Установление и оценка модели остеохондрального дефекта полной толщины у овец

Краткое содержание

Здесь мы представляем интегрированный протокол создания контролируемых остеохондральных поражений в коленях овец для создания экспериментальной модели, подходящей для исследований регенерации костной и хрящовой ткани. Протокол описывает метод индуцирования остеохондрального дефекта всей толщины бедренного мыщелка с использованием методов, минимизирующих воздействие на благополучие животных и вариабельность результатов.

Аннотация

Старение, травмы, генетическая предрасположенность и образ жизни влияют на деградацию хряща человеческого организма. После травмы постоянные оскорбления, вызванные повседневной деятельностью, могут вызвать патологические состояния, такие как остеоартрит — основную причину инвалидности и социально-экономических потерь во всём мире. Главной целью всех ортопедических хирургов, лечащих травмы хряща, было анатомическое уменьшение объёма поражения, восстановление поверхности хряща и восстановление стабильности суставов. Животные модели необходимы для разработки терапевтических препаратов, но текущие модели дефектов хряща неудовлетворительны. Остеохондральные поражения у овец являются ценной моделью для тестирования новых методов лечения и биоматериалов, способствующих восстановлению хряща и костей в человеческих суставах. Это исследование установило эффективный протокол для индуцирования острых остеохондральных дефектов у крупных животных. Стандартизированное поражение было создано в обоих медиальных мыщелках бедренной кости. Одно колено было случайным образом назначено для обработки желатином-метакрилоилом, а противоположное колено служило контрольным. Через шесть месяцев после операции область мышечка бедренного мышца была удалена, рассеченные коленные суставы были декальцифицированы, внедрены в парафин и разрезаны на срезы, которые были окрашены гематоксилином и эозином. Для оценки поражения использовались баллы. Эта методология позволяет немедленно проводить макроскопическое наблюдение после индукции травмы. Кроме того, эта модель эффективно воспроизводит клинические дефекты хряща, предоставляя ценную модель для изучения их патологии и разработки инновационных терапевтических подходов.

Введение

Хрящ необходим для сохранения механической компетентности скелетной системы, обеспечивая нетрение поверхности между костями в диатродиальных суставах, тем самым предотвращая эрозию суставной^{поверхности 1}. Способность хряща выполнять эти сложные механические функции во многом зависит от уникального состава и организации его внеклеточного матрикса — особенно от исключительно высокого содержания воды. Вода играет ключевую роль в структуре и функции суставного хряща, составляя примерно 70–80% его состава. Вода является основным элементом, отвечающим за несущую нагрузку во время сжатия. Способность ткани сопротивляться сжимающим силам зависит от того, как вода структурирована и ограничена внутри матрицы. Эта организация возможна благодаря взаимодействию воды с основными макромолекулами хряща, такими как коллаген и протеогликаны, особенно агрегаты, связанные с гиалуроновой^{кислотой 1}. Они действуют как сдерживающие структуры, которые порядочают и ограничивают движение воды. Это взаимодействие обеспечивает ткани не только жёсткость, но и устойчивость и способность восстанавливаться после деформации. Взаимодействие между свободной водой, связанной водой и макромолекулярной матрицей составляет ядро биомеханического поведения^{хряща 2}.

Несмотря на выдающуюся способность поддерживать и распределять физические и механические нагрузки, достигающие суставов, после повреждения суставный хрящ (АК) имеет ограниченный потенциал для спонтанного восстановления из-за низкой митотической активности хондроцитов и плохой васкуляризации^{тканей 2}. Повреждение суставов обычно связано с прогрессирующей потерей молекул и белков внеклеточного матрикса (ECM), которые составляют 95% ткани и придают биомеханические особенности AC³. Дисбаланс между синтезом и деградацией компонентов ЭКМ, смещающийся в сторону катаболических процессов, может привести к остеоартриту (ОА) — самому распространённому дегенеративному заболеванию суставов в мире. Остеоартрит поражает примерно 10–12% взрослого населения, вызывая боль, ограничивая подвижность и значительно снижая автономию^{пациентов 4}. Остеоартрит чаще встречается у пожилых популяций из-за накопленных повреждений на суставе в течение жизни; Однако с началом клинического состояния связаны различные факторы риска, такие как пол, генетическая предрасположенность, ожирение и повседневные^{привычки 4}. До сих пор терапевтические подходы к лечению ОА включали клиническое управление симптомами и тотальную замену суставов в самых тяжёлых^{случаях 5}. Без надёжной, воспроизводимой и надежной терапевтической стратегии для эффективного лечения ОА изучаются инновационные подходы к пониманию и решению проблем, связанных с повреждением суставного хряща.

