Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Причинное влияние метаболитов плазмы на повреждение ахиллова сухожилия: менделевское рандомизационное исследование

269 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69807

⸱

27 марта 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Centre Hand-Foot Surgery, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University, 2Ningxia Yinchuan Energy College, Nursing College, 3General Surgery Department, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем комбинированный менделевский рандомизацию и экспериментальный протокол валидации для выявления причинных метаболитов при повреждении ахиллова сухожилия, выявление 19 плазменных метаболитов с причинной связью с повреждением ахиллова сухожилия и демонстрацию терапевтического применения 5,6-дигидротимина и гидроксиаспарагина для стимулирования восстановления тканей и снижения воспаления.

Аннотация

Для изучения причинно-следственных эффектов метаболитов плазмы на прогрессирование и восстановление повреждения ахиллова сухожилия (ATI) была применена менделевская рандомизация (MR) с использованием двухвыборного подхода с генетическими данными из двух больших наборов данных. Данные ATI были получены из проекта IEU-OpenGWAS (ebi-a-GCST90018895), а данные метаболитов плазмы включали 1400 метаболитов. Были выявлены значимые инструментальные переменные (IV) для метаболитов, а для оценки причинно-следственных связей были применены пять методов МР — IVW, MR-Egger, взвешенная медиана, простой режим и взвешенный режим. Для изучения влияния ATI на уровень метаболитов был проведён обратный МРТ. Восстановление тканей и экспрессия IL-6, TNF-α, VEGFA и TGF-β1 в ткани ахиллова сухожилия у мышей оценивались на 7-й день после обработки с помощью 5,6-дигидротиминов (Dih) и гидроксиаспарагина (Hyd) с использованием окрашивания H&E и Western blot. МРТ-анализ выявил 19 метаболитов с значимыми причинными связями с АТИ. Из них 12 метаболитов, включая Ди (IVW: OR = 1,197, 95% ДИ: 1,074-1,334; P = 0,001) и прегнанедиол-3-глюкуронид (IVW: OR = 1,098, 95% CI: 1,023-1,177; P = 0,001), были положительно связаны с прогрессированием ATI. В отличие от этого, 7 метаболитов, таких как Hyd (IVW: OR = 0,789, 95% CI: 0,707-0,880; P < 0,001), были связаны с восстановлением ATI. Обратный МРТ-анализ не выявил значимых причинных эффектов ATI на уровень метаболитов, что указывает на однонаправленную связь. Рентгеновские и H&E анализы показали, что лечение Ди и Хид значительно ускоряло заживление ахиллова сухожилия в зависимости от дозы. Кроме того, лечение Dih и Hyd заметно снизило экспрессию IL-6 и TNF-α (P < 0,05), одновременно увеличив уровень VEGFA и TGF-β (P < 0,05), что свидетельствует о снижении воспаления и стимулировании восстановления тканей. В этом исследовании были выявлены возможные причинно-следственные связи между определёнными метаболитами плазмы и результатами ATI. Эти результаты могут помочь в разработке будущих терапевтических стратегий и подчеркнуть полезность МРТ в изучении связей между метаболитами и заболеваниями.

Введение

Травма ахиллова сухожилия (ATI) — распространённое и изнуряющее заболевание опорно-двигательного аппарата, особенно среди спортсменов и физически активныхлюдей 1,2. Ахиллово сухожилие, самое большое и прочное сухожилие в человеческом теле, играет ключевую роль в передвижении, передавая силы от икровых мышц к пятке во время таких упражнений, как ходьба, бег ипрыжки 3,4,5,6. Ограниченное кровоснабжение и высокий механический стресс делают его особенно уязвимым к перегрузке итравмам 2,7. АТП проявляется в различных формах — от лёгкой тендинопатии до полного разрыва, вызывая сильную боль, ухудшённую подвижность и продолжительнуюреабилитацию 8,9. Несмотря на достижения в лечении, ATI часто приводит к постоянной боли, снижению подвижности и увеличению времени восстановления, с повышенным риском хронических осложнений и повторных травм 5,10,11,12.

