Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Разработка и валидация методики построения моделей крыс с ожирением и типичной жировой дистрофией поджелудочной железы

892 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69553

⸱

11 ноября 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Это исследование предлагает воспроизводимый и стандартизированный метод для создания моделей крыс с ожирением, которые демонстрируют простое ожирение, обычно характеризующееся жировой дистрофией поджелудочной железы. Он также включает в себя подробные протоколы забора образцов ткани поджелудочной железы и иммуногистохимии.

Аннотация

Ожирение стало доминирующей глобальной эпидемией в области здравоохранения, и в настоящее время почти половина населения мира классифицируется как страдающая избыточным весом или ожирением. Ключевым патологическим признаком у людей с ожирением является эктопическое отложение липидов в нежировых тканях, включая поджелудочную железу – состояние, называемое стеатозом поджелудочной железы или жировой станцией поджелудочной железы. В моделях грызунов, индуцированных диетой с высоким содержанием жиров (HFD), стеатоз поджелудочной железы последовательно предшествует стеатозу печени, подчеркивая особую восприимчивость поджелудочной железы к накоплению липидов. Это раннее вовлечение позиционирует поджелудочную железу как критически важный орган для понимания метаболической дисрегуляции при ожирении. Несмотря на то, что крысы с ожирением, вызванным диетой (DIO), повторяют основные аспекты прогрессирования заболевания человека, хорошо охарактеризованные животные модели, которые достоверно демонстрируют этот фенотип поджелудочной железы, остаются редкими в литературе.

Важным методологическим соображением при моделировании ожирения человека является время введения HFD. Многие существующие модели инициируют HFD в период отлучения от груди, что может привести к смешанным метаболическим программам развития, которые не полностью отражают ожирение человека, которое в первую очередь развивается после развития. В отличие от этого, настоящее исследование устанавливает стандартизированный протокол, в котором HFD вводится после отъема. Этот подход более точно имитирует обычную человеческую траекторию начала ожирения во взрослом возрасте, позволяет избежать метаболических адаптаций в раннем возрасте и приводит к более физиологически значимому прогрессированию в сторону стеатоза поджелудочной железы.

Это исследование обеспечивает подробную и воспроизводимую основу для создания модели ожирения у крыс, характеризующейся выраженной патологией поджелудочной железы. Методология включает в себя 1-недельную фазу акклиматизации, 14-недельный период индукции HFD, начинающийся после отлучения от груди, и систематический забор тканей. Описаны два пути обработки тканей: мгновенная заморозка для молекулярного анализа (например, вестерн-блоттинг) и перфузионная фиксация параформальдегида для морфологических оценок (например, IHC, H&E). Эта модель предлагает надежную платформу для механистических исследований метаболической дисфункции поджелудочной железы, связанной с ожирением.

Введение

Простое ожирение определяется как ожирение, которое существует самостоятельно без других сопутствующих заболеваний, в первую очередь связанных с энергетическим дисбалансом, вызванным нездоровым образом жизни, таким как неправильное питание и недостаточная физическая активность1. Ожирение в значительной степени способствует росту заболеваемости неинфекционными заболеваниями среди молодого населения, характеризующегося высокими показателями распространенности, ранним началом и мультисистемными осложнениями, что делает его важнейшей глобальной проблемой общественного здравоохранения2. Жировая дистрофия поджелудочной железы – это состояние, характеризующееся эктопическим отложением липидов в этом нежировом органе во время метаболической дисрегуляции. Жировая дистрофия поджелудочной железы отражает критическое взаимодействие между жировой тканью и патофизиологией поджелудочной железы. Чрезмерное накопление панкреатического жира вытесняет нормальные ацинарные и островковые ткани, вызывая двойные функциональные нарушения как в экзокринной, так и в эндокринной способностях 3,4. Этот патологический процесс нарушает соотношение α/β-клеток, способствует дедифференцировке β-клеток с последующей потерей секреторной функции инсулина5 и опосредует прямое липотоксическое повреждение β-клеток6. В то же время пролиферация α-клеток и нерегулируемое высвобождение инсулина усугубляют гликемическую нестабильность, ускоряя прогрессирование сахарного диабета 2 типа (СД2) и связанных с ним осложнений7.

Изучение патогенеза жировой дистрофии поджелудочной железы выявляет новые механизмы, лежащие в основе прогрессирования метаболических заболеваний8. В то время как в предыдущих исследованиях ожирения особое внимание уделялось стеатозу печени, новые данные указывают на то, что отложение липидов в поджелудочной железе является более ранним событием метаболической дисрегуляции9. Этот сдвиг парадигмы позволяет построить модель патологии двух органов для простого ожирения, объединяющую стеатоз поджелудочной железы и печени10. Изучение их перекрестных взаимодействий может пролить свет на критические пути по всему спектру заболеваний, охватывающих нарушение липидного обмена, ожирение, резистентность к инсулину и диабет, предлагая новоепонимание механизмов заболевания. При патологическом процессе поджелудочной железы начальным проявлением является значительное отложение панкреатического жира, сопровождающееся существенным расширением адипоцитов поджелудочной железы. Это преимущественно наблюдается в вентральной части головы, шеи и тела поджелудочной железы и в основном локализуется в интерстициальных областях между ацинарными и островковыми клетками. В то же время присутствует хроническое воспаление поджелудочной железы низкой степени злокачественности, в то время как эндокринная и экзокринная функции остаются в основном нетронутыми на этой стадии12,13. Обширная жировая инфильтрация еще больше ухудшает функцию β-клеток поджелудочной железы за счет липотоксичности и подавляет активность инсулина. В течение этой фазы ацинарные клетки постепенно замещаются адипоцитами, тем самым способствуя развитию СД214,15. Хотя сахарный диабет не является независимым фактором риска развития рака поджелудочной железы, пациенты с острым панкреатитом и диабетом в анамнезе демонстрируют значительно повышенный риск развития рака поджелудочной железы16.

