Современное применение капиллярного электрофореза в высокоразрешающем обнаружении моноклональных белков в сыворотке

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол высокоразрешающего анализа белков сыворотки с использованием капиллярного электрофореза. Под воздействием высоковольтного электрического поля белки сыворотки мигрируют через капилляр на основе заряда и электрофоретической подвижности. Полученная электроферограмма позволяет обнаружить, локализировать и количественно оценивать пики моноклональных белков.

Аннотация

Моноклональный иммуноглобулин, также известный как М-белок или парапротеин, образуется за счёт клональной пролиферации плазматических клеток или B-лимфоцитов и служит ключевым биомаркером моноклональных гаммопатий. Точное обнаружение и количественная оценка белка сыворотки M необходимы для ранней диагностики заболеваний, клинической классификации и терапевтического мониторинга. Этот протокол описывает метод с использованием капиллярного электрофореза (КЭ) для высокоразрешающего разделения белков сыворотки. Белки разделяются в щелочном буфере под действием высоковольтного электрофореза и обнаруживаются ультрафиолетовым поглощением, генерируя электроферограммы, позволяющие чётко визуализировать и количественно оценивать аномальные пики моноклональных белков. По сравнению с традиционными методами, CE обеспечивает улучшенное разрешение бета-области и обеспечивает автоматизированный, быстрый анализ с минимальными требованиями к обработке выборок. Пять репрезентативных электроферограмм продемонстрировали миграцию M белка в областях β1, β2 и γ, при этом уровни M белка составляли 0, 44,1% (45,8 г/л), 10,5% (8,6 г/л), 35,5% (28,4 г/л) и двойные пики 41,3% (46,0 г/л) и 12,4% (13,8 г/л). В ретроспективном исследовании 700 клинических образцов сыворотки CE показал положительный уровень обнаружения 51,86% по сравнению с 52,86% для иммунофиксационного электрофореза (IFE). Используя IFE в качестве эталонного метода, CE продемонстрировала чувствительность 92,70% и специфичность 93,94%. Эти результаты подтвердили ЦЭ как быстрый, автоматизированный способ скрининга и количественной оценки белка сыворотки M в рутинных клинических лабораториях.

Введение

Нарушения, связанные с M-белком, характеризуются наличием моноклонального иммуноглобулина (M-белка) в сыворотке и/или моче. Эти белки обычно выделяются клональными плазматическими клетками или B-лимфоцитами и в первую очередь связаны с злокачественными плазматическими дискразиями или доброкачественными моноклональными^{гаммопатиями 1,2}. Клинический спектр этих состояний включает моноклональную гаммопатию неопределённого значения (MGUS), одиночную плазмацитому (SPC), тлеющую множественную миелому (SMM), множественную миелому (MM), плазматичный лейкоз (PCL), макроглобулинемию Вальденстрёма (WM), системный легкоцепочный амилоидоз (AL), B-клеточную неходжкинскую лимфому (B-NHL) и другие B-клеточные лимфопролиферативные заболевания (LPD)³. Ретроспективное исследование, проведённое в Испании, показало, что среди этих состояний наиболее распространённым является MGUS, составляя 54,1% случаев, за ним следуют MM (31,3%) и другие злокачественные гаммопатии (14,6%)⁴. Также важно отметить, что белок M может также вырабатываться в ответ на некоторые неоплицические состояния, такие как нефротический^{синдром 5}.