Для восстановления, регенерации и улучшения движения суставов при артрите прогресс в регенеративной медицине стал новой надеждой на восстановление повреждённого AC ^6,7. Использование аутологичных хондроцитов в сочетании с имплантацией ЭКМ и внутрисуставной инъекцией стволовых клеток отражает современное состояние в этой^{области 8,9,10}. Основная проблема этих подходов — обеспечение правильной дифференцировки и функционального синтеза ЭКМ имплантированными клетками. Аутологичные хондроциты, как правило, образуют фиброхрящ или прогрессируют в гипертрофическое состояние, создавая новую дисфункциональную ткань, которая не воспроизводит физиологические особенности АК, что приводит к неполному восстановлению и часто позднему^{ухудшению.} Биоматериалы могут использоваться для управления поведением клеток во время регенерации тканей, обеспечивая временную основу для клеток для присоединения и синтеза нового, естественного и функционального внеклеточного^{матрикса} 12,13,14. Идеальный биоматериал для инженерии хряща должен обеспечивать прочную интеграцию с окружающими тканями, особенно с подхондральной костью, поскольку отказ на этом интерфейсе снижает долгосрочное восстановление. Однако слабая связь между хрящом и костным слоями остеохондральных каркасов и плохая интеграция с тканью хозяина остаются серьёзными^{проблемами 15}. Хотя каркаси пытаются имитировать родную остеохондральную архитектуру, воспроизведение сложной микроструктуры интерфейса всё ещё сложно. Это подчёркивает важность исследований и разработки каркасов с биологическими свойствами, которые одновременно поддерживают регенерацию хряща и костей при сохранении стабильности^{интерфейса 16}. Желатин, получаемый из коллагена — ключевого компонента хрящевой ткани — обладает такими свойствами, как клеточно-связывающие мотивы и биоразлагаемость, что свидетельствует о его потенциале как поддерживающего биоматериала в сочетании с регенеративными факторами для лечения остеохондральных поражений. При химической модификации с метакрилангидридом для получения желатинового метакрилоила (GelMA) он становится фотосшитым, что позволяет осуществлять инъекции и фотополимеризацию in situ, что повышает механическую стабильность для применений в регенеративной^{медицине 17}.

Остеохондральные поражения имеют ограниченную регенеративную способность, что представляет собой клиническую проблему. Доклинические исследования, использующие крупные животные модели травмы коленного сустава, являются необходимыми для трансляционных исследований, поскольку позволяют систематически оценивать переменные, влияющие на механизмы заболевания и терапевтические результаты. Часто используемые виды включают свиней, коз, собак, лошадей и овец, каждый из которых обладает определёнными преимуществами и ограничениями, которые необходимо учитывать при экспериментальной разработке. Кроме того, все эти виды демонстрируют ограниченное эндогенное восстановление хондральных и остеохондральных дефектов, как это наблюдалось у людей¹⁸. Чтобы эти модели предсказывали исходы для человека, они должны воспроизводить соответствующие параметры, такие как анатомия, физиология и биомеханические^{свойства 18}. Для сравнения: толщина человеческого суставного хряща в бедренных мыщелках составляет от 1,8 до 2^{мм 19}, а диаметр повреждений хряща, обычно требующих лечения, составляет 10 мм и^{больше 20}.

Модель свиньи предлагает преимущества для исследований регенерации хряща и остеохондра, поскольку размер сустава, толщина хряща и требования к несению веса очень похожи на наблюдаемые у людей¹⁸. Некоторые миниатюрные породы свиней, такие как гёттингенская мини-свинья, легко управляются и достигают скелетной зрелости в возрасте от 18 до 22 месяцев в^{возрасте 21} года. Толщина хряща варьируется от 1 до 2 мм, а дефекты от 6 до 8 мм могут^{быть созданы 18}. Характеристики костей, включая толщину трабекуляров, скорость её размещения и организацию волокон коллагена, сопоставимы с^{человеческими 22}. Однако у модели свиней есть и ограничения: даже у миниатюрных пород коленный (штифленный) сустав меньше, чем у людей, что ограничивает появление крупных экспериментальных дефектов. Кроме того, большинство исследований используют скелетно незрелых животных из-за связанных с этим затрат на обслуживание, что может завысить потенциал^{ремонта 23}.