Макроскопический анатомический анализ количественно оценивает тяжесть стеатоза поджелудочной железы и характер инфильтрации, в то время как оценка ИГХ на микроскопическом уровне характеризует морфологию ацинарных клеток, расположение ядра, частоту вакуолизации и динамику клеточной популяции17. Этот мультимодальный подход, охватывающий общее анатомическое наблюдение до ИГХ с клеточным разрешением, позволяет комплексно определять стадию патологии поджелудочной железы на протяжении всего прогрессирования заболевания. В настоящем исследовании подробно описан стандартизированный протокол, включающий 1-недельную акклиматизацию, 14-недельную индукцию ожирения у взрослых крыс и оптимизированную обработку ткани поджелудочной железы для морфологического анализа, устанавливая надежную основу для изучения метаболических нарушений, связанных со стеатозом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Процедура обращения с животными была одобрена Комитетом по этике животных Нанкинского университета традиционной китайской медицины (202006A016) и соответствовала рекомендациям ARRIVE, этическим принципам, руководству по работе с животными (научные процедуры) 1986 года и связанным с ним руководящим принципам, Директиве ЕС 2010/63 по защите животных, используемых в научных целях. Перед вскрытием всем экспериментальным животным была проведена анестезия в соответствии с утвержденными процедурами анестезии грызунов. Процедура была организована в три отдельных компонента.

1. Создайте модель крысы с ожирением

  1. Экспериментальные животные и группы
    1. Выберите самцов крыс Sprague-Dawley (SD) в возрасте 4 недель (80-120 г) из сорта, чувствительного к диете с высоким содержанием жиров (HFD).
    2. Приучите всех крыс к поддерживающей диете в течение одной недели, затем случайным образом разделите их на две группы: контрольную и модельную.
    3. Замените поддерживающую диету на HFD для модельной группы через одну неделю, сохраняя при этом контрольную группу на исходной диете. Поддерживайте диету обеих групп в течение 14 недель. Состав HFD подробно описан в таблице 1, а стандартная рецептура кормового сырья для технического обслуживания - в таблице 2.
  2. Условия кормления и экспериментальные параметры
    1. Параметры окружающей среды: температура 22 ± 2 °C, влажность 50 ± 10%, цикл света/темноты 12 часов, свободный доступ к воде и пище.
  3. Показатели мониторинга
    1. Записывайте массу тела и потребление пищи еженедельно в фиксированное время.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Выполнение этого упражнения вечером может свести к минимуму стресс и привести его в соответствие с моделями дневной/ночной активности18.
    2. Постройте кривую роста массы тела, используя записанные данные.
    3. Определите успешное моделирование ожирения как ситуацию, когда масса тела превышает 20% от массы тела контрольной группы соответствующего возраста.
ИнгредиентСодержание (г/кг)Основные питательные вещества
Обычный порошковый корм365Основная пищевая база углеводов, Растительные белки, Жиры, Витаминные комплексы, Минеральные вещества и т.д
Сало310Насыщенные жирные кислоты, Ненасыщенные жирные кислоты
Казеин250Незаменимые аминокислоты
Холестерин10Холестерин
Целлюлозно-минеральная смесь60Клетчатка, кальций, фосфор, натрий и т.д
DL-метионин метионин/аминокислоты метионина3Незаменимые аминокислоты
Дрожжи1Витамины группы В, β-глюкан и т.д.
NaCl1NaCl

Таблица 1: Специальная формулировка HFD для создания DIO в моделях крыс. В таблице подробно описан конкретный состав HFD, использованного в этом исследовании для модельной группы, которая вводилась с конца периода акклиматизации до сбора тканей.

ИнгредиентСодержаниеЕдиница
Влага12.196%
Сырой белок (CP%)18.272%
Легкоусвояемая энергия (DE)3.186Мкал/кг
Метаболизируемая энергия (МЭ)2.939Мкал/кг
Чистая энергия (NE)2.228Мкал/кг
Экстракт эфира (EE%)4.417%
Сырая клетчатка (CF%)3.677%
Кальций (Ca%)0.991%
Общий фосфор0.681%
(Всего P%)
Нефитатный фосфор0.19%
Соль0.407%
Лизин1.118%
Легкоусвояемый лизин0.813%
Метионин0.53%
Треонин0.779%
Триптофан0.221%
Медь (Cu)22.06мг/кг
Железо (Fe)173.69мг/кг
Марганец (Mn)102.1176мг/кг
Цинк (Zn)60.3687мг/кг

Таблица 2: Стандартная кормовая формула для крыс. В таблице представлена рецептура стандартного поддерживающего корма, который предоставлялся всем крысам на этапе акклиматизации и контрольной группе на протяжении всего периода исследования.

