Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка неоваскулярных тканей из человеческих глиомных тканей для количественного протеомического анализа ангиогенеза опухолей

524 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69547

⸱

20 марта 2026 г.

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол успешно подготовил достаточное количество высококачественной неоваскулярной ткани из образцов глиомы с использованием микродиссекции лазерного захвата для количественного протеомического анализа ангиогенеза опухоли, преодолев ограничения исследований, традиционно сосредоточенных преимущественно на ангиогенных факторах, и предоставив масштабный протеомный профиль глиомного ангиогенеза.

Аннотация

Глиома представляет собой первичные злокачественные опухоли центральной нервной системы с высокой частотой заболеваемости и смертностью. Опухолевой ангиогенез является отличительной чертой патофизиологии глиомы и является важным событием в опухолевой среде. Аномальная структура неоваскуляризации опухоли выполняет две функции: источник питательных веществ и метастатический портал, обеспечивающий вторжение опухолевых клеток в кровоток. Антиангиогенезная терапия — актуальная тема в области рака. Большинство предыдущих исследований сосредоточены на активирующих и ингибиторных факторах ангиогенеза опухоли; однако это лишь проясняет ангиогенез опухолей в очень ограниченном диапазоне. Аномальная экспрессия белков или посттрансляционные модификации способствуют аномальной морфологии кровеносных сосудов при глиоме. Этот протокол использовал лазерно-захватную микродиссекцию (LCM) для выделения и очистки достаточного количества неоваскулярных тканей из тканей глиомы, что применялось для изотопно-маркированного количественного протеомического анализа с целью выявления дифференциально экспрессируемых белков в неоваскулярных тканях глиомы по сравнению с контрольными группами. Эти данные служат важнейшей научной основой для разъяснения патологических механизмов ангиогенеза опухоли, обнаружения антиангиогенных терапевтических целей и построения биомаркеров, основанных на ангиогенезе опухоли.

Введение

Глиомы — это высокогетерогенные опухоли центральной нервной системы (ЦНС), происходящие из глиальных клеток, которые обеспечивают структурную и метаболическую поддержкунейронам 1, и гистологически классифицируются на подтипы: астроцитомы, олигодендроглиомы и эпендимомы2. Согласно системе оценки ВОЗ, глиомы I и II степеней — это низкостепенные глиомы (LGG), обычно характеризующиеся медленными темпами роста и потенциальной долгосрочной стабильностью, часто подверженными хирургической резекции в зависимости от анатомического расположения. В отличие от этого, III и IV степени — это глиомы вы....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Этот протокол, включающий образцы человеческих тканей, был одобрен Комитетом по медицинскому этическому обзору Первого медицинского университета Шаньдуна (Одобрение No R202211090133), и было получено информированное согласие от пациентов и их семей. Образцы глиомы, использованные в этом исследовании, были получены из нейрохирургических резекций отделения нейрохирургии больницы Сянья Центрального Южного университета, включая 7 случаев тканей астроцитомы III степени. Нормальные контрольные сосуды (n = 3) были взяты из микрососудов внутри повреждённой мозговой ткани, удалённых в результате черепно-мозговой травмы. Все пациенты были вперв....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для количественной протеомики было получено достаточное количество образцов белков, выделенных в LCM

Для получения надёжных протеомных профилей дифференциально экспрессируемых белков в неоваскулярных тканях глиомы в этом исследовании был выбран наиболее распространённый подтип глиомы — астроцитома III степени, а также изолированные неоваскулярные ткани с помощью LCM благодаря наличию обогащённых неоваскулярных сосудов. Кроме того, количественн.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

ЛКМ в сочетании с количественной протеомикой, маркирующей изотопами, выявила первый крупномасштабный протеомный профиль глиомного ангиогенеза

