Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

CD8+CD103+ Треги снижают заболевание сухого глаза за счет подавления воспаления, опосредованного Т-клетками CD4+, и защиты целостности глазной поверхности у мышей

319 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69110

⸱

21 ноября 2025 г.

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan Second People's Hospital

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол, демонстрирующий адсекционный перенос регуляторных Т-клеток CD8+CD103+ в качестве иммунотерапевтического вмешательства для смягчения высыхающей стресс-индуцированной сухости глаз через комплексную модуляцию патогенных ответов CD4+ Т-клеток.

Аннотация

Регуляторные Т-клетки CD8+CD103+ представляют собой специализированную иммуносупрессивную популяцию с продемонстрированным терапевтическим потенциалом при аутоиммунных заболеваниях; однако их роль в воспалении поверхности глаз остаётся неизученной. Этот протокол описывает систематический подход к выделению Т-клеток CD8+CD103+ у мышей, подвергшихся высыхающему стрессу, и оценки их терапевтической эффективности посредством адсекционного переноса при экспериментальных заболеваниях сухого глаза. Методология включает магнитно-активированное сортирование клеток для очистки Т-клеток CD8+CD103+, стандартизированную индукцию стресса при высушивании и комплексные функциональные оценки, включая измерение слёзного образования, тестирование проницаемости роговицы и молекулярный анализ воспалительных медиаторов. Репрезентативные результаты показывают, что терапия CD8+CD103+ Т-клеток значительно восстановила производство слёз, сохранила популяции клеток конъюнктивального кубка и сохранила целостность эпителиального барьера роговицы. Лечение позволило значительно подавить экспрессию матрикс-металлопротеиназ, снизить апоптотическую гибель клеток и модулировать профили цитокинов от провоспалительных к тканево-защитных паттернов. Протокол эффективно снизил инфильтрацию CD4+ Т-клеток в глазные ткани, одновременно подавляя производство патогенных IL-17A и IFN-γ и повышая защитные уровни IL-13. Этот подход предоставляет надёжную экспериментальную основу для изучения иммуномодуляции CD8+CD103+ Т-клеточной системы при нарушениях поверхности глаз и закладывает основополагающую методологию для разработки новых клеточных терапевтических средств для лечения сухого глаза.

Введение

Заболевание сухого глаза (DED) представляет собой распространённое и изнуряющее заболевание поверхности глаз, которое стало серьёзной глобальной проблемой для здоровья, затрагивая 10-30% населения мира и существенно снижая качество жизни, продуктивность труда и психологическое благополучие пациентов 1,2,3. Патофизиология ДЭП включает сложное взаимодействие между нестабильностью слёзной плёнки, воспалением глазной поверхности и нейросенсорными нарушениями, которые вместе поддерживают порочный круг повреждения тканей и функциональныхнарушений 4. На молекулярном уровне гиперосмолярность слезы служит центральным патогенным механизмом, запуская каскадные воспалительные события, активирующие пути стрессового ответа, вызывающие высвобождение провоспалительного медиатора и в конечном итоге нарушающие тонкий гомеостатический баланс микросреды поверхности глаз 5,6,7.

Иммунологический ландшафт DED доминирует адаптивными иммунными ответами, при этом иммунитет, опосредованный Т-клетками CD4+, играет ключевую роль в ухудшении состояния поверхности глаз и поддержании хроническоговоспаления 8. CD8+ Т-клетки являются важнейшим компонентом нормальной популяции гомеостатических иммунных клеток в глазных тканях, поддерживая иммунный надзор и целостность тканей прифизиологических условиях 9. Фундаментальные исследования показали, что высыхающий стресс (ДС) активирует клетки, представляющие антиген, и впоследствии направляет CD4+ Т-клетки к патогенным фенотипам, которые могут автономно индуцировать аутоиммунный слёзный кератоконъюнктивит сикка (KCS) при передаче на мышей с дефицитом Т-клеток, тем самым повторяя ключевые особенности человеческого DED10,11.