Тестирование на М-белок играет ключевую роль в диагностике и мониторинге заболеваний, связанных с^{М-белком 6}. Однако ранняя диагностика остаётся клинической проблемой, поскольку пациенты с ММ часто бессимптомны на начальных стадиях, что приводит к задержке постановки диагноза на относительно поздней стадии заболевания. Примерно 1% пациентов с MGUS ежегодно прогрессируют к злокачественному заболеванию — чаще всего к MM, WM или^{SPC 7}. Хотя считается, что почти все случаи MM эволюционируют из MGUS, менее 10% пациентов с MM имеют задокументированную историю предыдущего диагноза MGUS. В результате своевременное выявление белка М в сыворотке и/или моче может дать ценные подсказки для ранней диагностики этих расстройств, что крайне важно для повышения выживаемости пациентов и прогноза. Исследования показывают, что у пациентов с MGUS, выявленной с помощью активного скрининга, осложнений меньше, чем у тех, у кого был диагностирован^{случайно 8}. Во время терапевтического мониторинга необходима информация об изотипе и электрофоретической миграционной схеме М-белка для различия между рецидивом исходного моноклонального белка и появления олигоклональных полос или вторичного реактивного M^{белка 9}. Появление нового М-белка, часто наблюдаемого после аутологичной трансплантации стволовых клеток, обычно считается благоприятным прогностическим показателем для большинства^{пациентов 10}. В соответствии с этим наблюдением, сравнительные данные по выживаемости показывают, что у пациентов, у которых развивается вторичный белок M, медиана общей выживаемости составляет 115,3 месяца, в отличие от 31,0 месяцев у тех, у кого^{нет 11} месяцев.

Электрофорез белков — это высокотехнологичный аналитический метод. Существует ряд методов обнаружения белка M в сыворотке, включая электрофорез белка сыворотки (SPE), IFE, иммунотипизацию с капиллярным электрофорезом (IT), анализ свободной лёгкой цепи (FLC), обнаружение тяжелой и легкой цепи (HLC), а также масс-спектрометрию (MS). Каждый подход имеет свои преимущества, но при этом сталкивается с внутренними ограничениями. SPE можно дополнительно подразделить на агарозный гель электрофорез (AGE) и CE. AGE, использующий среду на основе агарозы, представляет собой простой и экономичный метод, подходящий для быстрого разделения и анализа. Однако он ограничен относительно низкой чувствительностью, с типичным пределом обнаружения 0,3-0,5 г/^{л 12}, что может привести к неудаче в обнаружении белков малого объёма или низкой концентрации M. Кроме того, техника подвержена изгибу и деформации полос, что снижает воспроизводимость.

IFE широко признан золотым стандартом типирования белков M. После начального электрофореза применяются специфические антитела (анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, κ, λ) для формирования иммунопреципитанных полос, что позволяет определить тип иммуноглобулина и подтип лёгкой цепи. IFE может обнаруживать белок M при концентрациях от 0,05 до 0,15 г/л, обеспечивая чувствительность более чем в 10 раз выше SPE. Несмотря на это преимущество, для определённых образцов, например, тех, что содержат полимеры М-белка, требуется специализированная предварительная обработка, чтобы обеспечить диссоциацию с β-меркаптоэтанолом. Недостаточное лечение может привести к вводящим в заблуждение результатам. Кроме того, пациенты, проходящие новые комбинированные терапии (например, схемы с даратумумабом, бортезомибом, дексаметазоном и талидомид/леналидомидом), могут дать ложноположительные результаты^{IFE 13}. Ключевым ограничением ИФЭ является то, что он даёт только качественные результаты, поскольку не может количественно измерить уровень белка М, и поэтому непригоден для мониторинга терапевтической^{эффективности 14}. Среди лечённых пациентов результаты IFE могут оставаться положительными даже при снижении концентрации белка M при успешном лечении.

