Экстракция биомаркеров из отложений - ускоренная экстракция растворителем

1. Сбор необходимых материалов

1. Извлеките образцы. Образцы (в данном случае осадок) замораживаются, лиофилизируются, измельчаются и гомогенизируются перед экстракцией, а также извлекаются группами для достижения максимальной эффективности.
2. В зависимости от размера образца используют коллекционные флаконы объемом 40 или 60 мл. Для этого эксперимента используются флаконы из боросиликатного стекла (40 мл) и безопасные для растворителей колпачки. Перед этим сожгите флаконы, пипетки из боросиликатного стекла и весовые банки при температуре 550 °C в течение 6 часов, чтобы обеспечить удаление возможных органических загрязнений.
3. Дихлорметан (DCM) и метанол широко распространены в большинстве лабораторий органической геохимии. Используйте их по отдельности (сначала метанол, а затем DCM) для ополаскивания лабораторных инструментов и стеклянной посуды перед использованием. Смесь дихлорметана и метанола (MeOH; 9:1) используется во многих лабораториях для эффективного извлечения биомаркеров с широким диапазоном полярностей. Растворители не должны содержать органических загрязнителей.
4. Приобретите ускоренный экстрактор растворителей для использования в этом эксперименте.

2. Подготовка образцов клеток

1. Соберите ячейку для каждого образца, который нужно извлечь, плюс одну заготовку.
   1. Для каждой ячейки прикрутите торцевую крышку к одному концу корпуса ячейки.
   2. Поместите фильтр из сгоревшего стекловолокна на верхнюю часть каждой ячейки с помощью пинцета, промытого растворителем. Затем аккуратно и медленно вдавите фильтр в ячейку с помощью поршня фильтра.
   3. Пометьте тела ячеек по номерам (, например, 1 - 22) для каждого образца и напишите "blank" на пустой ячейке.
   4. Заполните заготовку диатомовой землей (или песком) и накройте крышкой со вторым торцевым колпачком. Затяните вручную.

3. Подготовка образцов

1. Положите сгоревшую форму для взвешивания на лабораторные весы и держите в таре.
2. Промойте лабораторный шпатель растворителем, затем используйте его для переноса соответствующей массы образца в банку для взвешивания и запишите массу.
   1. Масса образца варьируется в зависимости от содержания в нем органического вещества. Для относительно органического материала (морская грязь) может потребоваться несколько граммов, в то время как для материала, богатого органическим веществом (ткань листьев), может потребоваться гораздо меньше.
3. Перенесите весь материал из весовой банки в подготовленную ячейку ASE.
4. Поместите еще один фильтр из стекловолокна на верхнюю часть ячейки, затем медленно и осторожно надавите, пока он не достигнет верхней части образца с помощью поршня фильтра.
5. Добавляйте в ячейку диатомовую землю (или песок) до тех пор, пока она почти не заполнится. Будьте осторожны, чтобы удалить любой мусор с нитей тела клетки.
6. Закройте верхнюю часть ячейки еще одной торцевой заглушкой.
7. Повторите шаги 3.1 - 3.6 для каждого образца.

4. Приготовление флаконов для сбора

1. Пометьте каждый флакон номером соответствующей ячейки (, например, 1 - 22 или пустой) и накройте крышкой колпачка для сбора ASE.

5. Извлечение

1. Поместите каждую ячейку образца в пронумерованный слот на верхнем лотке ASE.
2. Поместите соответствующий флакон для сбора в слот с тем же номером на нижнем лотке ASE.
3. Создайте метод извлечения с помощью клавиатуры на ASE. Экстрагируйте при 100 °C и давлении 1 200 фунтов на квадратный дюйм. Извлеките каждый образец 3 раза со статической выдержкой в течение 10 минут и промойте тело клетки на 50% от его общего объема между статическими удержаниями.
4. Убедитесь, что флакон с растворителем содержит достаточно растворителя для извлечения всех образцов.
5. Промойте ASE 3 раза перед началом прогона, нажав кнопку «Промывка» на панели управления ASE.
6. Нажмите «Пуск».