2. Забор тканей

  1. Предоперационная подготовка
    1. Лечение натощак: ограничение приема пищи за 12 часов до эвтаназии для минимизации вмешательства содержимого кишечника в биохимические анализы.
    2. Анестезия: Введение изофлурана через ингаляцию для глубокой анестезии (индукционная концентрация 4%, поддерживающая концентрация 1,5-2%). Наркозный аппарат был оснащен испарителем для изофлурана, а концентрация анестетика поддерживалась на уровне 1,5-2. В качестве ориентира для подготовки физическое потребление жидкого изофлурана составляло примерно 0,5-0,8 мл на крысу в течение всей процедуры.
    3. Контролируйте глубину анестезии: непрерывно отслеживайте частоту дыхания и роговичные рефлексы. Поддерживайте устойчивое обезболивающее состояние на протяжении всей процедуры, чтобы предотвратить посмертный аутолиз поджелудочной железы.
    4. Управление недостаточной анестезией: Если глубина анестезии недостаточна или сознание возвращается, немедленно введите 20% уретана внутрибрюшинно для дополнительной анестезии (50 мг/кг) и повторно проверьте жизненно важные показатели, прежде чем продолжить. Приготовьте 20% раствор уретана, растворив уретановый порошок в физрастворе.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Изофлурановая анестезия является методом, соответствующим этическим требованиям Центра экспериментальных животных Нанкинского университета китайской медицины. Для этой терминальной процедуры в качестве приемлемой альтернативы может быть использована внутрибрюшинная инъекция 20% уретана. Тем не менее, имеющиеся данные свидетельствуют о том, что изофлуран может обеспечивать более высокий профиль безопасности, чем кетамин у грызунов19.
  2. Забор свежей ткани
    1. Дезинфекция кожи: Быстро распылите 75% этанол по всему телу (1-2 с) для предотвращения загрязнения волосами органов брюшной полости.
    2. Фиксация положения: Расположите крысу лежа на спине на столе для вскрытия и надежно зафиксируйте все четыре конечности булавками с большой головкой.
    3. Возьмитесь за кожу живота щипцами в левой руке и разрежьте кожу по средней линии (от мечевидного кость до лобка) с помощью ножниц в правой руке. Тупо рассеките подкожную фасцию, чтобы отделить соединительную ткань и разрезать прямую мышцу живота и брюшину по той же средней линии.
    4. Идентификация поджелудочной железы: Аккуратно сместите кишечник влево, чтобы визуализировать желудок, селезенку и двенадцатиперстную кишку. Селезенка прикреплена к хвосту поджелудочной железы, а желудок находится близко к поджелудочной железе.
    5. Быстрое рассечение: Аккуратно приподнимите селезенку с помощью щипцов и изолируйте поджелудочную железу, постепенно разрезая ее прикрепления к селезенке, желудку и брыжейке двенадцатиперстной кишки. Из-за его хрупкой текстуры избегайте прямого пережатия паренхимы поджелудочной железы и сохраняйте протоки/кровеносные сосуды поджелудочной железы для предотвращения разрыва тканей.
    6. Сохранение тканей: Быстро промойте рассеченную поджелудочную железу ледяным PBS (1× фосфатно-солевой буфер, PH 7,4) или физиологическим раствором для удаления остаточной крови. Немедленно перенесите поджелудочную железу в морозильную трубку объемом 2 мл, погрузите в жидкий азот в течение 30 с и храните длительное время при температуре -80 °C.
    7. Эвтаназия и утилизация туши После сбора тканей усыпьте всех подопытных крыс путем вывиха шейки матки. Согласно регламенту Центра экспериментальных животных Нанкинского университета китайской медицины, туши животных классифицируются как патологические биомедицинские отходы (Код отходов: 831-003-01). Запечатайте все туши животных в герметичные пакеты в соответствии с правилами и храните их в специально отведенных для этого морозильных камерах. Централизованная, экологически безопасная утилизация будет проводиться университетом. Ни при каких обстоятельствах туши нельзя выбрасывать произвольно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте воздействия при комнатной температуре для предотвращения ферментативного разложения биомолекул20,21.
  3. Забор перфузионной ткани (остальные этапы те же)
    1. Обнажите сердце: Поднимите ткань кожи крысы левой рукой и откройте грудную полость правой рукой, чтобы полностью обнажить сердце.
    2. Подготовьте левый желудочек к перфузии: сделайте небольшой разрез на левом желудочке (размер соответствует диаметру перфузионной иглы) и надрежьте правое предсердие, чтобы обеспечить отток крови.
    3. Перфузионный раствор: Осторожно введите перфузионную иглу в левый желудочек и медленно перфузируйте 100 мл физиологического раствора со скоростью потока 10 мл/мин до тех пор, пока отток из правого предсердия не станет прозрачным.
    4. Перфузионный фиксатор: Переключитесь на 200 мл 4% параформальдегидного фиксатора, расход: 5 мл/мин. Перфузируйте каждую крысу 100 мл физиологического раствора, а затем 200 мл 4% параформальдегида. В этом исследовании использовался коммерчески приготовленный раствор PFA. Из-за нестабильности PFA в растворе, обладающей значительным потенциалом изменчивости в зависимости от приготовления и свежести, жидкий раствор необходимо защищать от света и хранить при температуре 4 °C. Своевременно используйте открытую аликвоту, чтобы убедиться в эффективности. Если раствор готовится из порошка, то его следует готовить в свежем виде непосредственно перед применением.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Наденьте перчатки, очки и лабораторный халат; Выполняйте в вытяжном шкафу, потому что параформальдегид токсичен. Согласно правилам Центра экспериментальных животных Нанкинского университета китайской медицины, отходы параформальдегида классифицируются как химические биомедицинские отходы (Код отходов: 831-004-01). После использования его необходимо хранить в специальном контейнере для отходов с маркировкой символа биологической опасности. Централизованная утилизация осуществляется университетом. Ни при каких обстоятельствах он не должен быть выброшен ненадлежащим образом.
    5. Подтвердите успешность перфузии: проверьте ригидность конечности, указывающую на эффективную фиксацию.
    6. Поместите поджелудочную железу в центрифужную пробирку объемом 50 мл, содержащую 30 мл 4% раствора параформальдегида. Зафиксируйте ткань, храня трубку неподвижно в темноте в течение 2-4 часов.
    7. Перенесите поджелудочную железу в новую центрифужную пробирку объемом 50 мл, содержащую 30 мл 70% раствора этанола. Держите трубку неподвижной и защищенной от света в течение примерно 20-24 часов22 минуты.
    8. Заделка парафина: Погрузите салфетки в парафин. Храните внедренные салфетки при температуре 4 °C или -20 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовались парафиновые срезы. Замороженные срезы являются допустимой альтернативой, но для обеспечения оптимальных результатов необходимо предварительно проверить эффективность антител для конкретного типа срезов.

3. Иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание поджелудочной железы

  1. Протокол секционирования и монтажа
    1. Парафиновые срезы: Разрежьте срезы ткани толщиной 6 мкм с помощью микротома и закрепите на стеклянных предметных стеклах.
    2. Метод флоатации: Поместите секции на тканевую флотационную ванну при температуре 40 °C для разглаживания морщин.
    3. Сбор салфетки: Установите секции на предметные стекла с клейким покрытием (2-3 на предметное стекло) и высушите на нагревателе слайдов при температуре 80 °C.
    4. Сушка на предметных стеклах: Перенесите предметные стекла с установленными секциями в духовку при температуре 60 °C на ночь после разделки.
  2. Протокол депарафинизации и регидратации
    1. Поместите слайды в решетку для слайдов и погружайте последовательно следующим образом: ксилол I, 7 мин; ксилол II, 7 мин; безводный этанол, 5 мин; 90% этанол, 5 мин; 85% этанол, 5 мин; 75% этанол, 5 мин; дистиллированная вода, 5 мин; PBS, 5 мин (три раза).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте операции с ксилолом в вытяжном шкафу в перчатках и защитных очках. Отходы ксилола утилизируют в соответствии с протоколом, аналогичным протоколу, указанному для параформальдегида на этапе 2.3.4.
  3. Протокол забора антигенов
    1. Приготовление раствора цитрата натрия: Приготовьте буфер цитрата натрия (pH 6,0). Мы использовали самостоятельно приготовленный буферный раствор цитрата натрия, растворив один пакет порошка в 1 л воды.
    2. Готовьте в микроволновой печи последовательно: поместите предметные стекла в стеклянную банку для окрашивания, наполненную буферным раствором цитрата натрия, чтобы покрыть предметные стекла, затем поместите банку в микроволновую печь. Образцы подвергали микроволновой обработке в следующей последовательности: средний нагрев (600 Вт) в течение 8 мин, затем стояние без нагрева в течение 8 мин и, наконец, слабый нагрев (300 Вт) в течение 7 мин.
    3. Естественное охлаждение до комнатной температуры: дайте контейнеру естественным образом остыть до комнатной температуры.
    4. PBS: Промойте предметные стекла в PBS в течение 5 минут два раза.
  4. Инкубация в печи
    1. H2O2: Нанесите 3% H2O2 на участки ткани на 10 минут, чтобы блокировать активность эндогенной пероксидазы. Нанесите примерно 50 - 80 мкл H2O2 на каждое предметное стекло.
    2. PBS: Промойте слайды в PBS в течение 5 минут три раза.
    3. Стрепт-авидин-биотин-пероксидаза комплекс (SABC): нанести SABC по каплям на ткань и окрашивать в течение 30 минут в инкубаторе при температуре 37 °C. Нанесите примерно 50 - 80 μL SABC на каждое предметное стекло.
    4. PBS: Промойте слайды в PBS в течение 5 минут три раза.
  5. Цветопередача
    1. 3,3'-диаминобензидин (DAB): Нанесите хромогенный раствор DAB на участки тканей и наблюдайте до тех пор, пока не разовьется коричневато-желтая окраска. Окрашивайте срезы примерно на 1-5 минут. Отрегулируйте продолжительность окрашивания в зависимости от специфики тканей и температуры окружающей среды. Для ткани поджелудочной железы рекомендуется время окрашивания 2 минуты при 22 °C.
    2. Промывка: Немедленно промойте горки под слабой струей дистиллированной воды, чтобы остановить реакцию.
    3. Погружение: Погрузите предметные стекла в дистиллированную воду на 5 минут для удаления остатков реагентов.
  6. Окрашивание гематоксилином
    1. Гематоксилин: Погрузите предметные стекла в гематоксилин на 1 минуту. Раствор гематоксилина готовят с использованием чистой воды в соотношении 56 мг/мл.
    2. Полоскание: Дважды промойте предметные стекла в дистиллированной воде (5 с на полоскание).
    3. Дифференцировка соляной кислоты-спирта: Дифференцируйте слайды в растворе соляной кислоты-спирта в течение 1 с.
    4. Погружение: Погрузите предметные стекла в воду из-под крана на 10 минут, чтобы получить устойчивое синее ядерное окрашивание.
  7. Обезвоживание: Последовательно обезвоживайте предметные стекла с помощью следующих растворов: 70% этанола, 80% этанола, 90% этанола, безводного этанола, ксилола I и ксилола II в течение 3 минут в каждом растворе соответственно.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте операции с ксилолом в вытяжном шкафу в перчатках и защитных очках.
  8. Запечатывание
    1. Закрепите секции нейтральным бальзамом: Нанесите нейтральный бальзам на предметное стекло с помощью резиновой капельницы. Накройте крышкой. Избегайте сильного сжатия груши, чтобы предотвратить образование пузырьков. Нанесите примерно 50 мкл нейтрального бальзама на каждое предметное стекло.
    2. Сушка на воздухе: Поместите предметные стекла в вытяжной шкаф на ночь, чтобы нейтральная смола полностью высохла.

4. Анализ вестерн-блоттинга (WB)