Недавние исследования подчеркнули критическую роль метаболитов плазмы в процессе заживленияATI 13,14. Считается, что эти метаболиты, участвующие в различных биохимических путях, влияют на ключевые факторы, такие как воспаление, восстановление тканей и здоровьесухожилий. Например, определённые аминокислоты и липиды необходимы для синтеза коллагена и управления окислительным стрессом, что играет ключевую роль в патологиисухожилий 16,17. Плазма, богатая тромбоцитами (PRP), богатая факторами роста, такими как PDGF, TGF-β, VEGF и IGF, показала потенциал для стимулирования заживления сухожилий, хотя её эффективность в лечении хронической ахиллововой тендинопатии остаётся предметомспоров 14. В последние годы высокопроизводительные омикс-технологии, такие как метаболомика и протеомика, предоставили беспрецедентные возможности для изучения молекулярного ландшафта сложных условий, таких какATI 18,19. Передовые метаболомные технологии способствовали выявлению биомаркеров, связанных с результатами ATI, давая представление о том, как определённые метаболиты влияют на прогрессирование и восстановление после травмы.

Профилирование метаболитов и анализ метаболических путей стали мощными методами для выявления биомаркеров и путей, связанных стравмами 20,21. Менделевская рандомизация (МР) — это надёжный метод причинно-следственного вывода, который использует генетические варианты в качестве инструментальных переменных (IV) для устранения смешивающих искажений, распространённых в традиционныхэпидемиологических исследованиях 22,23,24,25,26,27. МР особенно полезна для изучения причинно-следственных связей между воздействием, такими как метаболиты в плазме, и исходами, такими как АТИ. В отличие от традиционных наблюдательных исследований, которые подвержены запутанию и обратной причинности, МР использует генетические варианты в качестве IV для получения более сильных причинных выводов. Более глубокое понимание того, как метаболиты плазмы влияют на здоровье сухожилий, необходимо для продвижения терапевтических стратегий и улучшения результатов восстановления.

Опираясь на эти достижения, настоящее исследование изучает причинную роль метаболитов плазмы в АТИ с помощью МРТ. Были проанализированы генетические вариации, связанные с уровнем метаболитов, для выявления специфических метаболитов, связанных с прогрессированием и восстановлением АТИ. Кроме того, кандидатные метаболиты, такие как 5,6-дигидротимин (Dih) и гидроксиаспарагин (Hyd), были экспериментально подтверждены на животных моделях для прояснения их влияния на ход и заживление ATI.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Этическое одобрение и согласие на участие

Все экспериментальные проекты на животных проводились строго в соответствии с мерами по управлению лабораторными животными провинции Нинся и были одобрены Этическим комитетом Народной больницы автономного района Нинся Хуэй, Медицинского университета Нинся.

Дизайн исследования

В этом исследовании изучались причинно-следственные связи между 1400 метаболитами плазмы и ATI с использованием двухобразной МР-методологии. Для обеспечения достоверности IV в причинном выводе необходимо выполнить три критически важных предположения: (1) генетическая вариативность напрямую связана с интересующим воздействием; (2) генетическая вариация не путается потенциальными факторами между воздействием и результатом; и (3) генетическая вариативность влияет на результат исключительно через воздействие, а не через альтернативные пути.

Источники данных GWAS для ATI

Данные для исследования ассоциаций по всему геному (GWAS) по ATI были получены из проекта IEU-OpenGWAS (https://gwas.mrcieu.ac.uk/), в частности с использованием набора данных ebi-a-GCST90018895. Анализ GWAS охватил 357 658 человек европейского происхождения, включая 7 746 случаев и 349 912 контрольных групп. В соответствии с процедурами контроля качества было выявлено всего 19 072 056 однонуклеотидных полиморфизмов (SNP). Процедуры контроля качества включали удаление SNP с частотой малых аллелей<0,01, равновесием Харди-Вайнберга P<1×10-⁶ и частотой генотипов <0,95. Стратификация популяций оценивалась с помощью анализа основных компонентов, а фактор геномной инфляции (λ) рассчитывался для оценки систематического смещения.

Источники данных GWAS для метаболитов плазмы

Набор данных Exposure Factors включает данные GWAS для 1 400 метаболитов плазмы, включающих 1 091 уровень метаболитов и 309 соотношения метаболитов, как описано в базе данных GWAS (https://www.ebi.ac.uk/gwas/studies/GCST90199621-90201020). МР-анализы были ограничены людьми европейского происхождения. Подробная информация о наборе данных приведена в дополнительных материалах, таблица S1.

