследованы и визуализированы под микроскопом.

Окрашивание H&E
Образцы печени фиксировали с помощью 4% параформальдегида в фосфатно-солевом буфере (PBS), погружали в парафин и разрезали. Срезы депарафинизировали в ксилоле I и II, регидратировали в убывающих концентрациях этанола (100%, 95%, 85% и 75%) и промывали водой, дифференцировали, снова промывали и воронили с помощью воронеющего раствора. После промывки срезы обезвоживали в 85% и 95% этаноле в течение 5 мин каждый, окрашивали эозином в течение 5 мин и обезвоживали в безводном этаноле I, II и III (по 5 мин каждый). Наконец, срезы были очищены в ксилоле I и II (по 5 мин каждый) и смонтированы нейтральной камедью. Изображения были получены с помощью светового микроскопа (100x).

Определение малонового диальдегида (МДА) в тканях печени
Образцы печени гомогенизировали в 9 объемах физиологического раствора с помощью тканевого измельчителя. Гомогенат центрифугировали при 700 x g в течение 10 мин при 4 °C. Анализ MDA проводили на надосадочной жидкости с использованием коммерческого набора (см. Таблицу материалов) в соответствии с инструкциями производителя.

Статистический анализ
Данные представлены в виде средних значений ± стандартных отклонений (УР). Групповые сравнения проводились с использованием дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом с наименьшей значимой разницей (LSD). Двусторонние p-значения <0,05 считались статистически значимыми.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Идентификация активных соединений в желчи голубой лисы
Голубые лисицы и медведи являются плотоядными животными с схожей физиологией пищеварения и метаболизмом. Поэтому их желчь может иметь сопоставимый состав. Используя хроматографические условия, описанные выше, каждое соединение было хорошо отделено (рис. 2). В этом эксперименте время удержания стандарта TUDCA21 использовалось для идентификации TUDCA в желчи голубой лисы (...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Согласно Докладу Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) о состоянии алкоголя и здоровья в мире за 2018 год, потребление алкоголя на душу населения в Китае увеличилось с 4,1 л в 2005 году до 7,2 л в 2016 году, что представляет собой рост на 76%. АБП, вызванная хроническим употреблением алкоголя, остается основной этиологией заболеваемости и смертности, связанных с печенью22. Bo et al. создали модель повреждения печени, индуцированного четыреххлористым углеродо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая Youth Science Foundation (NO.82204562).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,03M Дигидрофосфат натрияН/ДН/ДМобильная ВЭЖХ фаза А
0,1% Муравьиная кислота в водеFisher Scientific, СШАН/ДМобильная фаза для УПЛК
0,22 μ Мембранный фильтр MН/ДН/ДФильтрация проб
4% параформальдегидаН/ДН/ДФиксация тканей
Ацетонитрил, хроматографическая степеньFisher Scientific, СШАН/ДМобильная фаза для УПЛК
Наборы ALT, AST, T-CHOШанхай Юанье Биотехнология Ко., Лтд., КитайН/ДБиохимический анализ сыворотки крови
Аналитические весыН/ДН/ДИзмерение веса животного
Аурохолевая кислотаКитайский институт по контролю за продуктами питания и лекарствамиН/ДВнутренний стандарт для ВЭЖХ/МС
Порошок медвежьей желчиКитайский институт по контролю за продуктами питания и лекарствами, ПекинН/ДСправочные материалы
БилирубинНе указаноН/ДИдентифицированное активное соединение в желчи
Голубая лисицаЛисья ферма Суйхуа, Хэйлунцзян, КитайН/ДИсточник желчи