Козы обладают анатомией суставов, биомеханикой и толщиной хряща, как у людей²⁴. Им не нужны специализированные условия, они просты в обращении и стоят относительно^{недорого, 25}. Толщина хряща козы варьируется от 0,8 до 2,0 мм, а наиболее сообщаемый критический размер дефекта — 6^{мм 26}. Однако существует значительное различие толщины хряща между породами, размерами и полом, что может приводить к непоследовательным^{результатам 27}. Соотношение хресток и субхондральной кости и трабекулярная костная структура также сопоставимы с^{человеческими 28}. Скелетная зрелость наступает относительно поздно — в возрасте от 24 до 36 месяцев в^{возрасте 29} лет. С биомеханической точки зрения, коленное колено козы испытывает давление в суставах и циклические нагрузки, подобные^{человеческим 25}, хотя сгибание колена во время походки выше (50°-70° у коз против <30° у людей), что приводит к чётким контактным^{зонам 30}. Эта разница, в сочетании с более высоким пиковым давлением, может способствовать снижению эффективности восстановления^{хряща 30}.

Среди крупных животных собаки выделяются способностью переносить реабилитационные процедуры, иммобилизацию суставов и тренировки к ходьбе на беговой дорожке, плаванию и контролируемым упражнениям на несущую^{нагрузку 18}. Толщина суставного хряща варьируется от 0,9 до 1,3 мм, а критический размер дефекта составляет примерно 4 мм, что ограничивает прямое сравнение с человеческой^{моделью 25}. Скелетная зрелость достигается в период от 8,5 до 13,7 месяцев в^{возрасте 31} года. Анатомически собачье колено отличается от человеческого, а вариации биомеханики, нагрузочных паттернов и зрелости между породами усложняют экстраполяцию^{результатов 32}. Несмотря на эти анатомические различия и небольшой размер дефекта, модель собак остаётся ценной для исследований, включая реабилитационные протоколы или спонтанные патологии хряща, похожие на человеческие. Однако его экспериментальное использование ограничено этическими^{соображениями 29}.

Модель лошадей является крупнейшей из доступных животных моделей для исследований восстановления хряща и естественным образом развивает возрастные или травматичные хондральные поражения и остеоартрит, аналогичные тем, что у людей³³. Лошади обладают анатомическими и биомеханическими особенностями, сопоставимыми с человеческими, такими как вертикальный коленный сустав, большой размер суставов, толщина хряща от 2 до 3 мм — ближе к человеческому хрящу при полном разгибании колена во время походки, а также сопоставимая минеральная плотность^{костей 34}. Созревание скелета происходит в период от 24 до 48 месяцев, а обычно изучаемые размеры дефектов варьируются от 6 до 20^{мм 32,33}. К ограничениям относятся высокая вертикальная нагрузка на сустав лошадиного сустава во время передвижения, что подвергает импланты воздействию больших сил, чем у людей, и затрудняет длительное^{заживление 35}. Кроме того, затраты на приобретение и обслуживание высоки, и требуется специализированные^{объекты 36}.

Овцы широко используются в качестве моделей в исследованиях восстановления хряща благодаря их доступности, спокойному характеру, хорошей переносимости к операциям на суставах и простоте обращения³⁷. Скелетная зрелость овец обычно достигается примерно в 2–3 года в^{возрасте 25} лет. Кроме того, овино колено проявляет анатомические и биомеханические сходства с человеческим^{коленным суставом 38}. Толщина хряща в медиальном бедровом мыщелке варьируется от 0,7 до 1,7 мм, а плотность минералов костей и контактное давление также сопоставимы, хотя доля объёма костей выше у^{овец 39}. Из-за уменьшения толщины хряща индуцированные дефекты часто распространяются в подхондральную кость, что делает эту модель более подходящей для исследований остеохондральных^{дефектов 32}. Поражения диаметром от 6 до 8 мм обычно образуются в таких местах, как мыщелки бедра и^{трохлея 32}. Кроме того, модель овец даёт преимущества для двусторонних исследований, позволяя сравнивать обработанные и контрольные участки внутри одного и того же животного, что снижает вариабельность, связанную с хозяином, улучшает согласованность и воспроизводимость, а также минимизируя количество животных, требуемых⁴⁰. Каждая модель обладает разной степенью сходства с физиологией и биомеханикой человека. Поэтому выбор модели должен балансировать между биологической значимостью, практической осуществимостью и этическими соображениями. В настоящем исследовании были включены неплодородящие самки овец в возрасте 12 месяцев, оцениваемые в период сезонного анеструса.