  1. Разложение тканей
    1. Возьмите 200 мг ткани поджелудочной железы крысы, поместите ее в измельчающую трубку объемом 2 мл, содержащую 1 мл буфера для лизиса и 3 небольших стальных шарика. Буфер для лизиса состоит из полного коктейля ингибиторов протеазы и буфера для лизиса RIPA. Соотношение смешивания: 1 таблетка ингибитора протеазы: 50 мл буфера для лизиса RIPA.
    2. Измельчение производилось с помощью шаровой мельницы со следующими параметрами: частота: 30/с; время: 30 с; 10-15 раз. До тех пор, пока белые частицы не будут видны невооруженным глазом.
    3. Перенесите верхний белковый надосадочный слой в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл, не берите пену. Центрифугируйте его с 16900 x g 30 мин, 4 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Гомогенаты для анализа вестерн-блоттинга были приготовлены из всей поджелудочной железы.
  2. Количественное определение белка: количественное определение концентрации белка с помощью набора для анализа белка Pierce BCA в соответствии с инструкциями производителя. Соотношение смешивания для рабочего раствора BCA — Решение А: Раствор В = 50:1.
  3. Электрофорез белков:
    1. Добавить подготовленные образцы белка поджелудочной железы (объем 6 мкл загружали в каждую дорожку) в гель для электрофореза додецилсульфат-полиакриламид натрия-Young PAGE, Bis-Tirs, 10 × 8.
    2. Работайте при напряжении 70 В в течение 0,5 ч, затем работайте при напряжении 110 В в течение 1 ч с помощью системы Mini-PROTEAN Tetra System. Разбавьте электрофорез MOPS Running Buffer жидкостью 20× чистой водой до концентрации 1×.
  4. Мембранный перенос
    1. Развести трансферный концентрат eBlot L2 от 5× до 1× рабочей концентрации с использованием чистой воды. Этот буфер передачи 1× может быть повторно использован до 3 раз. Балансовый концентрат eBlot L2 разбавить от 5× до 1× рабочей концентрации с помощью чистой воды.
    2. Отрежьте мембрану из ПВДФ (Immobilon-P Transfer Membrane) до соответствующего размера (например, 7,5 см × 5,5 см). Размер пор составляет 0,45 мкм.
    3. Налейте примерно 30 мл метанола в инкубационный бокс с 90 × 60 × 32 мм. Погрузите мембрану PVDF в метанол на 5 секунд, чтобы активировать его.
    4. Налейте примерно 30 мл приготовленного балансового раствора 1x в другую чистую инкубационную коробку. Осторожно снимите гель с пластин для электрофореза и поместите его в балансовый раствор.
    5. Перенесите активированную мембрану PVDF из метанола и также поместите ее в инкубационный бокс, содержащий балансовый раствор. Убедитесь, что мембрана расположена под гелем для правильного контакта. Позвольте обоим уравновеситься.
    6. Следуя инструкциям производителя блотажного аппарата, расположите трансферный «бутерброд» в таком порядке сверху вниз: губка, гель, мембрана из ПВДФ, губка. Убедитесь, что между слоями не задерживаются пузырьки воздуха. Правильно поместите собранный передаточный стек в камеру промокательного аппарата. Подключите блок питания и запустите передачу в стандартном режиме в течение 15 минут.
  5. Блок
    1. Подготовьте две инкубационные коробки, одна из которых содержит примерно 15 мл TBST (Tris-buffered salt Tween20), а другая — около 15 мл 5% раствора для блокирования BSA.
    2. Приготовление раствора TBST: Растворите один пакетик порошка Tris Buffered Salt в 2 л чистой воды, затем добавьте 2 мл Tween 20.
    3. Поместите мембрану PVDF в раствор TBST так, чтобы сторона, которая соприкасалась с гелем, была обращена вверх.
    4. Промойте мембрану PVDF на шейкере при 40 об/мин при комнатной температуре в течение 3-5 минут.
    5. Перенесите мембрану из ПВДФ в блокирующий буфер. Заблокируйте его на шейкере при 20 оборотах в минуту, при комнатной температуре на 1 час.
  6. Первичная инкубация антител
    1. Промойте мембрану PVDF в инкубационном боксе, содержащем TBST, промойте мембрану три раза по 5 минут каждый на шейкере при 40 об/мин при комнатной температуре.
    2. Инкубировать с первичным антителом в течение ночи (14-18 ч) при 4 °C (1:40000, поликлональное антитело винкулина) в другой инкубационной коробке с антителами на шейкере при 20 об/мин.
    3. Убедитесь, что антитело разбавлено 5% раствором блокировки БСА, приготовленным в соотношении, указанном в разделе.
  7. Вторичная инкубация антител
    1. Поместите мембрану PVDF в инкубационный бокс, содержащий 15 мл раствора TBST. Промойте мембрану три раза по 5 мин каждый в шейкере при комнатной температуре, помешивая при 40 об/мин.
    2. Получают вторичное антитело путем разведения Anti-rabbit IgG, HRP-связанного антитела в дозе 1:2000 в 5% буфере блокировки BSA.
    3. Выдерживать в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере при 20 об/мин23.
    4. Промойте мембрану PVDF три раза раствором TBST в течение 5 минут каждый, следуя описанному выше методу.
  8. Обнаружение
    1. Приготовьте рабочий раствор субстрата, смешав AccuWest ECL Plus, Raegent A и AccuWest ECL Plus, Raegent B в соотношении 1:1 по объему непосредственно в инкубационном боксе. Выполняйте все последующие действия в защищенном от света месте.
    2. Мембрану PVDF инкубировать в растворе в течение 5-10 с, после чего немедленно обнаружить иммунореактивные полосы с помощью реагентов с усиленной хемилюминесценцией (ECL) - Vilber Fusion FX6 MINI. Типичное время экспозиции составляет от 5 до 10 с.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Мы описываем воспроизводимый протокол для создания простой модели ожирения, которая достоверно демонстрирует жировую дистрофию поджелудочной железы (рис. 1). Весь процесс, от кормления животных и сбора тканей до последующей молекулярной валидации, схематически обобщен на рисунке 1. Были зарегистрированы еженедельные изменения веса модельной группы (n = 5) и контрольной группы (n = 5), и существенной разницы в весе двух групп до ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Будучи основным фактором метаболического синдрома, неосложненное ожирение представляет собой начальное проявление системной дисрегуляции липидного обмена. Без вмешательства он может прогрессировать до СД2 и тяжелых диабетических осложнений, что подчеркивает необходимость ранней метаболической коррекции. Стеатоз поджелудочной железы (жировая дистрофия поджелудочной железы), ранний маркер эктопического отложения липидов при ожирении, переопределяет поджелудочную жел...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Эта работа была поддержана Проектом наследников и инструкторов по наследованию академического опыта седьмой группы национальных признанных экспертов традиционной китайской медицины; Национальный фонд естественных наук Китая, проект Фонда молодых ученых [номер гранта 82305376]; Проект поддержки молодых талантов в области науки и техники в провинции Цзянсу в 2024 году [номер гранта JSTJ-2024-380].