Учитывая центральную роль дисрегулированных ответов CD4+ Т-клеток в патогенезе ДЭП, перспективные подходы к лечению этого заболевания стали перспективными методами лечения этого заболевания. В этом контексте регуляторные Т-клетки CD8+ (Treg), особенно подгруппа CD8+CD103+, привлекли значительное внимание благодаря своим мощным иммуносупрессивным способностям и защитным функциям тканей при различных аутоиммунных и воспалительных состояниях. Эти специализированные регуляторные популяции модулируют иммунные ответы с помощью различных механизмов, включая цитокин-опосредованное подавление, прямое торможение контакта между клетками и метаболическую регуляцию функции эффекторныхлимфоцитов 12,13,14. Интегрин αEβ7 (CD103) служит критически важным рецептором для самонахожания, который способствует позиционированию внутриэпителиальных лимфоцитов по слизистой ткани, позволяя CD8+CD103+ Трегам оказывать локализованные иммунорегуляторные эффекты в местахвоспаления 15.

Появляется всё больше доказательств того, что CD8+CD103+ Треги обладают значительным терапевтическим потенциалом для смягчения вредных иммунных реакций при ряде аутоиммунных заболеваний слизистой 16,17,18. Эти клетки демонстрируют уникальные паттерны транспорта, позволяющие им накапливаться в слизистых участках, где они эффективно противодействуют разрушающим ткани иммунным ответам и способствуют заживлению и гомеостазу. Недавние исследования начали прояснять роль Т-клеток CD8+CD103+ в иммунитете на поверхности глаза, демонстрируя их численное расширение шейных лимфатических узлов после воздействия ДС и способность мигрировать в конъюнктивальныеткани 19,20,21,22. Однако, несмотря на эти интересные наблюдения, специфические функциональные вклады Т-клеток CD8+CD103+ в патогенез сухого глаза и их терапевтический потенциал в модулировании повреждения поверхности глаза, опосредованного CD4+ T-клетками, остаются неполностью изучены.

Перенос CD8+CD103+ Tregs представляет собой заметный прогресс по сравнению с традиционными терапевтическими методами DED, включая искусственные разрывы, противовоспалительные препараты и иммуносупрессивные препараты, нацеливаясь на подлежащие патогенные иммунные механизмы, а не просто насимптоматические проявления 23. В отличие от системных иммуносупрессивных методов, которые в целом подавляют иммунную функцию, вмешательство на основе CD8+CD103+ Treg обеспечивает целенаправленную модуляцию ответов патогенных CD4+ Т-клеток при сохранении защитногоиммунитета 24. Этот подход дополняет существующие клеточные терапии, такие как применение мезенхимальных стволовых клеток и перенос CD4+CD25+ Treg, обеспечивая повышенную специфичность слизистой ткани с помощью CD103-опосредованных механизмовсамонахождения 25.

Критический пробел в знаниях о регуляторных механизмах, с помощью которых CD8+CD103+ Т-клетки могут влиять на патогенез сухого глаза, представляет собой значительный барьер для разработки таргетных иммунотерапевтических вмешательств при этом изнуряющем состоянии. Кроме того, сложное взаимодействие между регуляторными и эффекторными Т-клетками при воспалении поверхности глаз требует систематических исследований для выявления новых терапевтических целей и оптимизации стратегий лечения. Данное исследование направлено на всестороннюю характеристику CD8+CD103+ Т-клеточной регуляции патогенных процессов, управляемых CD4+ Т-клетками, в хорошо зарекованной модели сухого глаза у мышей. Основное методологическое новшество включает последовательное выделение регуляторных клеток CD8+CD103+, последующем адоптивным переносом и всесторонней оценкой функциональных, гистологических и молекулярных показаний для установления терапевтической эффективности и выяснения основных механизмов. Конечная цель заключалась в том, чтобы углубить понимание иммунных ответов на поверхности глаз и выявить возможные стратегии лечения ДЭД у людей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры с участием животных проводились в строгом соответствии с Заявлением ARVO о применении животных в офтальмологических и зрительных исследованиях и были одобрены Комитетом по этике экспериментальных животных Второй народной больницы Цзинаня. Были предприняты все усилия для минимизации страданий животных и сокращения количества используемых животных в соответствии с принципом 3Rs (Замена, Сокращение и Совершенствование).