В этом исследовании было направлено разработать эффективный протокол для создания острых остеохондральных дефектов у крупных животных. Протокол предполагает создание остеохондрального поражения всей толщины для создания модели, подходящей для исследований регенеративной медицины. Кроме того, рассматривается применение гидрогеля GelMA как ориентир для восстановления тканей и перспективный способ доставки регенеративных молекул и клеток. Протокол описывает хирургическую процедуру создания остеохондральных поражений в суставном хряще колена овцы. Он адаптирован к различным приложениям в области тканевой инженерии, включая индукцию аналогичных повреждений в других крупных животных моделях регенеративной медицины.

Протокол

Исследование получило одобрение Комитета по этике в области исследований и было сертифицировано сертификатом об этической презентации под номером 6092250823/2023. В настоящем исследовании были отобраны девять самок белых суффолкских овец в возрасте 12 месяцев. Дефект возник в обоих медиальных бедренных мыщелках каждого животного. Пустые дефекты использовались в качестве контроля. Каждому животному было рандомизировано одно колено для лечения GelMA, а другое — как контрольный состав. Эта стратегия позволила оценить естественную регенеративную способность и снизить влияние индивидуальных вариаций, таких как генетические факторы и зрелость скелета. За животными наблюдали в течение 6 месяцев для оценки формирования гиалинового хряща.

1. Процедура анестезии

1. Лишите животных кормления и воды примерно за 24 часа до операции.
2. Предварительное лечение животных внутримышечным меперидином 4 мг/кг в сочетании с мидазоламом 0,3 мг/кг.
3. Наполните анестетиком вапорайзер за день до использования, когда комната пуста, и наденьте защитные перчатки, чтобы минимизировать риск профессионального воздействия.
4. Перед каждой процедурой проверяйте анестетический контур на наличие протечек и выполняйте все манипуляции в хорошо проветриваемом помещении, следуя институциональным рекомендациям по биобезопасности.
5. Через 15 минут заканюйте животных катетером 18 G и введите раствор лактатного Рингера с дозой 10 мл∙^кг-1∙^h-1.
6. Введите внутривенную анестезию с 1% пропофолом при дозе 4 мг/кг.
7. Интубировать животных с помощью манжетированной эндотрахеальной трубки толщиной 7,5–8,0 мм и поддерживать их в состоянии спонтанной вентиляции с помощью полузакрытой круглой дыхательной системы, подающей кислород с FiO₂ 1,0 и расходом 50 мл/кг.
8. Используйте технику частичной внутривенной анестезии (PIVA), поддерживайте пропофол как непрерывную инфузию в концентрации 0,1 мг∙^{кг-1 мин-1} и лишь корректируйте концентрацию изофлурана для достижения адекватной хирургической плоскости анестезии. Следите за глубиной анестезии на протяжении всей процедуры.
9. Проведите периневральные блокады бедренного и седалищного нервов под руководством нейролокализатора. Вводите 0,2 мл/кг 2% лидокаина на каждую блокаду.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Операция должна начаться только после подтверждения анестезии (отсутствие реакции на сильное щипывание копыт и тонус челюсти).