Блок-схемы были созданы с помощью FigDraw, Biorender.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<Сильный>Материал
Микроцентрифугная трубка объемом 1,5 млBiosharp Bioengineering Co. LtdBS-15-MWB
2 мл замораживающая трубкаLABSELECTCV-002-200-EXWB
2 мл измельчающая трубкаWuhan Servicebio Technology Co., LtdHT-200-MWB
3% H2O2Компания Booster Electronics Technology Co., Ltd.20A23CIHC
4% параформальдегидBiosharp Bioengineering Co. LtdBL539Aоперация перфузионного рассечения поджелудочной железы
5% раствор BSABiofroxx4240GR100IHC
50 мл центрифугной трубки  Biosharp Bioengineering Co. LtdБС-500-МСохранение тканей
AccuWest ECL Plus, Raegent ANanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
AccuWest ECL Plus, Raegent BNanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
Безводный этанолShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.10009257IHC
Анти-кроличий IgG, антитела, связанные с HRPCell Signaling Technology.Inc,7074WB
cOmplete Коктейль с ингибиторами протеазыHoffmann-La Roche Ltd 82256300WB
CoverslipCITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD10212450CIHC
DAB-хромогенный растворКомпания Booster Electronics Technology Co., Ltd.AR2017-1IHC
щипцыШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.SP0007-Mвскрытие SD крысы
стеклянные слайды CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD188105IHC
Стеклянная банка для витражейShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.FG010IHC
ГематоксилинShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.ST2067-20gIHC
Диета с высоким содержанием жировSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Таблица 1Питание экспериментальных животных
Солянокислотный спиртShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0163MIHC
изофлуранШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.R510-22-10Обезболенные крысы
метанол и bbsp;Biofroxx67-56-1WB
MOPS запускает буферную жидкость 20 раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C36842504WB
Нейтральный бальзамBeijing Solarbio Science & Science Technology Co., Ltd.G8590IHC
Нейтральная смолаShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.G8590IHC
Решение PBSJiangsu Keygen Biotech Corp., LtdKGL2206-500Сохранение тканей
Набор для анализа белков Pierce BCA;Thermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, США.ZB382867
Набор для анализа белков Pierce BCA;hermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, СШАZB382867WB
Коктейль с ингибиторами протеазыHoffmann-La Roche Ltd 82256300
мембрана PVDF (мембрана Immobilon-P, Millipore, 0000380346) Мерк Миллипор0000380346WB
Буфер лизиса RIPABiosharp Bioengineering Co. LtdBL504A, 70096436WB
SABCКомпания Booster Electronics Technology Co., Ltd.20C03AIHC
физиологический растворSHANXI SHENGAO ANIMAL PHARMACEUTICAL CO., LTD.&NBSP;270071460Сохранение тканей
Самцы SD крысJiangsu GemPharmatech Co., Ltd. D000017крысы
цитрат натрияMerck Life ScienceS1804IHC
Стандартное питание для обслуживанияSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Таблица 2Питание экспериментальных животных
баланс концентрата eBlot L2 5 и раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97212410 WB
концентрат переноса eBlot L2 5& раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97211504WB
Tris буферизировал физиологический раствор, порошок и bbsp;Biosharp Bioengineering Co. LtdBL602AWB
Tween 20BiofroxxEZ681A3EA8WB
УретанSigma-Aldrich Co., Ltd.U2500-100GОбезболенные крысы
Винкулиново-поликлональное антителоProteintech Group, Inc,26520-1-APWB
КсилолКорпорация Нанкин РеагентC0430530223IHC
Young PAGE, Bis-Tirs, 10& times; 8Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C33152505WB
<Сильно>Снаряжение
Анестезиологический аппаратШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.Модель R5805Обезболенные крысы
шаровая мельница Retsch Technology GmbH — MicrotracMM400WB
ЦентрифугиЭппендорф SE5418RWB
Компьютеризированная биологическая сушилка для тканейЧжэцзян Цзиньхуа Kedi Instrument Co.SC2013-G-KITIHC
реагенты усиленной хемилюминесценции (ECL) и nbsp;VILBER BIOIMAGING00170961WB
microtome Thermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, США.HM325IHC
микроволновкаShanghai Boxun Industry Co., Ltd. 97000IHC
Система Mini-PROTEAN TetraBio-Rad Laboratories, Inc.1658004WB
духовкаШанхайская Цзинхунская Научная Компания, Лтд.DNP-9082IHC
Чистая водаSichuan UPT Ultra-Pure Technology Co., Ltd.ULUP-TEZIHC