Порошок желчи голубой лисыПодготовка на местеН/ДОбразец для компонентного анализа
Колонна C18 для ВЭЖХAgilent Technologies, СШАZORBAX SB-C18 (в 4,6 раза; 150 мм, 5 мкм; m)Разделение ВЭЖХ
Цитоспейпhttps://cytoscape.org/Версия 3.9.1Визуализация сети и топологический анализ
ДАВИДНИЗhttps://david.ncifcrf.gov/Анализ обогащения GO/KEGG
Генные картыИнститут Вейцманаhttps://www.genecards.org/Извлечение генов, связанных с заболеванием
Гематоксилин и эозин (H& E)Н/ДН/ДГистологическое окрашивание
Система ВЭЖХAgilent Technologies, США1200 БесконечностьАнализ состава желчи
Куньминские мыши (SPF, 18– 22г)Ляонин Чаншэн Биотехнология Ко., Лтд.SCXK (Ляо) 2020-0010Модель алкогольного поражения печени
Лейцин-энкефалинSigma, СШАН/ДКалибровочный стандарт MS (40 фмоль/μ L)
Комплект для обнаружения MDAШанхай Юанье Биотехнология Ко., Лтд., КитайН/ДИзмерение окислительного стресса печени
Метанол, хроматографическая маркаFisher Scientific, СШАН/ДРастворитель для пробоподготовки
МОГруппа химических вычисленийМЧС 2022.02Молекулярный докинговый анализ
ОМИМНИЗhttps://omim.org/Извлечение генов, связанных с заболеванием
Оптический микроскопН/ДН/ДГистологическое наблюдение
ФармМапперЭКУСТhttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/Прогнозирование активных составных мишеней
Фосфорная кислотаН/ДН/ДРегулировка pH подвижной фазы
ПабХимНКБИhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/Извлечение составной структуры
Банк данных белков RCSBhttps://www.pdbus.org/Н/ДИсточник 3D-структуры белка
Охлаждаемая центрифугаН/ДН/ДОтделение сыворотки и тканей
Таурурсодезоксихолат натрия (TUDCA)Китайский институт по контролю за продуктами питания и лекарствамиН/ДВнутренний стандарт для ВЭЖХ/МС
СТРУНАЭМБЛhttp://version10.string-db.org/Анализ белок-белкового взаимодействия
ЮниПротEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/Стандартизация целей
Система UPLC-Q-TOF-MSУотерс, СШАUPLC HSS T3 (100&раз; 2,1 мм, 1,8 μ m)Идентификация компонентов
ВенниCSIChttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlВизуализация целевого перекрестка

Ссылки

  1. Thursz, M., et al. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of alcohol-related liver disease. J Hepatol. 69 (1), 154-181 (2018).
  2. Sugimoto, K., Takei, Y. Pathogenesis of alcoholic liver disease. Hepatol Res. 47 (1), 70-79 (2017).
  3. Adekunle, A. D., Adejumo, A., Singal, A. K. Therapeutic targets in alcohol-associated liver disease: progress and challenges. Therap Adv Gastroenterol. 16, 17562848231170946(2023).
  4. Wang, Y., et al. bile powder prevents drunkenness and alcohol-induced liver injury in mice via the gut microbiota and metabolic modulation. Chin Med. 19 (1), 39(2024).
  5. Li, L., Liu, C., Mao, W., Tumen, B., Li, P. Taurochenodeoxycholic Acid Inhibited AP-1 Activation via Stimulating Glucocorticoid Receptor. Molecules. 24 (24), 4513(2019).
  6. Wang, D. Q., Carey, M. C. Therapeutic uses of animal biles in traditional Chinese medicine: an ethnopharmacological, biophysical chemical and medicinal review. World J Gastroenterol. 20 (29), 9952-9975 (2014).
  7. Yang, Y. M., Cho, Y. E., Hwang, S. Crosstalk between Oxidative Stress and Inflammatory Liver Injury in the Pathogenesis of Alcoholic Liver Disease. Int J Mol Sci. 23 (2), 774(2022).
  8. Quintero, P., et al. Bile acid supplementation improves established liver steatosis in obese mice independently of glucagon-like peptide-1 secretion. J Physiol Biochem. 70 (3), 667-674 (2014).