Выбор IV

При идентификации IV порог статистической значимости метаболит-ассоциированных плазмы 19 072 056 SNP был установлен на уровне P < 1 × 10-5. Для обеспечения независимости анализов SNP были агрегированы с использованием порогов r2 = 0,001 и килобазы (kb) = 10 000, исключая 19 037 213 SNP с r2 > 0,001 и kb < 10 000, чтобы исключить потенциальные эффекты дисбаланса связи (LD). SNP с F-статистическими значениями < 10 были исключены из дальнейших анализов из-за высокой гетерогенности, тогда как 34843 SNP, соответствующие критериям, остались действительными внутривенными.

Животные и экспериментальный дизайн

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с мерами по управлению лабораторными животными провинции Нинся и одобрены Этическим комитетом Народной больницы автономного района Нинся Хуэй, Медицинского университета Нинся. Самцы мышей BALB/c (8 недель, класс SPF) были приобретены у Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Пекин, Китай). Мыши были акклиматизованы в течение одной недели в контролируемой среде (температура 23 ± 1°C, влажность 60 ± 10%), с свободным доступом к стандартной еде и воде, а также 12 часов света и 12 часов темноты. После акклиматизации была разработана модель повреждения мышиных сухожилий. После продольного разреза кожи было обнажено левое ахиллово сухожилие, и в середине сухожилия с помощью микрохирургических ножниц была проведена стандартизированная поперечная срезка полной толщины. Сухожилие было немедленно восстановлено с помощью 6-0 неабсорбируемых швов под стереомикроскопом. Сразу после операции была проведена рентгеновская визуализация для подтверждения успешного использования модели мыши ATI. Одновременно для контрольной группы в одинаковых условиях анестезии были получены рентгеновские изображения, которые служили в качестве пустогоконтроля 28. Все процедуры проводились под общей анестезией, вызванной внутрибрюшной инъекцией пентобарбитала натрия (50 мг·кг-1), а послеоперационная анальгезия вводилась бупренорфином (0,05 мг·кг-1, подкожно) каждые 12 часов в течение 48ч. 29. После успешной индукции модели мышей случайным образом распределяли на следующие группы: контрольные, модельные и терапевтические группы, получающие ДиГ в низких дозах (10 мг·кг-1, LD-Hyd), средних (30 мг·кг-1, MD-Hyd) и высоких (50 мг·кг-1, HD-Hyd). Расчёт размера выборки: На основании предварительных данных, показывающих 40% улучшения показателей заживления при обработке метаболитами (SD = 15%), было установлено, что n = 6 мышей на группу обеспечат 80% мощности для обнаружения этой разницы при α = 0,05 (двуххвостых). Рандомизация была проведена с использованием компьютерно сгенерированных случайных чисел исследователем, ослеплённым к распределению групп. Экспериментальные процедуры и оценки результатов проводились исследователями, не обращая внимания на групповыезадания 30.

Окрашивание гематоксилином и эозином (HE)

На седьмой день после лечения мышей эвтаназировали под глубокой анестезией, вызванной внутрибрюшной инъекцией пентобарбитала натрия (100 мг·кг-1), что обеспечивало полную потерю рефлексов перед соответствующим сбором тканей. Повреждённая ткань ахиллова сухожилия, включая небольшую часть окружающих мягких тканей, была аккуратно извлечена и обработана. Был вырезан кусок кожи размером 15мм 2 дюйма, расположенный в центре ахиллова сухожилия. Образцы кожи фиксировались в растворе параформальдегида 4% при комнатной температуре в течение 48 часов, после чего следовало обезвоживание, вложение парафина и сечение на 5 мкм. Структурные характеристики кожи раны, формирование грануляционной ткани и инфильтрация воспалительных клеток были оценены с помощью окрашивания H&E. Для гистологической оценки срезы депарафинизировались в ксилол (2 × 10 мин), регидратированы с помощью сортируемого этанола (100%, 95%, 85% и 75%, по 5 минут каждая) и промывались в дистиллированной воде. Стекли окрашивались гематоксилином Харриса в течение 5 минут, промывались в проточной водопроводной воде 5 минут, дифференцировали кислотным спиртом 1% в течение 10 секунд и посиняли в воде с 0,2% аммиака в течение 30 секунд. После стирки участки окрашивались с 0,5% эозином в течение 2 минут, после чего следовали обезвоживание, очистка и монтаж. Надежность гистологической оценки: Для обеспечения точности измерений 20% случайно выбранных выборок были независимо оценены двумя слепыми наблюдателями. Надёжность между оценщиками оценивалась с помощью коэффициента корреляции внутриклассов (ICC). ICC для организации коллагена составил 0,89 (95% ДИ: 0,81-0,94), для дегенерации тканей — 0,92 (95% ДИ: 0,86-0,96), а для инфильтрации воспалительных клеток — 0,87 (95% ДИ: 0,78-0,93), что указывает на отличную надёжность. Надёжность внутри оценщика оценивалась путём повторного набора 15% выборок после двухнедельного интервала, что дало значения ICC > 0,85 по всемпараметрам 31.

