В этом исследовании была разработана высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с методом тройной квадрупольной масс-спектрометрии (HPLC-QQQ-MS) для выявления и количественной оценки тропановых алкалоидов (гиосциамин, анизодамин, скополамин) в Anisodus tanguticus. Метод оказался быстрым, точным и надёжным для высокопроизводительного анализа лекарственных растений.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Эффективный и быстрый метод HPLC-QQQ-MS для количественного определения тропановых алкалоидов в лекарственных растениях
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Anisodus tanguticus — важное тибетское лекарственное растение. Тропановые алкалоиды (ТА), такие как гиосциамин, анизодамин и скополамин, проявляют значительную анальгетикическую и седативную фармакологическую активность, что делает этот вид ценным природным источником для извлечения этих биоактивных соединений. Однако химический состав A. tanguticus весьма сложен. Он включает большое количество соединений без проясненных структур, что делает систематическую идентификацию и структурную характеристику его активных компонентов особенно важными. Хотя высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) широко используется для разделения экстрактов из этого завода, многие неизвестные компоненты остаются трудно точно идентифицировать, даже при сопоставлении спектральных баз данных.
В этом исследовании был установлен аналитический метод, основанный на высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тройной квадрупольной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-QQQ-MS) для определения тропановых алкалоидов у A. tanguticus. Метод включает в себя ряд систематических процедур, включая стандартизированную подготовку образцов, конфигурацию параметров масс-спектрометрии, предварительное уравновесение LC, установку метода, сбор данных MS, многоступенчатое сканирование масс-спектрометрии (MSⁿ) и ручную интерпретацию данных. Используя эту стратегию, мы успешно идентифицировали три репрезентативных тропановых алкалоида у A. tanguticus: гиосциамин, анизодамин и скополамин. Кроме того, он подтверждает точность установленного метода HPLC-QQQ-MS, подтверждая, что метод быстрый, чувствительный, осуществимый и точный для количественного определения тропановых алкалоидов (ТА) у A. tanguticus. Устоявшийся подход демонстрирует хорошую универсальность и надёжность, а также подходит для высокопроизводительной идентификации и количественной оценки тропановых алкалоидов в A. tanguticus и других лекарственных растениях.
Введение
Терапевтическая эффективность традиционной китайской медицины (ТКМ) во многом зависит от её вторичных метаболитов, таких как алкалоиды, флавоноиды, терпеноиды и другие активные компоненты 1,2,3. Следовательно, точный и чувствительный качественный и количественный анализ конкретных целевых метаболитов в этих сложных смесях является ключевым шагом к обеспечению качества ТКМ, разъяснению материальной основы его эффективности и продвижению современныхисследований 3. Однако разнообразие и сложность компонентов ТКМ, в сочета....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка образца
- Подготовка стандартных растворов
- Точно взвесьте по 10,0 мг гиосциамина, анизодамина гидробромида и скополамин гидробромида с использованием аналитического баланса в десять тысячных и размещайте их в отдельные колбы по 10 мл соответственно.
- Добавьте хроматографический метанол к отмеченной линии и тщательно растворите стандарты с помощью ультразвуковой обработки для получения единичных стандартных растворов с концентрацией 1,0 мг/мл.
- Переложите бульонные растворы в бутылки с коричневыми реагентами, храните их при 4 °C в темноте.
ПРИМЕЧАНИЕ: Используемы....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
HPLC-QQQ-MS хроматографическое разделение и идентификация ТА
Типичная хроматограмма MRM, полученная в результате анализа стандартной смеси и экстракта корня A.tanguticus , представлена на рисунках 3 и 4. При оптимизированных условиях ВЭЖХ все три целевых тропановых алкалоида: гиосциамин, анизодамин и скополамин — были успешно разделены в течение 20 минут, что демонстрирует высокую эффективность разра.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
С ростом интереса к вторичным метаболитам растений аналитические методы обнаружения алкалоидов привлекли значительное внимание. Хотя была создана фундаментальная хроматографическая система анализа тропановых алкалоидов (ТА),18 недавние достижения, такие как внедрение капиллярного электрофореза (КЭ), повышение инструментальной эффективности при ГК–МС и ВЭЖ–МС, а также выявление новых структурных соединений, включая конволвинные и тропиноподобные токсины, подчёркива.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликтов интересов, которые нужно раскрывать.
Благодарности
Эта работа поддерживается Сычуаньским провинциальным управлением традиционной китайской медицины (No 2024MS562) и Программой талантов Синлинь Университета ТКМ Чэнду (No MPRC2022035). Мы очень благодарны за поддержку Инновационного института китайской медицины и фармации Университета традиционной китайской медицины Чэнду.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Программное обеспечение Agilent MassHunter | Agilent Technologies | ||
| Колонка Agilent ZORBAX SB-C18 | Agilent Technologies | 880975-902 | C18 колонка для обратной фазы, 4,6 × 250 мм, 5 мкм |
| Анизодамина гидробромид | Chengdu glip Biotechnology Co., Ltd | 101-31-5 | HPLC>98% |
| Муравьиная кислота | Sigma-Aldrich | 5.33002 | |
| Лиофилизатор | EYELA, Токио, Япония | FDU-2110 | |
| Универсальный высокоскоростной блендер | Taisite Instrument Co., Ltd., Тяньцзинь, Китай | 6010210100 | FW-100, 24 000 об/мин, вместимость 100 г, 80 очков |
| Скополамин | Chengdu glip Biotechnology Co., Ltd | 55449-49-5 | HPLC>98% |
| Метанол | Thermo Fisher Scientific | 022909.K2 | |
| Микроволокнистая мембрана 0,22 мкм | Millipore | SLGV033RB | |
| Система Milli-Q Direct 8 | MilliporeSigma, Бёрлингтон, MA, США | ZRQSVP0JP | |
| Скополамина гидробромид | Chengdu glip Biotechnology Co., Ltd | 114-49-8 | HPLC>98% |
Ссылки
- Ji, P., Yang, X., Zhao, X. Application of metabolomics in quality control of traditional Chinese medicines: a review. Front Plant Sci. 15, 1463666(2024).
- Li, S. -S., et al. Phytochemical variation ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