Опухолевой ангиогенез является критической патологической отличительной чертой глиом, тесно связанной с их высокой инвазивностью и терапевтическойустойчивостью 6,7. Традиционные антиангиогенные терапии (такие как ингибиторы VEGF) демонстрируют ог.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют о конкурирующих интересах.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81272798 до X.Z. и 82203592 к N.L.), Фондом естественных наук провинции Шаньдун (ZR2022QH112 по N.L.), специальными фондами Шаньдунского провинциального проекта Taishan Scholar Engineering (NO.tstp20221143 до X.Z), Национальной программой высококлассных иностранных экспертов Китая (H20240743; Иностранный эксперт: X.Z.), а также Научно-исследовательский проект по развитию Первого медицинского университета Шаньдуна в новых стратегических областях (202403).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
96-скважинная плитаThermo Fisher Scientific (США)468667Расходные материалы
АцетонНаньцзинский реагент (Китай)C0720114023Реагент
АцетонитрилMerck (Китай)CN34892Реагент
Набор для анализа белков BCAAbcam (Великобритания)ab102536Реагент
Стандарт бычьей сыворотки альбумина (BSA)Solarbio (Китай)PC0001-1Реагент
Центрифугная трубка (50ML)Кирген (Китай)KG2811Расходные материалы
Микротом КриостатаLeica (Германия)C1900Оборудование
ЦистеинАладдин (Китай)C108238Реагент
DL-дитиотрейтол(DTT)Амреско (США)D8220Реагент
Колонка EASY-Spray C18 с обратной фазой ВЭЖХThermo Scientific (США)ES800AРасходные материалы
Электронный балансСарториус (США)BSA224SОборудование
Среда встраиванияLeica (Германия)39475237Расходные материалы
Патроны Empore SPE C18Sigma-Aldrich (США)66872-UРасходные материалы
Труба ЭппендорфаКирген (Китай)KG2211Расходные материалы
Фильтрующая бумагаCytiva (США)Grade42Расходные материалы
Муравьиная кислотаАладдин (Китай)F112032Реагент
Стеклянная стаканSHUBO (Китай)1015479Расходные материалы
Стеклянный градуированный цилиндрSHUBO (Китай)1601Расходные материалы
‌ Высокоразрешающая жидкостная хроматография-масс-спектрометрияThermo Scientific (США)Q-ExactiveОборудование
Изолированный контейнерФефон (Китай)LCZYX-12Расходные материалы
Инвертированный микроскоп и nbsp;Leica (Германия)XDS-1Оборудование
ЙодоацетамидSolarbio (Китай)I8010Реагент
ИзопропанолАладдин (Китай)I112018Реагент
Реагенты iTRAQSigma-Aldrich (США)4381663Реагент
KClБейотиме (Китай)ST1596Реагент
KH2PO4Шанхай Юанье (Китай)S24278Реагент
Микродиссекция с лазерным захватомLeica (Германия)LMD 6000Оборудование
Слайд с микродиссекцией с лазерным захватомLeica (Германия)3800040Расходные материалы
Одноразовые лезвия Leica высокого профиляLeica (Германия)14035838926Расходные материалы
Контейнер с жидким азотомКЕЙКРИО (Китай)YDS-3Оборудование
Магнитный горячий мешалShanghaiSILE (Китай)LAB-0002-0068-SHSLОборудование
Считыватель микропластинTECAN (Швейцария)INFNITE F200Оборудование
PEN  МембранаLeica (Германия)11505189Расходные материалы
pH-метрСарториус (США)PB-10Оборудование
ПипеттЭппендорф (Германия)3123000268Оборудование
ПипеттЭппендорф (Германия)3123000241Оборудование
ПипеттЭппендорф (Германия)3123000225Оборудование
Полисульфоэтил АPolyLC Inc (США)104SE0303Расходные материалы
Ингибитор протеазыRoche (Швейцария)05892791001Реагент
Рефрижераторная центрифугаБекман (США)AllegraTM X-22RОборудование
ХолодильникМЭЙЛИН (Китай)BCD-180KCTОборудование
Додецилсульфат натрия (SDS)Амреско (США)1027P033Реагент
Банка для окрашиванияБейотиме (Китай)FG005Расходные материалы
Воздухозаборник из нержавеющей сталиМузисин (Китай)XYS-101Расходные материалы
СоветыКирген (Китай)KG1313Расходные материалы
Раствор для окрашивания толуидина с голубым цветомSigma-Aldrich (США)198161-5G/198161-25GРеагент
Трифторуксусная кислотаАладдин (Китай)T103293Реагент
Tris-HClАмреско (США)T8230Реагент
Решение трипсина-EDTASolarbio (Китай)T1300Реагент
Морозильник с ультранизкой температуройSanyo (Япония)MDF-382EОборудование
Ультрачистый очиститель водыELGA (Великобритания)PureLAB flexОборудование
Ультразвуковой клеточный разрушительQSONICA (США)Q500Оборудование
Вакуумная сублимированная сушилкаThermo (США)SNL 315SVОборудование
Вихревой миксерCrystal Technology & Промышленность (США)HYQ-3110Оборудование
Инкубатор водяной баниШанхайский технологический инструмент Yiheng (Китай)HWS-26Оборудование
Бумага для взвешиванияCole-parmer (США)133802Расходные материалы

Ссылки

  1. Lapointe, S., Perry, A., Butowski, N. A. Primary brain tumours in adults. Lancet. 392 (10145), 432-446 (2018).
  2. Pienkowski, T., et al. Proteomic profiling reveals dynamic regulation of vesicle trafficking across glioma grades. J Neurooncol. 175 (2), 585-598 (2025)....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Ангиогенез глиомылазерная микродиссекциясосудистая сеть опухолидифференциальная экспрессия белкованализ LC-MS/MSсеть белковых взаимодействийопухолевые биомаркерыантиангиогенная терапия