1. Подготовка животных и экспериментальное проектирование

  1. Получите самок мышей C57BL/6 возрастом 6-8 недель в утверждённом лабораторном центре (код штамма: 027) с определённым состоянием здоровья, свободного от патогенов.
  2. Домашние животные в контролируемой среде, поддерживая 12-часовые циклы светло-темноты (свет включен 06:00–18:00), температуру 22 ± 2 °C и относительная влажность 50-60% с использованием систем экологического мониторинга.
  3. Дайте животным акклиматизироваться в течение недели перед экспериментальными процедурами, обеспечивая стандартную лабораторную еду и воду ad libitum.
  4. Рандомизуйте 32 мыши в четыре экспериментальные группы (n = 8 на группу) с использованием компьютерной рандомизации: нестрессовые контроли (NS), высушивающие стресс самостоятельно (DS), высушивающие стрессы с помощью транспортного контроля (DS + VC) и высушивающие стрессы с помощью обработки Т-клеток CD8+CD103+ (DS + CD8+CD103+).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ежедневно следите за животными на предмет признаков дискомфорта, таких как снижение активности или снижение веса свыше 10%.

2. Индукция высыхающих напряжений

  1. Приготовьте раствор гидробромида скополамина, растворив 0,5 мг в 0,2 мл стерильного фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS) непосредственно перед использованием, достигая конечной концентрации 2,5 мг/мл.
  2. Вводите скополамин подкожно при дозе 0,5 мг/кг массы тела (примерно 0,04 мл на 20 г мыши) четыре раза в день в 8:00, 12:00, 15:00 и 18:00 в течение пяти последовательных дней с использованием игл по 27 г.
  3. Разместить вентиляторы с переменной скоростью для создания непрерывного воздушного потока со стандартизированной скоростью 15 м/с, измеряемой на уровне клетки с помощью цифровой калибровки анемометра.
  4. Поддерживайте влажность окружающей среды ниже 40% с помощью осушительных камер с активированным силикагелем (Grade 40, сетка 6-12), при этом непрерывно контролируя условия окружающей среды с помощью цифровых гигрометров (точность ±2% RH).
  5. Поддерживайте температуру на уровне 22 ± 1 °C на протяжении всего периода воздействия с использованием точных систем контроля окружающей среды с непрерывным мониторингом.
  6. Следите за животными дважды в день на предмет признаков обезвоживания, потери веса (>15% требует исключения) или тревожного поведения, включая чрезмерный уход или снижение активности.

