Выделение липидных биомаркеров по методу Сокслета из осадка

1. Настройка и подготовка материалов

1. Соберите образец замороженных, сублимированных, измельченных и гомогенизированных морских отложений. Такой образец содержит множество соединений, необходимых для стандартов.
   1. Стандарты часто составляются на основе отложений, которые остаются после экспедиции по отбору керна или анализа. Например, в этом эксперименте извлекаются осадочные породы, которые были получены из «Грязевого пятна», расположенного к югу от Кейп-Кода. Этот осадок был взят в рамках экспедиции по отбору керна, но не будет использоваться для ответа на научные вопросы. Поэтому мы можем использовать его для создания стандарта.
   2. Поместите ~100 г осадка в морозильную камеру на ночь, чтобы он промерз.
   3. Как только осадок полностью замерзнет, включите сублимационную сушилку (доступную во многих розничных магазинах научного оборудования, таких как Fisher) и подождите, пока конденсатор достигнет заданного значения (часто ~-30 °C).
   4. Загрузите образец осадка в сублимационную сушилку и закройте продувку, чтобы начать подачу вакуума на образец.
   5. В зависимости от количества воды в осадке и размера образца, для высыхания образца может потребоваться несколько дней.
   6. Как только образец высохнет, выключите сублимационную сушилку, проветрите ее и удалите образец.
   7. Поместите образец в промытую растворителем ступку и измельчите в порошок с помощью пестика. Проделайте это со всем образцом и храните в стеклянной банке в морозильной камере до тех пор, пока не будете готовы к извлечению.
2. В зависимости от размера образца используйте флаконы с объемами в пределах 4-60 мл. Для этого эксперимента используйте флаконы из боросиликатного стекла (40 мл) и безопасные для растворителей колпачки. Сожгите флаконы, пипетки из боросиликатного стекла и весовые банки при температуре 550 °C в течение 6 часов, чтобы обеспечить удаление возможных органических загрязнений.
3. Получите дихлорметан и метанол (оба распространены в большинстве лабораторий органической геохимии), а затем используйте их по отдельности для промывки лабораторных инструментов и стеклянной посуды перед использованием. Смесь дихлорметана (DCM) и метанола (MeOH; 9:1) используется во многих лабораториях для эффективного извлечения биомаркеров с широким диапазоном полярностей. Растворители не должны содержать органических загрязнителей.
4. Приобретите аппарат для использования в этом эксперименте (его можно приобрести в Fisher Scientific или другом научном магазине), затем промойте и сожгите его при температуре 550 °C в течение 6 часов перед использованием.
5. Приобретите наперстки из стекловолокна (можно приобрести в Ватмане) и обжгите их при температуре 550 °C в течение 6 часов перед использованием.

2. Подготовка образца

1. Положите сгоревшую форму для взвешивания на лабораторные весы и держите в таре.
2. Промойте лабораторный шпатель растворителем, затем используйте его для переноса соответствующей массы образца в банку для взвешивания и запишите массу.
   1. Масса образца варьируется в зависимости от содержания в нем органического вещества. Для относительно органического материала (морская грязь) может потребоваться несколько граммов, в то время как для материала, богатого органическим веществом (ткань листьев), может потребоваться гораздо меньше.
3. Переложите весь материал из весовой банки в сгоревший наперсток из стекловолокна.

3. Извлечение

1. Перелейте ~400 мл смеси DCM:MeOH (9:1) в колбу с круглым дном (колба должна быть заполнена более чем наполовину) и положите в нагревательную мантию. Добавьте несколько (5-10) промытых растворителем кипящих чипсов.
2. Поместите наперсток с образцом открытым концом вверх в центральную часть аппарата Сокслета.
3. Поместите центральный элемент на верхнюю часть колбы с круглым дном и закрепите зажимом для стеклянной посуды.
4. Установите конденсатор на верхнюю часть центрального элемента Soxhlet и закрепите зажимом для стеклянной посуды.
5. Подсоедините одну из линий холодной воды от конденсатора к линии холодной воды в вытяжке с помощью хомута для шланга. Направьте другой в канализацию.
6. Включите воду, чтобы обеспечить правильную циркуляцию и дренаж.
7. Включите нагревательную мантию и регулируйте температуру до тех пор, пока растворитель в колбе с круглым дном слегка не закипит.
8. Контролируйте экстракцию несколько раз в течение следующего часа.
   1. Убедитесь, что температура правильно установлена на низком уровне кипения, растворитель конденсируется в конденсаторе и капает в центральную часть, центральная часть правильно заполняется и опорожняется, а вода правильно стекает в слив вытяжки.
9. Следите за экстракцией в течение следующих 36 часов.
   1. Убедитесь, что температура правильно установлена на низком уровне кипения, растворитель конденсируется в конденсаторе и капает в центральную часть, центральная часть правильно наполняется и опорожняется, вода правильно стекает в слив колпака, а уровень растворителя в колбе с круглым дном все еще заполнен примерно наполовину.
10. Через 36 ч прекратите экстракцию, выключив нагревательную мантию.
11. Наклейте на колбу этикетку "TLE".