Ссылки

  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obesity Atlas 2024. , World Obesity Federation. London. (2024).
  3. Kromrey, M. L., et al. Pancreatic steatosis is associated with impaired exocrine pancreatic function. Invest Radiol. 54 (7), 403(2019).
  4. Miyake, H., et al. Association of fatty pancreas with pancreatic endocrine and exocrine function. PLoS One. 13 (12), e0209448(2018).
  5. López-Bermudo, L., et al. Contribution of liver and pancreatic islet crosstalk to β-cell function/dysfunction in the presence of fatty liver. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 892672(2022).
  6. Vilas-Boas, E. A., Almeida, D. C., Roma, L. P., Ortis, F., Carpinelli, A. R. Lipotoxicity and β-cell failure in type 2 diabetes: oxidative stress linked to NADPH oxidase and ER stress. Cells. 10 (12), 3328(2021).
  7. Martínez, M. S., et al. The role of the α cell in the pathogenesis of diabetes: a world beyond the mirror. Int J Mol Sci. 22 (17), 9504(2021).
  8. Catanzaro, R., Cuffari, B., Italia, A., Marotta, F. Exploring the metabolic syndrome: nonalcoholic fatty pancreas disease. World J Gastroenterol. 22 (34), 7660-7675 (2016).
  9. Pinnick, K. E., et al. Pancreatic ectopic fat is characterized by adipocyte infiltration and altered lipid composition. Obesity. 16 (3), 522-530 (2008).
  10. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  11. Savage, D. B., Petersen, K. F., Shulman, G. I. Disordered lipid metabolism and the pathogenesis of insulin resistance. Physiol Rev. 87 (2), 507-520 (2007).
  12. Shah, N., Rocha, J. P., Bhutiani, N., Omer, E. Nonalcoholic fatty pancreas disease. Nutr Clin Pract. 34 (S1), S49-S56 (2019).
  13. Chang, M. L. Fatty pancreas-centered metabolic basis of pancreatic adenocarcinoma: from obesity, diabetes and pancreatitis to oncogenesis. Biomedicines. 10 (3), 692(2022).
  14. Ou, H. Y., Wang, C. Y., Yang, Y. C., Chen, M. F., Chang, C. J. The association between nonalcoholic fatty pancreas disease and diabetes. PLoS One. 8 (5), e62561(2013).
  15. Yu, T. Y., Wang, C. Y. Impact of non-alcoholic fatty pancreas disease on glucose metabolism. J Diabetes Investig. 8 (6), 735-747 (2017).
  16. Petrov, M. S. Post-pancreatitis diabetes mellitus and excess intra-pancreatic fat deposition as harbingers of pancreatic cancer. World J Gastroenterol. 27 (17), 1936-1942 (2021).
  17. Mihoc, T., et al. Pancreatic morphology, immunology, and the pathogenesis of acute pancreatitis. Biomedicines. 12 (11), 2627(2024).
  18. Robinson-Junker, A. L., O'Hara, B. F., Gaskill, B. N. Out like a light? the effects of a diurnal husbandry schedule on mouse sleep and behavior. J Am Assoc Lab Anim Sci. 57 (2), 124-133 (2018).
  19. Virgilio, T., et al. Impact of prolonged isoflurane or ketamine-xylazine anesthesia with or without buprenorphine and oxygen on mouse vitals and immune responses. Lab Anim. 54, 1-8 (2025).
  20. Oh, S., Ahn, B., Lee, B. J., Nam, S. Y. Effect of humidity on postmortem changes in rats. J Vet Sci. 25 (3), e24(2024).
  21. Wu, C. T., et al. SARS-CoV-2 infects human pancreatic β cells and elicits β cell impairment. Cell Metab. 33 (8), 1565-1576.e5 (2021).
  22. Tremblay, C., Moullé, V., Zarrouki, B., Ghislain, J., Poitout, V. Immunofluorescent staining of pancreatic sections. protocols.io. , (2022).
  23. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  24. Lu, M., et al. Electroacupuncture stimulation regulates adipose lipolysis via catecholamine signaling mediated by NLRP3 suppression in obese rats. Front Endocrinol. 12, 773127(2022).
  25. Lu, M., et al. Remodelling the inguinal adipose sensory system to switch on the furnace: electroacupuncture stimulation induces brown adipose thermogenesis. Diabetes Obes Metab. 26 (4), 1430-1442 (2024).
  26. Otsuka, N., Shimizu, K., Taniai, M., Tokushige, K. Risk factors for fatty pancreas and effects of fatty infiltration on pancreatic cancer. Front Physiol. 14, 1243983(2023).
  27. Zhang, X., Cui, Y., Fang, L., Li, F. Chronic high-fat diets induce oxide injuries and fibrogenesis of pancreatic cells in rats. Pancreas. 37 (3), e31(2008).
  28. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  29. Liu, Y., et al. Neurophysiological mechanisms of electroacupuncture in regulating pancreatic function and adipose tissue expansion. World J Diabetes. 16 (5), 101354(2025).
  30. Jirawat, N., Srisuk, A. Obesity, metabolic syndrome, and cardiovascular disease: pathophysiological connections. Sci Acad J. 7 (1), 1-12 (2024).
  31. Fan, Y. H., et al. Inter-organ metabolic interaction networks in non-alcoholic fatty liver disease. Front Endocrinol. 15, 1494560(2025).
  32. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  33. Zhang, X., Ji, X., Wang, Q., Li, J. Z. New insight into inter-organ crosstalk contributing to the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Protein Cell. 9 (2), 164-177 (2018).
  34. Zhang, C. L., Wang, J. J., Li, J. N., Yang, Y. Nonalcoholic fatty pancreas disease: an emerging clinical challenge. World J Clin Cases. 9 (23), 6624-6638 (2021).
  35. Corte, C. D., et al. Nonalcoholic fatty pancreas disease and nonalcoholic fatty liver disease: more than ectopic fat. Clin Endocrinol. 83 (5), 656-662 (2015).
  36. Saloman, J. L., et al. Animal models: challenges and opportunities to determine optimal experimental models of pancreatitis and pancreatic cancer. Pancreas. 48 (6), 759(2019).
  37. Hariri, N., Thibault, L. High-fat diet-induced obesity in animal models. Nutr Res Rev. 23 (2), 270-299 (2010).
  38. Lee, H. -Y., Min, K. -J. Dietary restriction and lipid metabolism: unveiling pathways to extended healthspan. Nutrients. 16 (24), 4424(2024).