2. Хирургическое вмешательство in vivo

1. Дезинфицируйте побритое колено с помощью местного антисептика хлоргексидина глюконата и поместите животное в позу спинного декубита в операционной.
2. Определите суставную полость, коснувшись колена животного, чтобы определить точное место разреза. Сделайте двойной изогнутый разрез кожи (начиная дистально от латерального бедренного эпикондилка и заканчивающаяся медиально на уровне бугоркости большеберцовой кости).
3. Определите надколенное сухожилие, надколенник, надколенную связку и медиальную часть суставной капсулы. Разрезайте капсулу, чтобы обнажить медиальный соскалок бедренной кости. Гиперфгиб колена, чтобы визуализировать самую дистальную область суставного хряща мыщелка.
4. Сделайте хирургический разрез примерно 3-5 см в области мыщелка животного. Удалите тканевые слои под кожей, чтобы получить доступ к мыщелку, и поддерживайте участок разреза чистым для предотвращения заражения.
5. Собирайте синовиальную жидкость с помощью шприца и игли. Часть образца перенесите в EDTA-пробирку для анализа и используйте оставшийся материал для подготовки мазочных препаратов.
6. Расположите ретракторы так, чтобы полностью открыть поверхность мыщелка. Чем более открыт мыщел, тем легче вызвать травму на следующем этапе.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В этот момент обращайте внимание на лапу животного. Сгибание или разгибание колена может помочь обнажить мыщелке.
7. Просверлите дефект диаметром 8 мм и глубиной 5 мм в центре медиального мыщелка бедренной кости с помощью ортопедического сверла с трефиновым сверлом диаметром 8 мм, обеспечивая правильное выравнивание для предотвращения непреднамеренных размеров и форм, и поддерживая угол 0° относительно самой дистальной области суставного хряща.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните трепанацию на минимальной скорости, аккуратно управляя сверлом и используя только столько вращения, чтобы разрезать хрящ и подхондральную кость, а также локальное охлаждение с 0,9% NaCl при комнатной температуре, даже на низкой скорости.
8. Проведите хирургическое удаление остеохондральной пробки с помощью ортопедического молотка и остеотомии.
9. Очистите удлинение раны стерильной марлей, убедившись, что внутри повреждения нет крови и тканевых остатков.
10. Нанесите 200 мкл жидкой формулы GelMA с 20% (w/v), содержащей 0,25% (w/v) литий-фенил-фенил-2,4,6-триметилбензоилфосфинат (LAP) в качестве фотоинициатора, на внутреннюю сторону повреждения, пока она не достигнет поверхности.
11. Фотокросслинк: гидрогель GelMA под светодиодом 395-405 нм (общая мощность 9 Вт), расположенным примерно в 5 см от образца в течение 180 секунд. При таких условиях оценочная радиация на поверхности составляет ~10 мВт/см², что приводит к общей энергии экспозиции примерно 1,8 Дж/см².
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте защитные очки при использовании ультрафиолетового света.
12. Аккуратно снимайте ретракторы.
13. Закройте поражение отдельными швами в различных слоях ткани, чтобы предотвратить образование сером. Количество необходимых швов зависит от степени хирургического разреза.
14. Наложите стерильную повязку на швы для предотвращения инфекций.

3. Послеоперационный уход

1. Следите за животными во время восстановления после наркоза, включая жизненно важные показатели, такие как частота сердечных сокращений (70-90 ударов в минуту), частота дыхания (12-20 вдохов/мин), температура тела (39 °C до 40,5 °C) и нормальные слизистые оболочки с временем заполнения капилляров 1-2 секунды. Регулярно пальпацируйте лицевые и бедренные артерии, чтобы проверить, легко ли ощущается пульс.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Восстановление после анестезии должно происходить в тихой, чистой, тёплой и мягкой среде, с минимальным освещением и низким уровнем шума.
2. Проведение повязок в хирургическом месте с использованием местного пенициллина (бензатинпенициллин G: 1 250 000 МЕ; прокаин пенициллин G: 1 250 000 МЕ; дигидрострептомицин сульфат: 1,25 г; мочевина: 2,50 г) один раз в день в течение 10 дней.
3. Убедитесь, что животные сразу после пробуждения от наркоза оставались в положении четвероногих, положите вес на оперированную конечность и не проявляйте признаков дискомфорта.
4. Послеоперационная анальгезия состояла из мелоксикама (0,4 мг/кг каждые 24 часа) и трамадола (2 мг/кг каждые 12 часов) в течение 5 дней. Дополнительная спасательная доза трамадола была введена, когда были выявлены выражения лица, связанные с болью, с помощью шкалы гримасы овец⁴¹ — валидированного инструмента, основанного на специфических единицах движения лица (включая сжатие орбиты, реакцию флемена, положение ушей и голову) для оценки послеоперационной боли и страдания у овец.