  9. Feng, Y., et al. Bear bile: dilemma of traditional medicinal use and animal protection. J Ethnobiol Ethnomed. 5, 2(2009).
  10. Song, G., et al. Potential therapeutic action of tauroursodeoxycholic acid against cholestatic liver injury via hepatic Fxr/Nrf2 and CHOP-DR5-caspase-8 pathway. Clin Sci (Lond). 137 (7), 561-577 (2023).
  11. Li, J., et al. Pharmacological studies on the comparison between the drainage and certified Fel Ursi. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 16 (12), 749-763 (1991).
  12. Allegri, F. Respect, Inherent Value, Subjects-of-a-Life Some. Reflections on the Key Concepts of Tom Regan's Animal Ethics. Relations Beyond Anthropocentrism. 7, 1-2 (2020).
  13. Underwood, L. S., Reynolds, P. Photoperiod and fur lengths in the arctic fox (Alopex lagopus L). Int J Biometeorol. 24 (1), 39-48 (1980).
  14. Wu, L., et al. Toxicological evaluation of porcine bile powder in Kunming mice and Sprague-Dawley rats. Front Pharmacol. 15, 1424940(2024).
  15. Chen, D. X., et al. Therapeutic Effects of Different Animal Bile Powders on Lipid Metabolism Disorders and Their Composition Analysis. Chin J Integr Med. 28 (10), 918-923 (2022).
  16. Liu, J., et al. Effect of Dietary Supplementation with Calcium, Phosphorus and Vitamin D(3) on Growth Performance, Nutrient Digestibility, and Serum Biochemical Parameters of Growing Blue Foxes. Animals (Basel). 12 (14), 1814(2022).
  17. Desiderio, D. M., Dass, C. The Measurement of Leucine Enkephalin at the Femtomole Level by Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry/Mass Spectrometry Methods. Anal Lett. 19 (19-20), 1963-1971 (1986).
  18. Li, S., et al. Substitutes for Bear Bile for the Treatment of Liver Diseases: Research Progress and Future Perspective. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 4305074(2016).
  19. Ji, L., et al. Identification of bioactive compounds and potential mechanisms of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma in the treatment of atherosclerosis by integrating network pharmacology and experimental validation. Biomed Pharmacother. 165, 115210(2023).
  20. Shi, J., Zhou, B., Ding, C. Study on the Chemical Components of Blue Fox Gall Powder. J Trad Chinese Med Herald. 31 (03), 83-88 (2025).
  21. Gómez, C., Stücheli, S., Kratschmar, D. V., Bouitbir, J., Odermatt, A. Development and Validation of a Highly Sensitive LC-MS/MS Method for the Analysis of Bile Acids in Serum, Plasma, and Liver Tissue. Metabolites. 10 (7), 282(2020).
  22. Wu, M., et al. Estimated projection of incidence and mortality of alcohol-related liver disease in China from 2022 to 2040: a modeling study. BMC Med. 21 (1), 277(2023).
  23. Bo, Z., Rui, W., Jingbo, J. Arctic fox bile can alleviate carbon tetrachloride-induced acute liver injury. Intl J Clin Exp Med. 9 (2), 5050-5055 (2016).
  24. Zhou, C. F., Gao, G. J., Liu, Y. Advances in studies on bear bile powder. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 40 (7), 1252-1258 (2015).
  25. Zhou, C. S., Yin, Z. Y., Zhao, W. X. Bear bile affects immunologic feature of hepatic stellate cells. J Hepatol Surg. 20 (3), 204-208 (2012).
  26. Wang, N., et al. A comparative study on the hepatoprotective action of bear bile and Coptidis Rhizoma aqueous extract on experimental liver fibrosis in rats. BMC Complement Altern Med. 12, 239(2012).
  27. Ratziu, V., et al. A randomized controlled trial of high-dose ursodesoxycholic acid for nonalcoholic steatohepatitis. J Hepatol. 54 (5), 1011-1019 (2011).