3. Выделение и очистка Т-клеток CD8+CD103+

  1. Жертвоприношение донорских мышей, ранее подвергавшихся высушивающему стрессу с помощью CO₂ асфиксии, а затем вывиха шейки матки, согласно утверждённым протоколам эвтаназии.
  2. Сбор селезёнок и поверхностных шейных лимфатических узлов в стерильных условиях с использованием стерильных инструментов в биологическом защитном шкафу, помещённые ткани в ледяную среду RPMI-1640 с добавлением сыворотки из 10% плода бычьего скота.
  3. Подготовить суспензии для одной клетки путём механического разрушения тканей через 70 мкм клеточные сита с использованием стерильных поршней для шприцев, промывая клетки дважды PBS, содержащим 2% FBS и 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA).
  4. Изолировать CD8+ Т-клетки с помощью магнитно-активированного сортировки клеток с помощью магнитных микрочастиц, конъюгированных антителами против CD8, согласно инструкциям производителя.
  5. Оценка жизнеспособности клеток с помощью теста исключения трипана (раствор 0,4%), подсчитывая жизнеспособные и нежизнеспособные клетки с помощью автоматического счётчика клеток, используя только препараты с жизнеспособностью более 95%.
  6. Обогащайте экспрессию CD103+ посредством последовательной инкубации антителами против CD103-APC при разбавлении 1:100 в течение 30 минут при температуре 4 °C в темноте.
  7. Проведите вторичное магнитное разделение с использованием микрошариков антиаллофикоцианина (анти-APC) с колонками LS для получения клеток CD8+CD103+ с двойным положительным результатом в соответствии с протоколами производителя.
  8. Проверьте чистоту клеток с помощью проточной цитометрии, окрашивая аликвоты антителами анти-CD8-FITC и анти-CD103-APC, обеспечивая популяцию из >90% CD8+CD103+ двойных положительных клеток перед продолжением процедуры.

4. Протокол передачи при приемлении

  1. Подготовьте суспензии Т-клеток CD8+CD103+ в концентрации 5 × 106 клеток/мл в стерильном фосфатно-буферном физиологическом растворе, центрифугировав клетки при 300 × г в течение 5 минут и восстановив их в соответствующем объёме.
  2. Вводите 1 ×10 6 клеток в 200 мкл стерильного PBS внутрибрюшно в дни -2, 0 и +2 относительно инициации стресса при высушивании, обеспечивая аккуратное смешивание перед каждой инъекцией.
  3. Вводите эквивалентные объемы стерильного PBS в контрольные группы транспортных средств с использованием одинакового графика и техники инъекции для поддержания экспериментальной согласованности.
  4. Поддерживайте клеточные препараты на льду и завершайте переносы в течение 2 часов после изоляции для сохранения оптимальной жизнеспособности и функции.
  5. Поменяйте места инъекций между левым и правым нижней частью живота для минимизации локального воспаления и наблюдайте за животными в течение 24 часов после инъекции на предмет побочных реакций.

5. Процедура функциональной оценки

  1. Измерение образования срыва
    1. Проводите измерения последовательно в 20:00, чтобы учесть циркадные различия в производстве слёз.
    2. Аккуратно фиксируйте мышь с помощью соответствующих удерживающих средств без анестезии, чтобы избежать помех естественным механизмам образования слёз.
    3. Поместите хлопковую нить, пропитанную фенолом, в нижний конъюнктивальный форникс ровно на 15 секунд, используя тонкие щипцы.
    4. Немедленно измеряйте длину навлажнённой нити с помощью прецизионных цифровых суппортов (точность ± 0,01 мм) при стандартизированных люминесцентных условиях.
  2. Оценка функции барьерароговицы 26
    1. Кратковременно анестезируйте мышь с помощью 2% изофлурана во время нанесения трассера для обеспечения точного инстилляции.
    2. Введите 0,5 мкл раствора Oregon green-dexn с концентрацией 50 мг/мл на центральную поверхность роговицы с помощью прецизионной микропипетки с наконечниками положительного смещения.
    3. Тщательно промыйте роговицы стерильным физиологическим раствором пять раз после 1 минуты инкубации, чтобы удалить избыток трасера и полностью удалить поверхностную флуоресценцию.
    4. Немедленно сфотографировать роговицы с помощью флуоресцентной микроскопии с фильтром Флуоресцеин изотиоцианатом (FITC) (возбуждение 490 нм, эмиссия 525 нм) и стандартизированными параметрами экспозиции.
    5. Количественно измерять интенсивность флуоресценции с помощью программного обеспечения ImageJ с единообразным выбором регионов интереса и протоколами фонового вычитания.
      1. Преобразовать изображения в 8-битные оттенки серого, определить стандартизированную круговую область интереса (ROI), покрывающую центральный диаметр роговицы 3 мм.
      2. Измерить среднее значение серого, вычесть фоновую флуоресценцию, измеренную из соседней нероговицы области, и представить результаты как скорректированную полную флуоресценцию (CTF), рассчитанные как: CTF = Интегрированная плотность - (площадь ROI × Средняя фоновая флуоресценция)22.