Вестерн-блот анализ

Экспрессия белка была проанализирована с помощью Western blot. Количественное определение белка проводилось с помощью набора для анализа концентрации белка BCA. Равные количества белка отделялись электрофорезом гель-электрофорезом 10% натрия додецилсульфат-полиакриламида (SDS-PAGE) и переносились на мембрану нитроцеллюлозы. Мембрана была заблокирована на 1 час 5% обезжиренным молоком в Tris-буферированном физиологическом растворе с содержанием 0,1% Tween-20 при комнатной температуре. Мембраны инкубировали ночью при 4°C с первичными антителами к VEGFA (1:1000, ab46154), TGF-β1 (1:1000, 21898-1-AP), IL-6 (1:1000, 26404-1-AP) и TNF-α (1:1000, 17590-1-AP). После трёх промываний с PBS мембраны инкубировали вторичными антителами (1:5000) в течение 90 минут при комнатной температуре. Белковые диапазоны визуализировались с помощью комплекта для субстрата ECL для хемилюминесценции (см. таблицу материалов для подробностей) в соответствии с протоколом производителя и проанализированы с помощью программного обеспечения ImageJ (версия 1.8; Национальные институты здравоохранения). GAPDH (10494-1-AP) использовался в качестве управления загрузкой.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения R Studio. Пакеты TwoSampleMR и ieugwasr R использовались для извлечения данных о воздействии и скрининга валидных IV данных, включая скопление (r² < 0,001, размер окна = 10 000 кб), гармонизацию аллелей и расчёт статистики F-(F = β²_exposure/SE²_exposure). Для МР и обратного МР-анализа мы использовали пакеты VariantAnnotation, gwasglue и TwoSampleMR, что способствовало надёжному каузальному выводу и тестированию чувствительности. Было проведено двухобразцовое МР-исследование для изучения признаков, связанных с метаболитами плазмы. Были использованы пять различных аналитических подходов: обратная дисперсия (IVW), MR-Эггер, взвешенная медиана (WM), простая и взвешенная мод. Первичные результаты были определены с помощью метода IVW, при этом статистическая значимость составляла P < 0,01. Метод IVW присваивает веса для минимизации влияния вариации, обеспечивая более точные оценки эффекта. Регрессия MR-Egger использовалась для оценки плейотропии (явления, при котором гены влияют на несколько признаков), горизонтальная плейотропия оценивалась по P-значению пересечения (P > 0,05), а гетерогенность — с использованием метода IVW в сочетании со статистикой Q MR-Egger. При P > 0,05 значимой гетерогенности не наблюдалось. Многократная коррекция тестирования применялась с использованием метода частоты ложного обнаружения Бенжамини-Хохберга (FDR), при этом FDR < 0,05 считался значимым. Гетерогенность количественно оценивалась с помощью статистики Q Кокрана и статистики I2 , где I2 > 50% указывали на значительную гетерогенность. Для значенийI 2 95% доверительные интервалы были рассчитаны по методу, описанному Иоаннидисом и др. Анализ чувствительности проводился путём последовательного удаления каждого SNP для оценки влияния отдельных вариантов на общие результаты.