В отличие от этого, ИТ использует капиллярные буферы в качестве среды разделения, обеспечивающие более высокое разрешение, чем обычный IFE. Тем не менее, процесс требует трудоёмких этапов предварительной обработки образцов, таких как смешивание антисыворотки, что продлевает общий процесс обнаружения. ФЛК, являющиеся лёгкими цепями иммуноглобулина (κ и λ), не связанными с тяжёлыми цепями, напрямую количественно измеряются в сыворотке с помощью антител, направленных на их эпитопы «скрытой зоны», обеспечивая высокую чувствительность к выявлению заболеваний, связанных с лёгкими цепями, при пределе обнаружения всего 10–30 мг/л. В ММ повышенные уровни FLC в сыворотке коррелируют с опухолевой нагрузкой и позволяют более раннее оценивать ответ на лечение благодаря более короткому периоду полувыведения по сравнению с целыми иммуноглобулинами¹⁵. Однако клиническое применение должно сочетаться с другими диагностическими методами, такими как электрофорез, чтобы исключить другие состояния и обеспечить всестороннюю оценку. Например, нарушение функции почек может привести к ложно повышенному уровню лёгких цепей. Анализы HLC представляют собой ещё один количественный подход, использующий антитела, направленные на эпитопы как на постоянных, так и на лёгких цепях иммуноглобулина. Эта конструкция позволяет отдельно количественно оценивать изотипно-специфические пары иммуноглобулинов (например, IgGκ и IgGλ), а производное отношение HLC служит чувствительным индикатором клональности. Однако результаты могут зависеть от фоновых уровней поликлонального иммуноглобулина, и метод может быть менее надёжным при анализе сложных вариантов M-белка. МС обладает исключительной чувствительностью и позволяет проводить углубленную протеомную характеристику M-белков. Однако его применение ограничено высокими затратами на оборудование, длительными аналитическими процедурами и специализированной экспертизой, необходимой для интерпретации данных.

CE — это мощная аналитическая техника разделения, использующая упругие капилляры из плавления и кремнезема в качестве каналов разделения и высоковольтное прямое электрическое поле в качестве движущей силы. Он обеспечивает высокоточное разделение, используя различия в электрофоретической подвижности и/или поведении распределения целевых анализов. С момента своего появления технология развивалась от однокапиллярных конфигураций до высокопроизводительных капиллярных решеток и миниатюрных микрофлюидных устройств. Сейчас его применение охватывает различные области, включая фармацевтический анализ, биомедицинскую и клиническую диагностику, тестирование безопасности пищевых продуктов и биотерапевтическую^{характеристику 16,17}. CE всё больше признаётся важным инструментом для скрининга и количественного анализа M-белков. Он определяет процент белка M относительно общего количества белка, который затем можно умножить на общую концентрацию белка для вычисления абсолютного уровня белка M белка. Особенно важно, что минимальная потребность в образце делает его особенно подходящим для анализа ценных или ограниченных по объему образцов.

КЭ предлагает три ключевых технических преимущества. Во-первых, его высокая аналитическая чувствительность (0,1–0,5 г/л) позволяет эффективно обнаруживать белки низкой концентрации M, тем самым снижая риск ошибочных диагнозов при таких состояниях, как MGUS и лёгкоцепные заболевания. Во-вторых, полностью автоматизированный рабочий процесс устраняет субъективные ошибки интерпретации, присущие традиционным методам окрашивания на основе геля. Наконец, время анализа значительно сокращается до 15–20 минут, что значительно короче, чем 60–90 мин, необходимые для обычного электрофореза. В качестве ключевого аналитического метода между зонным электрофорезом и жидкостной хроматографией CE осуществляется электрофоретическое разделение в свободном растворе. Под действием электрического поля молекулы белка в основном разделяются электроосмотическим потоком внутри щелочного буфера при определённом pH. После разведения с помощью специального буфера образцы вводятся в капиллярный анод под высоким напряжением для быстрого и эффективного разделения белков, а затем обнаруживают на катоде на 200 нм. После каждого аналитического цикла капилляры проходят автоматическую очистку и пополнение буфера для обработки последующих образцов. Разделение белков происходит в следующем порядке: гамма-глобулин, бета-2-глобулин, бета-1-глобулин, альфа-2-глобулин, альфа-1-глобулин и альбумин, что позволяет выявлять аномалии в одной или нескольких фракциях белка сыворотки. В частности, CE обеспечивает повышенную разрешающую способность в бета-области, чётко разделяя её на компоненты бета-1 и бета-2 глобулинов, что позволяет предоставить более подробную клиническую^{информацию 18}. Благодаря интеграции искусственного интеллекта и постоянным достижениям в многопараметрическом обнаружении, CE готовится эволюционировать в метод скрининга первой линии для обнаружения белков M. Поэтому этот протокол описывает использование капиллярного электрофореза для быстрого обнаружения, локализации и количественного анализа моноклональных белков сыворотки в клинических образцах.