6. Гистологическая обработка и анализ

  1. Удалите глаза и окружающие структуры сразу после эвтаназии, затем зафиксируйте 4% параформальдегида на 24 часа или внедрите в состав с оптимальной температурой резки (OCT) для замороженных срезов, обеспечивая правильную ориентацию для сагиттального сечения.
  2. Подготовьте последовательные сагиттальные сечения (6 мкм для замороженных, 5 мкм для парафина) с использованием стандартизированных анатомических ориентиров (зрительный нерв как точка отсчёта) для согласованных плоскостей сечения на всех образцах.
  3. Проводите периодическое окрашивание кислотно-шиффового (PAS) для количественной оценки ячейки кубка с использованием стандартизированных протоколов с соответствующими положительными и отрицательными контролями.
  4. Провести иммунофлуоресцентное окрашивание с использованием первичных антител: анти-MMP-3 (1:200), анти-MMP-9 (1:100), антиактивированной каспазы-3 (1:300), антиактивированной каспазы-8 (1:200) и анти-CD4 (1:100) с ночной инкубацией при 4 °C.
  5. Количественно измерять кубковые ячейки на миллиметр длины конъюнктивы с помощью систематических методов отбора проб, подсчитывая клетки в пяти непересекающихся полях высокой мощности на секцию и усредняя оценку результатов.

7. Молекулярный анализ

  1. Извлечение полной РНК из объединённых тканей конъюнктивы и роговицы с использованием проверенных протоколовэкстракции 27.
  2. Синтез cДНК и количественное измерение ПЦР в реальном времени28
    1. Приготовьте смеси реакций обратной транскрипции с 1 мкг общей РНК, олиго-dT праймерами (50 мкм), случайными гексамерными праймерами (100 мкм), ферментом обратной транскриптазы, реакционным буфером и безнуклеазной водой в итоговом объёме 20 мкл.
    2. Инкубировать реакционные смеси в тепловом циклере при 37 °C в течение 15 минут, чтобы обеспечить синтез кДНК первой цепочки.
    3. Инактивируйте фермент обратной транскриптазы, нагревая при 85 °C в течение 5 секунд, затем охлаждайте до 4 °C и храните кДНК при -20 °C до использования.
    4. Разбавленные cДНК 1:10 с водой без нуклеазы для использования в качестве шаблона в последующих реакциях ПЦР.
    5. Приготовьте реальные ПЦР-реакционные смеси в реальном времени (конечный объем 20 мкл), содержащие 1 мкл разбавленной кДНК-шаблона, прямые и обратные праймеры (по 0,2 мкМ конечной концентрации каждый), мастер-смесь SYBR Green и воду без нуклеазы.
    6. Загружайте образцы в тройном экземпляре в оптические реакционные пластины с 96 ямыцами, включая контроли без шаблонов для каждой пары праймеров.
    7. Запрограммируйте термоциклер при следующих условиях: начальная денатурация при 95 °C в течение 10 минут, затем 40 циклов денатурации (95 °C за 15 с), отжиг (60 °C за 30 с) и расширение (72 °C за 30 с).
    8. Включите каскад диссоциационной кривой сразу после усиления: 95 °C в течение 15 с, 60 °C в течение 1 минуты, затем постепенное повышение температуры до 95 °C со скоростью 0,3 °C/s для подтверждения усиления одного продукта.
    9. Анализировать кривые усиления и значения порога цикла (Ct) с помощью инструментального программного обеспечения, обеспечивая эффективность усиления от 90 до 110% для всех пар праймеров.
    10. Нормализовать экспрессию целевых генов (IL-17A, IFN-γ, IL-13, MMP-3 и MMP-9) в гене домашнего содержания GAPDH с помощью метода 2-ΔΔCt .
    11. Используйте праймерные последовательности, указанные в Таблице 1 , для всех целевых и референсных генов.
  3. Количественно измерить уровень белка цитокинов в экстрактах тканей с помощью коммерчески доступных наборов для ИФС с соответствующими стандартными кривыми и контролем качества.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Успешная реализация этого протокола обеспечивает всестороннее улучшение высыхающей патологии глазной поверхности, вызванной стрессом, посредством иммуномодуляции CD8+CD103+ Т-клеточное. Положительные результаты показывают значительное восстановление слёзной продукции, обычно достигая 60-80% по сравнению с нестрессовыми контролями, в то время как у животных, обработанных транспортными средствами, наблюдаются стойкие дефициты слез (рису...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании установлены регуляторные Т-клетки CD8+CD103+ как мощные терапевтические агенты, осушающие стресс-индуцированную сухость глаза, через комплексную модуляцию патогенных ответов, опосредованных CD4+ Т-клетками. Результаты показывают, что перенос Т-клеток CD8+CD103+ обеспечивает многогранную защиту целостности поверхности глаза, включая функциональное восстановление слезной продукции, сохранение слизистотой архитектуры, поддержание функции эпителиального барьера и подавлен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов, ни финансовых, ни иных, которые могли бы ненадлежащим образом повлиять на описанное в этой рукописи произведение.