Для оценки надежности измерений были проведены анализы тестов и повторных тестов по ключевым показателям исхода (количественная оценка WB и гистологическое оценивание) с использованием внутриклассовых коэффициентов корреляции (ICC). ICC использовался для оценки надёжности между оценщиками и внутри оценок количественной оценки Western Blot (WB) и гистологического оценки. Критерии интерпретировались следующим образом: ниже 0,50 (плохой), от 0,50 до 0,75 (умеренный), от 0,75 до 0,90 (хорошо) и выше 0,90 (отлично)32. Три независимых исследователя слепо оценивали один и тот же набор образцов в двух моментах времени с интервалом в одну неделю. ICC для количественной оценки западных блотов IL-6, TNF-α, VEGFA и TGF-β варьировались от 0,87 до 0,93, что свидетельствует о высокой надёжности. ICC для гистологического оценивания составляли 0,85 для организации коллагена и 0,82 для оценки неоваскуляризации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Причинно-следственная связь между 1 400 метаболитами плазмы и ATI

Был проведён комплексный МР-анализ 1400 метаболитов плазмы для оценки их причинного воздействия на ATI. Первичный анализ использовал подход IVW с строгим контролем LD и потенциальных смешивающих факторов, чтобы выявить метаболиты, существенно влияющие на прогрессирование и восстановление ATI. На рисунке 1 показаны причинно-следственные связи между 144 метаболитами плазмы и ATI, где ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании был проведён комплексный МР-анализ для изучения причинно-следственных связей между 1400 метаболитами плазмы и ATI. Было выявлено девятнадцать метаболитов плазмы как значимые связанные с прогрессированием и заживлением АТИ, при этом Ди и Хид стали ключевыми факторами, влияющими на результаты АТТ. Последующие эксперименты in vivo подтвердили положительную роль этих метаболитов в стимулировании заживления сухожилий. Лечение Диг и Хайд привело к значительному, за...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют о конкурирующих интересах.

Благодарности

Клинические прикладные исследования по оценке кишечной флоры и поэтапному лечению хронических язв при диабетической стопе, проект Yinchuan Science and Technology Innovation Project (2024SF005). Прикладные исследования влияния различных хирургических методов на кровоснабжение перитендальной ткани и биомеханическое восстановление острого разрыва замкнутого ахиллова сухожилия в рамках ключевой исследовательской и разработочной программы Нинся (2019BEG3036).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
5,6-дигидротиминРеагент696-04-8Реагент
Набор для анализа белков BCAРеагентP0012Реагент
Комплект для подкладки для хемилюминесценции ECLРеагентP0018SРеагент
Антитела к GAPDHАнтитела10494-1-APАнтитела
Набор для окрашивания гематоксилина и эозинаРеагентG1120Реагент
ГидроксиаспарагинРеагентH1126Реагент
Антитела к IL-6Антитела26404-1-APАнтитела
ImageJПрограммное обеспечениеВерсия 1.8Программное обеспечение
Нитроцеллюлозная мембранаРасходный материалHATF08130Расходный материал
ПараформальдегидРеагентP0099-3LРеагент
RStudioПрограммное обеспечениеВерсия 4.5.2Программное обеспечение
Набор для подготовки геля SDS-PAGEРеагентP0012ACРеагент
Пентобарбитал натрияАнестезия200-323-9Анестезия
TGF-и бета; 1 АнтителаАнтитела21898-1-APАнтитела
TNF и альфа; АнтителаАнтитела17590-1-APАнтитела
Антитела к VEGFAАнтителаab46154Антитела
Рентгеновская системаИнструментMX-20Инструмент

