Method Article

Разработка и валидация методики построения моделей крыс с ожирением и типичной жировой дистрофией поджелудочной железы

DOI:

10.3791/69553

⸱

November 11th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование предлагает воспроизводимый и стандартизированный метод для создания моделей крыс с ожирением, которые демонстрируют простое ожирение, обычно характеризующееся жировой дистрофией поджелудочной железы. Он также включает в себя подробные протоколы забора образцов ткани поджелудочной железы и иммуногистохимии.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ожирение стало доминирующей глобальной эпидемией в области здравоохранения, и в настоящее время почти половина населения мира классифицируется как страдающая избыточным весом или ожирением. Ключевым патологическим признаком у людей с ожирением является эктопическое отложение липидов в нежировых тканях, включая поджелудочную железу – состояние, называемое стеатозом поджелудочной железы или жировой станцией поджелудочной железы. В моделях грызунов, индуцированных диетой с высоким содержанием жиров (HFD), стеатоз поджелудочной железы последовательно предшествует стеатозу печени, подчеркивая особую восприимчивость поджелудочной железы к накоплению липидов. Это раннее вовлечение позиционирует поджелудочную железу как критически важный орган для понимания метаболической дисрегуляции при ожирении. Несмотря на то, что крысы с ожирением, вызванным диетой (DIO), повторяют основные аспекты прогрессирования заболевания человека, хорошо охарактеризованные животные модели, которые достоверно демонстрируют этот фенотип поджелудочной железы, остаются редкими в литературе.

Важным методологическим соображением при моделировании ожирения человека является время введения HFD. Многие существующие модели инициируют HFD в период отлучения от груди, что может привести к смешанным метаболическим программам развития, которые не полностью отражают ожирение человека, которое в первую очередь развивается после развития. В отличие от этого, настоящее исследование устанавливает стандартизированный протокол, в котором HFD вводится после отъема. Этот подход более точно имитирует обычную человеческую траекторию начала ожирения во взрослом возрасте, позволяет избежать метаболических адаптаций в раннем возрасте и приводит к более физиологически значимому прогрессированию в сторону стеатоза поджелудочной железы.

Это исследование обеспечивает подробную и воспроизводимую основу для создания модели ожирения у крыс, характеризующейся выраженной патологией поджелудочной железы. Методология включает в себя 1-недельную фазу акклиматизации, 14-недельный период индукции HFD, начинающийся после отлучения от груди, и систематический забор тканей. Описаны два пути обработки тканей: мгновенная заморозка для молекулярного анализа (например, вестерн-блоттинг) и перфузионная фиксация параформальдегида для морфологических оценок (например, IHC, H&E). Эта модель предлагает надежную платформу для механистических исследований метаболической дисфункции поджелудочной железы, связанной с ожирением.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Простое ожирение определяется как ожирение, которое существует самостоятельно без других сопутствующих заболеваний, в первую очередь связанных с энергетическим дисбалансом, вызванным нездоровым образом жизни, таким как неправильное питание и недостаточная физическая активность1. Ожирение в значительной степени способствует росту заболеваемости неинфекционными заболеваниями среди молодого населения, характеризующегося высокими показателями распространенности, ранним началом и мультисистемными осложнениями, что делает его важнейшей глобальной проблемой общественного здравоохранения2. Жиров....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Процедура обращения с животными была одобрена Комитетом по этике животных Нанкинского университета традиционной китайской медицины (202006A016) и соответствовала рекомендациям ARRIVE, этическим принципам, руководству по работе с животными (научные процедуры) 1986 года и связанным с ним руководящим принципам, Директиве ЕС 2010/63 по защите животных, используемых в научных целях. Перед вскрытием всем экспериментальным животным была проведена анестезия в соответствии с утвержденными процедурами анестезии грызунов. Процедура была организована в три отдельных компонента.

1. Создайте модель крысы с ожирение....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы описываем воспроизводимый протокол для создания простой модели ожирения, которая достоверно демонстрирует жировую дистрофию поджелудочной железы (рис. 1). Весь процесс, от кормления животных и сбора тканей до последующей молекулярной валидации, схематически обобщен на рисунке 1. Были зарегистрированы еженедельные изменения веса модельной группы (n = 5) и контрольной группы (n = 5), и существенной разницы в весе двух групп до .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Будучи основным фактором метаболического синдрома, неосложненное ожирение представляет собой начальное проявление системной дисрегуляции липидного обмена. Без вмешательства он может прогрессировать до СД2 и тяжелых диабетических осложнений, что подчеркивает необходимость ранней метаболической коррекции. Стеатоз поджелудочной железы (жировая дистрофия поджелудочной железы), ранний маркер эктопического отложения липидов при ожирении, переопределяет поджелудочную жел.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Проектом наследников и инструкторов по наследованию академического опыта седьмой группы национальных признанных экспертов традиционной китайской медицины; Национальный фонд естественных наук Китая, проект Фонда молодых ученых [номер гранта 82305376]; Проект поддержки молодых талантов в области науки и техники в провинции Цзянсу в 2024 году [номер гранта JSTJ-2024-380].