  28. Moorhouse, T. P., et al. Substitutes for wildlife-origin materials as described in China's "TCM" research literature. Global Ecol Conservation. 34 (April), e02042(2022).
  29. Steyn, W. J., Wand, S. J., Jacobs, G., Rosecrance, R. C., Roberts, S. C. Evidence for a photoprotective function of low-temperature-induced anthocyanin accumulation in apple and pear peel. Physiol Plant. 136 (4), 461-472 (2009).
  30. Intagliata, S., et al. Discovery of a Highly Selective Sigma-2 Receptor Ligand, 1-(4-(6,7-Dimethoxy-3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)butyl)-3-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-one (CM398), with Drug-Like Properties and Antinociceptive Effects In Vivo. AAPS J. 22 (5), 94(2020).
  31. Contreras-Zentella, M. L., Villalobos-Garcia, D., Hernandez-Munoz, R. Ethanol Metabolism in the Liver, the Induction of Oxidant Stress, and the Antioxidant Defense System. Antioxidants (Basel). 11 (7), 1258(2022).
  32. Lala, V., Zubair, M., Minter, D. A. Liver Function Tests. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2023).
  33. Seo, E., Kang, H., Choi, H., Choi, W., Jun, H. S. Reactive oxygen species-induced changes in glucose and lipid metabolism contribute to the accumulation of cholesterol in the liver during aging. Aging Cell. 18 (2), e12895(2019).
  34. Freitas, I. N., et al. Insights by which TUDCA is a potential therapy against adiposity. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1090039(2023).
  35. Lu, W., Xi, R., Huaiwu, H. Ursodeoxycholic acid (UDCA) reduces hepatocyte apoptosis by inhibiting farnesoid X receptor (FXR) in hemorrhagic shock (HS). Curr Mol Med. 23 (6), 550-558 (2022).
  36. Reyes-Gordillo, K., et al. Akt1 and Akt2 Isoforms Play Distinct Roles in Regulating the Development of Inflammation and Fibrosis Associated with Alcoholic Liver Disease. Cells. 8 (11), 1337(2019).
  37. Li, J., Guo, C., Wu, J. The Agonists of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma for Liver Fibrosis. Drug Des Devel Ther. 15, 2619-2628 (2021).
  38. Dichtel, L. E., Cordoba-Chacon, J., Kineman, R. D. Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor 1 Regulation of Nonalcoholic Fatty Liver Disease. J Clin Endocrinol Metab. 107 (7), 1812-1824 (2022).
  39. Takahashi, Y. The Role of Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor-I in the Liver. Int J Mol Sci. 18 (7), 1447(2017).
  40. Feng, M., et al. Kupffer-derived matrix metalloproteinase-9 contributes to liver fibrosis resolution. Int J Biol Sci. 14 (9), 1033-1040 (2018).
  41. Ma, X. Y., et al. Ursolic acid reduces hepatocellular apoptosis and alleviates alcohol-induced liver injury via irreversible inhibition of CASP3 in vivo. Acta Pharmacol. 42 (7), 1101-1110 (2021).
  42. Taguchi, K., Fukami, K. RAGE signaling regulates the progression of diabetic complications. Front Pharmacol. 14, 1128872(2023).
  43. Lino Rodrigues, K., et al. Aerobic Exercise Training Improves Microvascular Function and Oxidative Stress Parameters in Diet-Induced Type 2 Diabetic Mice. Diabetes Metab Syndr Obes. 15, 2991-3005 (2022).
  44. Wilkening, S., Stahl, F., Bader, A. Comparison of primary human hepatocytes and hepatoma cell line Hepg2 with regard to their biotransformation properties. Drug Metab Dispos. 31 (8), 1035-1042 (2003).
  45. Takebe, T., et al. Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).
  46. Goessling, W., Sadler, K. C. Zebrafish: an important tool for liver disease research. Gastroenterology. 149 (6), 1361-1377 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.