Ссылки

  1. Kvist, M. Achilles tendon injuries in athletes. Sports Med. 18 (3), 173-201 (1994).
  2. Järvinen, T. A., et al. Achilles tendon injuries. Curr Opin Rheumatol. 13 (2), 150-155 (2001).
  3. Barfod, K. W. Achilles tendon rupture; assessment of nonoperative treatment. Dan Med J. 61 (4), B4837(2014).
  4. Buddecke, D. Jr Acute Achilles Tendon Ruptures. Clin Podiatr Med Surg. 38 (2), 201-226 (2021).
  5. Bullock, M., Pierson, Z. Achilles Tendon Rupture. Clin Podiatr Med Surg. 41 (3), 535-549 (2024).
  6. Oliva, F., et al. Influence of Exercise on Musculoskeletal Disorders Associated with Gut Microbiota: A Narrative Review. MLTJ. 13 (1), (2023).
  7. Caldwell, J. E., Vosseller, J. T. Maximizing Return to Sports After Achilles Tendon Rupture in Athletes. Foot Ankle Clin. 24 (3), (2019).
  8. King, C. M., Vartivarian, M. Achilles Tendon Rupture Repair: Simple to Complex. Clin Podiatr Med Surg. 40 (1), 75-96 (2023).
  9. Kraeutler, M. J., Purcell, J. M., Hunt, K. J. Chronic Achilles Tendon Ruptures. Foot Ankle Int. 38 (8), 921-929 (2017).
  10. Vascellari, A., et al. Orthobiologics Injection Therapies in the Treatment of Muscle and Tendon Disorders in Athletes: Fact or Fake. MLTJ. 14 (2), (2024).
  11. Winnicki, K., Ochała-Kłos, A., Rutowicz, B., Pękala, P. A., Tomaszewski, K. A. Functional anatomy, histology and biomechanics of the human Achilles tendon - A comprehensive review. Ann Anat. 229, 151461(2020).
  12. Strom, A. C., Casillas, M. M. Achilles tendon rehabilitation. Foot Ankle Clin. 14 (4), 773-782 (2009).
  13. Sun, J. Y., Li, C., Du, F. Y. Adenylate cyclase activates the cAMP signalling pathway to enhance platelet-rich plasma-treated Achilles tendon disease,a theoretical bioinformatics-based study. World Journal of Orthopedics. 15 (2), 192-200 (2024).
  14. Restuccia, G., Varchetta, G. E. Platelet rich plasma (PRP) in the surgical treatment of Haglund's syndrome: the use of PRP membranes as an intra-operative local adjuvant. medicinski glasnik. 21 (1), 196-202 (2024).
  15. Wang, K., Cheng, L., He, B. Therapeutic effects of asperosaponin VI in rabbit tendon disease. Regen Ther. 20, 1-8 (2022).
  16. Shen, H., Lane, R. A. Extracellular Vesicles From Primed Adipose-Derived Stem Cells Enhance Achilles Tendon Repair by Reducing Inflammation and Promoting Intrinsic Healing. Stem Cells. 41 (6), 617-627 (2023).
  17. Bisciotti, G. N., et al. Achilles Tendon Repair after Tenorraphy Imaging and the Doughnut Metaphor. Int J Environ Res Public Health. 20 (11), (2023).
  18. Roh, C. Metabolomics in Radiation-Induced Biological Dosimetry: A Mini-Review and a Polyamine Study. Biomolecules. 8 (2), (2018).
  19. Malinowska, J. M., et al. Derivation of metabolic point of departure using high-throughput in vitro metabolomics: investigating the importance of sampling time points on benchmark concentration values in the HepaRG cell line. Arch Toxicol. 97 (3), 721-735 (2023).
  20. He, L., et al. Causal Associations of Obesity With Achilles Tendinopathy: A Two-Sample Mendelian Randomization Study. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 902142(2022).
  21. Koike, Y., et al. Genetic insights into ossification of the posterior longitudinal ligament of the spine. Elife. 12, (2023).
  22. Birney, E. Mendelian Randomization. Cold Spring Harb Perspect Med. 12 (4), (2022).
  23. Burgess, S., Thompson, S. G. Interpreting findings from Mendelian randomization using the MR-Egger method. Eur J Epidemiol. 32 (5), 377-389 (2017).
  24. Georgakis, M. K., Gill, D. Mendelian Randomization Studies in Stroke: Exploration of Risk Factors and Drug Targets With Human Genetic Data. Stroke. 52 (9), 2992-3003 (2021).
  25. Ho, J., Mak, C. C. H., Sharma, V., To, K., Khan, W. Mendelian Randomization Studies of Lifestyle-Related Risk Factors for Osteoarthritis: A PRISMA Review and Meta-Analysis. Int J Mol Sci. 23 (19), (2022).
  26. Larsson, S. C., Butterworth, A. S., Burgess, S. Mendelian randomization for cardiovascular diseases: principles and applications. Eur Heart J. 44 (47), 4913-4924 (2023).
