Method Article

Влияние различных методов экстракции на профили биоактивности in vitro Terfezia claveryi

DOI:

10.3791/69950

⸱

March 20th, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biophysics, Department of Basic Medical Sciences, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering and Architecture, Kirsehir Ahi Evran University, 3Department of Physiology, Gulhane Faculty of Medicine, University of Health Sciences, 4Department of Medical Services and Techniques, Medical Laboratory Techniques Program, Vocational School of Health Services, Kirsehir Ahi Evran University, 5Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Kirsehir Ahi Evran University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Биоактивность экстрактов Terfezia claveryi in vitro зависела от биофизического метода экстракции и полярности растворителя. Экстракт воды из экстракции с ассистированной мацерацией (MAE) проявил самую сильную антиоксидантную активность, тогда как экстракция Soxhlet (SE) вызывала большую цитотоксичность в клетках SH-SY5Y. Эти результаты демонстрируют явные методозависимые различия в биоактивности экстрактов Terfezia claveryi in vitro.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terfezia claveryi — это съедобный пустынный трюфель, традиционно употребляемый в засушливых регионах. В последние годы он привлекает растущий научный интерес благодаря своим потенциальным антиоксидантным, антимикробным и терапевтическим свойствам, что указывает на возможные применения в пищевой и медицинской сфере. Однако, несмотря на растущее количество доказательств его биологического потенциала, влияние различных стратегий экстракции на восстановление биоактивных соединений и профиль биоактивности Terfezia claveryi in vitro пока не прояснено в литературе. В этом исследовании была оценена in vitro биоактивность экстрактов Terfezia claveryi, полученных с использованием различных методов экстракции и растворителей с разной полярностью. Был определен выход экстракции, а полученные экстракты оценивались на антиоксидантную, антимикробную, антибиопленку и цитотоксичную активность с использованием устоявшихся тестовых систем. Антиоксидантная ёмкость измерялась с помощью тестов на 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил (DPPH), 2,2′-азино-бис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота) (ABTS) и тесты на редуцирующую антиоксидантную мощность (FRAP), а цитотоксические эффекты изучались в клетках нейробластомы SH-SY5Y. Выход экстракции варьировался как в зависимости от метода, так и от полярности растворителя, при этом наибольший выход получался из водного экстракта, приготовленного методом ультразвуковой экстракции (ОАЭ) (18,40%). Было установлено, что антиоксидантная активность демонстрирует значительные различия в зависимости от метода экстракции, а водные экстракты, полученные методом мацерационно-ассистированной экстракции (MAE), демонстрировали профиль, богатый фенолными соединениями, а также обладали самой сильной способностью к добыче радикалов. Анализ LC-MS/MS этого экстракта выявил наличие девяти фенольных соединений; Доминирующими компонентами были определены хининовая и хлорогеновая кислоты. В отличие от этого, экстракты, полученные из Soxhlet, вызывали более сильные цитотоксичные эффекты в клетках SH-SY5Y. Антимикробные и антибиопленочные ответы демонстрировали относительно небольшую вариативность между методами экстракции, что указывает на более слабую зависимость от стратегии экстракции для этих действий. В целом эти результаты показывают, что биофизический метод экстракции и выбор растворителя являются ключевыми факторами профиля биоактивности экстрактов Terfezia claveryi in vitro, с выраженными эффектами антиоксидантной и цитотоксической активности.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Использование различных видов грибов для улучшения здоровья, профилактики и лечения болезней восходит к древним временам 1,2,3. Макрогрибы обычно делят на две группы: эпигенные (грибы) и гипогеозные (трюфели)4. Известный как пустынный трюфель, Terfezia claveryi (T. claveryi) — всемирно известный и съедобный вид трюфелей из рода Terfezia5. T. claveryi обычно распространён в засушливых и полузасушливых регионах, где преобладают виды Helianthemum

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ПРИМЕЧАНИЕ: Общий экспериментальный процесс подготовки и анализа экстрактов T. claveryi схематически изложен на рисунке 1. Все материалы, использованные в исследовании, описаны в Таблице материалов.

1. Аутентификация и подготовка грибковых материалов

  1. Сбор и обработка материалов
    ПРИМЕЧАНИЕ: Свежие трюфели T.claveryi были собраны в мае 2023 года на степных и песчаных, необработанных (несельскохозяйственных) земель в области Кырсехир, Центральная Анатолия, Турция. Отбор проб проводился в трёх различных местах: дере....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Молекулярная идентификация T. claveryi
ПЦР-амплификация области ITS проводилась с использованием универсальных праймеров ITS1 и ITS4 для молекулярной идентификации T. claveryi. Полученные последовательности анализировались и сравнивались с эталонными в базе данных NCBI с использованием алгоритма BLAST, что позволило окончательно идентифицировать вид (Дополнительный файл 1).