Блок-схемы были созданы с помощью FigDraw, Biorender.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<Сильный>Материал
Микроцентрифугная трубка объемом 1,5 млBiosharp Bioengineering Co. LtdBS-15-MWB
2 мл замораживающая трубкаLABSELECTCV-002-200-EXWB
2 мл измельчающая трубкаWuhan Servicebio Technology Co., LtdHT-200-MWB
3% H2O2Компания Booster Electronics Technology Co., Ltd.20A23CIHC
4% параформальдегидBiosharp Bioengineering Co. LtdBL539Aоперация перфузионного рассечения поджелудочной железы
5% раствор BSABiofroxx4240GR100IHC
50 мл центрифугной трубки  Biosharp Bioengineering Co. LtdБС-500-МСохранение тканей
AccuWest ECL Plus, Raegent ANanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
AccuWest ECL Plus, Raegent BNanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
Безводный этанолShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.10009257IHC
Анти-кроличий IgG, антитела, связанные с HRPCell Signaling Technology.Inc,7074WB
cOmplete Коктейль с ингибиторами протеазыHoffmann-La Roche Ltd 82256300WB
CoverslipCITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD10212450CIHC
DAB-хромогенный растворКомпания Booster Electronics Technology Co., Ltd.AR2017-1IHC
щипцыШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.SP0007-Mвскрытие SD крысы
стеклянные слайды CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD188105IHC
Стеклянная банка для витражейShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.FG010IHC
ГематоксилинShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.ST2067-20gIHC
Диета с высоким содержанием жировSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Таблица 1Питание экспериментальных животных
Солянокислотный спиртShanghai Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0163MIHC
изофлуранШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.R510-22-10Обезболенные крысы
метанол и bbsp;Biofroxx67-56-1WB
MOPS запускает буферную жидкость 20 раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C36842504WB
Нейтральный бальзамBeijing Solarbio Science & Science Technology Co., Ltd.G8590IHC
Нейтральная смолаShanghai SCR-Biotech Co., Ltd.G8590IHC
Решение PBSJiangsu Keygen Biotech Corp., LtdKGL2206-500Сохранение тканей
Набор для анализа белков Pierce BCA;Thermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, США.ZB382867
Набор для анализа белков Pierce BCA;hermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, СШАZB382867WB
Коктейль с ингибиторами протеазыHoffmann-La Roche Ltd 82256300
мембрана PVDF (мембрана Immobilon-P, Millipore, 0000380346) Мерк Миллипор0000380346WB
Буфер лизиса RIPABiosharp Bioengineering Co. LtdBL504A, 70096436WB
SABCКомпания Booster Electronics Technology Co., Ltd.20C03AIHC
физиологический растворSHANXI SHENGAO ANIMAL PHARMACEUTICAL CO., LTD.&NBSP;270071460Сохранение тканей
Самцы SD крысJiangsu GemPharmatech Co., Ltd. D000017крысы
цитрат натрияMerck Life ScienceS1804IHC
Стандартное питание для обслуживанияSuzhou Shuangshi Laboratory Animal Feed Technology Co., Ltd.Таблица 2Питание экспериментальных животных
баланс концентрата eBlot L2 5 и раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97212410 WB
концентрат переноса eBlot L2 5& раз;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97211504WB
Tris буферизировал физиологический раствор, порошок и bbsp;Biosharp Bioengineering Co. LtdBL602AWB
Tween 20BiofroxxEZ681A3EA8WB
УретанSigma-Aldrich Co., Ltd.U2500-100GОбезболенные крысы
Винкулиново-поликлональное антителоProteintech Group, Inc,26520-1-APWB
КсилолКорпорация Нанкин РеагентC0430530223IHC
Young PAGE, Bis-Tirs, 10& times; 8Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C33152505WB
<Сильно>Снаряжение
Анестезиологический аппаратШэньчжэнь RWD Life Science Co., Ltd.Модель R5805Обезболенные крысы
шаровая мельница Retsch Technology GmbH — MicrotracMM400WB
ЦентрифугиЭппендорф SE5418RWB
Компьютеризированная биологическая сушилка для тканейЧжэцзян Цзиньхуа Kedi Instrument Co.SC2013-G-KITIHC
реагенты усиленной хемилюминесценции (ECL) и nbsp;VILBER BIOIMAGING00170961WB
microtome Thermo Fisher Scientific Inc, Уолтем, США.HM325IHC
микроволновкаShanghai Boxun Industry Co., Ltd. 97000IHC
Система Mini-PROTEAN TetraBio-Rad Laboratories, Inc.1658004WB
духовкаШанхайская Цзинхунская Научная Компания, Лтд.DNP-9082IHC
Чистая водаSichuan UPT Ultra-Pure Technology Co., Ltd.ULUP-TEZIHC

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obes....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Obese Rat ModelsFatty PancreasPancreatic SteatosisHigh Fat DietDiet Induced ObesityLipid DepositionTissue HarvestingWestern BlottingParaformaldehyde FixationMetabolic Dysfunction

Related Articles