  27. Sekula, P., Del Greco, M. F., Pattaro, C., Köttgen, A. Mendelian Randomization as an Approach to Assess Causality Using Observational Data. J Am Soc Nephrol. 27 (11), 3253-3265 (2016).
  28. Zhao, X., Wang, Q., Wang, W., Lu, S. Increased neutrophil extracellular traps caused by diet-induced obesity delay fracture healing. Faseb j. 38 (20), e70126(2024).
  29. Lin, K., et al. Exosomal miR-212-5p promotes tendon repair via targeting FOXO1 to activate PP1A/YAP1 signaling. Commun Biol. 8 (1), 1798(2025).
  30. Migliorini, F., et al. Management of transient bone osteoporosis: a systematic review. Br Med Bull. 147 (1), 79-89 (2023).
  31. Napoli, R., et al. Cross Cultural Adaptation and Multi Centric Validation of The Italian Version of The Tegner Activity Scale. Muscle Ligaments Tendons J. , (2023).
  32. Koo, T. K., Li, M. Y. A Guideline of Selecting and Reporting Intraclass Correlation Coefficients for Reliability Research. J Chiropr Med. 15 (2), 155-163 (2016).
  33. Hafez, A. E., Ismail, F. M., Abdelhakeem, M. A., Ragaee, S., Soliman, S. A. Musculoskeletal Ultrasound Changes in Chronic Plantar Fascia after Treatment with Platelet Rich Plasma Compared to Steroid. Muscle Ligaments Tendons J. 13 (01), 126(2023).
  34. Xiangyang, Y., et al. Sirtuin1 mitigation of calcium oxalate nephropathy via enhancing itaconate abundance through reduction of histone trimethylation. Clin Transl Med. 15 (8), (2025).
  35. Roland, K., et al. Ceramides in cardiovascular disease: emerging role as independent risk predictors and novel therapeutic targets. Cardiovasc Res. 121 (9), (2025).
  36. Kathryn, A. M., Bernard, D. K., Anna, N. Circulating ceramides as biomarkers of cardiovascular disease: Evidence from phenotypic and genomic studies. Atherosclerosis. 327 (0), (2021).
  37. Kuliś, S., Pietraszewski, P., Callegari, B. Characteristics of Post-Exercise Lower Limb Muscle Tremor Among Speed Skaters. Sensors (Basel). 25 (14), (2025).
  38. Tuniyazi, M., et al. Changes of microbial and metabolome of the equine hindgut during oligofructose-induced laminitis. BMC Vet Res. 17 (1), 11(2021).
  39. Dobritzsch, D., et al. β-Ureidopropionase deficiency due to novel and rare UPB1 mutations affecting pre-mRNA splicing and protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 136 (3), 177-185 (2022).
  40. Nakajima, Y., et al. Dihydropyrimidinase deficiency in four East Asian patients due to novel and rare DPYS mutations affecting protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 122 (4), 216-222 (2017).
  41. Hirano, M., et al. Mitochondrial neurogastrointestinal encephalomyopathy (MNGIE): Position paper on diagnosis, prognosis, and treatment by the MNGIE International Network. J Inherit Metab Dis. 44 (2), 376-387 (2021).
  42. Mukherjee, A., et al. Adipocytes reprogram cancer cell metabolism by diverting glucose towards glycerol-3-phosphate thereby promoting metastasis. Nat Metab. 5 (9), 1563-1577 (2023).
  43. Tighanimine, K., et al. A homoeostatic switch causing glycerol-3-phosphate and phosphoethanolamine accumulation triggers senescence by rewiring lipid metabolism. Nat Metab. 6 (2), 323-342 (2024).
  44. Blackwell, L. F., Cooke, D. G., Brown, S. The Use of Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide Excretion Rates to Navigate the Continuum of Ovarian Activity. Front Public Health. 6, 153(2018).
  45. Chen, J., et al. Quantitation of serum pregnanediol-3-glucuronide level in different endocrine statuses by LC-MS/MS. J Pharm Biomed Anal. 184, 113171(2020).
  46. Usala, S. J., Alliende, M. E., Trindade, A. A. Algorithms with Area under the Curve for Daily Urinary Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide to Signal the Transition to the Luteal Phase. Medicina (Kaunas). 58 (1), (2022).
  47. Feng, J., Huang, Z., Cui, C., Zhao, M., Feng, Y. Synthesis, taste characteristics and taste mechanism of N-lactoyl leucine from soy sauce using sensory analysis and UPLC-MS/MS. Food Chem. 454, 139670(2024).