Эффективность извлечения.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящее исследование устанавливает сравнительную и стандартизированную платформу экстракции и биоактивности для T. claveryi, демонстрируя, что стратегия экстракции является решающим фактором как химического состава, так и биологической функциональности. Основная методологическая сила этого протокола заключается в строгом контроле параметров экстракции, в частности фиксированного соотношения твердо-жидкости, стандартизированного объёма растворителя, идентичной обработки после э.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не заявляют о конкурирующих интересах. Все данные, подтверждающие результаты данного исследования, доступны в основной рукописи и дополнительных информационных файлах. Наборы данных, созданные и проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявили, что это исследование не получило финансовой поддержки.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
96-колодцевые микротитровые пластины из полистиролаNest Scientific701001Клеточная культура / анализные пластины
ABTS (2,2'-азино-бис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота))Сигма-ОлдричA3219Анализ на катионные радикальные анализы
Ацетон (аналитическая степень)Сигма-Олдрич179124Растворитель для экстракции
Ацетонитрил (класс LC-MS)Сигма-Олдрич34851Органическая подвижная фаза
Acinetobacter baumanniiATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 17978
Тройной четырёхцилиндровый LC-MS/MS с системой 1290 Infinity UPLCAgilent Technologies6460Количественный анализ
Аналитическая колонка (C18, 4,6 и раз; 100 мм, 3,5 и м; m)Agilent Technologies (Zorbax)959990-902Столбец обратной фазы
Антиоксидантные стандарты (аскорбиновая кислота / тролокс)Сигма-ОлдричA7506 / 238813Положительные контроли
Анализаторы ДНК Applied Biosystems 3730xlПрикладные биосистемы ДНК-анализаторы 3730xlСистема секвенирования ДНК
Прикладные биосистемы и торговля; BigDye™ Комплект секвенирования циклов Terminator версии 3.1Прикладные биосистемы 4337455Набор для секвенирования Сэнгера
Bacillus cereusATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 14579
Биоинформатический анализ, программное обеспечение BioEdit, используемый алгоритм: сборка CAP contigIbis BiosciencesNAПрограммное обеспечение для сборки последовательностей
Наперсток для экстракции целлюлозыFisherbrand™  11724043Используется для экстракции Soxhlet.
Диметилсульфоксид (DMSO)Merck102952Растворитель
Набор для изоляции ДНК (Plant& Набор для изоляции ДНК грибов (Польша)EurX GeneMATRIXE3595Выделение ДНК 
DPPH (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил)Сигма-ОлдричD9132Радикальный анализ на подбор
Модифицированный Eagle Medium от DulbeccoКозерог и bbsp;DMEM-HA
Enterobacter aerogenesATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 13048
Энтерококк фаекалисATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 29212
Escherichia coliATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 25922
ЭтанолMerck100983Растворитель
ЭтилацетатMerck109623Экстракционный растворитель
Сыворотка для плода быка (FBS)Capricorn ScientificFBS-16A
BigDyeTerminator v3.1 Cycle Sequencing KitThermoFisher4337455Набор секвенирования
Реагент Фолин-ЧиокальтеуSigma-Aldrich 47641Общее фенольное содержание
Муравьиная кислотаSigma-Aldrich 33015Мобильный фазовый аддитив
Галловая кислотаКарло Эрба406335Кривая калибровки
Gene MATRIX Plant& Набор для изоляции ДНК грибовEurX E3595Набор для выделения ДНК
GraphPad Prism (v9)Визуализация данных и статистический анализН/ДСтатистический анализ
Нагревательная мантияЭлектротермальные и bbsp;EME30500Используется для поддержания рефлюкса растворителя
HighPrep™ Система очистки ПЦРМАГБИОAC-60005
ЛёдЛабораторный уровень—Контроль температуры в ОАЭ
Klebsiella pneumoniaeATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 13883
L-глутаминCapricorn ScientificГермания
Listeria monocytogenesATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 19115
ЛиофилизаторScientzН/ДСублимационная сушка экстрактов
Магнитная бусина и даш; Система очистки на основе ПЦРМАГБИОAC-60005ПЦР
МетанолMerck106009Растворитель для экстракции
n-ГексанMerck103701Растворитель для экстракции
Пенициллин/стрептомицинCapricorn ScientificГермания
Pseudomonas aeruginosaATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 27853
Фильтрующая бумага (No 541)Цитива1541–125 VВ процессе фильтрации экстракта
Роторный испарительBuchi R10011100V101Удаление растворителя
Дизентерии шигеллыATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 13313
Карбонат натрияMerck106392Тотальный фенольный анализ
SPECTROstar Nano Microplate Reader BMG LabtechИзмерения поглощения
Золотистый стафилококкATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 25923
Staphylococcus epidermidisATCCМанассас, Вирджиния, СШАATCC 12228
Программное обеспечение для статистического анализа (SPSS, v23)Анализ данныхNA
Thermo Scientific Nanodrop 2000 Термо Фишер СайентификND-2000
Триптон соевый агар (TSA)MerckГермания—
Соевый бульон из триптона (TSB)MerckГермания—
Ультразвуковой гомогенизаторScientzSCIENTZ-650LЭкстракция с помощью ультразвука

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Terfezia ClaveryiExtraction MethodsIn Vitro BioactivityAntioxidant ActivityAntimicrobial ActivityCytotoxic ActivityUltrasound Assisted ExtractionMaceration Assisted ExtractionPhenolic CompoundsLC MS MS Analysis

Related Articles