  39. Rosini, T. C., Ramos da Silva, A. S., de Moraes, C. Diet-induced obesity: rodent model for the study of obesity-related disorders. Rev Assoc Med Bras (Engl Ed). 58 (3), 383-387 (2012).
  40. Uc, A., et al. Chronic pancreatitis in the 21st century - research challenges and opportunities: summary of a national institute of diabetes and digestive and kidney diseases workshop. Pancreas. 45 (10), 1365(2016).
  41. Fisher, W. E., et al. Standard operating procedures for biospecimen collection, processing, and storage: from the consortium for the study of chronic pancreatitis, diabetes, and pancreatic cancer. Pancreas. 47 (10), 1213(2018).
  42. Alexander, J., Chang, G. Q., Dourmashkin, J. T., Leibowitz, S. F. Distinct phenotypes of obesity-prone AKR/J, DBA2J and C57BL/6J mice compared to control strains. Int J Obes (Lond). 30 (1), 50-59 (2006).
  43. Nishikawa, S., Yasoshima, A., Doi, K., Nakayama, H., Uetsuka, K. Involvement of sex, strain and age factors in high-fat diet-induced obesity in C57BL/6J and BALB/cA mice. Exp Anim. 56 (4), 263-272 (2007).
  44. Levin, B. E., Dunn-Meynell, A. A., Balkan, B., Keesey, R. E. Selective breeding for diet-induced obesity and resistance in Sprague-Dawley rats. Am J Physiol. 273 (2 Pt 2), R725-R730 (1997).
  45. Kautzky-Willer, A., Harreiter, J., Pacini, G. Sex and gender differences in risk, pathophysiology and complications of type 2 diabetes mellitus. Endocr Rev. 37 (3), 278-316 (2016).
  46. Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. Adipose tissue heterogeneity: implication of depot differences in adipose tissue for obesity complications. Mol Aspects Med. 34 (1), 1-11 (2013).
  47. Geer, E. B., Shen, W. Gender differences in insulin resistance, body composition, and energy balance. Gender Med. 6 Suppl 1 (Suppl 1), 60-75 (2009).
  48. Nadal-Casellas, A., Proenza, A. M., Lladó, I., Gianotti, M. Sex-dependent differences in rat hepatic lipid accumulation and insulin sensitivity in response to diet-induced obesity. Biochem Cell Biol. 90 (2), 164-172 (2012).
  49. Stubbins, R. E., Holcomb, V. B., Hong, J., Núñez, N. P. Estrogen modulates abdominal adiposity and protects female mice from obesity and impaired glucose tolerance. Eur J Nutr. 51 (7), 861-870 (2012).
  50. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).
  51. Xu, T. C., Liu, Y., Yu, Z., Xu, B. Gut-targeted therapies for type 2 diabetes mellitus: a review. World J Clin Cases. 12 (1), 1-8 (2024).
  52. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  53. Feng, X., et al. Ferroptosis enhanced diabetic renal tubular injury via HIF-1α/HO-1 pathway in db/db mice. Front Endocrinol (Lausanne). 12, 626390(2021).
  54. Fang, X., et al. Beinaglutide shows significantly beneficial effects in diabetes/obesity-induced nonalcoholic steatohepatitis in ob/ob mouse model. Life Sci. 270, 118966(2021).
  55. Mao, T., et al. Semaglutide alters gut microbiota and improves NAFLD in db/db mice. Biochem Biophys Res Commun. 710, 149882(2024).
  56. Zeng, Z., et al. Bacillus amyloliquefaciens SC06 alleviates the obesity of ob/ob mice and improves their intestinal microbiota and bile acid metabolism. Food Funct. 13 (9), 5381-5395 (2022).
  57. Suriano, F., et al. Novel insights into the genetically obese (ob/ob) and diabetic (db/db) mice: two sides of the same coin. Microbiome. 9 (1), 147(2021).
  58. Owada, Y., et al. Novel non-alcoholic steatohepatitis model with histopathological and insulin-resistant features. Pathol Int. 68 (1), 12-22 (2018).
  59. Flessa, C. M., et al. Genetic and diet-induced animal models for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) research. Int J Mol Sci. 23 (24), 15791(2022).
  60. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  61. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  62. Vimaleswaran, K. S., et al. Causal relationship between obesity and vitamin D status: bi-directional Mendelian randomization analysis of multiple cohorts. PLoS Med. 10 (2), e1001383(2013).
  63. Alvheim, A. R., et al. Dietary linoleic acid elevates endogenous 2-AG and anandamide and induces obesity. Obesity (Silver Spring). 20 (10), 1984-1994 (2012).
  64. Hintze, K. J., Benninghoff, A. D., Cho, C. E., Ward, R. E. Modeling the Western diet for preclinical investigations. Adv Nutr. 9 (3), 263-271 (2018).
  65. D, L. Obesity due to a high-fat diet in the rat and mouse. Nutr Dieta Eur Rev Nutr Diet. 9 (1), 27-42 (1967).
  66. Lemonnier, D., Tremolieres, J. Experimental obesity induced by high-fat diets. Probl Actuels Endocrinol Nutr. 7, 77-85 (1963).
  67. Samuel, V. T., et al. Mechanism of hepatic insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease. J Biol Chem. 279 (31), 32345-32353 (2004).
  68. Hu, S., et al. Dietary fat, but not protein or carbohydrate, regulates energy intake and causes adiposity in mice. Cell Metab. 28 (3), 415-431.e4 (2018).
  69. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  70. Levin, B. E. Factors promoting and ameliorating the development of obesity. Physiol Behav. 86 (5), 633-639 (2005).
  71. Yuan, C. X., et al. Electroacupuncture alleviates diabetic peripheral neuropathy through modulating mitochondrial biogenesis and suppressing oxidative stress. World J Diabetes. 16 (2), 93130(2025).
  72. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Стеатоз поджелудочной железыдиета с высоким содержанием жировожирениеиндуцированное диетойотложение липидовзабор тканейвестерн-блоттингфиксация параформальдегидомметаболическая дисфункция
Разработка и валидация методики построения моделей крыс с ожирением и типичной жировой дистрофией поджелудочной железы
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.