Конверсия метиловых эфиров жирных кислот методом омыления для палеотермометрии U^k'37

1. Настройка и подготовка материалов

1. Получить общий липидный экстракт (TLE) с помощью метода экстракции растворителем (Sonation, Soxhlet или Accelerated Solvent Extraction (ASE)).
2. Приготовьте раствор 2 Н КОН в 5% Н₂О в метаноле.
   1. KOH и метанол можно приобрести в розничных магазинах химической продукции. Эти химические вещества должны быть чистыми и не содержать углеводородов.
      1. Молярная масса KOH составляет ~56 а.е.м., что дает 1 моль OH- на каждый моль KOH. Таким образом, для достижения концентрации 2 N растворите 112 г KOH в 0,95 л чистой воды и 0,05 л метанола.
      2. Обратите внимание, что растворение KOH в воде является экзотермическим и создает большое количество тепла. Осторожно добавляйте гранулы KOH в воду медленно, чтобы избежать бурной реакции.
   2. Растворите 112 г гранул KOH в 0,95 л чистой воды на автоматической пластине для перемешивания.
   3. Добавьте 0,05 л метанола после того, как весь KOH растворится, чтобы помочь растворению органических биомаркеров в водном растворе.
3. Приготовьте раствор 6 Н соляной кислоты (HCl) в Н₂О.
   1. HCl можно приобрести в розничных магазинах химической продукции. Это химическое вещество должно быть чистым и не содержать углеводородов.
   2. HCl обычно концентрируется в виде 13 N. Таким образом, смесь HCl и чистой воды в соотношении 1:1 дает смесь HCl с концентрацией 6,5 N, что достаточно близко к 6 N.
      1. Обязательно добавляйте HCl в воду, а не наоборот, так как добавление воды в концентрированный HCl является экзотермическим и выделяет тепло. Это может привести к разбрызгиванию HCl.
   3. Аккуратно и медленно влейте 100 мл HCl в стакан, содержащий 100 мл чистой воды, перемешивая смесь между добавлениями HCl.
4. Приготовьте раствор 5% NaCl (поваренная соль) в H₂O.
   1. NaCl можно приобрести в розничных магазинах химической продукции. Это химическое вещество должно быть чистым и не содержать углеводородов.
   2. Рассчитайте и взвесьте массу соли, необходимую для приготовления ~1 л 5% раствора (w/w). 1 л воды весит ~1 кг или 1 000 г. Таким образом, 50 г NaCl, растворенные в 950 мл дают 5% раствор (50 г + 950 г = 1000 г; 50 г / 1000 г = 0,05 или 5%).
   3. Аккуратно добавьте 50 г NaCl в чистую воду на автоматической пластине для перемешивания и подождите, пока она растворится.
5. Получить следующие материалы: 2 чистых и сгоревших (550 °C в течение 6 ч) флаконов из боросиликатного стекла объемом 40 мл с крышкой, покрытой PTFE; нагревательную печь или нагревательные блоки; сгоревшие (550 °C в течение 6 ч) пипетки и лампы из боросиликатного стекла; pH-ленту (кислотный диапазон); Гексан (гексан можно приобрести в розничных магазинах химической продукции. Это химическое вещество должно быть Optima Grade или эквивалентным).

2. Методы

1. Начните с высушенного TLE (содержащего сложные эфиры) в одном из флаконов из боросиликатного стекла объемом 40 мл.
2. Добавьте примерно 10 мл 2 Н KOH в TLE и колпачк.
3. Нагрейте в духовке или на нагревательном блоке до 60 °C в течение 2,5 часов, чтобы расщепить эфирную связь (рис. 3).
4. Снимите образец с огня и дайте ему остыть до комнатной температуры.
5. Добавьте примерно 10 мл 5% раствора NaCl в TLE (рис. 3). Это помогает предотвратить пенообразование на границе раздела между водной и органической фазой (которая должна быть добавлена). Закройте крышкой и слегка встряхните.
6. Добавьте 6 N HCl в соленый TLE по каплям до тех пор, пока не будет достигнут pH 2, чтобы протонировать O^- и сформировать конечный продукт, стабильную карбоновую кислоту (рис. 3; используйте бумагу pH для тестирования). Если TLE был окрашен, может произойти сдвиг цвета, совпадающий с pH 2.
7. Добавьте примерно 20 мл гексана в подкисленный раствор, который теперь не содержит эфиров. Закройте крышкой и энергично встряхивайте в течение 5 с, чтобы извлечь органические соединения из воды.
8. Дайте застыть до полного разделения водной и органической фаз. Соли, ионы, вода и непрореагировавшая HCl остаются в водной фазе. Органические соединения теперь находятся в гексане.
9. Удалите примерно 75% надосадочной жидкости гексана с помощью пипетки и распределите по 40 мл во флакон из боросиликатного стекла.
10. Повторите 2,7 - 2,9 дважды, добавляя каждый раз примерно 10 мл гексана.
11. Выбросьте остатки водной смеси в подходящий контейнер для отходов.
12. Маркировка флакона, содержащего гексан и бесэфирную органику: "TLE - sapomified.