  48. Fernandes Silva, L., Hokkanen, J., Vangipurapu, J., Oravilahti, A., Laakso, M. Metabolites as Risk Factors for Diabetic Retinopathy in Patients With Type 2 Diabetes: A 12-Year Follow-up Study. J Clin Endocrinol Metab. 109 (1), 100-106 (2023).
  49. Ito, T., Tono, M., Kitaura, Y., Hemmi, H., Yoshimura, T. Urinary l-erythro-β-hydroxyasparagine-a novel serine racemase inhibitor and substrate of the Zn2+-dependent d-serine dehydratase. Biosci Rep. 41 (4), (2021).
  50. Xia, Y., et al. N(γ) -Hydroxyasparagine: A Multifunctional Unnatural Amino Acid That is a Good P1 Substrate of Asparaginyl Peptide Ligases. Angew Chem Int Ed Engl. 60 (41), 22207-22211 (2021).
  51. Schmidt, C., et al. Lactoyl leucine and isoleucine are bioavailable alternatives for canonical amino acids in cell culture media. Biotechnol Bioeng. 118 (9), 3395-3408 (2021).
  52. Castro, B. M., Prieto, M., Silva, L. C. Ceramide: a simple sphingolipid with unique biophysical properties. Prog Lipid Res. 54, 53-67 (2014).
  53. Cogolludo, A., Villamor, E., Perez-Vizcaino, F., Moreno, L. Ceramide and Regulation of Vascular Tone. Int J Mol Sci. 20 (2), (2019).
  54. Zhang, J., Wei, L., Tan, H., Pang, W. Gut microbiota and postpartum depression: a Mendelian randomization study. Front Psychiatry. 15, 1282742(2024).
  55. Liu, Y., et al. The risk of Alzheimer's disease and cognitive impairment characteristics in eight mental disorders: A UK Biobank observational study and Mendelian randomization analysis. Alzheimers Dement. 20 (7), 4841-4853 (2024).
  56. Chi, J., et al. Causal effects for neurodegenerative diseases on the risk of myocardial infarction: a two-sample Mendelian randomization study. Aging (Albany NY). 16 (11), 9944-9958 (2024).
  57. Tan, Z., Hong, J., Sun, A., Ding, M., Shen, J. Causal effects of circulating lipids and lipid-lowering drugs on the risk of urinary stones: a Mendelian randomization study. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1301163(2023).
  58. Kitsios, G. D., Thaler, D. E., Kent, D. M. Potentially large yet uncertain benefits: a meta-analysis of patent foramen ovale closure trials. Stroke. 44 (9), 2640-2643 (2013).
  59. Sung, C. W., et al. Prediction of high-risk emergency department revisits from a machine-learning algorithm: a proof-of-concept study. BMJ Health Care Inform. 31 (1), (2024).
  60. Lidi, L., Jennifer, H., Daniel, J. L., Hui, B. S. Advances of stem cell based-therapeutic approaches for tendon repair. J Orthop Translat. 9 (0), (2018).
  61. Daibang, N., Yiqin, Z., Wang, W., Jianying, Z., James, H. -C. W. Mechanical Overloading Induced-Activation of mTOR Signaling in Tendon Stem/Progenitor Cells Contributes to Tendinopathy Development. Front Cell Dev Biol. 9 (0), (2021).
  62. Mathieu, M., et al. Trigonelline is an NAD(+) precursor that improves muscle function during ageing and is reduced in human sarcopenia. Nat Metab. 6 (3), (2024).
  63. Yoshida, M., Funasaki, H. Optimal Platelet Concentration for The Therapeutic Effect of Autologous Neutrophil-Reduced Platelet Rich Plasma in A Rat Model of Achilles Tendinopathy. Muscles, Ligaments & Tendons Journal (MLTJ). 10 (4), (2020).
  64. Kuan-Ju, C., Li-Cheng, C., Yi-No, K., Chiehfeng, C. Autologous Stem Cell Therapy for Chronic Lower Extremity Wounds: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Cells. 10 (12), (2021).
  65. Gupta, S., Paliczak, A., Delgado, D. Evidence-based indications of platelet-rich plasma therapy. Expert Rev Hematol. 14 (1), 97-108 (2021).
  66. Impellizzeri, F. M., Bizzini, M. Systematic review and meta-analysis: A primer. International Journal of Sports Physical Therapy. 7 (5), 493-503 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Восстановление тканейгенетические данныеинструментальные переменныевестерн-блоттингмаркеры воспаленияткань сухожилия мышипричинно-следственные связи
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.