Благодарности

Мы признаём техническую поддержку, оказанную лабораторным персоналом 2-й народной больницы Цзинань и персоналом учреждения по уходу за животными, которые поддерживали оптимальные условия содержания на протяжении всего экспериментального периода.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Антиантитела к CD103-APCБиолегендаКлон 2E7Потоковая цитометрия и сортировка клеток
Анти-CD8 магнитные микрошарикиMiltenyi Biotec-Разделение магнитных ячеек
Роговица Орегона зелёный-декстранИнвитрогенD7172Молекулярная масса 70 000
ELISA комплект IFN-и гамма;eBioscienceBMS606Квантификация цитокинов
Комплект ELISA IL-13eBioscienceBMS6015Квантификация цитокинов
Комплект ELISA IL-17AeBioscienceBMS6001Квантификация цитокинов
ImageJНациональные институты здравоохраненияВерсия 1.53k
Фетнольные хлопковые нити красного цветаЗон-Быстрый, Йокота-Измерение образования срыва
Скополамин гидробромидMelonepharmaMB5860Мускариновый антагонист

Ссылки

  1. Tang, Q., et al. Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans. Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).
  2. Harrell, C. R., Feulner, L., Djonov, V., Pavlovic, D., Volarevic, V. The molecular mechanisms responsible for tear hyperosmolarity-induced pathological changes in the eyes of dry eye disease patients. Cells. 12 (23), 2755(2023).
  3. Britten-Jones, A. C., et al. Epidemiology and risk factors of dry eye disease: considerations for clinical management. Medicina (Kaunas). 60 (9), 1458(2024).
  4. Bhujbal, S., Rupenthal, I. D., Steven, P., Agarwal, P. Inflammation in dry eye disease-pathogenesis, preclinical animal models, and treatments. J Ocul Pharmacol Ther. 40 (10), 638-658 (2024).
  5. Nieto-Aristizabal, I., Mera, J. J., Giraldo, J. D., Lopez-Arevalo, H., Tobon, G. J. From ocular immune privilege to primary autoimmune diseases of the eye. Autoimmun Rev. 21 (8), 103122(2022).
  6. Sheppard, J., Shen Lee, B., Periman, L. M. Dry eye disease: identification and therapeutic strategies for primary care clinicians and clinical specialists. Ann Med. 55 (1), 241-252 (2023).
  7. Rolando, M., Merayo-Lloves, J. Management strategies for evaporative dry eye disease and future perspective. Curr Eye Res. 47 (6), 813-823 (2022).
  8. Vereertbrugghen, A., et al. CD4+ T cells drive corneal nerve damage but not epitheliopathy in an acute aqueous-deficient dry eye model. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (48), e2407648121(2024).
  9. Yaman, E., et al. Mouse corneal immune cell heterogeneity revealed by single-cell RNA sequencing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (12), 29(2024).
  10. Niederkorn, J. Y., et al. Desiccating stress induces T cell-mediated Sjogren's syndrome-like lacrimal keratoconjunctivitis. J Immunol. 176 (7), 3950-3957 (2006).
  11. Ogawa, Y., Takeuchi, T., Tsubota, K. Autoimmune epithelitis and chronic inflammation in Sjogren's syndrome-related dry eye disease. Int J Mol Sci. 22 (21), 11820(2021).
  12. Flippe, L., Bezie, S., Anegon, I., Guillonneau, C. Future prospects for CD8+ regulatory T cells in immune tolerance. Immunol Rev. 292 (1), 209-224 (2019).