4. Гистологический анализ

1. Через шесть месяцев после операции проведите эвтаназию. Для достижения глубокой седации перед введением препарата для эвтаназии предварительно вводите животным внутривенно кетамином (10 мг/кг) и ксилазином (1 мг/кг), используя дозы, намеренно превышающие рекомендуемые для клинических процедур дозы, чтобы обеспечить быстрое наступление глубокой седации, что подтверждается принятыми протоколами эвтаназии. Затем введите пропофол для вызова анестетической комы. Затем вводите хлорид калия при 2 мэкв/кг внутривенно до остановки дыхания и сердечно-сосудистых заболеваний и отсутствия всех защитных рефлексов.
2. Разрезать дистальный бедренный эпифиз для удаления области мыщелков. Зафиксируйте расчленённые коленные суставы формалином с 10% нейтральным буфером и декальцифицируйте в 5% ЭДТА (этилендиаминтетрауксусную кислоту) при 34 °C, меняя раствор ЭДТА каждые 3 дня.
3. Внедрить материал в парафин и разрезать на срезы размером 4 мкм. Удалите парафин из затворов, замочив их в ксилоле при 65 °C на 3 x 5 минут. Гидратировать с 10-20 погружениями в этанол (99%, 95%, 70%), затем деионизированной водой в течение 5^{минут 42}.
4. Для окрашивания гематоксилином и эозином (H&E) окрашивайте срезы гематоксилином Харриса и контрокрашивайте эозином, сканируйте с увеличением 20× с помощью автоматического сканирующего микроскопа и анализируйте с помощью связанного программного обеспечения.
5. Оценить поражение согласно инициативе по гистопатологии Международного общества остеоартрита (OARSI)⁴³: балл 0 указывает на нормальный хрящ; оценка 1 отражает поверхностную фибрилляцию без потери хряща; оценка 2 соответствует вертикальным трещинам, достигающим слоя непосредственно под поверхностной зоной, сопровождающихся частичным потерей поверхностной пластинки; оценка 3 указывает на вертикальные расщелины или эрозию, которые проникают в кальцифицированный хрящ и затрагивают менее 25% поверхности суставов; Оценки 4, 5 и 6 представляют собой вертикальные расщелины или эрозию, достигающие кальцифицированного хряща и охватывающие соответственно 25-50%, 50-75% и более 75% поверхности суставов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании поражения с вертикальными расщелинами или эрозиями, простирающимися в кальцифицированный хрящ и охватывающими более 25% поверхности суставных слоёв, получили балл 4.

Результаты

Индукция остеохондральных дефектов

Целью этого исследования было разработать эффективный протокол для индуцирования острых остеохондральных дефектов у крупных животных. Травмы были созданы механически во время хирургической процедуры, что привело к образованию поражения диаметром примерно 8 мм и глубиной 5 мм (рисунок 1). Учитывая оценки, установленные Международным обществом регенерации хряща и сохранения суставо...