Протокол

Протокол исследования был пересмотрен и утверждён Этическим комитетом провинциальной народной больницы Гуандуна (номер одобрения: KY2025-176-01). Все участники предоставили письменное информированное согласие перед сбором образца.

1. Подготовка материалов

ПРИМЕЧАНИЕ: Реагентный набор должен храниться при температуре 2–30 °C и иметь срок хранения до 3 лет.

1. Храните буфер при 2–8 °C и дайте ему достичь комнатной температуры перед использованием. После открытия раствор остается стабильным до 3 месяцев. Используйте этот раствор в качестве буфера для разделения белков сыворотки при капиллярном электрофорезе.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер готов к использованию с pH 9,9 ± 0,5. Реагентный набор содержит три баллона щелочного буфера по 700 мл, используемых в качестве буфера для разделения белков сыворотки.
2. Разведите 75 мл концентрированного раствора для промывания до 750 мл деионизированной водой перед использованием. Храните разбавленный раствор для промывания при комнатной температуре. После открытия раствор остается стабильным до 3 месяцев. Используйте этот раствор для очистки капиллярных трубок после электрофореза.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор для промывания содержит гидроксид натрия и используется для очистки капилляров.
   ВНИМАНИЕ: В растворе для промывания содержится гидроксид натрия — коррозионное вещество, способное вызвать сильные ожоги. В случае зрительного контакта немедленно полосните много воды и обратитесь за медицинской помощью. Если кожа или одежда загрязнены, немедленно снимите заражённую одежду. Всегда носите соответствующую защитную одежду и используйте защиту для глаз и лица.
3. Храните стаканчики с реагентами в оригинальной герметичной упаковке при 2–30 °C в чистом и сухом месте. Используйте реагентные чашки для разбавления образцов на полностью автоматизированных приборах.
4. Герметичный фильтр храните в сухом месте при комнатной температуре (15–30 °C). Используйте одноразовые фильтры для фильтрации буферных растворов и деионизированной воды.
5. Капиллярный очистительный раствор храните (см. таблицу материалов) при 2–8 °C и избегайте осадков.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Каждая бутылка концентрата капиллярного чистящего раствора (25 мл/бутылка) содержит протеолитические ферменты, поверхностно-активные вещества и другие добавки. Добавки не являются опасными в концентрации применения и необходимы для оптимальной работы. Раствор предотвращает закупорку капилляров и поддерживает оптимальную производительность.
6. Используйте фильтрованную деионизированную воду с размером пор ≤ 0,45 мкм, проводимостью ниже 3 мкС/см и сопротивлением свыше 0,33 МОм·см. Меняйте воду ежедневно, чтобы предотвратить микробное загрязнение. Используйте эту воду для очистки капиллярных трубок анализатора электрофореза.
7. Приготовьте раствор гипохлорита натрия, содержащий 2–3% доступного хлора. Используйте этот раствор для очистки пробного зонда, чтобы удалять адсорбированные белки. Храните рабочий хлорированный раствор при комнатной температуре в закрытом контейнере. Раствор сохраняется стабильным до 3 месяцев. Не храните рядом с солнечным светом, теплом, источниками возгорания, кислотами или аммиаком.

