Здесь мы показываем наш метод, чтобы изолировать мыши эпидермального нервного гребня стволовые клетки (EPI-NCSC). Техника включает в себя микро-рассечение усов фолликулов, изолируя выпуклость и placeing его в культуре ткани. EPI-NCSC начинают эмигрировать из выпуклости эксплантов на субстрате в течение 3 - 4 дня.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Мышь эпидермального нервного гребня стволовых клеток (EPI-NCSC) Культур
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
EPI-NCSC остатки эмбрионального нервного гребня у взрослого человека месте, выпуклость волосяных фолликулов. Они мультипотентных стволовых клеток, которые имеют физиологическое свойство генерировать широкий спектр дифференцированных типов клеток, включая нейроны, нервные опорные клетки, клетки гладкой мышцы, кости / хрящевых клеток и меланоцитов. EPI-NCSC были легко доступны в волосатой кожи и могут быть выделены в виде высокой чистой популяции стволовых клеток. Это видео содержит подробный протокол для подготовки мыши EPI-NCSC культур от усов фолликулов. Усов площадке взрослой мыши удаляется, а усов фолликулов расчленены. Фолликулы затем разрезают вдоль и поперек впоследствии выше и ниже выпуклость регионе. Выпуклость удаляется из коллагена капсулы и помещены в культуре пластины. EPI-NCSC начинают эмигрировать из выпуклости эксплантов от 3 до 4 дней.
Протокол
Препарирование дуге от взрослых Фолликулы Whisker мышь
- Мы используем 10 недель до 6 месяцев мышей. Младший мышей часто дают более ячеек. Эвтаназии мыши и погрузить весь животного в смеси 1:1 бетадин (раствор йода) и перекись водорода (доступный из аптеки) в течение 3 минут.
- Squirt все мыши, особенно лицевой области, с 75% этанола, и нести мыши рассечение микроскоп в ламинарном потоке капот.
- Рассеките подушечками усов, тщательно избегая резки в волосяных луковиц, и бассейн в HBSS.
- Рассеките усов фолликулов и бассейн в HBSS при комнатной температуре. Этого, удерживая кожу рядом с волосяной фолликул с щипцами, а затем резки....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В силу их миграционных способностей, EPI-NCSC могут быть выделены в виде высокой чистой популяции стволовых клеток, которая может быть расширена в пробирке. Как эмбриональных остатков во взрослом месте, EPI-NCSC являются потенциально привлекательными кандидатами для будущей замены клеток терапии, биомедицинской инженерии и / или регенеративной медицины. Мы протестировали EPI-NCSC в мышиной модели повреждения спинного мозга, где они показывают желаемые черты. Через экспрессии генов профилирования по LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / гео, сери.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
При поддержке: USPHS грант NS38500, Национального института неврологических расстройств и инсульта, NIH, США; Биомедицинские технологии Альянса Юго-Восточной Висконсин, Milwauke, Висконсин, США; Брион Риш Паралич фонда, Милуоки, Висконсин, США; Общества работников Eagles, Среднем Западе главы , США; Национальный Травма спинного мозга ассоциации, Милуоки главе, США; Северо-Восточная Англия Институт Стволовых Клеток, Университета Ньюкасла, Великобритания.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Ссылки
- Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle. Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).
- Sieber-Blum, M., Grim, M. The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells. Birth Defects....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