Обсуждение

Для преодоления проблем в терапии хряща, таких как недостаточность хондрогенной дифференцировки и созревания ЭКМ, неклинические исследования остаются необходимыми для оценки терапевтических стратегий. Ранее были описаны методы для неклинических моделей повреждённой хрящевой ткани с использованием различных^{методов 45}. Однако в литературе до сих пор отсутствуют подробные отчёты и стандартизированные процедуры для индуцирования острого остеохондрального повреждения к...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Нитка шва 25 полиглекапрона, No 2-0	Ethicon		Швная нить для общего закрытия мягких тканей использовалась для зашивания суставной капсулы и подкожной клеточной ткани.
Антитела, анти-ибета;-тубулин	Инвитроген	PA516863	Антитела против &бета;-тубулина — двух субъединиц (&альфа;/&бета;), составляющих микротрубочки цитоскелета
Анестезиологическое устройство	HB hospitalar		Оборудование для ингаляционной анестезии
Axio Scan Z1	Zeiss, Мюнхен, Германия		Микроскоп
Бензатин пенициллин G	Оуофино		Антибиотики
Катетер 18 G	Солидор		Внутривенный катетер
Цефалексин	Вирбак		Антимикробная терапия
Водный раствор хлоргексидина диглюконата	РИОКУ и ОСТРО; MICA		Антисептик, используемый для лечения кожной антисептики
Манжетная эндотрахеальная трубка 7.5– 8,0 мм	Солидор		Манжетированная эндотрахеальная трубка
DAPI	Sigma	D9542	Флуоресцентный краситель
Модифицированный Eagle Medium от Dulbecco	Gibco	12100-046	Среда для культивирования клеток
Дигидрострептомицинсульфат	Оуофино		Антибиотики
Трубка EDTA	Бектон Дикинсон	362788	Трубка для сбора
Эозин	Неон	1795	Краситель, используемый для визуализации морфологии клеток, окрашивания и nbsp; Цитоплазма.
Этилендиаминтетрауксусная кислота	Sigma	E5134	Способствует постепенной деминерализации костной ткани
Сыворотка плода для быка	Gibco	12657-029	Добавка для культивирования клеток с факторами роста
Формалин	Сигма-Олдрич	47608	Сохранение морфологии тканей
Лиофилизация GelMA	TissueLabs	GLMA-LYO-1	Фотосшитаемый гидрогель
Гематоксилин Харриса	Лаборклин	620503	Краситель, используемый для визуализации морфологии клеток, окрашивающий ядра.
Изофлурано	Cristá лия		Поддержание анестезией
Кетамин 10%	VETNIL		Процедура эвтаназии
Раствор Лактатного Рингера	Фрезениус Каби		Жидкостная терапия
L-глутамин 200 мМ	Gibco	25030-081	Незаменимая аминокислота для культивирования клеток
Гидрохлорид лидокаина	Cristá лия		Местная анестезия
Жизнеспособность LIVE/DEAD Kit/цитотокситетный набор	Инвитроген	L3224	Набор флуоресцентного анализа для оценки жизнеспособности клеток
Мелоксикам	Оуро фино		Противовоспалительный и обезболивающий для послеоперационного периода
Мидазолам гидрохлорид	Cristá лия		Преанестетические препараты
Мононилонная нитка для шва, No 3-0	Ethicon		Шов, используемый для закрытия кожи
NaCl 0,9%	Кристалия		Солевый раствор
Нейролокализатор	Neurolocalizador DL 250 DeltaLife		Местная анестезия под управлением нейролокализатора и периферического нервного электростимулятора.
Ортопедический дрилл	Канюлированная мини-ортопедическая дрель (деликатная) — хромированный мандрел — бренд Makita		Используется для ортопедических операций.
Ортопедический молоток и bbsp;	Эдло	Хаммер Нойфилд (10-3155)	Общие характеристики: длина 20 см и вес 560 гр; Материал: высококачественная нержавеющая сталь; Применение: показано для травматологических и ортопедических процедур, требующих контролируемого удара. Сертификации: продукция имеет сертификаты качества, такие как ISO (Международная организация по стандартизации): 13485:2016, соответствующие европейским стандартам соответствия и хорошим производственным практикам.
Остеотом Ламботта	Эдло	Остеотом Ламботта (10-0749)	Остеотом Ламботта (6 мм x 17 см / 6 3/4") — это высокоточный хирургический инструмент, используемый преимущественно в ортопедических операциях и нейрохирургических операциях, связанных с манипуляциями с костями. С наконечником шириной 6 мм он идеально подходит для тонких порезов, изменения формы и удаления компактного хряща и подхондральной кости.
Пенициллин стрептомицин	Gibco	15140-122	Антибиотик широкого спектра, широко используемый в клеточном культурировании
Петидин гидрохлорид	Cristá лия		Преанестетические препараты
Хлорид калия 19,1%	Samtec		Процедура эвтаназии
Прокаин пенициллин G	Оуофино		Антибиотики
Пропофол	Cristá лия		Индукция и поддержание анестезией
Лактат рингера	Cristá лия		Жидкостная терапия
Полузакрытая круглая дыхательная система	HB hospitalar		Дыхательные контуры для анестезии
Стерильный бинт из крепа	Кремер		Стерильный креповый бинт, используемый для покрытия дистальных концов конечностей, на которых оперируются.
Stimuplex D, 22 Ga. x 2 дюйма. (50 мм) Изолированная игла с удлинителем, 30 градусов; Фаска (STIMD2250/30)	BBRAUN		Периневральная местная анестезия
Трамадол-гидрохлорид	Cristá лия		Послеоперационная анальгезия
Трефиновое сверло	Дрель для костного трефина, диаметр мм и тир; модель: Contra-Angle, марка: surgical WF		Трефиновое сверло для сбора костей 8,0 мм; производилось из хирургической стали; используется при операциях по пересадке костей; Служит для удаления костного блока для гистологического анализа или аутотрансплантации.
Ксилазин 10%	VETNIL		Процедура эвтаназии