2. Сбор образцов

1. Убедитесь, что пациенты голодаются минимум 8–12 часов перед забором крови.
2. Попросите пациентов отдохнуть в положении сидя или на спине в течение 10–15 минут для стабилизации гемодинамики.
3. Подготовьте следующие материалы: одноразовые венозные кровяные иглы, вакуумные трубки для сбора крови (сывороточные трубки), жгут, стерильные ватные палочки, дезинфицирующее средство 75% спирта или йодофора, медицинский пластырь и контейнер для биологических отходов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Срединная кубитальная вена в локтевой ямке является предпочтительным местом прокола.
4. Наложите жгут на 3–5 см выше места прокола, чтобы достаточно наполнить вену.
5. Продезинфицируйте кожу 75% спиртом или йодофором в центробежном спиралевидном узоре от центра наружу, покрывая область диаметром ≥5 см, и дайте дезинфицирующему средству естественным образом высохнуть на воздухе, не касаясь этой области.
6. Держите иглу с фаском вверх под углом 15–30° к коже и плавно проколете кожу и стенку вен.
7. Увидев возвращение крови, закрепите иглу и подключите вакуумную трубку. Пусть кровь пассивно заполняет трубку под отрицательным давлением, без ручного сжатия, чтобы предотвратить гемолиз.
8. После сбора сначала отпустите жгут, затем аккуратно вытащите иглу и сразу же приложите давление на место прокола стерильной ватной палочкой в течение 3–5 минут для обеспечения гемостаза.
9. Поставьте собранный образец вертикально при комнатной температуре и дайте крови естественным образом свертиться.

3. Оценка качества образца

1. Центрифугная сыворотка берет образцы при 2 095 x г в течение 10 минут при комнатной температуре.
2. Образцы сыворотки подвергаются строгой визуальной оценке качества при достаточном естественном освещении на простом белом фоне.
3. Оценивайте гемолиз, изучая цвет и прозрачность супернатанта. Если супернатант выглядит прозрачным и жёлтым, оценивайте образцы как негемолизированные, а любое розовое или красное изменение цвета указывает на лёгкий или тяжёлый гемолиз.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Гемолиз может привести к появлению двойной альфа-2 зоны. Фракция бета-2 может снижаться в старых или неправильно хранящихся образцах сыворотки.
4. Проверьте наличие помех фибриногенов, проверяя видимые фибриновые цепи, тромбы или желеобразные сети внутри супернатанта, а также неполное фазовое разделение, мутность или несогласованные аналитические сигналы.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Фибриноген мигрирует в положении бета-2 (плечо на бета-2 или наложенный на бета-2 зону, с возможном увеличением этой доли). В некоторых образцах (плазма, сыворотка, не полностью дефибринирующая, или пациенты, принимающие лечение антикоагулянтами) фибриноген может мешать анализу и приводить к неточной интерпретации, например, к подозрению на моноклональный полосник или увеличению фракции бета-2.
5. Исключить образцы с гемолизом, фибриногеновыми интерференциями или другими преданалитическими аномалиями после обнаружения из анализа.
6. Берите новый образец крови с соблюдением стандартизированных протоколов флеботомии и обработки, обеспечивая соответствующее время свертывания и стандартизированные параметры центрифуга. Используйте только образцы с удовлетворительным внешним видом — прозрачные, без гемолиза, фибрина, липемии или загрязнения для последующего тестирования.
7. Проверьте отдельные образцы сыворотки как можно скорее при комнатной температуре. Если немедленное тестирование невозможно, храните образцы при 2–8 °C до 10 дней и при -20 °C до 30 дней. Не замораживайте и не размораживайте образцы многократно.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте плазменных образцов. При анализе старых образцов плазмы (что не рекомендуется) лабильные компоненты, такие как комплемент C3, со временем разрушаются, поэтому бета-2-зона по сути соответствует фибриногену.
8. Перед тестированием восстановите образцы до комнатной температуры и тщательно перемешайте. Убедитесь, что замороженные образцы полностью разморажены перед использованием.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте неразбавленные образцы белка из сыворотки. Некоторые охлаждённые сыворотки могут становиться вязкими или мутными, особенно содержащие криоглобулины или криогель. Используйте образцы с полииммуноглобулинами напрямую без дополнительного предварительного лечения.