  13. Olson, K. E., Mosley, R. L., Gendelman, H. E. The potential for Treg-enhancing therapies in nervous system pathologies. Clin Exp Immunol. 211 (2), 108-121 (2023).
  14. Boonpiyathad, T., Sozener, Z. C., Akdis, M., Akdis, C. A. The role of Treg cell subsets in allergic disease. Asian Pac J Allergy Immunol. 38 (3), 139-149 (2020).
  15. Xu, W., Bergsbaken, T., Edelblum, K. L. The multifunctional nature of CD103 (αEβ7 integrin) signaling in tissue-resident lymphocytes. Am J Physiol Cell Physiol. 323 (4), C1161-C1167 (2022).
  16. Zhang, X., et al. CD8+CD103+ iTregs inhibit chronic graft-versus-host disease with lupus nephritis by the increased expression of CD39. Mol Ther. 27 (11), 1963-1973 (2019).
  17. Liu, Y., et al. Phenotypic and functional characteristic of a newly identified CD8+ Foxp3- CD103+ regulatory T cells. J Mol Cell Biol. 6 (1), 81-92 (2014).
  18. Chen, Q., et al. CD8+ CD103+ iTregs protect against ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting pyroptosis. Apoptosis. 29 (9-10), 1709-1722 (2024).
  19. Kaneko, N., et al. Cytotoxic CD8+ T cells may be drivers of tissue destruction in Sjogren's syndrome. Sci Rep. 12 (1), 15427(2022).
  20. Kudryavtsev, I., et al. Circulating CD8+ T cell subsets in primary Sjogren's syndrome. Biomedicines. 11 (10), 2778(2023).
  21. Heidari, M., Noorizadeh, F., Wu, K., Inomata, T., Mashaghi, A. Dry eye disease: emerging approaches to disease analysis and therapy. J Clin Med. 8 (9), 1439(2019).
  22. Ibiayo, A. G., Varinthra, P., Nagarajan, M., Liu, I. Y. Coniferaldehyde reverses 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease pathologies via PKM2 restoration and JAK2/STAT3 inhibition. Mol Med. 31 (1), 271(2025).
  23. Loi, J. K., et al. Corneal tissue-resident memory T cells form a unique immune compartment at the ocular surface. Cell Rep. 39 (8), 110852(2022).
  24. Kennedy-Batalla, R., et al. Treg in inborn errors of immunity: gaps, knowns and future perspectives. Front Immunol. 14, 1278759(2023).
  25. Suffia, I., Reckling, S. K., Salay, G., Belkaid, Y. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+ Treg and control of Leishmania major infection. J Immunol. 174 (9), 5444-5455 (2005).
  26. De Paiva, C. S., et al. IL-17 disrupts corneal barrier following desiccating stress. Mucosal Immunol. 2 (3), 243-253 (2009).
  27. Rio, D. C., Ares, M. Jr, Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).
  28. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(−ΔΔC(T)) method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  29. Zareh, H., et al. Doxycycline versus curcumin for inhibition of matrix metalloproteinase expression and activity following chemically induced inflammation in corneal cells. J Ophthalmic Vis Res. 19 (3), 273-283 (2024).
  30. Yang, X., et al. IFN-gamma facilitates corneal epithelial cell pyroptosis through the JAK2/STAT1 pathway in dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 64 (3), 34(2023).
  31. Lollett, I. V., Galor, A. Dry eye syndrome: developments and lifitegrast in perspective. Clin Ophthalmol. 2018, 125-139 (2018).
