Здесь мы опишем технику подготовки и поддержания отсеки камеры для культивирования сенсорных нейронов спинного ганглиев корня.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Подготовка и обслуживание Спинной корневой Ganglia Нейроны в отсеки культур
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Нейроны расширить аксонального процессы, которые далеки от тела клетки к иннервируют тканях-мишенях, где целевая полученных факторов роста, необходимых для выживания нейронов и функции. Нейротрофинов специально обязаны поддерживать выживание и дифференциации иннервирующих сенсорных нейронов, но вопрос о том, как эти целевые полученных нейротрофинов сообщает тела клетки нейронов, иннервирующих была областью активных исследований на протяжении более 30 лет. Наиболее общепринятой моделью того, как нейротрофина сигналы достигают тела клетки предлагает сигнализации эндосомы нести этот сигнал ретроградно вдоль аксона. С целью изучения ретроградного транспорта, культуры система первоначально была разработана Робертом Campenot, в которых клетка тела изолированы от своих аксонов. Техника подготовки этих отсеки камеры для культивирования сенсорных нейронов повторяет селективной стимуляции нейронов терминалов, что происходит в естественных условиях после выпуска целевых полученных нейротрофинов. Ретроградная сигнализация событий, требующих дальнего микротрубочек зависящих транспортных ретроградной иметь важные последствия для лечения нейродегенеративных расстройств.
Протокол
Подготовка реагентов
- Коллаген покрытие: коллаген пальто p35 культуре ткани пластин и поместить в духовку при температуре 37 ° С в течение 2 дней до смазки перегородок. Конечная концентрация коллагена должны быть в 0,71 мг / мл разведенного в 0,001 N HCl. Затем добавьте 1 мл смеси на чашку.
- Смазка погрузчики: Для того, чтобы заполнить смазкой погрузчика, 60 мл шприца сначала должен быть заполнены смазкой вакуумных Corning. Используйте шприц для заполнения смазкой погрузчик, заверните его в фольгу, а затем автоклаве в течение 45 минут.
- Тефлон делителей: Делители могут быть использованы повторно после каждого эксп....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этом видео, мы показали, как готовить и поддерживать отсеки камеры для использования в нейронах DRG культивирования. Было сделано правильно, эта система позволяет разделение тела клетки от аксона с целью изучения механизмов, посредством которых нейротрофинов сигнала на большие аксонов. Так как жидкостный изоляцию между отсеками, оно позволяет для селективной стимуляции или лечение одного отсека без остальных отсеков вреда для себя. Культур на отсеки, камера может поддерживать другие типы клеток, в том числе симпатических нейронов из верхн.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Катарина Cosker и Стефани Courchesne за полезные обсуждения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| коллаген | Реагент | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-метилцеллюлоза 400CPS | Реагент | Sel-Win Chemicals | ||
| Тефлоновый разделитель | Прочее | Tyler Research | CAMP10 | доступны многие другие типы разделителей |
| Штифтовой гребень | Инструмент | Tyler Research | Camp-PR | |
| Загрузчик смазки | Инструмент | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Реагент | Fisher Scientific | MT10017CV | |
| NGF | Реагент | PeproTech Inc | 450-01 | |
| BDNF | Реагент | PeproTech Inc | 450-02 | |
| Высоковакуумная смазка | Реагент | Fisher Scientific | 14-635-5D | |
| AraC | Реагент | Sigma-Aldrich | C-1768 | |
| Люэр-адаптер 23G | Инструмент | Fisher Scientific | 427565 | |
| Угловой гемостатический зажим 90° | Инструмент | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-7035 |
Ссылки
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neurosci....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