4. Операционные процедуры

1. Питание автоматического анализатора капиллярного электрофореза (см. таблицу материалов) и подключённой компьютерной системы. Дождитесь, пока инструмент полностью инициализируется.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Длина капилляров и внутренний диаметр составляют соответственно 17,5 см и 25 мкм. Напряжение разделения варьируется от 8 000 до 10 000 В. Используется электрокинетическая инъекция, а температура разделения поддерживается примерно на уровне 25 °C. Общее время работы составляет примерно 10 минут на один сэмпл.
2. Запустите программное обеспечение PHORESIS (см. таблицу материалов), установленное на компьютере для обработки данных.
3. В программном интерфейсе выберите программу PROTEIN (E) 6 и вставьте буферную буферную буферную систему в инструменте.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Эта программа представляет собой заводскую откалибровку заранее установленный протокол, специально разработанный для фракционирования белков сыворотки. Все параметры заранее настроены в программном обеспечении PHORESIS прибора без необходимости ручной модификации.
4. При необходимости поместите в инструмент бутылку с растворённым очищающим раствором.
5. Установите новый реагентный стакан на автоматическую загрузочную платформу анализатора капиллярного электрофореза.
6. Установите новый контейнер для отходов в стандартном положении анализатора капиллярного электрофореза для использованных реагентов.
7. Загрузите стеллажи для проб в анализатор через отверстие справа (максимальная вместимость: 15 стеллажей).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Каждая стойка может вместить до 8 пробирок для проб. Штрихкод на каждой пробирке должен быть виден через отверстие стойки.
8. Используйте сэмпл-стеллаж No0 для контрольной сыворотки. Используйте сторонний контроль качества на основе совокупного среднего и коэффициента вариации, рассчитанных на основе 20 тестовых данных.
9. Снимите готовую стойку для образцов из разгрузочного лотка слева. При необходимости удалите и выбросьте контейнер с использованными реагентами.
   ВНИМАНИЕ: Обращайтесь с использованными реагентами с осторожностью, так как в них могут содержаться биологические образцы.
10. Поместите капиллярный чистящий раствор в позицию S2 в камере вторичного реагента. Нажмите «Обслуживание и очистка» на экране приборов, затем выберите «Запустить очистку».
11. Поместите 2-3% раствор гипохлорита натрия в камеру вторичного реагента (позиция T1). Нажмите «Обслуживание и очистка» на экране приборов и выберите «Начать дезактивацию».
    ПРИМЕЧАНИЕ: Весь процесс очистки капилляров автоматически длится 45 минут.
12. Начинайте процедуру очистки как минимум раз в неделю.

5. Анализ результатов

1. После завершения каждого запуска анализа передавайте исходные данные с прибора в программное обеспечение для обработки. Программа генерирует электроферограмму, которая отображается на экране компьютера.
2. Проанализируйте электроферограмму и количественно определите относительные интенсивности поглощения каждого белкового диапазона на длине волны 200 нм с помощью программного обеспечения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Основываясь на общих концентрациях белка, измеренных полностью автоматизированным биохимическим анализатором, программное обеспечение рассчитывает концентрацию каждой белковой группы.
3. Используйте полученные электроферограммы для визуальной оценки и выявления аномальных полос.
   ПРИМЕЧАНИЕ: По умолчанию система отображает электроферограммы в режиме перерисовки.
4. При необходимости используйте стандартный режим для представления начальных электроферограмм, полученных из исходных данных.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Эталонные диапазоны капиллярного электрофоретического анализатора были установлены статистическим анализом 246 здоровых взрослых участников (как мужчин, так и женщин) с нормальным уровнем триглицеридов (Таблица 1). Рекомендуется каждой лаборатории устанавливать свои собственные стандарты.

6. Отключение приборов

1. В конце каждой анализной последовательности запускайте процедуру отключения капиллярного электрофореза, чтобы сохранить капилляр в идеальных условиях.
   1. Чтобы инициировать процедуру отключения, выберите «Выключение» в главном меню или воспользуйтесь стойкой для отключения, предоставленной анализатором.
   2. Нажмите «Выключить» в главном меню. В окне, отображаемом на экране, нажмите кнопку для начала процедуры. Процесс закрытия начнётся автоматически после завершения текущей программы анализа.
   3. Стойка выключения обозначена как «EXTINCTION/SHUTDOWN CAPILLARYS 3 & MC». Вставьте эту стойку в конец очереди сэмпла, и инструмент автоматически запустит процедуру отключения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Когда процедура выключения завершена, прибор выключается, и экран выключается.
2. Используйте физический выключатель питания на задней части прибора, чтобы отключить анализатор от сети.
3. Вынимите все бутылки с реагентами из двух реагентных камер и храните их в рекомендуемых условиях хранения. Распространённые неисправности, возможные причины и решения полностью автоматизированного анализатора электрофореза приведены в дополнительной таблице 1.