  32. Zhang, X., et al. CD8+ cells regulate the T helper-17 response in an experimental murine model of Sjogren syndrome. Mucosal Immunol. 7 (2), 417-427 (2014).
  33. Zhou, H., Yang, J., Tian, J., Wang, S. CD8+ T lymphocytes: crucial players in Sjogren's syndrome. Front Immunol. 11, 602823(2020).
  34. Lu, Z., et al. Rapid and quantitative detection of tear MMP-9 for dry eye patients using a novel silicon nanowire-based biosensor. Biosens Bioelectron. 214, 114498(2022).
  35. Burgalassi, S., et al. Functionalized hyaluronic acid for "in situ" matrix metalloproteinase inhibition: a bioactive material to treat the dry eye syndrome. ACS Macro Lett. 11 (10), 1190-1194 (2022).
  36. Chen, X., et al. Tc17/IL-17A up-regulated the expression of MMP-9 via NF-kappaB pathway in nasal epithelial cells of patients with chronic rhinosinusitis. Front Immunol. 9, 2121(2018).
  37. Alam, J., et al. IL-17 producing lymphocytes cause dry eye and corneal disease with aging in RXRalpha mutant mouse. Front Med (Lausanne). 9, 849990(2022).
  38. Flores-Pliego, A., et al. Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is an endogenous activator of the MMP-9 secreted by placental leukocytes: implication in human labor. PLoS One. 10 (12), e0145366(2015).
  39. You, Y., et al. Investigation of conjunctival goblet cell and tear MUC5AC protein in patients with Graves' ophthalmopathy. Transl Vis Sci Technol. 12 (10), 19(2023).
  40. Tukler Henriksson, J., Coursey, T. G., Corry, D. B., De Paiva, C. S., Pflugfelder, S. C. IL-13 stimulates proliferation and expression of mucin and immunomodulatory genes in cultured conjunctival goblet cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (8), 4186-4197 (2015).
  41. Fang, Z., et al. Clinical ocular surface characteristics and expression of MUC5AC in diabetics: a population-based study. Eye (Lond). 38 (16), 3145-3152 (2024).
  42. Garcia-Posadas, L., et al. Interaction of IFN-gamma with cholinergic agonists to modulate rat and human goblet cell function. Mucosal Immunol. 9 (1), 206-217 (2016).
  43. Volpe, E. A., et al. Interferon-gamma deficiency protects against aging-related goblet cell loss. Oncotarget. 7 (40), 64605-64614 (2016).
  44. Gustafsson, J. K., Hansson, G. C. Immune regulation of goblet cell and mucus functions in health and disease. Annu Rev Immunol. 43 (1), 169-189 (2025).
  45. Lin, N., et al. Ectoine enhances mucin production via restoring IL-13/IFN-gamma balance in a murine dry eye model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (6), 39(2024).
  46. Ogawa, Y., Shimizu, E., Tsubota, K. Interferons and dry eye in Sjogren's syndrome. Int J Mol Sci. 19 (11), 3548(2018).
  47. Zhang, X., et al. Interferon-gamma exacerbates dry eye-induced apoptosis in conjunctiva through dual apoptotic pathways. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6279-6285 (2011).
  48. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624(2025).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

CD4
Видео скоро будет доступно
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.