7. Параметры производительности

1. Для определения аналитической чувствительности процедуры капиллярного электрофореза подготовьте и проанализируйте последовательные разбавления образца сыворотки с аномалированным белком в гамма-зоне при 1,198 г/дл. Наибольшее разбавление с заметной аномалией соответствует концентрации 19 мг/дл аномального белка.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от положения аномального белка и поликлонального фона в гамма-зоне, предел обнаружения может варьироваться.
2. Оценка точности — внутренняя корреляция
   1. Для обеспечения целостности образца обрабатывайте все образцы сыворотки (включая 18 обычных и 100 патологических) одинаково и обрабатывайте их по тем же рекомендациям.
   2. Измерять уровни каждой белковой фракции как с помощью электрофоретических сепараций, полученных капиллярной электрофоретической процедурой на анализаторе, так и другой коммерчески доступной технике капиллярного электрофореза для анализа белков.
   3. Проанализируйте измеренные значения обеих процедур с помощью линейной регрессии. Полученные результаты показали идеальную корреляцию между обеими процедурами.

Результаты

Позиции миграции, пиковые характеристики и относительные проценты каждого белкового диапазона количественно анализировались путём обнаружения поглощения сывороточного белка. Клиническая интерпретация была проведена на основе наличия и рисунка аномальных полос, наблюдаемых на электроферограмме. Репрезентативная капиллярная электроферограмма, показывающая нормальную миграционную схему фракций белков сыворотки, показана на рисунке 1. Вариации в периодах пиковой миграции в первую очередь связаны...

Обсуждение

SPE — это фундаментальная диагностическая техника в клинических лабораториях, разделяющая белоки сыворотки на основе различий в их изоэлектрических точках, молекулярных массах и^{конформациях 19}. В этом исследовании систематически изложен протокол быстрого обнаружения и количественной оценки белка сыворотки M с помощью CE. Протокол подчёркивает отличную аналитическую эффективность метода, основные его преимущества — высокая чувствительность, высокая пропускная спосо...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
CAPI 3 БЕЛОК (E) 6 буфер	SEBIA	2503	Бегущий буфер, используемый для разделения белков сыворотки при капиллярном электрофорезе (в рукописи называется бегущим буфером).
Раствор промывки де-лаважа	SEBIA	2062	Разбавленный раствор для промывания капилляров после электрофореза.
Реагентные стаканчики	SEBIA	2582	Для разбавления сэмпла на полностью автоматических инструментах.
ФИЛЬТРУЮЩИЕ КАПИЛЛЯРЫ	SEBIA		Одноразовый фильтр, используемый для фильтрации буферных растворов и деионизированной воды при очистке капилляров.
CAPICLEAN	SEBIA	2060	Для очистки капиллярных трубок инструментов CAPILLARYS 3 OCTA (в рукописи называемого раствором очистки капилляров)
Раствор гипохлорита натрия	Гуанчжоуский завод химических реагентов	1703079	Для очистки пробного зонда.
Деионизированная вода	Ватсонс	/	Используется для промывания капилляров в автоматическом анализаторе капиллярного электрофореза.
Контроль качества Randox	Рандокс	HN1530	Для контроля качества.
Полностью автоматизированный анализатор капиллярного электрофореза	SEBIA	CAPILLARYS 3 OCTA	Инструмент, используемый для высококачественного и высокопроизводительного анализа протеинов сыворотки.
Программное обеспечение PHORESIS 9.30	SEBIA	/	Программное обеспечение, используемое для автоматизированного сбора и анализа паттернов электрофореза.